Мы описывают использование трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (ТГСК) для оценки злокачественным потенциалом генетически модифицированные гемопоэтические клетки. ТГСК полезен для оценки различных злокачественных гемопоэтических клеток в естественных условиях , а также создание большой когорты мышей с лейкозом или миелодиспластические синдромы (MDS) для оценки Роман терапии.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Использование трансплантации гемопоэтических стволовых клеток для оценки происхождения миелодиспластический синдром
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Миелодиспластические синдромы (MDS) представляют собой разнородную группу расстройств гемопоэтических стволовых клеток, которые определяются неэффективными кроветворения, периферической крови цитопении, Дисплазия и склонность для преобразования острый лейкоз. NUP98-HOXD13 (NHD13) трансгенных мышей пилки человека MDS с точки зрения периферической крови цитопении, Дисплазия и преобразование, острый лейкоз. Ранее мы показали, что MDS могут быть переданы от генетически мышь с MDS одичал тип получателей путем трансплантации клеток костного мозга тому MDS (BMNC). Более четко понимать MDS ячейке происхождения, мы разработали подходы к пересадке конкретных, immunophenotypically определены гемопоэтических подмножеств. В этой статье мы описываем процесс изоляции и пересадка конкретных популяций гемопоэтических стволовых и прогениторных клеток. После трансплантации мы описаны подходы к оценке эффективности трансплантации и сохранение клеток донора MDS.
Введение
Миелодиспластические синдромы (MDS) представляют собой разнообразный набор клоновых крови расстройства характеризуются неэффективным кроветворения, морфологических доказательств дисплазии и склонность для преобразования острый миелоидный лейкоз (ОМЛ)1,2 ,3,4. Неэффективные кроветворения признан созревания арест в костный мозг и результаты в периферической крови цитопении несмотря на костный мозг hypercellular1,3. Распространенность MDS различно оценивается как 2-12 случаев на 100 00....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Животных процедуры, описанные в этой статье были утверждены в национальном институте рака в Bethesda животное уход и использование Комитета и соответствуют политики, содержащихся в политике службы общественного здравоохранения на гуманного ухода и использования лабораторных животных, Закон о защите животных и руководство для ухода и использования лабораторных животных.
1. Подготовка клетки
- Заготовка ядерных клеток костного мозга (BMNC)
- Используйте только стерильные материалы. Стерилизуйте повторно используемых инструментов, с помощью паровой автоклав. Покупка, иглы, шприцы и пластиковая посуда в одноразовых стерильных конт....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Мы показываем представительных цифры для результаты нескольких экспериментов. Рисунок 1 показывает представитель проточной цитометрии, сортировка эксперимент. Во время нормального кроветворения дифференциации как клетки становятся приверженность конкретным гемопоэтических линии, они приобретают определение линии клеток поверхностных маркеров и потерять возможность самообновления. Таким образом в мышах одичал типа, стволовых клеток самообновлению ограничиваетс.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Хотя MDS расстройство клоновых гемопоэтических стволовых клеток, MDS «остановить» или вызывающей ячейки, пока не характеризовались. Ранее мы показали, что MDS может быть которые спасаютжизньпритрансплантации WT мышей с использованием костного мозга от NHD13 мышей, ТГСК, характеризуется пернициозной анемии, лейкопения, нейтропения и морфологических доказательств дисплазии15. Кроме того конкурентоспособные заселение анализов определены преимущества роста клеток из костного мозга NHD13 MDS. Взятые вм.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
У нас есть ничего не разглашать.
Благодарности
Эта работа была поддержана интрамуральных программа исследований Национального института рака, национальные институты здравоохранения (Грант 010378 SC Зия и до н.э. 010983).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 14 мл трубки с круглым дном | Falcon | 352057 | |
| сбалансированный раствор соли Хэнка | Lonza | 10-527F | |
| Anti-CD45.2 антитело | Southern Biotech | 1800-15 | LOT# A077-T044O |
| 3 мл шприц | Monoject | 8881513934 | |
| игла 27-G BD | 305109 | ||
| игла 20-G BD | |||
| Lineage Cocktail | Miltenyi | 130-090-858 | LOT# 5170418221 |
| Антитела к биотину | Miltenyi | 130-113-288 | LOT# 5171109046 |
| 1 мл Шприц | Excelint | 26027 | Инсулиновый шприц |
| Нагревательная лампа | Thermo Fisher Scientific | E70001901 | |
| FACS машина | Cytec | FACScan | 2 лазеры, 5 цветовых детекторов |
| FACS сортировочный прибор | Beckman Coulter | MOFLO ASTRIOS | 5 лазеров, 23 параметра, 6 популяционных сортировок одновременно |
| Пропидий Йодид | Thermo Fisher Scientific | P3566 | |
| Гамма-облучатель | Theratronics | Gammacell 40 | |
| Пробирка для сбора крови | RAM scientific | 76011 | |
| Recipient мыши | Charles River | B6-LY5.1/Cr, CD45.1 | |
| NUP98-HOXD13 мыши | n/a | C57Bl/6, CD45.2 | Colony содержались в NIH |
| 5 мл круглодонная трубка | Falcon | 352058 |
Ссылки
- Corey, S. J., et al. Myelodysplastic syndromes: the complexity of stem-cell diseases. Nature Reviews Cancer. 7 (2), 118-129 (2007).
- Garcia-Manero, G. Myelodysplastic syndromes: 2015 Update on diagnosis, risk-stratification an....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
