Методическая статья

Использование Autometallography для локализации и полу количественно серебра в тканях китообразных

DOI:

10.3791/58232

⸱

4 октября 2018 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Graduate Institute of Molecular and Comparative Pathobiology, National Taiwan University, 2School of Veterinary Medicine, National Taiwan University, 3Department of Oceanography and Asia-Pacific Ocean Research Center, National Sun Yat-sen University, 4Graduate Institute of Veterinary Pathobiology, National Chung Hsing University

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Протокол представлен autometallography для локализации Ag в китообразных тканях печени и почек. Кроме того новый пробирного, названный китообразных Пробирной гистологического Ag (Чаа) разработана для оценки концентраций Ag в этих тканях.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Наночастиц серебра (AgNPs) широко используются в коммерческих продуктов, включая текстиль, косметики и медицинских пунктов, их сильным антимикробным воздействием. Они также могут попадать в окружающую среду и накапливаются в океане. Таким образом AgNPs являются основным источником загрязнения Ag, и повышение осведомленности общественности о экологической токсичности Ag. Предыдущие исследования показали биоаккумуляции (в производителей) и масштаб (в потребителей/хищников) АГ. Китообразных, как Апекс хищников океана, может отрицательно сказались Ag/Ag соединений. Хотя концентрации соединений Ag/Ag в тканях китообразных могут быть измерены индуктивно связанной плазмы масс-спектроскопии (ICP-MS), использование ICP-MS ограничивается его высокие капитальные затраты и требования для хранения/Подготовка тканей. Таким образом autometallography (AMG) метод с количественный анализ изображений с помощью формалин исправлена, парафин врезанных тканей (FFPE) может быть методом адъювант для локализации Ag распределения на уровне скупщиков и оценки концентрации Ag в китообразных тканей. Позитивные сигналы AMG основном коричневый черный гранул различных размеров в цитоплазме проксимальных почечных трубчатых эпителия, гепатоцитов и клеток Купфера. Иногда некоторые аморфного золотисто-желтый коричневый AMG позитивные сигналы, отмечены в просвет и базальной мембраны некоторых проксимальных почечных канальцев. Анализа для оценки концентрации Ag называется Пробирной гистологического Ag китообразных (Чаа), который представляет собой модель регрессии, установленные данным изображения количественный анализ метода AMG и ИСП-МС. Использование AMG с Чаа локализовать и полу количественную оценку тяжелых металлов обеспечивает удобный методологии для исследования пространственно временных и кросс видов.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Наночастиц серебра (AgNPs) широко используются в коммерческих продуктов, в том числе текстильных изделий, косметики и медицинских пунктов, из-за их большой антимикробным эффекты1,2. Таким образом производство AgNPs и количество продуктов, содержащих ССПС увеличиваются за время3,4. Однако AgNPs может быть выпущено в окружающую среду и накапливаются в океан5,6. Они стали основным источником загрязнения Ag, и повышение осведомленности общественности о экологической токсичности Ag.

Статус AgNPs и Ag в морской среды является сложной и постоянно меняющейся. Предыдущие исследования показали, что AgNPs могут оставаться, частицы, совокупные, распустить, реагируют с различных химических видов или регенерироваться из ионов Ag+ ,78. Несколько типов соединений Ag, например AgCl, были найдены в морских отложениях, где они могут быть ingested бентических организмов и ввести в пищевой цепи9,10. По словам предыдущего исследования, проведенного в районе лагуны Чи ку вдоль юго-западного побережья Тайваня Ag концентрации морских отложениях являются крайне низкими и похож на коре, и те из ткани печени рыб, как правило, ниже обнаружения ограничение (< 0,025 мкг/г мокрой/мокрый)11. Однако предыдущие исследования, проведенные в различных странах продемонстрировали относительно высокие концентрации Ag в печень китообразных12,13. Концентрация Ag в печень китообразных зависит от возраста, предполагая, что источник Ag в их тела, скорее всего их добычей12. Эти выводы далее предложить биоусиления Ag в животных на более высоких трофических уровнях. Китообразных, как Апекс хищников в океане, возможно, страдал негативных медицинских последствий, вызванных Ag/Ag соединений12,,1314. Самое главное как китообразных, люди являются млекопитающие и негативных медицинских последствий, вызванных Ag/Ag соединений в китообразных могут возникнуть также в организме человека. Другими словами китообразных могут быть дозорных животных для здоровья людей и морской среды. Таким образом воздействие на здоровье человека, тканей распределение и концентрация Ag в китообразных, большую озабоченность.

Хотя концентрации соединений Ag/Ag в тканях китообразных могут быть измерены индуктивно связанной плазмы масс-спектроскопии (ICP-MS), использование ICP-MS ограничивается его высокие капитальные затраты (инструмент и содержание) и требования для хранения тканей /Preparation12,15. Кроме того обычно трудно собирать образцы всеобъемлющей тканей во всех расследованиях случаев мель китообразных из-за материально-технические трудности, нехватка людских ресурсов и нехватка соответствующих ресурсов12. Замороженные ткани проб для анализа ICP-MS хранятся не легко из-за ограниченного холодильного пространства, и образцы замороженные ткани может отказаться из-за сломанной холодильное оборудование12. Эти вышеупомянутые препятствия мешают исследования уровней загрязнения в тканях китообразных ICP-MS анализа с использованием образцов замороженные ткани. В отличие от фиксированной образцы тканей формалином сравнительно легко собирать в ходе патанатомия мертвых мель китообразных. Таким образом необходимо разработать простой в использовании и недорогой метод для обнаружения/мера тяжелых металлов в китообразных тканей с помощью фиксированной образцы тканей формалином.

Хотя скупщиков распределения и концентрации щелочных и щелочноземельных металлов могут быть изменены во время формалин исправлена, парафин врезанных (FFPE) процесс, только меньшее воздействие на переходных металлов, таких как Ag, было отмечено16. Следовательно FFPE ткани рассматривался как идеальный образец ресурс для металлических локализации и измерения16,17. Autometallography (AMG), гистохимические процесса, может усиливать тяжелых металлов как переменно размера золотисто-желтый черный AMG позитивные сигналы на разделах ткани FFPE, и эти усиленные тяжелые металлы могут быть визуализированы под световой микроскопии18, 19 , 20 , 21. Следовательно, метод AMG предоставляет информацию о скупщиков распределения тяжелых металлов. Он может обеспечить важную дополнительную информацию для изучения метаболических тяжелых металлов в биологических системах, потому что ICP-MS можно измерить только концентрация тяжелых металлов на уровне органов18. Кроме того программное обеспечение для анализа цифровых изображений, таких как ImageJ, был применен к анализу количественного гистологический ткани разделы22,23. Переменно размера золотисто-желтый черный AMG позитивные сигналы разделов ткани FFPE могут быть количественно и использованы для оценки концентраций тяжелых металлов. Хотя абсолютная концентрация Ag не может непосредственно определяется метод AMG с количественного анализа изображений, она может быть оценена путем регрессионной модели, основанные на данных, полученных от количественного анализа изображений и ICP-MS, которая называется китообразных Пробирной гистологического Ag (Чаа). Учитывая трудности измерения концентрации Ag путем анализа ICP-MS в наиболее затруднительном положении китообразных, Чаа является ценным адъювантной методом для оценки концентраций Ag в китообразных тканях, которые не могут быть определены ICP-MS анализа из-за отсутствия замороженная образцы тканей. Этот документ описывает протокол гистохимический метод (метод AMG) для локализации Ag на уровне скупщиков и assay именем Чаа для оценки концентраций Ag в тканях печени и почек китообразных.

figure-introduction-1
Рисунок 1: схема, изображающие установление и применение китообразных Пробирной гистологического Ag (Чаа) для оценки концентрации Ag. Чаа = китообразных Пробирной гистологического Ag, FFPE = формалин исправлена, парафин врезанных, ИСП-МС = индуктивно связанной плазмы масс-спектроскопии. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Исследование проводилось в соответствии с международными руководящими принципами, и разрешается использование образцов ткани китообразных Советом сельского хозяйства Тайваня (исследования позволяют 104-07.1-SB-62).

1. ткань пробоподготовки для анализа ICP-MS

Примечание: Тканей печени и почек были собраны из свеже мертвых и умеренно autolyzed мель китообразных24, включая 6 мель китообразных 4 различных видов, 1 Гремпус griseus (Gg), 2 похожую spp. (Ko), 2 Lagenodelphis hosei (ЛГ), 1 оттянутая продельфины (Sa). Каждый мель китообразных имел номер поля для индивидуальной идентификации. Ткани пробоподготовки для анализа ICP-MS за метод создан в лаборатории м.х. Чэнь, и Чэнь м.х. Лаборатория провела ICP-MS анализ11,13,25.

  1. Собирать ткани печени и почек для анализа ICP-MS от мель китообразных и хранить их в −20 ° C до использования.
  2. Собирать пара согласованная печени и почечной ткани из того же затруднительном положении китообразных AMG анализа (см. шаг 2).
  3. Трим наружный слой ткани образцов, собранных для ICP-MS анализа с помощью скальпеля из нержавеющей стали. Внутренняя часть образцов ткани нарезать мелкими кубиками (около 1 см3) и поместите их в zip lock пластиковые мешки. Как правило каждый пакет содержит 10 г тканей.
  4. Храните пластиковые мешки, содержащие образцы тканей −20 ° C для последующих процедур.
  5. Положите 1 см3 кубов, образцы в заморозке сухой системы (-50 ° C, вакуумный насос с перемещением по крайней мере 98 Л/мин, 0,002 мбар) для по крайней мере за 72 часа до полностью высох путем взвешивания к константе.
  6. Однородный сушеные кубов в порошок с гомогенизатор для последующих ткани пищеварения.
  7. Весят 0,3 г гомогенизированные лиофилизированной образцов в 30 мл бутылки из политетрафторэтилена (ПТФЭ) и смешайте их с 10 мл 65% w/w азотной кислоты.
  8. Положить закрытия на PTFE бутылки, но оставлять untightened закрытия.
    Примечание: Это позволяет коричневый дыма в форме бутылки PTFE и рефлюкс внутри бутылки для пищеварения до коричневого дыма исчезает и становится ясно.
  9. Тепло переваривается образцы с горячей плите, от 30 ° C до 110/120 ° C (в соответствии с коричневой дыма, формируя условие) в бутылках PTFE для 2-3 недели до коричневатого газ в бутылках PTFE становится бесцветным и жидкости в бутылки PTFE становится полупрозрачным gree НИСМ бледно желтого или совершенно ясно.
    Примечание: Выполните процесс нагрева в химической зонта.
  10. Тепло переваривается образцы на 120 ° C для испарения азотной кислоты в бутылках PTFE до только 0,5-1 мл останков.
    Примечание: Выполните процесс нагрева в Химический вытяжной шкаф и всегда контролировать увеличение температуры для обеспечения что газ не коричневатые утечки из ПТФЭ бутылки закрытия.
  11. Затяните затворы и охладить их при комнатной температуре около 1 часа.
  12. Место воронки с фильтром документы на 25 мл объемные колбы и мыть оставшуюся жидкость с 1 М HNO3 окончательный объем 25 мл.
    Примечание: Мыть бутылки для по крайней мере три раза и закрытие дважды.
  13. Проверка аналитическое качество ICP-MS анализа с помощью стандартных справочных материалов, включая «отморозком»-2 (dogfish печени) и ОБЩЕЖИТИЯ-2 (dogfish мышцы).
  14. Используйте дубликаты каждого аналитической пробы и triplicates стандартных справочных материалов для анализа ICP-MS.
  15. Средние концентрации Ag каждого аналитических образцов и представить данные как основы концентрации сухого веса (мкг/г сухого веса).

2. ткань пробоподготовки для анализа AMG

  1. Собирать пара согласованная тканей печени и почек для анализа AMG мель китообразных и исправить их в нейтральных буферизации формалина 10% до использования.
    Примечание: Храните образцы тканей в пластиковых бутылках в нейтральных буферизации формалина 10% (NBF, pH 7.0) за 24-48 часов. Объем NBF должно быть по крайней мере в 10 раз больше, чем объем тканей.
  2. Трим формалин фиксированной печень и почки тканей с одноразовые микротомных лезвий из нержавеющей стали и разделах обрезанной ткани в видеокассет с лейблами.
    Примечание: Размер каждого из разделов ткани должен быть около 2 см x 1 см и толщина каждого раздела ткани не должна превышать 3 мм., положить тканей печени и почек от того же лица в том же кассету.
  3. Обезвоживает обрезанной ткани разделы с процессором ткани через серию градуированных этанола (70% за 1 ч, 80% за 1 ч, 95% за 1 ч, 95% за 2 ч, 100% для 1 h x 2 окрашивания блюда и 100% для 2 h), не ксилол (за 1 час и 2 h в различных блюдах окрашивание) и погружать образцы обезвоженной тканей в paraffin (за 1 час и 2 h в различных блюдах окрашивание).
  4. Образцы тканей обезвоженной в днища стальных гистология формы и внедрить образцы обезвоженной ткани с парафином.
  5. Холод формалин, фиксированной парафин врезанных блоков ткани (FFPE) на холодную тарелку до парафин застывает. Обрежьте FFPE блоков с микротома до тех пор, пока поверхность ткани подвергается.
  6. Холод FFPE блоков на −20 ° C в течение 10 минут в разделе FFPE блоков на 5 мкм, микротома.
  7. Заполните ванну с водой с двойной дистиллированной воды при температуре 45 ° C. Поднимите ленты разделов ткани и сделать их плавать на поверхности теплой воды с помощью пинцета и щетки.
  8. Отдельные ленты разделов ткани с помощью пинцета. Поместите на слайд микроскопа.
  9. Место Микроскоп слайды на слайде теплее и позволяют разделы для высыхания на ночь при 37 ° C.
  10. Микроскоп слайды в слайд стойки и deparaffinize их путем замачивания их в 3 различных окрашивание блюда чистого номера ксилола (примерно 200-250 мл) для 8, 5 и 3 мин.
  11. Гидрата ткани разделы в слайд стойки путем замачивания их в разные блюда окрашивания растворов градуированных этанола (100% этанола дважды, 90% этанола раз и 80% этанола раз [по 1 мин]) и промойте их в двойной дистиллированной воды.
    Примечание: Эти решения являются примерно 200-250 мл на различных блюдах окрашивание. Для каждого мытья 30 секунд вполне достаточно.
  12. Промыть ткани разделы в фосфат амортизированное saline (PBS) с 0,5% Тритон X-100, мыть их с PBS для несколько раз и затем промойте их в двойной дистиллированной воды.
    Примечание: Эти решения являются примерно 200-250 мл на различных блюдах окрашивание. Для каждого, 30 секунд вполне достаточно.
  13. Подготовить равные суммы трех компонентов (инициатор, модератор и активатор) предоставляемые Серебряный расширение kit в темноте и тщательно перемешать.
    Примечание: Решения модератора и активатор липким, поэтому, пожалуйста, используйте Пипетка с широкий кончик отверстия (или вырезать советы для создания более широких отверстий). Для каждого слайда 300 мкл раствора смешанного (в зависимости от размера в разделе ткани), как правило, достаточно. Таким образом при использовании 10 слайдов, количество каждого компонента (инициатор, модератор и активатор) составляет 1000 мкл (комбинированное решение – 3000 мкл 10 слайдов).
  14. Инкубируйте разделов ткани в смешанного решения для 15 мин в темноте при комнатной температуре. Полностью охватывают разделов ткани на слайдах с смешанного решения. Длиннее время инкубации может привести к ложно положительных сигналов AMG.
  15. Вымойте слайды с двойной дистиллированной водой и выведение их в гематоксилином 10 s как изображение.
  16. Вымойте слайды с проточной водой, высушить их и смонтировать их с монтажа средних.
  17. Просмотрите слайды под микроскопом света.
  18. Случайно захватить десять гистологические изображения с 40 X объектив от каждой секции ткани с помощью подключенной цифровой камеры с компьютером изображений программное обеспечение.

3. полуколичественного анализа для положительных значений AMG гистологические изображений

Примечание: AMG положительное значение означает процент от области с AMG позитивные сигналы.

  1. Используйте программное обеспечение для анализа изображений (ImageJ) для анализа гистологические изображения.
  2. Откройте гистологические изображение, нажав файл | Открытые.
  3. Разделить на три цветовых каналов (красный, синий и зеленый) выбранного изображения, нажав изображение | Тип | Стек RGB.
  4. Количественно AMG позитивные сигналы с помощью синего канала. Ядерные ложных положительных сигналов обычно снизилась под синего канала, когда пятно гематоксилином применяется для ядерных изображение (Рисунок 2).
  5. Измерить процент области с AMG позитивные сигналы в каждом гистологические изображения с инструментом «порог» (изображения | Отрегулируйте | Порог).
  6. Вручную настройте порогового значения порога для каждого гистологические изображения (от 90 до 110) на основании присутствия ложных положительных областей в ядрах и/или красных кровяных клеток.
    Примечание: по умолчанию настройки, AMG позитивные сигналы должны быть выделены красным цветом.
  7. Пресс анализировать | Задать размерыи Часть области для указания, что фракция области записи установите флажок.
  8. Пресс анализировать | Мера. Позитивные процент область каждого гистологические изображения отображается в столбце % площади окна результатов .
  9. Средняя позитивные процент области 10 гистологические изображений из каждого раздела ткани и определить результат как AMG положительное значение для каждого раздела ткани.

figure-protocol-1
Рисунок 2: наличие ядерных ложных положительных сигналов под различные цветовые каналы (изображение: гематоксилином пятно). Представитель ядерной ложных положительных сигналов обозначается желтой стрелки. PPA = позитивные процент районов. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

4. Создание китообразных Пробирной гистологического Ag (Чаа) по модели регрессии

Примечание: Приводимый ниже анализ выполняется в 6.01 Призма для Windows.

  1. Оцените взаимосвязь между результатами ICP-MS и AMG положительные значения.
  2. Открытое программное обеспечение, создать новый файл проекта и выберите XY и корреляции.
  3. Входные данные, включая результаты ICP-MS и AMG положительных значений.
  4. Нажмите кнопку анализ и выберите корреляции под категорию XY анализ для анализа прочности ассоциации между результатами ICP-MS и положительных значений AMG, анализ корреляции Пирсона.
    Примечание: Результаты ICP-MS и AMG положительных значений должны положительно коррелироваться друг с другом; в противном случае не будут разработаны последующие регрессионная модель.
  5. Статистически Сравните модели регрессии, включая линейной регрессии, квадратичных регрессии, кубической регрессии и линейной регрессии через происхождения, путем статистического программного обеспечения12,,2627.
    Примечание: Если модель регрессии порождает нереалистичные концентрация Ag, регрессионная модель должна быть брошенных12.
  6. Вернуться к таблице данных (левая панель) и нажмите кнопку анализ | Нелинейная регрессия (кривой) под категорию XY анализ | ОК.
  7. В окне Параметры: нелинейной регрессии, выбрать различные регрессионной модели на странице Fit и затем сравнить различные регрессионных моделей на странице Сравнение.
  8. На странице, сравнитьвыберите методы сравнения, включая дополнительную сумму квадратов F тест и критерии Akaike в информации (AIC). По результатам сравнения методов используйте в Чаа относительно подходящую модель регрессии.
  9. Оцените с помощью Чаа Ag концентрации китообразных тканей печени и почек с неизвестной концентрации Ag.
  10. Оценка точности и точности Чаа для печени и почечной ткани. На рисунке 3показана разница между точностью и точностью.
  11. Точность: Вычислить среднее стандартное отклонение (SD) от различия между концентрациями Ag известны и оценены.
  12. Точность: Выполните повторные измерения (по крайней мере в трех экземплярах) AMG положительные значения последовательных секций из же FFPE тканей. Вычислить среднее SD измерений из тканей печени или почек от различия между концентрациями известны и оценены Ag
    Примечание: Методы оценки точности и точности изображены на рисунке 4.

figure-protocol-2
Рисунок 3: разница между точность и повторяемость. Точность означает, насколько близко измерения в значение true (т.е., концентрация Ag определяется ИСП-МС); точности означает воспроизводимости измерения (т.е. согласованность повторные измерения AMG положительные значения из разделов тройные ткани). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

figure-protocol-3
Рисунок 4: схема, изображающие методы оценки точности и точности. Чаа = китообразных Пробирной гистологического Ag; FFPE = формалин исправлена, парафин врезанных; ICP-MS = индуктивно связанной плазмы масс-спектроскопии; AI = каждый из концентрации Ag, определяется ICP-MS каждого образца соответствует паре ткани; BI = каждый из концентрации Ag, по оценкам Чаа каждого образца соответствует паре ткани; CI, ди и Ei = каждый из концентрации Ag, по оценкам Чаа тройные проб из каждого образца соответствует паре ткани; я = 1 до n. Пожалуйста, смотрите необработанные данные точность и повторяемость тестов в разделе представительных результатов. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

5. Оценка концентрации Чаа Ag.

  1. Собирать ткани печени и почек от мель китообразных и исправить их в нейтральных буферизации формалина 10%.
  2. Обработки тканей формалином Исправлена регулярно (см. шаг 2).
  3. Оценки концентраций Ag китообразных тканей печени и почек с неизвестной концентрации Ag Чаа (см. шаги 3 и 4).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Представитель образов AMG позитивных сигналов в китообразных тканях печени и почек показано на рисунке 5. AMG позитивные сигналы включают переменно размера коричневый черный гранул различных размеров в цитоплазме проксимальных почечных трубчатых эпителия, гепатоцитов и клеток Купфера. Иногда аморфные золотисто-желтый коричневый AMG позитивные сигналы, отмечены в просвет и базальной мембраны некоторых проксимальных почечных канальцев. Существует позитивная кор...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Цель статьи исследования является установить метод адъювантной оценить распределение Ag на уровнях скупщиков и оценить Ag концентрации в тканях китообразных. Текущий протоколы включают в себя 1) определение концентраций Ag в китообразных тканей ICP-MS, 2) AMG анализ образцов тканей, пара согласованная с известной концентрацией Ag, 3) создание модели регрессии (Чаа) для оценки концентрации Ag AMG позитивные ценности, 4) Оценка точности и точности Чаа и 5) оценки Ag концентрации Чаа.

В этом иссл...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы не имеют ничего сообщать.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы благодарим Тайвань китообразных мель сети для сбора и хранения, в том числе китообразных общество Тайвань, Taipei; Китообразных научно-исследовательская лаборатория (профессор Лянь Сян Chou), Институт экологии и эволюционной биологии, Национальный университет Тайваня, Тайбэй; Национальный музей естественных наук (доктор Chiou Цзюй Яо), Тайчжун; и морской биологии и китообразных научно-исследовательский центр, Национальный университет Ченг Кунг. Мы также благодарим бюро лесного хозяйства, Советом сельского хозяйства, Исполнительный юань для их разрешения.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
HQ Silver Enhancement kitNanoprobes#2012
Surgipath ParaplastLeica Biosystems39601006Парафин
100% этанолMuto Pure Chemical Co., Ltd4026
Не-ксилолMuto Pure Chemical Co., Ltd4328
Горка с силановым покрытиемMuto Pure Chemical Co., Ltd511614
Защитное стекло (25 x 50 мм)Muto Pure Chemical Co., Ltd24501
MalinolMuto Pure Chemical Co., Ltd20092
GM Окрашивание гематоксилинаMuto Pure Chemical Co., Ltd3008-1
10% нейтральный буферный раствор формалинаChin I Pao Co., Ltd---
Tip (1000 μ L)MDBio, Inc.1000
PIPETMAN Classic P1000Gilson, Inc.
Центрифужная пробирка 15 млGeneDireX, Inc.PC115-0500
Печень собачьей рыбыНациональный исследовательский совет КанадыDOLT-2
Мышцы собачьей рыбыНациональный исследовательский совет КанадыDORM-2
Масс-спектрометрия с индуктивно связанной плазмой (ICP-MS)PerkinElmer Inc.PE-SCIEX ELAN 6100 DRC
FreeZone 6 литровая система сублимационной сушкиLabconco7752030Для сублимационной сушки
БРЕНД® SILBERBRAND мерная колбаMerckZ326283
30 мл стандартный флакон, плоская внутренняя часть с крышкой 33 ммSavillex Corporation200-030-12Для диагесции
азотная кислота, суперпур®, 65,0%Merck1.00441Для диагезиции
Горячая плита/мешалкиCorning®PC-220Для сортировки
лабораторный смеситель с большими сдвиговыми усилиямиSilversonSL2TДля гомогенизации
Стерильная банка для образцов из полипропилена (250 мл)Thermo Scientific™6186L05Для гомогенизации
Цифровой фотоаппаратNikon CorporationDS-Fi2
Световой микроскопNikon CorporationECLIPSE Ni-U
Shandon™ Утонченность и торговля; 325 микротом ручной ThermoScientific&торговля;
Accu-Cut® SRM™ 200 ротационный микротомSakura1429
Микротом лезвие S35FEATHER®207500000
Горка для окрашивания тарелки и крышкаBrain Research Laboratories#3215
Стойка для окрашивания сталиBrain Research Laboratories#3003
Shandon embedding centerThermo Scientific™S-EC
Shandon Citadel® тканевый процессорThermo Scientific™
Подогреватель стеколLab-Line Instruments26005
Водяная баняShandon Capshaw3964
Фильтровальная бумагаMerck1541-070
Prism 6.01 для WindowsGraphPad Программное обеспечениедля статистики
ImageJNational Institutes of Health
Нержавеющая сталь форма для встраивания тканейShenyang Roundfin Trade Co., LtdRD-TBM003Для выделения парафина
F123602A78100001H69800003

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. McGillicuddy, E., et al. Silver nanoparticles in the environment: Sources, detection and ecotoxicology. Science Total Environment. 575, 231-246 (2017).
  2. Yu, S. J., Yin, Y. G., Liu, J. F. Silver nanoparticles in the environment. Environmental Science: Processes and Impacts. 15 (1), 78-92 (2013).
  3. Hansen, S. F., et al. Nanoproducts- what is actually available to European consumers? Environmental Science: Nano. 3 (1), 169-180 (2016).
  4. Vance, M. E., et al. Nanotechnology in the real world: Redeveloping the nanomaterial consumer products inventory. Beilstein Journal of Nanotechnology. 6, 1769-1780 (2015).
  5. Farre, M., Gajda-Schrantz, K., Kantiani, L., Barcelo, D. Ecotoxicity and analysis of nanomaterials in the aquatic environment. Analytical and Bioanalytical Chemistry. 393 (1), 81-95 (2009).
  6. Walters, C. R., Pool, E. J., Somerset, V. S. Ecotoxicity of silver nanomaterials in the aquatic environment: a review of literature and gaps in nano-toxicological research. Journal of Environmental Science and Health. Part A, Toxic/hazardous Substances & Environmental Engineering. 49 (13), 1588-1601 (2014).
  7. Levard, C., Hotze, E. M., Lowry, G. V., Brown, G. E. Environmental transformations of silver nanoparticles: impact on stability and toxicity. Environmental Science & Technology. 46 (13), 6900-6914 (2012).
  8. Massarsky, A., Trudeau, V. L., Moon, T. W. Predicting the environmental impact of nanosilver. Environmental Toxicology and Pharmacology. 38 (3), 861-873 (2014).
  9. Wang, H., et al. Toxicity, bioaccumulation, and biotransformation of silver nanoparticles in marine organisms. Environmental Science and Technology. 48 (23), 13711-13717 (2014).
  10. Buffet, P. E., et al. A marine mesocosm study on the environmental fate of silver nanoparticles and toxicity effects on two endobenthic species: the ragworm Hediste diversicolor and the bivalve mollusc Scrobicularia plana. Science of the Total Environment. 470, 1151-1159 (2014).
  11. Chen, M. H. Baseline metal concentrations in sediments and fish, and the determination of bioindicators in the subtropical Chi-ku Lagoon, S W Taiwan. Marine Pollution Bulletin. 44 (7), 703-714 (2002).
  12. Li, W. T., et al. Investigation of silver (Ag) deposition in tissues from stranded cetaceans by autometallography (AMG). Environmental Pollution. , 534-545 (2018).
  13. Chen, M. H., et al. Tissue concentrations of four Taiwanese toothed cetaceans indicating the silver and cadmium pollution in the western Pacific Ocean. Marine Pollution Bulletin. 124 (2), 993-1000 (2017).
  14. Li, W. T., et al. Immunotoxicity of silver nanoparticles (AgNPs) on the leukocytes of common bottlenose dolphins (Tursiops truncatus). Scientific Reports. , In Press (2018).
  15. Bornhorst, J. A., Hunt, J. W., Urry, F. M., McMillin, G. A. Comparison of sample preservation methods for clinical trace element analysis by inductively coupled plasma mass spectrometry. American Journal of Clinical Pathology. 123 (4), 578-583 (2005).
  16. Bonta, M., Torok, S., Hegedus, B., Dome, B., Limbeck, A. A comparison of sample preparation strategies for biological tissues and subsequent trace element analysis using LA-ICP-MS. Analytical and Bioanalytical Chemistry. 409 (7), 1805-1814 (2017).
  17. Bischoff, K., Lamm, C., Erb, H. N., Hillebrandt, J. R. The effects of formalin fixation and tissue embedding of bovine liver on copper, iron, and zinc analysis. Journal of Veterinary Diagnostic Investigation. 20 (2), 220-224 (2008).
  18. Miller, D. L., Yu, I. J., Genter, M. B. Use of Autometallography in Studies of Nanosilver Distribution and Toxicity. International Journal of Toxicology. 35 (1), 47-51 (2016).
  19. Anderson, D. S., et al. Influence of particle size on persistence and clearance of aerosolized silver nanoparticles in the rat lung. Toxicological Sciences. 144 (2), 366-381 (2015).
  20. Kim, W. Y., Kim, J., Park, J. D., Ryu, H. Y., Yu, I. J. Histological study of gender differences in accumulation of silver nanoparticles in kidneys of Fischer 344 rats. Journal of Toxicology and Environmental Health, Part A. 72 (21-22), 1279-1284 (2009).
  21. Danscher, G. Applications of autometallography to heavy metal toxicology. Pharmacology Toxicology. 68 (6), 414-423 (1991).
  22. Deroulers, C., et al. Analyzing huge pathology images with open source software. Diagnostic Pathology. 8, 92(2013).
  23. Shu, J., Dolman, G. E., Duan, J., Qiu, G., Ilyas, M. Statistical colour models: an automated digital image analysis method for quantification of histological biomarkers. BioMedical Engineering Online. 15, 46(2016).
  24. Geraci, J. R., Lounsbury, V. J. Specimen and data collection. Marine mammals ashore: a field guide for strandings. , National Aquarium. Baltimore. 167-230 (2005).
  25. Shih, C. -C., Liu, L. -L., Chen, M. -H., Wang, W. -H. Investigation of heavy metal bioaccumulation in dolphins from the coastal waters off Taiwan. , National Sun Yat-sen University. Kaohsiung. (2001).
  26. Liang, C. S., et al. The relationship between the striatal dopamine transporter and novelty seeking and cognitive flexibility in opioid dependence. Progress in Neuro-Psychopharmacology and Biological Psychiatry. 74, 36-42 (2017).
  27. Spiess, A. N., Neumeyer, N. An evaluation of R2 as an inadequate measure for nonlinear models in pharmacological and biochemical research: a Monte Carlo approach. BMC Pharmacology. 10, 6(2010).
  28. Stoltenberg, M., Danscher, G. Histochemical differentiation of autometallographically traceable metals (Au, Ag, Hg, Bi, Zn): protocols for chemical removal of separate autometallographic metal clusters in Epon sections. Histochemical Journal. 32 (11), 645-652 (2000).
  29. Dimitriadis, V. K., Domouhtsidou, G. P., Raftopoulou, E. Localization of Hg and Pb in the palps, the digestive gland and the gills in Mytilus galloprovincialis (L.) using autometallography and X-ray microanalysis. Environmental Pollution. 125 (3), 345-353 (2003).
  30. Loumbourdis, N. S., Danscher, G. Autometallographic tracing of mercury in frog liver. Environmental Pollution. 129 (2), 299-304 (2004).
  31. Stoltenberg, M., Larsen, A., Kemp, K., Bloch, D., Weihe, P. Autometallographic tracing of mercury in pilot whale tissues in the Faroe Islands. International Journal of Circumpolar Health. 62 (2), 182-189 (2003).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи