$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Внеклеточная матрица (ECM) предоставляет важные биофизических и биохимических подсказки для поддержания гомеостаза ткани. Состав комплекса молекулярной регулирует структурные и функциональные свойства ткани. Структурные белки обеспечивают клетки с пространственной осведомленности и позволяют для адгезии и миграции1. Связанные лиганды взаимодействуют с поверхности рецепторы клеток контролировать поведение ячейки2. Почки ECM содержит множество молекул, состав и структура которого варьируется в зависимости от анатомического расположения, стадии развития и болезни состояние3,4. Изложив сложности ECM является ключевым аспектом в изучении клеток почек, полученных в пробирке.
Предыдущие попытки репликации ECM микросреды сосредоточились на decellularizing всей ткани для создания леса способны recellularization. Decellularization выступал с химическими чистящими средствами, например додецилового сульфата натрия (SDS) или неионных моющих средств, и он использует либо весь орган перфузии или погружения и агитации методы5,6,7 ,8,9,10,11,12,13. Подмости, представленные здесь сохранения структурных и биохимические сигналы в родной ткани ECM; Кроме того, recellularization с донорами конкретных клеток имеет клиническое значение в реконструктивной хирургии14,,1516,,1718, 19. Однако, эти леса не хватает структурной гибкости и поэтому несовместимы с многих текущих устройств, используемых для исследований в пробирке . Чтобы преодолеть это ограничение, многие группы далее перерабатывается decellularized ECM гидрогели20,21,,2223,24. Эти гидрогели совместимы с литья и bioink и обойти микрометра масштаба пространственные ограничения, которые decellularized место подмостей на клетки. Кроме того,3,25сохранились молекулярный состав и соотношение в родной ECM. Здесь мы демонстрируем способ изготовления гидрогеля, производный от почечной коры ECM (kECM).
Цель настоящего Протокола заключается в производить гидрогеля, который реплицирует микроокружения регионе кортикального слоя почек. Почечной ткани коры decellularized в 1% растворе SDS под постоянным агитации для удаления клеточной материи. SDS обычно используется для decellularize ткани из-за его способность быстро удалить иммунологические клеточного материала6,7,9,26. KECM затем подлежит механической гомогенизации и лиофилизации5,6,9,11,26. Солюбилизация в сильной кислоты с пепсин приводит к окончательной гидрогеля Стоковый раствор20,27. Родной kECM белки, которые важны для структурной поддержки и сигнала трансдукции сохранились3,25. Гидрогель можно также загущенное в в течение одного порядка величины родного человека почечной коры28,29,30. Эта матрица обеспечивает физиологические среду, которая была использована для сохранения покоя почек специфических клеток, по сравнению с гидрогели от других белков матрицы. Кроме того, состав матрицы можно манипулировать, например, путем добавления коллагена-I, чтобы модель болезни сред для исследования почек фиброз и других заболеваний почек31,32.