$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Антропогенные изменения круговорота азота является одним из самых сложных проблем для системы земли1. Деятельность человека по крайней мере вдвое уровень реактивного азота для биосфера2. Однако по-прежнему существуют большой неопределенности в отношении как глобального цикла N оценивается. Несколько потоков оценки были количественно с меньш чем ±20% ошибка, и многие неопределенности ±50% и больше3. Эти неопределенности свидетельствуют о необходимости точной оценки темпов денитрификации всей экосистемы и понимание основных механизмов вариации. Денитрификация является микробной активности, через который азотистых оксидов, главным образом нитратов и нитритов, сводятся к диазота газов, N O2и N24. Путь является весьма актуальное значение для биосферы наличия химически активного азота, потому что это основной процесс удаления5. N2O является парниковым газом с потенциал потепления почти 300 раз что CO2 более 100 лет и она является текущей основной причиной истощения стратосферного озона из-за больших количествах, излучаемых6,7.
Ниже мы представляем собой протокол для интенсивности осадков денитрификация с использованием ядер и N2O микросенсоров экспериментально (рис. 1). Денитрификация тарифы рассчитаны с использованием ацетилена ингибирование метод8,9 и измерения накопления N2O в течение определенного периода (рис. 2 и рис. 3). Мы демонстрируем метод, применяя его к Гора озерных отложениях. Это тематическое исследование подчеркивает производительность метода для обнаружения сравнительно низкие ставки с минимальным нарушением физической структуре отложений.
Особенно трудно измерить10денитрификации. Существует несколько альтернативных подходов и методов, каждый из которых преимущества и недостатки. Недостатки, имеющиеся методы включают в себя их использования дорогостоящих ресурсов, недостаточной чувствительности и необходимость изменять уровни субстрат или изменять конфигурацию физического процесса с использованием образцов нарушенной10. Даже более фундаментальный вызов для измерения N2 является его повышенной фоновых уровней в окружающей среде10. Сокращение N2O N2 тормозится ацетилена (C2H2)8,9. Таким образом денитрификация может быть определена количественно измеряя накопленной N2O присутствии C2H2, который возможно из-за низких экологического N2O уровней.
Использование C2H2 для измерения скорости денитрификации в отложениях был разработан около 40 лет назад11и включение N2O датчиков произошло около 10 лет позже12. Наиболее широко применяемый подход, основанный на ацетилен является ядром «статические». Накопленные N2O измеряется во время инкубационный период до 24 ч после добавления headspace запечатанном отложений ядро10C2H2 . Метод, описанный здесь, следующим за этой процедурой с некоторыми нововведениями. Мы добавляем C2H2 , пузырьков газа в водной фазе ядра на несколько минут, и заполняем все headspace образца воды перед началом измерения накопления N2O с микропроцессоров. Мы также включать систему перемешивания, которая предотвращает расслоение воды без resuspending отложений. Процедура дает количественную оценку скорость денитрификации площадь поверхности отложений (например, мкмоль N2O m-2 h-1).
Высокой пространственной и временной вариации денитрификации представляет еще одна трудность в его точную количественную оценку10. Обычно накопления N2O последовательно измеряется газовой хроматографии headspace образцов, которые собираются в ходе инкубации. Метод, описанный обеспечивает улучшение контроля за временной вариации накопления N2O, потому что микропроцессоров обеспечивает непрерывный сигнал. Мультиметр микропроцессоров является микропроцессоров цифровой усилитель (picoammeter), который взаимодействует с датчик (датчики) и компьютера(рисунок 1). Мультиметр позволяет несколько N2O микросенсоров использоваться в то же время. Например до четырех отложений ядер с того же сайта исследования могут быть измерены одновременно счет для пространственной изменчивости.
Основной подход едва мешает структуры осадков, по сравнению с некоторыми другими методами (например, растворы). Если целостность отложений изменяется, это приводит к нереалистичным денитрификации ставки13 , подходят только для относительного сравнения. Более высокие показатели всегда получаются с методами навозной жижи, по сравнению с основными методами14, потому что последний сохраняет ограничения денитрификации диффузии субстрата15. Суспензии меры нельзя считать представителя на месте ставки16; они обеспечивают относительных показателей для сравнения с точно такая же процедура.
Метод, описанный подходит для оценки показателей денитрификации в любой тип осадка, который может быть порошковой. Мы особенно рекомендуем этот метод для выполнения экспериментальных манипуляций некоторых из движущих факторов. Примерами являются эксперименты, которые изменяют наличие нитратов и температуры, необходимые для оценки энергии активации (E) денитрификации17 (рис. 2).

Рисунок 1 : Экспериментальная установка. () Генеральной экспериментальной установки для оценки осадков денитрификации ставки использованием ядер и N2O микросенсоров. Инкубации палата обеспечивает тьмы и контролируемых температурных условий (±0, 3 ° C). Пяти нетронутыми кернах могут обрабатываться одновременно, используя их соответствующие N2O датчики. (b) N2O датчик калибровки камеры. Мы приспособили его с резиновыми пробками и шприцы смешать N2O воды (см. Протокол шаг 3.4.3). Есть термометр для контроля температуры воды. (c) макро отложений базисной выборке с датчиком вставляется в центральное отверстие покрытия ПВХ и суставов, запечатанный клейкой лентой. Мешалка висит в воде, и электромагнитом близка его и крепится к внешней части акриловые трубы. (d) макро N2O микропроцессоров наконечник защищен кусок металла. (e) осадочных кернов, который только что был восстановлен. Он был пробы с лодки в глубокое озеро; до сих пор акриловые трубы с основной крепится к посланник адаптированных тяжести многокамерного19. Смотрите Таблицу материалов для всех элементов, необходимых для выполнения этого метода. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.