Методическая статья

Определение активности фосфолипазы C в мозг огневки от пчелы

DOI:

10.3791/58173

⸱

14 сентября 2018 г.

 ,  , 
1Bioproduction Research Institute, National Institute of Advanced Industrial Science and Technology, 2Department of Biological Sciences, Graduate School of Science, The University of Tokyo

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Чтобы проверить тормозящее действие фармакологических агентов на фосфолипаза C (PLC) в различных регионах мозга пчелы, мы представляем биохимического анализа для измерения активности PLC в этих регионах. Этот assay может быть полезным для сравнения PLC активность тканей, а также среди пчел, экспонирование различных поведений.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Пчелы-организм модель для оценки сложного поведения и выше функции мозга, таких как обучение, память и разделение труда. Грибные тела (МБ) — выше мозга центр предложил быть нейронных субстрат поведения сложных пчелы. Хотя предыдущие исследования генов и белков, которые выражаются дифференцировано в MBs и других регионах мозга, деятельность белков в каждом регионе еще не понял полностью. Раскрыть функции этих белков в головном мозге, фармакологический анализ целесообразный подход, но сначала необходимо подтвердить, что Фармакологическое манипуляции действительно изменить активность белка в этих регионах мозга.

Мы ранее выявленные выше выражение генов, кодирующих фосфолипаза C (PLC) в MBs чем в других регионах мозга и фармакологически оценку участия PLC в поведении медоносных пчел. В этом исследовании мы биохимически проверили два фармакологических агентов и подтвердили, что они снижение активности PLC в MBs и других регионах мозга. Здесь мы представляем подробное описание о том, как обнаружить PLC деятельность в пчелы мозга огневки. В этой системе пробирного гомогенатах, полученных от различных мозга прореагировало с синтетическими fluorogenic субстрат, и флуоресценции, результатом деятельности PLC количественно и сравнении между областями мозга. Мы также обсудим наши оценки тормозящее действие некоторых лекарств на активность PLC, используя ту же систему. Хотя эта система, вероятно, пострадавших от других эндогенных флуоресценции соединений и/или абсорбция пробирного компонентов и тканей, измерения деятельности PLC, с помощью этой системы безопаснее и проще, чем, с помощью традиционных assay, который требует radiolabeled субстратов. Простые процедуры и манипуляции позволяют нам проанализировать деятельность PLC в мозги и других тканях медоносных пчел, участвующих в различных социальных задач.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Европейская медоносной пчелы (Apis mellifera L.) является эусоциальных насекомых, и Женский пчел Показать каста зависимых воспроизводства и зависящих от возраста разделение труда. Например в стерильных касты пчел, упоминаемые как «рабочие», молодых людей кормить выводка, в то время как старые комбикорма нектара и пыльцы вне куст1. Обучение и память, что способность критически важную роль в жизни пчелы, потому что кормоуборочные комбайны должны постоянно идти вперед и назад между источниками продовольствия и их гнезда и затем общаться расположения источников хорошее питание для их nestmates через танец сообщение1. Предыдущие исследования показали, что MB, выше мозговой центр в насекомых, участвует в учить и память способности пчелы2,3,4. Дифференциально выраженной генов и белков были определены в различных регионах мозга пчелы5,6,,78,9,10 ,11, предполагая, что они связаны с уникальными функциями каждой области мозга. Хотя фармакологических ингибирования или активации белка интерес представляет собой хорошо использовать подход к раскрыть функцию белка в пчелы поведение12,13,14, это неизвестно ли все наркотики иметь функциональные последствия в различных регионах мозга медоносной пчелы. Проверка функций таких наркотиков будет укреплять выводы исследования поведенческой фармакологии.

Здесь мы сосредоточены на PLC, один из ферментов, причастных к мыши познания15,16,17,18. PLC кальция триггеры сигнализации от унижающего достоинство фосфатидилинозитол 4,5-Бисфосфат (пункт2) в инозитол 1,4,5-trisphosphate (IP-3) и диацилглицерол (ГПДР)19,,2021. IP3 открывает IP3 рецепторов в эндоплазматический ретикулум (ER), приводит к высвобождению ионов кальция от ER. Выпущенные кальция активирует кальция/Кальмодулин зависимая протеинкиназа II (CaMKII) с Кальмодулин и протеинкиназы C (PKC) в присутствии группы доступности базы данных. Обе протеинкиназы участвуют в процессе обучения и памяти22,23, в соответствии с привлечением PLC в этот процесс. ПЛК делятся на подтипы, включая PLCβ, PLCγ и PLCε, на основе их структуры20. Каждый подтип PLC активируется в другом контексте20, и генов, кодирующих эти подтипы дифференциально выражаются в различных тканях. Ранее мы показали, что пчелы MBs выражать гены, кодирующие PLCβ и PLCε подтипы на более высоких уровнях, чем остальные регионы мозга24, и что две пан PLC ингибиторы (edelfosine и неомицина сульфат [неомицин]) снижение активности PLC в различных регионах мозга и, действительно, влияют на обучение и память способность пчел24.

Традиционно Ферментативная активность PLC была измерена с помощью radiolabeled PIP225, который требует надлежащей подготовки, оборудования и средств. Недавно синтетических fluorogenic субстрат PLC был установленным26, что делает его легко оценить деятельность PLC в стандартных лаборатории. Здесь мы представляем подробный протокол для обнаружения деятельности PLC в различных мозга пчелы с использованием fluorogenic субстрата и впоследствии проверить тормозящее действие edelfosine и неомицина на PLC в этих тканях. Потому что протокол требует только основные манипуляции, могут быть применимы к исследования PLC активность в других тканях или областей мозга в пчел, выделенных для различных социальных задач.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. захват нагула пчел

  1. Приобрести пчелы колонии от локального распространителя.
  2. Использование насекомых net, поймать добытчик пчел, которые возвращаются в улей с пыльцой Сумки на лапах. Передача пчел к стандартной 50 мл конические пластиковой трубки и крышка трубки (рис. 1). Положите трубку на льду чтобы анестезировать пчел.
    Примечание: Носите назначенный куртки для пчеловодства во избежание пчелы. Медсестер пчел также могут быть собраны в зависимости от эксперимента. Чтобы поймать пчел, наблюдать за поведением пчел на гребень воска и поймать пчел, которые совать их головы в расплода ячейки кормить личинок, крыло или грудной клетки, с помощью пинцета. Затем, место пчел в 50-мл пластиковую трубку, крышка трубки и положил его на льду, как указано в шаге 1.2.
  3. Случайно захватить 12 кормоуборочные комбайны.
    Примечание: Этот протокол использует два пчел на лот, что приводит к шести лотов. Несколько пчел могут быть перехвачены в одной из труб, и количество пчел в одной трубке не важна, как пчелы в каждой партии объединяются позднее (см. шаг 3.1.1). Держите трубку прохладно летом, как высокая температура в трубе ранит пчел.

2. рассечение мозг пчелы

  1. В лаборатории место 50 мл на льду для по крайней мере 30 минут6 анестезировать пчел.
  2. Для подготовки этапа рассечение, складывать кусок зубоврачебный воск в половине (полученный размер составляет около 3,5 x 7,5 см) и вставьте его в пластиковый блюдо (60 x 15 мм).
    Примечание: Складчатые воск уверенно удерживает насекомых булавки.
  3. Под бинокулярный микроскоп отделить пчелы от его тела с помощью пинцета и закрепить его на зубоврачебный воск, вставив насекомых булавки на базе каждой антенны держать передней головы в вертикальном положении(рис. 2).
    Примечание: Мыть пинцет перед использованием, использование этанола или стерилизации воды.
  4. Налейте достаточно солевой раствор (0,13 моль/Л NaCl, 5 ммоль/Л хлористого калия и 1 ммоль/Л CaCl2-2 H2O) на голову, чтобы покрыть его. Пробить голову снова с контактами, если руководитель плавает в решении. При необходимости используйте ледяной физиологический раствор.
    Примечание: Однако, этот протокол работает без холодной физиологический раствор.
  5. Удаление антенн, используя пинцет (рис. 2B).
  6. Сделайте горизонтальный разрез возле основания антенны и продольно на границе Составные глаза, с помощью скальпеля. Затем сделайте горизонтальный разрез в верхней части головы. Удаление кутикулы, чтобы открыть окно над мозга (рис. 2C).
    Примечание: При необходимости мыть скальпеля с этанолом или стерилизации воды перед использованием.
  7. Удаление retinae от глазка и трахею на передней поверхности мозга, используя пинцет (Рисунок 2D).
  8. Разверните разрез на границе Составные глаза дорсально и вентрально, с помощью скальпеля (2 рисунокE). Далее удалите соединительной ткани между кутикулы Составные глаза и retinae, вставив пинцет непосредственно под глаз кутикулы (Рисунок 2F).
  9. Отказаться от кутикулы Составные глаза. Выберите спинной советы retinae Составные глаза с помощью пинцета и переместить пинцет в вентральной направлении тщательно слезает retinae (рис. 2G).
  10. Осторожно удалите оставшиеся трахею на передней поверхности мозга, используя пинцет (Рисунок 2H).
  11. Вырезать соединительной ткани между мозгом и вокруг ткани, с помощью пинцета и вскрыть мозг от головной капсулы (Рисунок 2H).
  12. Отделите трахею на задней поверхности мозга, используя пинцет(рисунок 2-я).
  13. С помощью скальпеля, вырежьте связь между MBs и других регионах мозга рядом с вертикальной лопастями, которые являются частью MBs (Рисунок 2J).
  14. Место расчлененных MBs и остальные ткани мозга в 1,5 мл пробирок и быстро заморозить их с сухой лед или жидкий азот (рис. 2K). Храните замороженные ткани-80 ° c до использования.
    Примечание: Обработка жидкого азота с назначенным Перчатки и вентиляцию, чтобы избежать ожога холодной и удушья. Сухой лед следует также быть осторожно с перчатками. Протокол может быть приостановлена здесь. Рассечение и хранения мозга тканей должна быть выполнена одна пчела одновременно, чтобы избежать деградации белка.

3. Подготовка гомогенатах мозга

  1. 10 мкл гомогенизации буфера, состоящий из 50 ммоль/Л HEPES-Кох (рН 7,2), 70 ммоль/Л хлористого калия и 1,0 ммоль/Л CaCl2 для замороженных мозгов ткани и гомогенизации ткани в 1,5 мл, вручную применив давления с пестиком пластиковую. Инсульта ткани по меньшей мере 200 x.
    Примечание: Выполнение манипуляций, описанных в разделе 3 на льду. Используйте пестик, установку прямо в трубе достаточно разбить тканей, которые легко плыть в буфере гомогенизации.
    1. Гомогенизированные ткани решение передать следующий ткани в партии и гомогенизации ткани таким же образом.
      Примечание: На данном этапе объединяются пчел в каждой партии. Этот протокол использует шесть много.
  2. 30 мкл буфера гомогенизации.
  3. Центрифуга для образца гомогенизированные ткани для 10 мин на примерно 900 x27 gи 4 ° C.
  4. Супернатант передать новый 1,5 мл и центрифуги его снова для 20 минут около 9500 x27 gи 4 ° C.
  5. Место супернатант в новом 1,5 мл. Храните огневки при-20 ° C до использования.
    Примечание: Протокол может быть приостановлена здесь.
  6. Определите концентрацию протеина, с помощью bicinchoninic кислоты (BCA) assay.
    1. Разбавить 2,5 мкл огневки с 17,5 мкл стерилизации воды (таким образом разбавляя огневки восемь раз) и использовать все разбавленным огневки.
      Примечание: Огневки выборки с помощью микропипеткой должны тщательно выполняться из-за его высокой вязкости.
    2. Выполните пробирного BCA, с помощью 0, 0,1, 0,2, 0,4, 1,0 и 2,0 мг/мл бычьим сывороточным альбумином (БСА) в 20 мкл в качестве стандартов.
      Примечание: Изменить масштаб BCA assay при необходимости, на основе объема огневки и стандартных образцов. Протокол может быть приостановлена здесь.

4. PLC реакция в гомогенатах мозга

  1. Подготовить раствор субстрата WH-15 fluorogenic26 , растворенных в воде стерилизовать в 50 мкмоль/Л и храните его при температуре-80 ° C.
    Примечание: Обложка растворы, содержащие подложки с пленкой для предотвращения выцветания.
  2. Подготовьте премикс реакции в необходимый объем для достижения следующий состав в 10 мкл реакционной смеси: 50 ммоль/Л HEPES-Кох (рН 7,2), 70 ммоль/Л хлористого калия, 1,0 ммоль/Л CaCl2, 2.0 Дитиотреитол ммоль/Л, 50 мг/Л BSA и 12,5 мкмоль/Л WH-15.
  3. Разбавьте огневки с гомогенизации буфера, если требуется.
  4. Mix реакции премикс и огневки, содержащие 1,3 мкг белка в трубу полимеразной цепной реакции (ПЦР) для достижения окончательный объем 10 мкл реакционной смеси.
    1. Подготовить два типа управления смесей для статистического анализа: Положите огневки, но не WH-15 в смесь (смесь 1 управления) и наоборот (смесь 2 управления).
      Примечание: Подготовьте реакции смесей и смесей управления на льду для предотвращения деградации белка и реакция PLC. Управления смесей 1 и 2 используются для обнаружения флуоресценции от огневки и бесплатные субстрата, соответственно.
  5. Промойте трубку и инкубировать в тепловой cycler для 30 мин при температуре 25 ° C.
  6. Остановить реакции, добавив 2 мкл 25 бис этиленгликоля ммоль/Л (β-aminoethylether)-N, N, N', N'-tetraacetic кислоты.
    Примечание: Суммы соответствующего белка и время реакции варьируются среди экспериментов. Таким образом чтобы оптимизировать условия реакции, может быть необходимо повторить описанные в шагах 4.1-5.3 предварительные эксперименты, изменяя время сумма и инкубации белка, пока флюоресценция увеличивается линейно. Для справки когда используется огневки, полученных из других регионов мозга, реакции обычно работает линейно с 1,3 мкг или меньше белков в течение 30 мин, но линейность уменьшается с по крайней мере 2,7 мкг белка или инкубации время 90 мин или Ло пальцев.

5. Определение флюоресценции, результатом деятельности PLC

  1. Центрифуга реакционной смеси и управления смеси для 5 минут приблизительно 310 x28 gи передачи 10 мкл супернатант в различных скважин на 384-ну микроплиты, применимых для флуоресценции обнаружения.
    Примечание: Для предотвращения выцветания и загрязнение пылью, крышка с фольгой.
  2. Очистка с помощью центрифуги для микроплиты Гонав.
  3. Установите пластину в Считыватель микропланшетов и обнаружить флуоресценции с технической экземплярах.
    Примечание: Волны возбуждения и выбросов находятся 344 Нм и 530 нм, соответственно. Если применимо (в зависимости от Считыватель микропланшетов), перемешивают образец смеси для 5 s перед каждой обнаружения. Протокол может быть остановлено здесь.

6. тест ингибирующее действие фармакологических агентов

  1. Подготовка запасов решения edelfosine и неомицин в соответствующих концентрациях и хранить их до использования: edelfosine 5,0 ммоль/Л и-20 ° C; Неомицин 550 ммоль/Л и 4 ° C.
  2. При подготовке премикс реакции, как описано в шаге 4.2., добавьте ингибиторы премикс для достижения соответствующей окончательной концентрации: edelfosine, 1,0 ммоль/Л; неомицин, 0.55 ммоль/л
  3. Добавьте огневки смеси premixture и надлежащего управления реакции как в шаге 4.4.
    1. Подготовить три типа управления смесей: Положите огневки и ингибитор, но не субстрата в смесь управления 1; Добавление подложки и АБС битор но не огневки в смесь управления 2; и ингибитора, но не Гомогенат трутневых или субстрат в смесь управления 3.
  4. Выполните PLC реакции и обнаружения флуоресценции, как описано в шагах 4.5-5.3.

7. Статистический анализ

  1. Для обнаружения PLC активности с использованием смесей, описанные в разделе 4 Вычислите флуоресценции, производный от реакции между PLC и подложке путем вычитания флуоресценции, излучаемый огневки или бесплатные субстрата следующим.

    FL (PLC активность) = Fl (реакция mix) - {Fl (ctrl 1) + Fl (ctrl 2)}
    ​
    Примечание: Fl (PLC деятельность), Fl (реакция микс), Fl (ctrl 1) и Fl (ctrl 2) обозначают флуоресценции Бона ФИДЕ , полученных от деятельности PLC, флуоресценции обнаружен в реакционную смесь и управления смесей 1 и 2, соответственно.
    1. После измерения флуоресценции в смеси, как описано в шагах 4.1-5.3 Вычислите Fl (PLC активность) согласно уравнение в шаге 7.1, а затем означает Fl (PLC активность) технического экземплярах для каждого огневки.
    2. С помощью средней Fl (PLC активность) технического экземплярах, полученного на шаге 7.1.1, снова вычислить среднее Fl (PLC активность) биологических реплицирует MBs и других регионов мозга и сравнивать значения между тканей мозга.
  2. Для изучения активности PLC в присутствии ингибиторов, с использованием смесей, описанные в разделе 6 Вычислите флуоресценции, производный от реакции среди огневки, субстрат и АБС битор следующим.

    FL (PLC деятельность с ингибитором) = Fl (реакция mix) - {Fl (ctrl 1) + Fl (ctrl 2)} + Fl (ctrl 3)

    Примечание: Здесь, Fl (PLC деятельность с ингибитором) является bona fide флуоресценции результате PLC активности в присутствии ингибиторов. FL (реакция микс), Fl (ctrl 1), Fl (ctrl 2) и Fl (ctrl 3) являются флуоресценции сигналы обнаружены в реакционной смеси, смеси управления 1, контролировать смесь 2 и управления смесь 3, соответственно.
    1. После измерения флуоресценции в смеси, как описано в шагах 6.1-6.4 вычислите по формуле в шаге 7.2 Fl (PLC деятельность с ингибитором). Затем получите среднее Fl (PLC деятельность с ингибитором) технического экземплярах для каждого огневки.
    2. Используя среднее значение, рассчитанное на шаге 7.2.1, вычислить среднее Fl (PLC деятельность с ингибитором) биологических реплицирует, производный от каждой ткани мозга. Сравните Fl (PLC деятельность с ингибитором) и Fl (PLC деятельность), полученные на шаге 7.1.2 в каждой ткани мозга.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Концентрации белка в гомогенатах мозга:
Мы подготовили гомогенатах с помощью добытчик пчел. Вычисляемые белка концентрации в оригинальной гомогенатах показаны на рисунке 3. Приблизительные белка концентрации в оригинальной огневки были следующим образом: 1,5 мг/мл в MBs и 2,3 мг/мл в других регионах мозга. Мы использовали два пчел на лот, и были проанализированы шесть много.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Биохимические экспертиза деятельности белка крайне важно для понимания молекулярных сигналов в головном мозге, потому что активность фермента зависит от различных молекул, например субстратов и ингибиторов и может таким образом, изменить вместе с поведение животных (например, обучение и память)5. Пчелы исследований ферментов, таких как ЦАМФ зависимая протеинкиназа A, циклического GMP зависимая протеинкиназа, Петропавловск, фосфорилированных CaMKII и аденилатциклазы сообщается дифференциал...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы не имеют ничего сообщать.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Рисунок 4B - 4 D был изменен с Suenami и др. 24 с разрешения открытого биологии. Авторы выражают благодарность к издателю для разрешения. Эта работа была поддержана человека пограничной науки программы (RGY0077/2016) Шота Suenami и Ryo Миядзаки.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Набор для анализа белка Pierce BCAThermoFisher Scientific23227Набор реагентов для измерения концентрации белка
Pierce Bovine Serum Albumin Standard Ampoules 2mg/mlThermoFisher Scientific23209Стандартные образцы, используемые в анализе BCA
ПарафинGC13B1X00155000141Стоматологический воск используется в качестве стадии вскрытия
Insect pinShigaNo 0Нержавеющая твердая головка
PLCglowKXT BioKCH-0001Флуорогенный субстрат ПЛК
384-луночный микропланшетCorning4511Малообъемная пластина с круглым дном черного цвета
Gemini EM считыватель микропланшетовМолекулярные устройства
ЭдельфозинСанта Круз Биотехнологияsc-201021пан-ПЛК ингибитор
Неомицин сульфатSanta Cruz Biotechnologysc-3573пан-ПЛК ингибитор

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Winston, M. L. The Biology of the Honey Bee. , Harvard University Press. Cambridge, MA. (1991).
  2. Szyszka, P., Galkin, A., Menzel, R. Associative and non-associative plasticity in Kenyon cells of the honeybee mushroom body. Frontiers in Systems Neuroscience. 2, 3(2008).
  3. Müßig, L., et al. Acute disruption of the NMDA receptor subunit NR1 in the honeybee brain selectively impairs memory formation. The Journal of Neuroscience. 30 (23), 7817-7825 (2010).
  4. Devaud, J. -M., et al. Neural substrate for higher-order learning in an insect: mushroom bodies are necessary for configural discriminations. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (43), E5854-E5862 (2015).
  5. Grünbaum, L., Müller, U. Induction of a specific olfactory memory leads to a long-lasting activation of protein kinase C in the antennal lobe of the honeybee. The Journal of Neuroscience. 18 (11), 4384-4392 (1998).
  6. Kamikouchi, A., Takeuchi, H., Sawata, M., Natori, S., Kubo, T. Concentrated expression of Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase II and protein kinase C in the mushroom bodies of the brain of the honeybee Apis mellifera L. The Journal of Comparative Neurology. 417 (4), 501-510 (2000).
  7. Sen Sarma, M., Rodriguez-Zas, S. L., Hong, F., Zhong, S., Robinson, G. E. Transcriptomic profiling of central nervous system regions in three species of honey bee during dance communication behavior. PLoS ONE. 4 (7), e6408(2009).
  8. Kaneko, K., et al. In situ hybridization analysis of the expression of futsch, tau, and MESK2 homologues in the brain of the European honeybee (Apis mellifera L.). PLoS ONE. 5 (2), e9213(2010).
  9. Kaneko, K., et al. Novel middle-type Kenyon cells in the honeybee brain revealed by area-preferential gene expression analysis. PLoS ONE. 8 (8), e71732(2013).
  10. Pasch, E., Muenz, T. S., Rössler, W. CaMKII is differentially localized in synaptic regions of kenyon cells within the mushroom bodies of the honeybee brain. The Journal of Comparative Neurology. 519 (18), 3700-3712 (2011).
  11. Suenami, S., et al. Analysis of the differentiation of Kenyon cell subtypes using three mushroom body-preferential genes during metamorphosis in the honeybee (Apis mellifera L.). PLoS ONE. 11 (6), e0157841(2016).
  12. Farooqui, T., Robinson, K., Vaessin, H., Smith, B. H. Modulation of early olfactory processing by an octopaminergic reinforcement pathway in the honeybee. The Journal of Neuroscience. 23 (12), 5370-5380 (2003).
  13. Matsumoto, Y., et al. Cyclic nucleotide-gated channels, calmodulin, adenylyl cyclase, and calcium/calmodulin-dependent protein kinase II are required for late, but not early, long-term memory formation in the honeybee. Learning & Memory. 21 (5), 272-286 (2014).
  14. Scholl, C., Kübert, N., Muenz, T. S., Rössler, W. CaMKII knockdown affects both early and late phases of olfactory long-term memory in the honeybee. Journal of Experimental Biology. 218, 3788-3796 (2015).
  15. Miyata, M., et al. Deficient long-term synaptic depression in the rostral cerebellum correlated with impaired motor learning in phospholipase C β4 mutant mice. European Journal of Neuroscience. 13 (10), 1945-1954 (2001).
  16. Koh, H. -Y., Kim, D., Lee, J., Lee, S., Shin, H. -S. Deficits in social behavior and sensorimotor gating in mice lacking phospholipase Cβ1. Genes, Brain and Behavior. 7 (1), 120-128 (2008).
  17. Quan, W. -X., et al. Characteristics of behaviors and prepulse inhibition in phospholipase Cε-/- mice. Neurology,Psychiatry and Brain Research. 18 (4), 169-174 (2012).
  18. Rioult-Pedotti, M. -S., Pekanovic, A., Atiemo, C. O., Marshall, J., Luft, A. R. Dopamine promotes motor cortex plasticity and motor skill learning via PLC activation. PLoS ONE. 10 (5), e0124986(2015).
  19. Ghosh, A., Greenberg, M. E. Calcium signaling in neurons: molecular mechanisms and cellular consequences. Science. 268 (5208), 239-247 (1995).
  20. Smrcka, A. V., Brown, J. H., Holz, G. G. Role of phospholipase Cε in physiological phosphoinositide signaling networks. Cellular Signalling. 24 (6), 1333-1343 (2012).
  21. Dusaban, S. S., Brown, J. H. PLCε mediated sustained signaling pathways. Advances in Biological Regulation. 57, 17-23 (2015).
  22. Elgersma, Y., Sweatt, J. D., Giese, K. P. Mouse genetic approaches to investigating calcium/calmodulin-dependent protein kinase II function in plasticity and cognition. The Journal of Neuroscience. 24 (39), 8410-8415 (2004).
  23. Giese, K. P., Mizuno, K. The roles of protein kinases in learning and memory. Learning & Memory. 20 (10), 540-552 (2013).
  24. Suenami, S., Iino, S., Kubo, T. Pharmacologic inhibition of phospholipase C in the brain attenuates early memory formation in the honeybee (Apis mellifera L.). Biology Open. 7 (1), pii: bio028191 (2018).
  25. Zhu, L., McKay, R. R., Shortridge, R. D. Tissue-specific expression of phospholipase C encoded by the norpA gene of Drosophila melanogaster. The Journal of Biological Chemistry. 268 (21), 15994-16001 (1993).
  26. Huang, W., Hicks, S. N., Sondek, J., Zhang, Q. A fluorogenic, small molecule reporter for mammalian phospholipase C isozymes. ACS Chemical Biology. 6 (3), 223-228 (2011).
  27. Yoshioka, T., Inoue, H., Hotta, Y. Absence of phosphatidylinositol phosphodiesterase in the head of a Drosophila visual mutant, norpA (no receptor potential A). The Journal of Biochemistry. 97 (4), 1251-1254 (1985).
  28. Janjanam, J., Chandaka, G. K., Kotla, S., Rao, G. N. PLCβ3 mediates cortactin interaction with WAVE2 in MCP1-induced actin polymerization and cell migration. Molecular Biology of the Cell. 26 (25), 4589-4606 (2015).
  29. Fiala, A., Müller, U., Menzel, R. Reversible downregulation of protein kinase A during olfactory learning using antisense technique impairs long-term memory formation in the honeybee, Apis mellifera. The Journal of Neuroscience. 19 (22), 10125-10134 (1999).
  30. Thamm, M., Scheiner, R. PKG in honey bees: spatial expression, Amfor gene expression, sucrose responsiveness, and division of labor. The Journal of Comparative Neurology. 522 (8), 1786-1799 (2014).
  31. Balfanz, S., et al. Functional characterization of transmembrane adenylyl cyclases from the honeybee brain. Insect Biochemistry and Molecular Biology. 42 (6), 435-445 (2012).
  32. Lopez, I., Mak, E. C., Ding, J., Hamm, H. E., Lomasney, J. W. A novel bifunctional phospholipase C that is regulated by Gα12 and stimulates the Ras/mitogen-activated protein kinase pathway. The Journal of Biological Chemistry. 276 (4), 2758-2765 (2001).
  33. Huang, W., et al. A membrane-associated, fluorogenic reporter for mammalian phospholipase C isozymes. The Journal of Biological Chemistry. 293 (5), 1728-1735 (2018).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

PLC

Похожие статьи