Этот метод позволяет decellularization комплекс твердых органа с использованием простой протокол, основанный на осмотическим шоком и перфузии ионных моющих средств с минимальными орган матрица нарушения. Она включает в себя Роман decellularization техника для человеческого сердца внутри под давлением мешочек с мониторинг в реальном времени динамику и сотовых оттока потока мусора.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Decellularization всего человеческого сердца внутри под давлением мешочек в Перевернутый ориентации
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Идеальное решение для пациентов с терминальной стадии сердечной недостаточности — пересадка. Но доноров сердца ограничены, иммуносупрессия не требуется, и в конечном итоге может произойти отказ. Создание функциональных, аутологичные био искусственное сердце может решить эти проблемы. Одним из вариантов является Biofabrication сердца состоит эшафот и клеток. Естественный леску с состав ткани конкретных, а также микро - и макро архитектуры могут быть получены путем decellularizing сердца людей или крупных животных, таких как свиньи. Decellularization включает в себя мытье сотовой мусора при сохранении 3D внеклеточного матрикса и сосудистую и позволяет «cellularization» в более поздних timepoint. Опираясь на наш роман, найти что Изотопное decellularization сложных органов возможно, мы разработали более «физиологические» метод decellularize не-которые спасаютжизньпритрансплантации человеческие сердца, помещая их внутри под давлением мешочек, в Перевернутый ориентация, под контролируемого давления. Цель использования в герметичный мешок является создание градиентов давления через клапан аорты, держите его закрытые и улучшения перфузии миокарда. Одновременной оценки динамики потока и сотовой мусора во время decellularization, позволили нам контролировать жидкости приток и отток мусора, создавая тем самым эшафот, что могут быть использованы либо для простой ремонт сердца (например как патч или клапан леса) или в целом орган леску.
Введение
Сердечная недостаточность приводит к высокой смертности больных. Параметр конечной лечения для конечной стадии сердечной недостаточности — Алло трансплантация. Однако существует длинный лист ожидания для трансплантации из-за нехватки донорских органов, и больные лица после трансплантации препятствия диапазоне от непрерывного иммуносупрессии хронической орган отклонение1,2. Функциональные сердца биоинженерии, заселив decellularized человеческого размера сердца пациента клетки могут обойти эти препятствия3.
Крупный шаг в «Инжиниринг» сердце является создание ле....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Все эксперименты соблюдать руководящие принципы Комитета этики от института сердца Texas.
1. орган подготовка
Примечание: В сотрудничестве с LifeGift, некоммерческой органа Организации закупочной деятельности в Техасе (http://www.lifegift.org), дар человеческих сердцах не подходит для пересадки были использованы для исследований с утвержденными согласия.
- Для приобретения сердца, внутривенно настаиваться 30 000 U гепарина в сердцах. Надежно шовные Кардиоплегия канюли в аорте и прикрепить зажимается перфузии линию. Перфорировать нижней полой вены (IVC) вентиляционные правых отделов сердца. Вырежьте Улучше....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
После 7-дневного decellularization с антеградная аорты перфузии под постоянным давлением 120 мм рт.ст. сердце человека оказалось полупрозрачный (Рисунок 6B). Сердце было грубо расчлененный 19 разделов для биохимического анализа (ДНК, кляп и SDS) (рис. 6 c) для оценки конечного продукта decellularized.
На протяжении всего процесса decellularization скорость потока настой.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Насколько нам известно это первое исследование доклад Перевернутый decellularization человеческих сердец внутри под давлением мешочек с покадровой мониторинг потока скорость и ячейки удаления мусора. Сумке перикарда как сохраняет ориентацию сердца стабильной на протяжении всей процедуры decellularization. Погружение и инвертирование всего сердца внутри мешок предотвращает обезвоживание и минимизирует чрезмерную нагрузку на аорте (от веса сердца), когда по сравнению с обычными вертикально Langendorff перфузии decellulariz.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Д-р Тейлор является учредителем и акционером в Miromatrix Medical, Inc. Эта связь управляется в соответствии с политикой конфликта интересов университета Миннесоты и Техас институт сердца; другие авторы имеют никакого конфликта интересов раскрыть.
Благодарности
Это исследование было поддержано Хьюстон Дотационный Грант и Техас Фонд для новых технологий. Авторы признают агентство по закупкам орган LifeGift, Inc. и семьями донора для изготовления этого исследования возможных.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 2-0 шелковый шовный материал | Ethicon | SA85H | Шовный материал, используемый для перевязки верхней и нижней полой вены |
| 1/4" x 3/8" соединитель с люэром | NovoSci | 332023-000 | Соединение аорты и легочной артерии |
| Masterflex платиновая силиконовая трубка | Cole-Parmer | HV-96410-16 | Трубка для соединения сердечных камер/вен |
| Линия инфузии и оттока | Smiths Medical | MX452FL | Для протекания растворов через сосудистую сеть |
| Полиэфирный мешочек (Ampak 400 Series SealPAK Pouches) | Fisher scientific | 01-812-17 | Перикардоподобный мешочек для хранения сердца при децеллюляризации |
| Snapware Square-Grip Canister | Snapware 1022 | 1-литровый контейнер для перфузирования сердца | |
| Черные резиновые пробки | VWR | 59586-162 | Для герметизации Перфузионный контейнер |
| Перистальтический насос | Harvard Apparatus | 881003 | Для перекачивания жидкости через приточные трубопроводы и для слива жидкости |
| 2 л аспиратор с нижним боковым рычагом | VWR | 89001-532 | Для удержания растворов/перфузата |
| Quant-iT PicoGreen набор для анализа dsDNA | Life Technologies | P7589 | Для количественного определения dsDNA |
| Тимус теленка стандарт | Sigma | D4522 | ДНК стандартный |
| Blyscan Набор для анализа гликозаминогликанов Biocolor | Ltd | Blyscan #B1000 | набор для анализа GAG |
| Планшетный ридер | Tecan | Infinite M200 Pro | Для аналитических анализов |
| GE рентгеноскопия | General Electric | OEC 9900 Elite | Angiogram |
| Visipaque | GE | 13233575 | Контрастное вещество |
Ссылки
- Writing Group Members. Executive Summary: Heart Disease and Stroke Statistics--2016 Update: A Report From the American Heart Association. Circulation. 133 (4), 447-454 (2016).
- Zia, S., et al. Hearts beating through decellularized scaffolds: whole-organ engineering for cardiac regeneration and transplantation. ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
