Методическая статья

Метионин функционально совместимые биосовместимые блок кополимеры для целевой плазмидной доставки ДНК

DOI:

10.3791/58527

⸱

6 августа 2019 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Research Center of Clinical Oncology, Jiangsu Cancer Hospital & Jiangsu Institute of Cancer Research & Nanjing Medical University Affiliated Cancer Hospital, 2Department of General Surgery, The First Affiliated Hospital with Nanjing Medical University, 3School of Clinical Medicine, Xuzhou Medical University

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эта работа представляет собой подготовку метионина функционализированных биосовместимых блоков кополимеров (mBG) с помощью обратимого добавления фрагментации цепи передачи (RAFT) метод. Также были исследованы плазмидная способность ДНК-комплекса полученного mBG и их эффективность трансфекции. Метод RAFT очень полезен для полимеризации мономеров, содержащих специальные функциональные группы.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Реверсивная полимеризация цепочки добавленной части (РАФТ) интегрирует преимущества радикальной полимеризации и живой полимеризации. Эта работа представляет собой подготовку метионина функционализированных биосовместимых блоков кополимеров через RAFT полимеризации. Во-первых, N,N-бис(2-гидроксиэтил)метакриламид-б -N-(3-аминопропил)метакриламид (BNHEMA -b-APMA, BA) синтезировался с помощью полимеризации RAFT с использованием 4,4'-azobis (4-цианалерическая кислота) (ACVA) в качестве ивитативным агентом и 4-цианпенпентановой кислотой дитиобензоат (CTP) в качестве агента передачи цепи. Впоследствии, N,N-bis(2-гидроксиэтил)метакриламид-б -N-(3-гуанидинопропил)метакриламид (метионин привитый BNHEMA -b-GPMA, mBG) был подготовлен путем изменения групп амина в APMA с метионином и гуанидином Группы. Для сравнения были синтезированы три вида блоковых полимеров: mBG1, mBG2 и mBG3. Для количественной оценки содержания APMA была использована реакция нингидрина; mBG1, mBG2 и mBG3 имели 21%, 37% и 52% APMA, соответственно. Результаты хроматографии гель-пермяки (GPC) показали, что БА-кополимеры обладают молекулярными весами 16 200 (BA1), 20 900 (BA2) и 27 200 (BA3) г/мол. Была также исследована плазмидная ДНК (pDNA), усложняющая способность полученных носителей гена блока. Коэффициенты заряда (N/P) были 8, 16 и 4, когда pDNA был полностью осложнен mBG1, mBG2, mBG3, соответственно. Когда соотношение N/P polyplexes mBG/pDNA было выше 1, потенциал Зэты мБГ был положительным. При соотношении N/P между 16 и 32 средний размер частиц полигекса mBG/pDNA составлял от 100 до 200 нм. В целом, эта работа иллюстрирует простой и удобный протокол для синтеза комимерии блока.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В последние годы, генная терапия возникла для терапевтической доставки нуклеиновые кислоты в качестве лекарств для лечения всех видов заболеваний1. Развитие генных препаратов, включая плазмидную ДНК (pDNA) и малаюдическую интерферирующую РНК (siRNA), зависит от стабильности и эффективности системы доставки лекарств (DDS)2. Среди всех DDS, катионные полимерные носители имеют преимущества хорошей стабильности, низкой иммуногенности, и легкой подготовки и модификации, которые дают катионные полимерные носители широкие перспективы применения3,4. Для практического применения в биомедицине, исследователи должны найти катионный полимер перевозчика с высокой эффективностью, низкой токсичности, и хорошая способность ориентации5. Среди всех носителей полимеров блок кополимеры являются одной из наиболее широко используемых систем доставки лекарств. Блок кополимеров интенсивно изучаются на их свойство самосборки и способности формировать мицеллы, микросферы и наночастицы при доставке лекарств5. Блок кополимеров можно синтезировать с помощью живой полимеризации или нажмите методы химии.

В 1956 году Szwarc et al. подняли тему живой полимеризации,определив ее как реакцию без цепных реакций 6,7. С тех пор было разработано несколько методов синтеза полимеров с помощью этого метода; таким образом, живая полимеризация рассматривается как веха полимерной науки8. Димеризация жизни может быть классифицирована в живую анионическую полимеризацию, живую катионную полимеризацию и обратимую деактивацию радикальной полимеризации (РДРП)9. Живые анионические/катионные полимеризации имеют ограниченный объем применения из-за их строгих условий реакции10. Контролируемая/живая радикальная полимеризация (CRP) имеет мягкие условия реакции, удобное расположение, и хорошую урожайность и таким образом была главным фокусом исследования в недавних летах11. В CRP активные цепи распространения реверсивно переходят в спящие, чтобы уменьшить концентрацию свободных радикалов и избежать бимолекулярной реакции распространяющихся цепных радикалов. Крометое полимеризация может продолжаться только в том случае, если неактивные спящие цепи, распространяющиеся, обратимо анимируются на цепные радикалы. В качестве одной из наиболее перспективных форм живой радикальной полимеризации, обратимая добавка-фрагментация цепи передачи (RAFT) полимеризации является методом, применимым для выхода блок полимеров с контролируемым молекулярным весом и структурой, узкий молекулярный вес распределение и проведение функциональных групп12. Ключом к успешной полимеризации RAFT является эффект цепных переносных агентов, как правило, дитиостеров, которые обладают очень высокой константой передачи цепи.

В этой работе, метод полимеризации RAFT был разработан для подготовки BNHEMA -b-APMA блок полимера, принимая 4,4'-azobis (4-cyanovaleric кислоты) (ACVA) в качестве инициирующего агента и 4-цианоптановой кислоты дитиобензоат (CTP) в качестве агента передачи цепи. ПОЛимеризация RAFT дважды использовалась для внедрения BNHEMA в катионные полимерные носители. Впоследствии группы амина в цепи APMA были модифицированы с помощью метионина и гуанидинилового реагента 1-амидинопиразоле гидрохлорида. Благодаря использованию положительных зарядов гуанидинадинационного реагента и метакремламидного полимерного скелета структуры, была улучшена эффективность клеточного поглощения полученных блоков полимерных носителей.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Синтез полимера BNHEMA (PBNHEMA)

  1. Растворите 1,87 г N, N-бис(2-гидроксиэтил) метакриламид (БНХЕМА) в 1 мл дистиллированной воды в полимерной бутылке.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Бутылка полимеризации представляет собой кругло-нижнюю колбу с резиновой пробкой и магнитным мешалкой.
  2. Растворите 0,03 г 4-цианопентановой кислоты дитиобензоат (CtP) и 0,02 г 4,4'-азобис (4-cyanovalericacid ) (ACVA) в 0,5 мл 1,4-диоксана в 5 мл стакана. Затем добавьте раствор CTP и ACVA в бутылку полимеризации со ступени 1.1.
  3. Вентивная система реакции в полимеризации бутылки с азотом через три замораживания насоса оттепели циклов.
    1. Подробно заморозить раствор в полимеризации бутылки с помощью конденсата ловушку, исправить полимеризации бутылку железа опоры, и пылесосить и вводить азот в реакционную смесь через канал наконечником с иглой (#9 игла, внутренний диаметр 0,65 мм, внешнего диаметра 0,9 мм). Запечатать полимеризацию бутылки и разморозить раствор при комнатной температуре в течение 30 минут.
    2. Повторите циклы замораживания насоса-оттепели три раза.
  4. Положите бутылку полимеризации в масляную ванну 70 градусов по Цельсию и дайте раствору реагировать на 24 ч под атмосферой азота.
  5. Охладите бутылку полимеризации при 0 градусах по Цельсию и откройте резиновую пробку, чтобы завершить процесс полимеризации.
  6. Precool ацетон в холодильнике -20 градусов по Цельсию в течение 2 ч, а затем смешать его с реакционным раствором шага 1.5 на 50:1 (v/v). После этого, центрифуга на 8200 х г в течение 10 минут, чтобы удалить ацетон и собирать осадок.
  7. Для очищения синтезированного PBNHEMA, растворить собранный осадок в 2 мл чистой воды, а затем смешать его с 100 мл предварительно охлажденного ацетона, в соотношении 1:50 (v/v). Centrifuge раствор на 8200 х г в течение 10 минут и собирать осадок. Повторите этот процесс три раза.
  8. Высушите произведенный PBNHEMA с помощью вакуумной сушилки на 50 градусов Цельсия. После высыхать, взвесить порошок с балансом. Рассчитайте норму урожайности в соответствии с уравнением 1.
    figure-protocol-1(1)
    ПРИМЕЧАНИЕ: В этом эксперименте полученная доходность составила 77,2%.

2. Синтез полимера BNHEMA-b-APMA (BA)

  1. Растворите 0,96 г N-(3-аминопропил)метакриламид гидрохлорид (APMA) и 0,93 г PBNHEMA в 5 мл дистиллированной воды в стакане 10 мл.
  2. Растворите 0,01 г 4,4'-азобис (4-цианалера(ACVA) в 0,5 мл 1,4-диоксана и смешайте с раствором APMA-PBNHEMA с части 2.1.
  3. Перенесите смесь в полимеризацию бутылки и проветрить сухим азотом на 1 ч.
  4. Положите бутылку полимеризации в масляную ванну 70 градусов и дайте ей реагировать на 24 ч под атмосферой азота.
  5. Охладите бутылку полимеризации при 0 градусах по Цельсию и откройте резиновую пробку, чтобы завершить процесс полимеризации.
  6. Перенесите раствор на охлажденный ацетон со ступени 1.6, а затем центрифугите раствор при 8200 х г в течение 10 минут, чтобы осаждать БА.
  7. Растворите БА в 2 мл дистиллированной воды и осажесли полимер в охлажденный ацетон. Повторите три раза.
  8. Высушите произведенный БА в вакуумной сушиле на 50 градусов и взвесьте полученный порошок. Рассчитайте норму урожайности в соответствии с уравнением 2.
    figure-protocol-2
    ПРИМЕЧАНИЕ: В этом эксперименте, доходность была рассчитана на 82,0%.

3. Определите процент родинки APMA в BA copolymer с помощью метода нингидрина

ПРИМЕЧАНИЕ: Спектрофотометрия используется для определения содержания многокомпонентных аминокислот. Принцип омрачить цветовую реакцию нингидрина и аминокислоты, где абсорбция коррелирует с содержанием аминокислот в определенной степени13,14.

  1. Растворите 5 г нингидрина в 125 мл кипящей дистиллированной воды. Кроме того, растворить 5 г витамина С в 250 мл теплой дистиллированной воды. Добавьте 250 мл раствора витамина С, капли в раствор нингидрина при магнитном перемешивании. Продолжайте перемешивать в течение 15 мин, а затем охладить раствор реакции в холодильнике 4 градусов по Цельсию.
  2. Возьмите раствор из холодильника и фильтр путем всасывания с помощью воронки Buchner для получения сниженного нингидрина. Соберите осадок и сохранить его в обезвоживатель фосфора пентоксида.
  3. Растворите 85 мг нингидрина и 15 мг пониженного нингидрина в 10 мл этилена гликолмоном монометилэфира для приготовления раствора нингидрин-окраски.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Нингидрин-окраска решение может всмяиваться с а-амино в APMA и образуют фиолетовое соединение со структурой, как описано в предыдущем исследовании15.
  4. Разбавить 1 мл 0, 1, 10, 100, 1000 мг/мл APMA мономерные растворы с 1 мл ацетатбуфера (2 М, рН 5,4), а затем добавить 1 мл нингидрина окраски решения, соответственно.
  5. Нагрейте смеси в течение 15 минут на кипящей водяной бане, а затем охладите их с помощью проточной воды. Пусть растворы сидят в течение 5-10 мин и разбавить их 3 мл 60% этилового спирта и тщательно перемешать. Измерьте абсорбцию на уровне 570 нм спомощью спектрофотометра и нарисуйте стандартную кривую (Equation 3).
    figure-protocol-3
    ПРИМЕЧАНИЕ: Уравнение 3 было получено из линейной установки абсорбции на уровне 570 нм по сравнению с концентрацией APMA.
  6. Растворите 0,01 г БА в 1 мл дистиллированной воды; добавьте 1 мл ацетатного буфера (2 M, pH 5.4) и 1 мл раствора нингидрин-окраски. Рассчитайте содержание моляров APMA в соответствии с абсорбцией на 570 нм.
    figure-protocol-4
    figure-protocol-5(5)
    figure-protocol-6
    ПРИМЕЧАНИЕ: Формулы расчета следующие(Уравнения 3-6).

4. Синтез метилонина привитых BA полимер (mBA)

  1. Растворите 8,9 мг фомк-метионина в 5 мл ДМСО в леродительную колбу.
  2. Добавьте 6,92 мг 1-этил-3-(3-диметиламинопропил) карбодиимид гидрохлорида (EDCl) и 4,86 мг 1-гидроксибензотриазота (HOBT) в лечебную колбу и реагируйте при 0 КК на 0,5 ч.
  3. Растворите 2,59 г БА в 5 мл раствора DMSO, а затем добавьте 50 л триметиламина; добавить это решение dropwise к восстановлению колбу (шаг 4.2) и пусть раствор реагирует на 0,5 ч при комнатной температуре.
  4. Диализ для удаления DMSO и триметиламина из раствора BA в шаге 4.3 с помощью диализа мешок (MWCO 10 kDa) в 2 L стакан для 24 ч; заменить деионизированную воду каждые 6 ч.
  5. Заморозить-сухой полученный mBA и взвешивать, чтобы рассчитать норму урожайности в соответствии с уравнением 7.
    figure-protocol-7
    ПРИМЕЧАНИЕ: В этом случае, доходность была определена в 71%.
  6. Количественно NH2, содержащий mBA, путем измерения абсорбции на 570 нм, чтобы вычислить количество привитого метионина. Рассчитайте содержание моляров в метионине в соответствии с уравнением 8.
    figure-protocol-8

5. Синтез гуанидинатизированного и метионина спряженный BNHEMA -b-APMA полимер (mBG)

ПРИМЕЧАНИЕ: Были синтезированы три различных mBA1, mBA2 и mBA3 copolymer. copolymer mBA3 используется в качестве примера в следующих шагах.

  1. Растворите mBA3, содержащий 60 змоль группы аминокислот в 5 мл чистой воды.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Содержание группы Amino было количественно с использованием метода нингидрина, как описано в шаге 3.5.
  2. Растворите 40,6 мг (300 мкмоль) гуанидинадинационного реагента 1-амидинопиразоле гидрохлорид в растворах mBA.
  3. Отрегулируйте рН до 9.0 с насыщенным раствором карбоната натрия и дайте ему стабилизироваться в течение 24 ч при комнатной температуре.
  4. Диализ ный продукт с деионизированной водой с помощью диализа мешок в стакане (MWCO 10 kDa, 2 L) и сохранить его в виде лиофилизированного порошка.
    Процент доходности был рассчитан на 85% через Equation 8.
    figure-protocol-9(8)
  5. Растворите порошок mBG в D2O в трубках ЯМР и охарактеризуют его с помощью 1H ядерной магнитно-резонансной спектроскопии (1H NMr)16.

6. Подготовка и характеристика полиппексов мБГ/pDNA

  1. Растворите 50 мкг pDNA в 50 Л без RNase/DNase воды.
  2. Растворите 1 мг copolymers mBG в 1 мл безрычании RNase/DNase.
  3. Добавьте раствор copolymers mBG непосредственно в раствор pDNA в соответствии с различными соотношениями кормления, то есть различными соотношениями N/P (1:1, 4:1, 8:1, 16:1 и 32:1).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Соотношение N/P определяется как соотношение моляров группы гуанидин овполий и фосфатной группы в pDNA, а именно соотношение моляров цепи GPMA в полимере и мононуклеотида в pDNA. Соотношение N/P рассчитывается в соответствии с молекулярными весами аминоазота (N) в mBG и фосфатной группе (P) в pDNA.
  4. Смешайте растворы с вихревой смеситель и дайте им постоять 30 минут при комнатной температуре. После этого рассеять смесь в фосфатном буферном растворе (PBS, pH 7.4) и сохранить полученные полиптексы mBG/pDNA при 4 градусах По Цельсия для последующих экспериментов.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Средний размер частиц и потенциал Зета mBG и комплексы были обнаружены с помощью динамического рассеяния света (DLS)17.
  5. Разбавить 10 л из растворов полиппека mBG/pDNA с 1 мл PBS (pH 7.4) в потенциальных образцовых клетках DLS и Зета.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Размер частиц и потенциальное обнаружение Зеты выполнялись три раза, и в среднем было принято три значения.

7. Эксперимент по электрофоретической отсталости полиппексов mBG/pDNA

ПРИМЕЧАНИЕ: Для определения минимального коэффициента заряда был проведен эксперимент по электрофоретической отсталости.

  1. Возьмем пять групп полиптексов mBG/pDNA с различными соотношениями N/P (1:1, 4:1, 8:1, 16:1 и 32:1), содержащих 50 мкг pDNA .
  2. Добавьте 6x буфер загрузки к пробам polyplex mBG/pDNA к окончательной концентрации 1x.
  3. Добавьте растворы в 1,5% гели агарозы и запустите гель на 90 мВ в течение 15 мин, используя pDNA в качестве контроля.
  4. Сфотографируйте гели с помощью геля изображения.

8. Цитотоксичность полиппексов mBG/pDNA

  1. Семена MCF-7 в 96-колодцы пластин при плотности 104 клеток на скважину. Затем, культуры клеток для 12 ч с использованием DMEM среды (10% FBS и 1% антибиотик) в увлажненный 37 КС инкубатор поставляется с 5% CO2.
  2. Замените среду культуры с антибиотиками-свободно средствами культуры DMEM содержа 10% фетальной сыворотки крупного рогатого скота (FBS) и polyplexes mBG/pDNA по-разному коэффициентов обязанности (N/P 4, 8, 16, и 32, n'6) для 6 h, принимая клетки добавленные с равными томами разрешения PBS как управление. Затем замените культурную среду 150 qL свежих 1640 средних и далее культуры клеток для 24 ч.
  3. Добавьте 5 мг/мЛ 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилдетразолий бромид (МТТ) раствор (20 л/колодец) к 96-колодским пластинам и далее культуре клеток в течение 4 ч.
  4. Снимите раствор и добавьте 150 л DMSO к каждой скважине и встряхните 96-колодские пластины 30 сек.
  5. Измерьте оптическую плотность (OD) на уровне 490 нм с помощью микроплитного считывателя, чтобы показать жизнеспособность клетки. Рассчитайте процент жизнеспособности клеток в соответствии с уравнением 9.
    Жизнеспособность клеток figure-protocol-10 % (9)

9. Эффективность трансфекции полиппексов mBG/GFP-pDNA

  1. Растворите 50 мкг pDNA, содержащего репортёрский ген зеленого флуоресцентного белка (GFP) pDNA (GFP-pDNA) в 50 Л воды без RNase/DNase. Затем растворите 1 мг мг мг мг copolymers mBG в 1 мл воды без RNase/DNase. Смешайте раствор pDNA и mBG при соотношении заряда (N/P) 1:1, 4:1, 8:1, 16:1 и 32:1 и инкубируйте в течение 30 мин при комнатной температуре. Разогнать раствор полипрексm mBG/GFP-pDNA с помощью ультразвуковых волн (30 с) и хранить при 4 градусах Цельсия для последующих экспериментов.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Соотношение N/P рассчитывается в соответствии с молекулярными весами аминоазота (N) в mBG и фосфатной группе (P) в pDNA.
  2. Семена MCF-7 клеток при плотности 2 и 105 клеток на хорошо в 6-хорошо пластины и культуры их на 37 градусов по Цельсию и 5% CO2 в увлажненный инкубатор для 12 ч.
  3. Замените культурную среду на свежую культурную среду, содержащую полиппексы mBG/GFP-pDNA различных соотношений N/P (4, 8, 16 и 32) на 6 ч.
  4. Замените среду на 2 мл свежей среды RPMI1640 и культуры на 48 ч.
  5. Соберите клетки и обнаружить зеленую флуоресценцию с цитометром потока.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

БНЕХЕМА кормили в соответствии с объективной степенью полимеризации, показанной в таблице1; процедура синтеза mBG показана на рисунке 1. Во-первых, гомополимер BNHEMA был подготовлен с помощью обратимого добавления фрагментации цепи передачи (RAFT) метод в системе водного диоксана, используя 4-цианпентановой кислоты дитиобензоат в качестве агента передачи цепи. Во-вторых, PBNHEMA использовался в качестве цепного агента для подготовки полимера блока BNHEMA -b-APMA. A...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Это исследование представило серию BNHEMA-b-APMA блок полимерных катионных носителей генов. Эти блок-полимеры были синтезированы с помощью метода реверсивной передачи цепочек добавления (RAFT). Гидрофильный сегмент BNHEMA был введен для улучшения растворимости. Метилонин и гуанидин группы были изменены для улучшения целевой способности и трансфекции эффективность5. Содержание цепи APMA увеличилось, и гуанидинилация в мБГ кополимер еуменьшила размер частиц полиптекса mBG/pDNA. Размер частиц и повер...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы удостоверяем, что нет никакого конфликта интересов с какой-либо финансовой организацией в отношении материала, обсуждаемого в этой статье.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Это исследование было поддержано Национальной программой ключевых исследований и разработок Китая (No 2016YFC0905900), Национальным фондом естественных наук Китая (No 81801827, 81872365), Программой фундаментальных исследований провинции Цзянсу (Фонд естественных наук, No. BK20181086), и Цзянсу онкологический госпиталь Научно-исследовательский фонд (Нет. К201605).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
1-гидроксибензотриазолMacklin Biochemical Co., Ltd, КитайH810970≥ 97,0%
1,4-диоксанSinopharm химический реагент Co., Ltd, Китай10008918AR
1-амидинопиразола гидрохлоридAladdin Co., Ltd., КитайA10793598%
1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида гидрохлоридAladdin Co., Ltd., КитайE106172AR
4,4'-азобис(4-циановалериновая кислота)Aladdin Co., Ltd., КитайA106307Аналитический реагент (AR)
4-циано-4-(фенилкарбонотиоилтио)пентановая кислотаAladdin Co., Ltd., КитайC132316>97%(ВЭЖХ)
АцетатSinopharm химический реагент Co., Ltd, Китай81014818AR
АцетонSinopharm химический реагент Co., Ltd, Китай10000418AR
AgaroseAladdin Co., Ltd., КитайA118881
Аскорбиновая кислотавысокого разрешения Aladdin Co., Ltd., КитайA103533AR
DMSOAladdin Co., Ltd., КитайD103272AR
ЭтиленгликольAladdin Co., Ltd., КитайE103319AR
N-(3-аминопропил)метакриламида гидрохлоридAladdin Co., Ltd., КитайN129096≥ 98,0%(ВЭЖХ)
N,N-бис(2-гидроксиэтил)метакриламидZaiQi Bio-Tech Co., Ltd, КитайCF259748≥ 98,0%(ВЭЖХ)
НингидринАладдин Ко., Лтд., КитайN105629Буфер AR
PBSАладдин Ко., Лтд., КитайP196986рН 7,4
Плазмидная ДНКБИОГОТ Ко., Лтд., КитайпДНК-EGFP
Плазмида ДНКБИОГОТ Ко., Лтд., КитайпДНК
пДНК Декагидрат карбоната натрияАладдин Ко., Лтд., КитайS112589AR
TrimethylamineAladdin Co., Ltd., КитайT103285AR

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Flotte, T. R. Gene and Cell Therapy in 2018: A Look Ahead. Human Gene Therapy. 29, 1-1 (2018).
  2. Huang, W., et al. Nanomedicine-based combination anticancer therapy between nucleic acids and small-molecular drugs. Advanced Drug Delivery Reviews. 115, 82-97 (2017).
  3. Wu, Y., et al. Reversing of multidrug resistance breast cancer by co-delivery of P-gp siRNA and doxorubicin via folic acid-modified core-shell nanomicelles. Colloids & Surfaces B Biointerfaces. 138, 60-69 (2016).
  4. Quader, S., Kataoka, K. Nanomaterial-Enabled Cancer Therapy. Molecular Therapy. 25, 1501-1513 (2017).
  5. Wu, Y., et al. Multivalent methionine-functionalized biocompatible block copolymers for targeted siRNA delivery and subsequent reversal effect on adriamycin resistance in human breast cancer cell line MCF-7/ADR. Journal of Gene Medicine. 19, e2969(2017).
  6. Szwarc, M. ‘Living’ Polymers. Nature. 178, 168-169 (1956).
  7. Szwarc, M., Rembaum, A. Polymerization of methyl methacrylate initiated by an electron transfer to the monomer. Journal of Polymer Science. 22 (100), 189-191 (1956).
  8. Mukhopadhyay, R. D., Ajayaghosh, A. Living supramolecular polymerization. Science. 349, 241(2015).
  9. Ozkose, U. U., Altinkok, C., Yilmaz, O., Alpturk, O., Tasdelen, M. A. In-situ preparation of poly(2-ethyl-2-oxazoline)/clay nanocomposites via living cationic ring-opening polymerization. European Polymer Journal. 88, 586-593 (2017).
  10. Wu, W., Wang, W., Li, J. Star polymers: Advances in biomedical applications. Progress in Polymer Science. 46, 55-85 (2015).
  11. Boyer, C., et al. Copper-Mediated Living Radical Polymerization (Atom Transfer Radical Polymerization and Copper(0) Mediated Polymerization): From Fundamentals to Bioapplications. Chemical Reviews. 116, 1803-1949 (2016).
  12. Keddie, D. J. A guide to the synthesis of block copolymers using reversible-addition fragmentation chain transfer (RAFT) polymerization. Chemical Society Reviews. 43, 496-505 (2014).
  13. Wu, Y., et al. Guanidinylated 3-gluconamidopropyl methacrylamide-s-3-aminopropyl methacrylamide copolymer as siRNA carriers for inhibiting human telomerase reverse transcriptase expression. Drug Delivery. 20, 296-305 (2013).
  14. Qin, Z., Liu, W., Guo, L., Li, X. Studies on Guanidinated N-3-Aminopropyl Methacrylamide-N-2-Hydroxypropyl Methacrylamide Co-polymers as Gene Delivery Carrier. Journal of Biomaterials Science, Polymer Edition. 23, 1-4 (2012).
  15. Friedman, M. Applications of the Ninhydrin Reaction for Analysis of Amino Acids, Peptides, and Proteins to Agricultural and Biomedical Sciences. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 52, 385-406 (2004).
  16. Habuchi, S., Yamamoto, T., Tezuka, Y. Synthesis of Cyclic Polymers and Characterization of Their Diffusive Motion in the Melt State at the Single Molecule Level. Journal of Visualized Experiments. (115), 1-9 (2016).
  17. Rao, D. A., Nguyen, D. X., Mishra, G. P., Doddapaneni, B. S., Alani, A. W. Preparation and Characterization of Individual and Multi-drug Loaded Physically Entrapped Polymeric Micelles. Journal of Visualized Experiments. 102, 1-5 (2015).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

N PGFP

Похожие статьи