Изоляция CD4+ Т-клеток и анализ циркулирующих Т-фолликулярная помощник (cTfh) клеток подмножеств из периферической крови с помощью 6-цвет потока цитометрии

Elliot Byford; Matthew Carr; Lucia Piñon; Matthew J. Ahearne; Simon D. Wagner

doi:10.3791/58431

Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Изоляция CD4⁺ Т-клеток и анализ циркулирующих Т-фолликулярная помощник (cTfh) клеток подмножеств из периферической крови с помощью 6-цвет потока цитометрии

12K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/58431

⸱

7 января 2019 г.

Elliot Byford¹ , Matthew Carr¹ , Lucia Piñon² , Matthew J. Ahearne¹ , Simon D. Wagner¹

¹Leicester Cancer Research Centre and Ernest and Helen Scott Haematology Research Institute, University of Leicester, ²MRC Toxicology Unit, University of Leicester

В этой статье

Краткое содержание

Здесь, протокол для изоляции и характеристика CD4⁺ Т-клеток описал подмножеств из периферической крови человека. Очищенный CD4⁺ Т-клетки анализируются проточной цитометрии для определения пропорции T-фолликулярных клеток помощник подмножеств.

Аннотация

Ненормальная T-фолликулярная активность клеток помощник (ЦГЗ) обнаружен в аутоиммунных условий, и их присутствие ассоциируется с клинических исходов при анализе микроокружения лимфоузлов в B-клеточной неходжкинской лимфомы. Подмножества циркулирующих Т-фолликулярных клеток помощник (cTfh), циркулирующей отсека памяти Tfh клеток в крови, также возмущенных в болезни и поэтому представляют собой потенциальный Роман интеллектуального биомаркеров. Периферической крови ориентированное тестирование выгодно, потому что это относительно неинвазивные и позволяет простой последовательный мониторинг. Эта статья описывает метод для изоляции CD4⁺ Т-клетки из крови человека и дальнейшего анализа подачей cytometry перечислить cTfh клеток и пропорции их различных подмножеств (cTfhPD-1^{-/ +/ Привет}, cTfh1, 2, 17 и cTfh1/17). Уровень этих подмножеств был затем сравнить между обычные предметы и пациентов с лимфомой. Мы обнаружили, что метод был достаточно прочным, чтобы получить надежные результаты регулярно собранного материала пациента. Техника, которую мы опишем для анализа может быть легко адаптирована для сортировки клеток и нисходящие приложения, такие как RT-PCR.

Введение

T-фолликулярная хелперы (ЦГЗ) являются CD4 Т-клеток подмножества, который первоначально был охарактеризован в лимфоидной ткани¹⁺ . Эти клетки выразить PD-1 и CXCR5 поверхностная рецепторов, секретируют Ил-21 и Ил-4 и показать выражение ядерного транскрипционного фактора, BCL-6²^,³. Как их названия, они находятся в зародышевых центров и необходимы для высокое сродство антитела производства¹.

Dysregulated Tfh ответы были вовлечены в патогенез заболевания, прежде всего аутоиммунных заболеваний, где они способствуют расширению кл....