Здесь мы представляем мощный и физиологические модель для изучения молекулярных механизмов лежащие в основе гормона кишки и кишечной абсорбции — изолированной перфузии крыса тонкой кишки.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Лежащие в основе кишки гормона с помощью изолированных механизмов увлажненную крыса тонкой кишки
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Кишечник является крупнейшим эндокринных органов тела, производит более 15 различных пептидные гормоны, которые регулируют аппетит и приема пищи, пищеварения, всасывания питательных веществ и распределения и глюкозы натощак после экскурсии. Понимание молекулярных механизмов, которые регулируют секрецию гормона кишки имеет основополагающее значение для понимания и перевода гормон физиологии кишечника. Традиционно лежащие в основе кишки гормона либо изучаются in vivo (в экспериментальных животных или человека) или механизмы с использованием слизистой оболочки кишки секреции гормона начальных клеточные культуры или мобильных линий. Здесь мы представляем кишечник изолированной перфузии крыса как альтернативный метод для обучения гут гормона. Достоинства данной модели являются, что он опирается на нетронутыми кишечник, означает, что он резюмирует наиболее физиологически важных параметров, ответственных за секрецию в в-vivo исследований, включая слизистой поляризации, паракринными отношения и маршруты Перфузионный/стимул экспозиции. Кроме того и в отличие от в-vivo исследований изолированной перфузии крыса тонкой кишки позволяет почти полный контроль экспериментальных и прямой оценки секреции. В отличие от исследования in vitro он позволяет изучить масштабы и динамику секреции и на важные вопросы, например какие раздражители вызывают секрецию гормонов различных кишечник, с какой стороны кишечника (люминал или сосудистая) является секреции стимулирует и для анализа в деталях молекулярных сенсоров, лежащие в основе секреторная реакция. Кроме того подготовка является мощная модель для изучения кишечного поглощения и деталей относительно динамики кишечного поглощения, включая ответственность перевозчиков.
Введение
Кишечник является крупнейшим эндокринных органов тела, производит более 15 различных пептидные гормоны, которые регулируют всасывание питательных веществ и утилизации питательных веществ, кишечные роста и модулировать аппетит1. Таким образом, кишечнике гормоны участвуют во многих основных физиологических процессах, и понимание этих моделей секреции и молекулярных детали, контролирующие секрецию гормонов, соответствующих таким образом важно для наших основных физиологических понимание и для решения трансляционная аспектов действия гормона кишки; но как одно исследование молекулярных механизмов зондирования лежащие в основе кишки гормона? В общем....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Все исследования были проведены с разрешения датского инспекции экспериментов животных (2013-15-2934-00833) и местные этического Комитета, в соответствии с руководящими принципами датского законодательства, регулирующего экспериментов на животных (1987) и национальном Институты здравоохранения (публикация № 85-23).
1. подопытных животных
- Получать самцов крыс Wistar (250 g) и дом 2 на клетку, с ad libitum доступ к стандартным Чоу и воде и поддерживать в 12:12 h свето тени цикла. Наши животные зал использует не лечить вода и Чоу Alrtromin грызунов (1319 ФОРТИ, Brogaarden, Линге, Дания).
Примечание: Разрешить животных по крайней м....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Возможность определить ли заданный стимул вызывает секрецию гормона кишки интерес опирается на стабильный базовый секрецию. Кроме того если наблюдается не ответ на раздражитель, надежные секреторной ответ положительный контроль должен быть очевидным, чтобы исключить, что отсутствие реакции на тест раздражитель не отражает общее отсутствие оперативности. Рисунок 2A и 2B показывает пример хорошего качества данных; GLP-1 секреции из тонкой кишки.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Тонкая кишка изолированной перфузии крыса является мощный исследовательский инструмент, который позволяет динамика и молекулярные механизмы лежащие в основе кишки гормонов необходимо изучить в деталях. Наиболее важным шагом для успешного производства данных с этой моделью является хирургическая операция. Обработка кишечнике неизбежно вызовет некоторые повреждения кишечника и поэтому должны храниться в на абсолютный минимум. Еще более важно скорость работы является ключевым, особенно в том, что касается времени для размещ.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы этой работы объявить отношение к этой статье не потенциальные конфликты интересов.
Благодарности
Эта работа была поддержана неограниченный Грант Профессор Йенс Юуль холста от Ново Нордиск центра фундаментальных исследований метаболизма (Ново Нордиск фонд, Дания), отдельный грант от Ново Нордиск фонда для этого грызуна перфузионные исследования (Грант нет. NNF15OC0016574), Грант Профессор холста из Европейского исследовательского совета (Grant no.695069) и Европейского союза в седьмой рамочной программы научных исследований, TechnologicalDevelopment и демонстрационной деятельности (Грант № 266408), а также постдока Грант в Руне Kuhre E. Lundbeck фонда (R264-2017-3492). Мы благодарим Дженна E. Хант и Каролин F. склизки для тщательного корректуры.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Химикаты для перфузионного буфера | |||
| Бычий сывороточный альбумин (BSA) | Merck | 1.12018.0500 | |
| Кальция хлорида дигидрат (CaCl2 x 2 H2O) | Merck | 102382 | |
| Dextran 70 | Pharmacosmos | 40014 | |
| Динатриевая соль фумаровой кислоты (C44H2Na2O4) | Sigma Aldrich | F9642 | |
| глюкоза (C6H12O6)Merck | 108342 | ||
| гепатагидрат сульфата магния (MgSO4) | Merck | 105886 | |
| хлорид потазия (KCl) | Merck | 104936 | |
| дигидрофосфат калия (KH2PO4)Merck | 104873 | ||
| натриевая соль пировиноградной кислоты (C3H3NaO4) | Merck | 106619 | |
| Sodium бикарбонат (NaHCO3) | Merck | ||
| Sodium chloride (NaCl) | Merck | 106404 | |
| L-глутамата натрия моногидрат (C5H8NNaO4 x H2O) | Merck | 106445 | |
| Name | Company< | strong>Каталожный номер | >Комментарии |
| Perfusion equitment | |||
| Universial Perfusion system | Harvard Bioscience, Inc. | ||
| БАЗОВАЯ УСТАНОВКА UNIPER UP-100, ТИП 834 | Harvard Bioscience, Inc. | ||
| Роликовый насос с четырьмя каналами | Harvard Bioscience, Inc. | 730100 | |
| Виндкессел | Гарвард Бионаука, Инк. | ||
| Термостатический термостат, объем ванны 3 л, 230 В / 50 Гц | Harvard Bioscience, Inc. | ||
| Операционный стол с подогревом на штативной подставке, тип 873 | Harvard Bioscience, Inc. | ||
| Канюля с гремкой, OD = 2,0 мм, ID = 1,0 мм | Harvard Bioscience, Inc. |
Ссылки
- Rindi, G., Leiter, A. B., Kopin, A. S., Bordi, C., Solcia, E. The "normal" endocrine cell of the gut: changing concepts and new evidences. Annals of the New York Academy of Sciences. 1014, 1-12 (2004).
- Brighton, C. A., et al.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
Теги
