Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Пептид40 MUB для использования в обнаружении нейтрофилов опосредованной воспаление события

5.7K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/58367

⸱

7 января 2019 г.

 ,  ,  ,  , 
1Unité de Pathogénie Microbienne Moléculaire, Institut Pasteur, 2INSERM Unité 1202, Institut Pasteur, 3Institut de Biochimie et Génétique Cellulaires, Université Bordeaux Segalen, 4Unit of Technology and Service Photonic BioImaging, Institut Pasteur

В этой статье

Краткое содержание

Здесь мы представляем протокол обнаружить присутствие нейтрофилов в разделах фиксированной/permeabilized гистология и оценить состояние активации живой очищенный нейтрофилов. В частности MUB пептид40 связывает лактоферрина в гранулы нейтрофилов конкретных и высшего. Экспозиции блок содержимого через permeabilization или нейтрофилов активации позволяет для маркировки нейтрофилов.

Аннотация

Здесь мы предоставляем протокол с применением MUB40, синтезированных пептидов с способностью связывать гликозилированного лактоферрин, хранящиеся в высоких концентрациях в конкретных и третичного Гранулы нейтрофилов. Этот протокол детали, как MUB40 конъюгированных непосредственно к Флюорофор может использоваться для пятно нейтрофилов в фиксированной/permeabilized тканей также, как это может использоваться в живой клетки imaging для анализа для активации нейтрофилов и де грануляции. Методы обнаружения нейтрофилов ограничены к поставляемому моноклональные антитела, которые не всегда подходят для определенных приложений. MUB40 не проникают клеточной мембраны и таким образом, исключается из лактоферрин, хранящиеся в не активировано/не permeabilized нейтрофилов. MUB40 имеет добавленное преимущество признания лактоферрина из широкого хозяйского диапазона, что делает его особенно полезны для сравнения результатов исследований с участием нескольких исследований моделей, сократить количество повторяющихся реагентов и упрощения протоколы через единый этапа окрашивания.

Введение

Нейтрофилы являются одним из основных оружия иммунной системы и регулярно привлекаются к местам воспаления вокруг тела. Изучение нейтрофилов была значительной степени снижена путем их короткий срок в пробирке (менее 8 h) и средства ограничены обнаружения базальных условиях или после активации. Здесь мы представляем испытанный протокол для обнаружения широкого и конкретного млекопитающих нейтрофилов в образцах исправлены/permeabilized. Мы также предоставляем подробный протокол для окрашивания живой нейтрофилов с MUB40. Можно pinpointed по протоколу живой нейтрофилов окрашивание, сроков и местоположения нейтрофилов активации. Этот протокол является идеальным для исследователей, которые желают учиться нейтрофилов активации или гранул выпуска. Помимо их антимикробной функций нейтрофилы теперь ценятся как иммуномодулирующих клеток, участвующих в широкий спектр заболеваний и иммунных реакций (врожденная и адаптивного)1,2. Нейтрофилы присутствуют в наиболее воспалительных тканей, на высоких числах в инфицированных тканях, в воспалительных опухоли3, во время IBS и крона вспышки4и в районах неинфекционного воспаления например synovia (ревматоидный артрит Больных РА)5. Нейтрофилов содержат четыре класса с именем azurophil (α), специфические (β1), третичные (β2) гранул и секреторные пузырьки (γ)6предварительно сформированные гранулы. После миграции воспалительных сайт набранных нейтрофилы активируются и последовательно выделяют содержимое гранул (состоящий из адгезии, антимикробных соединений и иммуномодулирующих молекул), которые способствует дальнейшему вербовки и способствует инфекция резолюции (но и повреждение тканей хост)7. В то время как нейтрофилы считаются важным аспектом врожденного иммунитета, на сегодняшний день являются несколько обнаружения реагентов для их изучения, и даже меньше, который может использоваться для оценки состояния активации нейтрофилов жизни.

Нынешние методы обнаружения нейтрофилов полагаться на моноклональные антитела, созданных против клетк поверхности подвергаются антигенов, например Ly - 6 G2 или белки, специально хранится в нейтрофильных гранул в базальных условиях (например, миелопероксидаза лактоферрин). Преимущества их сильной привязки, чувствительность и гибкость при различных условиях пробирного моноклональных антител. Однако есть несколько недостатков с помощью моноклональных антител и анти Ly - 6G в частности. Эти недостатки включают специфику, как Ly - 6G присутствует на большинстве миелоидных клеток в костном мозге и на всех гранулоцитов, включая эозинофилов; Таким образом расшифровка нейтрофилов из эозинофилов с этот маркер требует более комплексы подходов к8. Другой частой компромисс с моноклональными антителами — их часто ограниченный узел специфика хребет, затрудняет сравнение исследований с более чем одной видов животных. Третий недостаток методы обнаружения антител, особенно при использовании живой клетки или в естественных условиях, является их потенциал нарушить функцию клеток или привести к активации клеток. Например администрация анти Ly - 6G для мышей обычно применяется для нейтрофилов истощения и переходных нейтропении9. Дополнительно было продемонстрировано, что инъекции антител может стимулировать нейтрофилов противоопухолевые функции10. Наконец обнаружение антител нейтрофилов не показывают состояние активации клеток.

Мы определили 40-амино кислоты пептид, под названием MUB40, который может использоваться в ряде анализов ярлык нейтрофилов в условиях in vitro или в естественных условиях , а также анализа состояния активации живой нейтрофилов11. MUB40 является производным от MUB7012, домен Lactobacillus reuteri поверхности слизь связывающий белок, первоначально описанных за его способность связывать слизи13,14. MUB40 взаимодействует с гликозилированного лактоферрин, который присутствует в высоких концентрациях в гранулы нейтрофилов конкретных и высшего. MUB40 могут быть подвержены эти гранулы через стандартный permeabilization шаги в гистопатологии или активирована флуоресценции клеток, сортировка (FACS) протоколы для надежной пятнать фиксированной нейтрофилов. Когда живой нейтрофилов хранятся в состоянии инактивированная, пептид40 MUB исключается из содержимое гранул, и клетки не испачкать положительных с маркером. После активации MUB40 можно привязать к воздействию лактоферрин и привести к надежной окрашивание с пептида. Таким образом MUB40 может использоваться для определения состояния активации очищенный нейтрофилов, что делает его привлекательным маркер следовать инфекционного процесса. Возможность привязать жить активированные нейтрофилы также позволяет MUB40 , чтобы использоваться в качестве инструмента для выявления областей нейтрофилов воспаления в живых животных моделях (например, мыши артрит модель15). Протоколы в этой рукописи детали как дневно помечены MUB40 может использоваться раскрыть нейтрофилов в Гистология ткани и как assay активации живой очищенный нейтрофилов в пробирке.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все методы, описанные здесь были проанализированы и одобрены французских организаций веймутовой (Comité de исследований Clinique), CPP (Comité de защиты des Personnes) и CNIL (Комиссии Nationale Informatique et Liberté).

1. Окрашивание дневно нейтрофилов в гистопатологии ткани с маркировкой MUB40

  1. Для получения ткани для гистопатология, исправьте разделов ткани/биопсии в соразмерную громкость параформальдегида 4% (PFA) за 30 мин до 4 ч в зависимости от толщины образца. Поместите образцы в холодильнике 4 ° C во время фиксации.
    Примечание: Альтернативные фиксации методы/тайминги можно заменить основаны на уникальных потребностей пользователя.
    1. Удаление PFA, добавить 16% раствор сахарозы с достаточным объемом для полностью покрывают образца и поместите образец в 4 ° C на 4 ч до ночлега.
    2. Удаление 16% раствор сахарозы и добавить 30% раствора сахарозы на достаточно большой объем, чтобы полностью покрыть образца и поместите его на 4 ° C на 4 ч до ночлега.
    3. Удаление 30% раствор сахарозы и пятно от избыточного решения из ткани с бумажным полотенцем. Место в разделе ткани в СМИ оптимального раскроя температуры (OCT) и оснастки замораживание в 2-methylbutane охлаждением в ванне с сухим льдом этанол (-72 ° C). После замерзла (после ~ 2 мин), удалите блоки из 2-methylbutane и разместите их на сухой лед, пока все блоки закончена и готова для длительного хранения. Хранение замороженных блоков на-80 ° C для длительного хранения.
  2. В ночь перед блоков ткани должны быть вырезать, удалить их из морозильной камеры-80 ° C и разместить их на 20 ° C ночь до сбалансировать.
    1. С помощью криостат, нарезать 10 - 30 мкм толстые ломтики OCT-врезанных тканей и абсорбируются высококачественных стеклянных скольжениях.
      Примечание: Толще или тоньше фрагментов может использоваться экспериментальные зависимости.
    2. С ручкой воска или других гидрофобные метода нарисуйте прямоугольник вокруг кусочек ткани на слайде стекло и высушить.
    3. Подготовить окрашивание решение, выполнив разведения 1:1,000 MUB40-Cy5 (или другой флуоресцентный MUB40версии, Стоковый раствор 1 мг/мл) в 0,1% раствора сапонина PBS. Оптимальная концентрация окончательный MUB40 должно быть 1 мкг/мл.
      Примечание: Нижняя окончательный концентрации могут быть использованы (0.1-0,01 мкг/мл), но может привести к снижению интенсивности сигнала.
      Предупреждение: Сапонин порошок может вызвать раздражение дыхание. Убедитесь, что весят сапонин в кабинет или защищенной области. Permeabilization альтернативные методы могут использоваться как Тритон. Добавить дополнительные маркеры в концентрациях, рекомендованный изготовителем (например., 4, 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI), Фаллоидин, флуоресцентные антитела).
    4. Аккуратно опустите стеклянное скольжение в раствор 0,1% сапонины PBS три раза.
    5. Тщательно пятно от лишней жидкости вокруг секции ткани и добавить достаточно окрашивание решение полностью покрывают ткани секции. Поместите слайд в камере влажности, чтобы избежать испарения и проинкубируйте 1 ч при комнатной температуре. Держите его от света.
    6. Аккуратно погрузите слайд в 0,1% раствора сапонина PBS 3 x. Затем, аккуратно погрузите слайд в PBS решение 3 x. Наконец, мягко погрузите слайд в дистиллированной H2O 3 x. Тщательно высушите избыток жидкости от слайда.
    7. Добавить небольшое количество (~ 20 мкл) монтажа средних (20 мм трис рН 8,0, 0,5% Н-пропиловый галлат, 90% глицерина) рядом с кусок ткани и аккуратно сложить стекла coverslip поверх стеклянное скольжение. Аккуратно и равномерно насадить coverslip на разделе ткани и, используя бумажным полотенцем, осторожно извлеките носитель монтажа, вытяжки по краям coverslip.
    8. Место слайдов в темный шкаф для 24 h разрешить СМИ монтажа закрепить. Кроме того место слайдов при 37 ° C в течение 1 ч.
  3. Изображения срезов ткани на флуоресцентный Микроскоп согласно методу желаемого приобретения.

2. Визуализация нейтрофилов активации с ретро Inverso-MUB40-Cy5 пептида

  1. Получение нейтрофилов человека, используя следующий протокол. Подготовить следующие решения и поместите их в ночевкой аноксии кабинета. Воздействия кислорода начнут активировать нейтрофилов и далее побуждать клетки смерти16,17.
    Примечание: Нейтрофилов может альтернативно очиститься «на стенде» MUB40-маркировки экспериментов; Однако имейте в виду, что воздействия кислорода начнет влиять на активацию нейтрофилов.
    1. Подготовьте следующее решение:
      Решение 1 [0,9% хлорида натрия (NaCl)]: добавить 4,5 г NaCl в 500 мл H2O. фильтр решение.
      Решение 2 (6% декстрана): добавить 6 g декстрана в растворе 0,9% NaCl в 100 мл.
      Решение 3 (Отмывающий буфер): растворить Этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА) в PBS pH 7,2 до конечной концентрации ЭДТА 2 мм. Непосредственно перед использованием Растворите бычьим сывороточным альбумином (БСА) в растворе PBS/ЭДТА, что конечная концентрация BSA 10% w/v.
    2. Центрифуга пробирки на 650 x g 20 минут без перерыва.
    3. Не нарушая разлученных крови, передать аноксии кабинета и сбор плазмы фракций (сверху) в 50 мл Конические трубки трубки для сбора крови.
    4. Снять трубку плазмы содержащих из анаэробной кабинета и центрифуги на 2900 x g 20 минут с перерывами в гранулы тромбоцитов.
    5. Не нарушая гранулированных тромбоцитов, аккуратно передача плазмы трубку обратно в аноксии кабинета и пипетки тромбоцитов бедных плазмы в свежий 50 мл трубки (в дальнейшем именуется «плазмы»).
  2. Разделение красных кровяных клеток из лейкоцитов
    1. С помощью пробирки, содержащие красные кровяные клетки (эритроциты) из шага 2.1.3., объединить эритроцитов в конической 50 мл трубки (5 крови трубки содержимое коллекции за Тюбик 50 мл).
    2. Добавьте NaCl 0,9%, до тех пор, пока общий объем достигает 44 мл. Добавьте 6 мл 6% декстрана (последний).
    3. Осторожно Смешайте смесь крови/декстрана, инвертирование трубки 10 - 20 раз. Пусть отложений трубки для по крайней мере 30 мин.
    4. В то время как происходит осаждение, подготовить Percoll градиент, добавив 4.2 мл Percoll раствора до 5,8 мл плазмы в 15 мл Конические трубки и перемешать хорошо, инвертирование трубки.
    5. Соберите верхняя часть декстран при попытке избежать дозирования красных кровяных клеток.
    6. Затяните резьбовую крышку, извлеките трубку декстрана из анаэробной камеры и центрифуги трубки на 300 g x 10 минут с перерывами.
    7. Тщательно место трубку обратно в зале аноксии не нарушая гранулированных клетки и удаление жидкости через закупорить.
    8. Аккуратно вновь приостановить Пелле клеток в 1 мл плазмы и очень медленно, добавить в верхней части Percoll решения. Будьте осторожны, чтобы не вызвать смешивание слоев при закупорить клетки на вершине.
    9. Осторожно удалите трубки Percoll решения из анаэробной камеры (избегая смешивания) и центрифуги на 800 x g 20 минут без перерыва. Мононуклеаров периферической крови (получения) останется на поверхности раствора Percoll, и будет гранулах нейтрофилов с БС.
  3. Удаление загрязняющих эритроцитов
    1. Подготовка 14 мл моющего раствора буфера путем добавления 700 мкл PBS + 10% BSA 14 мл отмывающего буфера.
    2. Место Percoll решение трубки обратно в зале аноксии. Удалить Percoll и репликацию через закупорить и вновь приостановить гранулированных клеток в 1 мл моющего раствора буфера. Пелле быть вновь приостановлено будет иметь красный цвет из-за загрязнения эритроцитов.
    3. Добавить 200 мкл магнитные бусы анти CD235a (Гликофорины) повторно подвесной клетки, осторожно перемешать и инкубировать в течение как минимум 15 мин. Этот шаг загружает загрязняющих эритроцитов с магнитной бусины, так что они могут быть удалены.
    4. Мыть разделения столбцов с 2 мл промывки буфер 3 x.
    5. Во время проведения 15 мл конические пробки в столбце разделения, медленно Пипетка нейтрофилов/RBC смесь в верхней части столбца. Соберите клетки в 15 мл Конические трубки, как они проходят через. Поток через должны быть мутной и потерять свой красный цвет из-за RBCs, оставаясь привязанным к столбцу.
    6. Добавить 2 мл отмывающего буфера в верхней части столбца и собирать в же 15 мл Конические трубки. К концу 2 мл мыть потока через должно быть ясно, означающий, что были собраны все нейтрофилы.
    7. Аккуратно перемешайте трубки для обеспечения равномерного распределения нейтрофилов и собирать 10 мкл для подсчета клеток. Обратите внимание, окончательный объем ячейки, считая целей. Перечислите общее количество клеток с любой стандартной ячейки, подсчитывая метод.
    8. Удаление нейтрофилов трубки из анаэробной камеры и центрифуги нейтрофилов в 300 x g 20 минут с перерывами.
    9. Место отложившейся нейтрофилов обратно в анаэробных камеру и удалите Отмывающий буфер через закупорить. Вновь приостановить нейтрофильных гранул в плазме с максимальной клеток плотность 107 ПМН/мл.
  4. Перечисление очищенный нейтрофилов и визуализация с помощью MUB40
    1. Добавить 1 мкл ри-MUB40-Cy5 (1 мг/мл) в 1 мл Розуэллом парк Мемориальный институт (RPMI) 1640 среды без фенола красного. Смешайте хорошо закупорить.
    2. Для целей настоящего Протокола результат был разработан как если бы мощным нейтрофилов, Активация реагентов, N-formylmethionyl лейцил фенилаланин (FMLP), добавляется. Добавить 1 мкм FMLP RPMI/ри-MUB40-Cy5 трубки и смеси через закупорить вверх и вниз.
      Примечание: Каждая экспериментальная процедура будет отличаться от этой точки вперед, в зависимости от рассматриваемых вопросов.
    3. Передача 1 мл RPMI/ри-MUB40-Cy5/FMLP смесь для микроскопии блюдо дно стекла. К этому блюду добавьте объем очищенной клеток соответствует 106 всего нейтрофилов. Смешайте нежно закупорить.
    4. Поместите блюдо в Перевернутый флуоресцентный микроскоп и начать получение изображения. Например рекомендуется приобрести исходных изображений до добавления реагента, активация нейтрофилов, например FMLP или бактерий. В этом примере, начать приобретение RPMI/ри-MUB40-Cy5/нейтрофилов и в более поздних timepoint, Пипетка активация нейтрофилов реагента в стеклянную посуду и продолжить получение изображения.
      Примечание: Эти шаги могут быть внесены изменения на основе научных потребностей.
    5. Процесс приобрел изображения/времени-покадровой фильмов, которые касаются конкретных Микроскоп используется.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Результаты MUB40-окрашенных тканей от гистопатология слайды обычно показывают отдельные клетки, разбросанных по всей ткани. MUB40 пятна лактоферрин, который присутствует в нейтрофильных гранул и разобщенным. Таким образом обычно видели пунктата пятнать или несколько больших разделенных областей сигнала приходят из отдельных нейтрофилов (рис. 1). Это полезно для добавления второй маркер клеток например DAPI помочь совместно локализовать с...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Здесь двух анализов описаны, в котором MUB пептид40 используется для изучения нейтрофилов воспаление и активации. Мы покажем, как можно выявить MUB40 нейтрофилов присутствует в гистопатологии секций или показать их состояние активации с использованием живой очищенный нейтрофилов. Важнейшие шаги для использования MUB40 как окрашивание реактива такие же, как и с любым другим методом флуоресцентного обнаружения. Необходимо позаботиться для обеспечения совместимости флуоресцентные сигналов и ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

B.S.M. указан как изобретатель на MUB40 патентов:

MUB40: Европейский патент EP11290403.2, 09/09/2011.

РИ MUB40: 11/12/17, Европейского патента EP № 17306746.3.

Благодарности

Эта работа была поддержана Фюгеном Лоретт Fondation (LF-2015-15) (B.S.M.) и ANR JCJC грантов (АНР-17-CE15-0012) (B.S.M.).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
MUB40-Cy5Benoit Marteynbenoit.marteyn@pasteur.frфлуоресцентный пептид MUB40 (доступен с другими конъюгированными флуорофорами)
RI-MUB40-Cy5Benoit Marteynbenoit.marteyn@pasteur.frРетро-инверсо флуоресцентный пептид MUB40. Синтезирован с D-аминокислотами и устойчив к протеазам (доступен с другими конъюгированными флуорофорами)
ПарформальдегидSigma-Aldrich16005Фиксатор для гистологии
СахарозаSigma-AldrichS7903Раствор используется для удаления избытка PFA
Оптимальный температурный компаунд (ОКТ)Сакура Finetek США4583Используется для замораживания тканей перед криостатным разрезанием
2-МетилбутанSigma-AldrichM32631Используется для замораживания тканей перед срезом криостата
ЭтанолSigma-Aldrich1.00974Используется для ванны с сухим льдом для замораживания тканей
Leica CryostatLeica BiosystemsCM1520Используется для срезов тканей
Предметные стекла для микроскопиистекла Fisher Scientific12-518-101
Защитные стеклаThor LabsCG15CHВысокоточный покровный лист
Dako pen Sigma-AldrichZ377821Используется для предотвращения потери жидкости при окрашивании тканей
SaponinSigma-Aldrich47036Используется для проникновения клеток для окрашивания IF
DAPISigma-Aldrich10236276001Stains DNA 
Alexa fluor 488 фаллоидинFisher ScientificA12379Связывает актин
Пролонгирует Золото антифадерный монтантFisherScientific P36930Продлевает сигнал ПЧ и устойчивость к фотообесцвечиванию
Флуоресцентный микроскопРазличныйИспользуется для изображения ПЧ слайдов
Бескислородный кабинетРазличныйИспользуетсядля очистки живых инактивированных нейтрофилов
Хлорид натрия NaCLSigma-AldrichS7653
EDTASigma-AldrichE9884Промывочный буферный компонент
MACS BSA буферMiltenyi Biotec130-091-376Промывочный буферный компонент
PercollSigma-AldrichP4937Градиент для очистки нейтрофилов
CD235a гликофориновых магнитных микрогранулMiltenyi Biotec130-050-501Используется для удаления загрязняющих эритроцитов
LS колонокMiltenyi Biotec130-042-401Используется для удаления эритроцитов из нейтрофилов
RPMI-1640 без фенола RedSigma-AldrichR8755Используется для анализа нейтрофилов

Ссылки

  1. Nathan, C. Neutrophils and immunity: challenges and opportunities. Nature Reviews Immunology. 6 (3), 173-182 (2006).
  2. Nicolás-Ávila, J. Á, Adrover, J. M., Hidalgo, A. Neutrophils in Homeostasis, Immunity, and Cancer. Immunity. 46 (1), 15-28 (2017).
  3. Coffelt, S. B., Wellenstein, M. D., de Visser, K. E. Neutrophils in cancer: neutral no more. Nature Reviews Cancer. 16 (7), 431-446 (2016).
  4. Wright, H. L., Moots, R. J., Bucknall, R. C., Edwards, S. W. Neutrophil function in inflammation and inflammatory diseases. Rheumatology. 49 (9), 1618-1631 (2010).
  5. Glennon-Alty, L., Hackett, A. P., Chapman, E. A., Wright, H. L. Neutrophils and redox stress in the pathogenesis of autoimmune disease. Free Radical Biology & Medicine. , (2018).
  6. Borregaard, N., Cowland, J. B. Granules of the human neutrophilic polymorphonuclear leukocyte. Blood. 89 (10), 3503-3521 (1997).
  7. Borregaard, N. Neutrophils, from marrow to microbes. Immunity. 33 (5), 657-670 (2010).
  8. Rose, S., Misharin, A., Perlman, H. A novel Ly6C/Ly6G-based strategy to analyze the mouse splenic myeloid compartment. Cytometry Part A: The Journal of the International Society for Analytical Cytology. 81 (4), 343-350 (2012).
  9. Shi, C., Hohl, T. M., Leiner, I., Equinda, M. J., Fan, X., Pamer, E. G. Ly6G+ neutrophils are dispensable for defense against systemic Listeria monocytogenes infection. Journal of Immunology. 187 (10), 5293-5298 (2011).
  10. Albanesi, M., Mancardi, D. A., et al. Neutrophils mediate antibody-induced antitumor effects in mice. Blood. 122 (18), 3160-3164 (2013).
  11. Anderson, M. C., Chaze, T., et al. MUB40 Binds to Lactoferrin and Stands as a Specific Neutrophil Marker. Cell Chemical biology. 25 (4), 483-493 (2018).
  12. Coïc, Y. -M., Baleux, F., et al. Design of a specific colonic mucus marker using a human commensal bacterium cell surface domain. Journal of Biological Chemistry. 287 (19), 15916-15922 (2012).
  13. Roos, S., Jonsson, H. A high-molecular-mass cell-surface protein from Lactobacillus reuteri 1063 adheres to mucus components. Microbiology. 148, Pt 2 433-442 (2002).
  14. Boekhorst, J., Helmer, Q., Kleerebezem, M., Siezen, R. J. Comparative analysis of proteins with a mucus-binding domain found exclusively in lactic acid bacteria. Microbiology. 152, Pt 1 273-280 (2006).
  15. Mancardi, D. A., Jönsson, F., et al. Cutting Edge: The murine high-affinity IgG receptor FcγRIV is sufficient for autoantibody-induced arthritis. Journal of Immunology. 186 (4), 1899-1903 (2011).
  16. Walmsley, S. R., Print, C., et al. Hypoxia-induced neutrophil survival is mediated by HIF-1alpha-dependent NF-kappaB activity. Journal of Experimental Medicine. 201 (1), 105-115 (2005).
  17. Monceaux, V., Chiche-Lapierre, C., et al. Anoxia and glucose supplementation preserve neutrophil viability and function. Blood. 128 (7), 993-1002 (2016).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Percoll
Пептид40 MUB для использования в обнаружении нейтрофилов опосредованной воспаление события
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.