Методическая статья

Пункция подключичной вены как альтернативный метод сбора образцов крови крыс

14.1K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/58499

⸱

18 ноября 2018 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Cardiology, The Second Xiangya Hospital, Central South University, 2Department of General Surgery, The Second Xiangya Hospital, Central South University

В этой статье

Краткое содержание

Здесь мы представляем протокол для сбора образцов крови от крыс подключичную Вену.

Аннотация

Сбор крови с достаточным объемом крови имеет важное значение в подопытных животных. Забора крови из Вены хвост крысы является популярным и меньше стрессовых ситуаций по сравнению с другими более агрессивные методы, такие, как ретро орбиталь сплетения образец коллекции. Однако этот метод сбора крови иногда ограничивается неудовлетворительной успеха. Здесь мы представляем метод для сбора крови через пункция подключичной вены. Подключичную Вену расположен прямо под ключицы и этом ключе является достаточно большим, чтобы выполнить требования объем сбора крови. Наши результаты показывают, что этот метод является безопасным и применимо для сбора проб крови с объем требуемых крови. Сбор крови через пункция подключичной вены может служить метод коллекции альтернативных крови в случае неудачных хвост вен проб крови крыс.

Введение

Сбор крови имеет важное значение в исследований на животных. Целевой вен для сбора крови включают сплетения ретро орбиталь, яремную Вену, подкожной вены, хвост кровеносных сосудов и сонной артерии1,2,3,4. Иногда крови могут быть получены от брюшной аорты, полой вены или даже сердца5,6,7. В таких случаях животные должны быть принесены в жертву и не может использоваться для последующего наблюдения; Таким образом, эти методы используются в повседневной работе экспериментальных. Сбор крови из Вены хвост крысы является популярным и меньше стрессовых ситуаций по сравнению с вышеупомянутые методы8.

Однако забора крови из Вены хвост иногда ограничивается неудовлетворительной успеха. Иногда это также трудно получить достаточный объем крови этим методом. Как подключичную Вену достаточно большой и расположен прямо под ключицы кости, пункция подключичной вены может быть альтернативный метод для отбора проб крови, если обычной крови коллекции методы оказываются безуспешными. Здесь мы представляем метод сбора крови посредством пункция подключичной вены в крыс.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Это исследование был одобрен Комитетом Центральной Южной университета этики исследований животных из больницы Xiangya второй (Чанша, Китай). Манускрипт был подготовлен согласно прибытия (животное исследования: отчетности в Vivo экспериментов) рекомендации9.

1. материал и животных подготовка

  1. Подготовить необходимые материалы: Скотч, агент эпиляции, 75% этанола, пробирки, 2,5 мл шприц, связанных с иглой (24 G, 0.6 мм x 25 мм), волос бритва, электронные весы и колеи (см. Таблицу материалы).
  2. Используйте 20 крысах Sprague-Dawley (SD), возрасте 8-10 недель и массой 153-200 г (см. Таблицу материалы). Поддерживать крыс в соответствии с руководство по уходу и использованию лабораторных животных10.
  3. Дом крысы при стандартных условиях с бесплатным доступом к продовольствию и питьевой воде. Держите их в клетках2 530 см с постельным бельем древесно стружечные (2 крысы в клетке). Сохранить животных в комнатной температуре контролируемой температурой около 25 ° c.
  4. Вызвать общий наркоз (Натрий Пентобарбитал 40 мг/кг) в всех животных через внутрибрюшинной инъекции перед пункция подключичной вены.
  5. Место крыса в лежачем положении. Исправьте задних конечностей в удобном положении и исправить параллельно оси тела просто рядом ствола верхней конечности.
    Примечание: Не механическая вентиляция необходима для выполнения этой процедуры (рис. 1).
  6. Очистите обе стороны подключичный пространства для удаления шерсти (с волос бритва и эпиляции агента, см. Таблицу материалы) и любых видимых загрязнений. Протрите шеи и грудной клетки кожи с 75% этанола. Держите области для прокола, чистой и сухой марлей.

2. Процедура сбора крови

Примечание: Обе стороны подключичную Вену подходят для прокола, и здесь мы выбираем с правой стороны для прокола. Расположение и направление правой ключицы идентифицируются оператора большой палец левой руки (рис. 2). Супрастернальные ямки нежно коснулся с указательный палец, как супрастернальные ямки в направлении стрелки (рис. 2).

  1. Промывайте стерильной 2,5 мл шприц с раствором гепарина (10 МЕ/мл).
  2. Найти узел прокол 0,5 мм каудально к внешней области 1/3 правой ключицы (рис. 3). Аккуратно переместите шприц в кожу на сайте проколам. После того, как игла входит в кожу подключичный, отрицательное давление оператора правой рукой (рис. 4).
    Примечание: Объем средняя и максимальная крови являются 1.0 мл и 1.4 мл, соответственно. Направление иглы позиционируется к супрастернальные ямки и должно быть почти параллельно ключицы, он просто кзади. Обычно подключичной вены можно добраться, вставляя иглу около 2 мм в этом направлении. После того, как игла входит в Вену, кровь будет ввести шприц под отрицательным давлением.
    1. Поддерживать отрицательное давление до тех пор, пока достаточное количество крови обращается (рис. 5).
  3. Если коллекция крови подключичную Вену не является успешным, снять иглу в подкожной области и Отрегулируйте направление иглы слегка интерьера к грудине.
    1. Если три попытки не удались, избежать подключичную Вену с той же стороны и использовать контралатеральную сторону для забора крови.
  4. После сбора крови удалить прокола иглой и приложите давление к проколам сайт для 1-2 минут, чтобы остановить кровотечение.
    Примечание: Давление должно быть очень нежный для предотвращения удушья.

3. кровь образец обработки

  1. Перенесите крови в антикоагулянт покрытием вакуумная трубка (с ЭДТА) и центрифуги для 10 мин на 1600 x g для сбора плазмы.
  2. Аспирационная супернатант чистой трубки и хранить при температуре-80 ° C (рис. 6).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

В общей сложности 20 SD крысы (мужской n = 10, женский n = 10) были использованы здесь. Collectionwas крови, выполняются квалифицированными операторами, которые провели более 20 крови выборок из подключичной вены в крыс, а также начинающих операторов, которые имеют не пункция подключичной вены опыт крыс и других животных. До операции начинающих смотрел по крайней мере 3 процедуры, выполняемые квалифицированными операторами.

Забо...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Здесь мы представляем альтернативный метод для извлечения крови из подключичной вены и мы показываем, что этот метод является осуществимым и применимо для забора крови крыс. Этот метод является производным от пункция подключичной вены в вживления ритмоводителя свинца для пациентов11. Подключичную Вену расположен только задняя и каудально к ключицы и является продолжением подмышечные вен. Она работает от внешней границы первого ребра до медиальной границы передней Лестничные мышцы...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Эта работа была поддержана грант от национального фонда естественных наук Китая № 81670269, № 81500355 и № 81500226.

Благодарности

Никто не заявил.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
крысыHunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd (Чанша, провинция Хунань, Китай) 
статическое программное обеспечениеSPSS Statistics 17
средство для эпиляцииFrance Yi Sha Cosmetics Co.,Ltd(Гуанчжоу, провинция Гуандун, Китай)
2,5 мл шприцShandong Weigao Group Medical Polymer Co.,Ltd(Вэйхай, провинция Шаньдун, Китай)
бритва для волосShanghai FLYCO Electric Co., Ltd(Шанхай, Китай)
клейкая лента3M Deutschland GmbH(EdisonstraBe 6,59157 Kamen, Германия)
Пентобарбитал натрияMerck
75% этанолДепартамент фармацевтики,Вторая больница Сянъя Центрального Южного университета
Пробирка для сбора кровиHubei Jinxing Technology& Development Co.,Ltd (Ухань, провинция Хубэй, Китай) (2 мл)
весыDongguan Shengheng Electronics Co., Ltd (Дунгуань, провинция Гуандн, Китай)
брезентовые перчаткидля лечения гетезии
Nanjing Xinbai Pharmaceutical  Co.,Limited (Нанкин, провинция Цзянсу, Китай) (2 мл
физический физиологический растворHunan Kelun Pharmaceutical Co., Ltd (Юэян, провинция Хунань, Китай) (100 мл)
электронные, 12500 МЕ)

Ссылки

  1. Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. Blood sample collection in small laboratory animals. Journal of Pharmacology, Pharmacotherapeutics. 1 (2), 87-93 (2010).
  2. Korfmacher, W., et al. Utility of capillary microsampling for rat pharmacokinetic studies: Comparison of tail-vein bleed to jugular vein cannula sampling. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 76, 7-14 (2015).
  3. Feng, J., et al. Catheterization of the carotid artery and jugular vein to perform hemodynamic measures, infusions and blood sampling in a conscious rat model. Journal of Visualized Experiments. (95), (2015).
  4. Wickremsinhe, E. R., Renninger, M., Paulman, A., Pritt, M., Schultze, A. E. Impact of Repeated Tail Clip and Saphenous Vein Phlebotomy on Rats Used in Toxicology Studies. Toxicologic Pathology. 44 (7), 1013-1020 (2016).
  5. Takahashi, M., Makino, S., Kikkawa, T., Osumi, N. Preparation of rat serum suitable for mammalian whole embryo culture. Journal of Visualized Experiments. (90), e51969(2014).
  6. Cochran, B. J., et al. Determining Glucose Metabolism Kinetics Using 18F-FDG Micro-PET/CT. Journal of Visualized Experiments. (123), (2017).
  7. Beeton, C., Garcia, A., Chandy, K. G. Drawing blood from rats through the saphenous vein and by cardiac puncture. Journal of Visualized Experiments. (7), 266(2007).
  8. Zou, W., et al. Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System. Journal of Visualized Experiments. (130), (2017).
  9. Kilkenny, C., Altman, D. G. Improving bioscience research reporting: ARRIVE-ing at a solution. Lab Animal. 44 (4), 377-378 (2010).
  10. National Institute of Health. Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. , 8th, National Academies Press (US). US (Washington DC). (2011).
  11. Antonelli, D., Feldman, A., Freedberg, N. A., Turgeman, Y. Axillary vein puncture without contrast venography for pacemaker and defibrillator leads implantation. Pacing and Clinical Electrophysiology. 36 (9), 1107-1110 (2013).
  12. Luis, A. L., et al. Microscopic magnetic resonance imaging of the thoracic venous system in rats with congenital diaphragmatic hernia. Pediatric Surgery International. 27 (2), 175-180 (2011).
  13. Tsukamoto, A., Serizawa, K., Sato, R., Yamazaki, J., Inomata, T. Vital signs monitoring during injectable and inhalant anesthesia in mice. Experimental Animals. 64 (1), 57-64 (2015).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи