Методическая статья

Оценка числа нефрона в целом почки использованием кислоты метод мацерации

9.9K просмотров

DOI:

10.3791/58599

22 мая 2019 г.

В этой статье

Краткое содержание

Оценки по целому количеству почек нефрона важны клинически и экспериментально, так как существует обратная связь между числом нефрона и повышенной опасностью почечных и сердечно-сосудистых заболеваний. При этом демонстрируется использование метода кислотного мацерации, который обеспечивает быструю и надежную оценку всего количества почек нефррона.

Аннотация

Облечение нефрона относится к общему количеству нефронов, с которыми рождается человек, поскольку нефрогенез у человека завершается 36 неделями гестации, и после родов не образуются новые нефроны. Число нефрона относится к общему количеству нефраонов, измеряемых в любой момент после родов. Как генетические, так и экологические факторы влияют на одаренность нефрона и их количество. Понимание того, как конкретные гены или факторы, влияющие на процесс нефрогенеза и потери нефрон или кончины важно, как лиц с меньшим облечения нефрона или числа, как полагают, на более высокий риск развития почечной или сердечно-сосудистых заболеваний. Понимание того, как воздействие на окружающую среду в течение жизни человека влияет на число нефрон также будет иметь жизненно важное значение в определении будущего риска заболевания. Таким образом, способность оценивать быстро и надежно количество всей почки нефрона является базовым экспериментальным требованием для лучшего понимания механизмов, способствующих или способствующих нефрологенезу или потере нефрона. Здесь мы описываем метод кислотного мацерации для оценки количества почек нефррона, основанного на процедуре, описанной Дамадкой, Шавайри и Брикер, с небольшими изменениями. Метод кислотного мацерации обеспечивает быструю и надежную оценку числа нефрона (оцениваемых путем подсчета клубочков), которые находятся в пределах 5% от тех, которые определяются с использованием более продвинутых, хотя и дорогостоящих, методов, таких как магнитно-резонансная томография. Кроме того, метод кислотного мацерации является отличным методом высокой пропускной способности для оценки номера нефрона в большом количестве образцов или экспериментальных условиях.

Введение

Нефрон является как основной структурной, так и функциональной единицей почки1. Структурно нефрон состоит из клубочек (капилляров и додокитов), расположенных в пределах боуменовой капсулы и почечной трубочки, состоящей из проксимальной трубочки, петли Хенле и дистальной трубочки, которая прекращается в собирающий проток. Функционально, роль нефрона заключается в фильтрации и реабсорбции воды и электролитов и секреции отходов. В целом, нефрогенез завершается в 36 недель гестации у людей и вскоре после рождения в нескольких видах, таких как мышь и крыса2. Облечение нефрона относится к общему количеству нефронов, с которыми....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Материалы и реагенты, перечисленные ниже, предназначены для определения целой почки нефрона в одной мыши, то есть две почки. Модификации для применения метода кислотного мацерации для крыс отождествляется со звездочками. Все экспериментальные протоколы соответствовали национальным институтам здравоохранения руководство по уходу и использованию лабораторных животных и были одобрены институционального ухода за животными и Комитета по использованию в университете штата Миссисипи медицинский центр.

1. почечная изоляция процедура

  1. Взвешивание мыши (или других видов) и усыпить его с изофлуран (5%-8%) передозировки или пентобарбатал (150 ....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Ниже приведены репрезентативные оценки по целому количеству почек нефрона от установленной модели мыши гипертонии и генетической модели крыс возрастных хронических заболеваний почек. Ключевые идентификационные характеристики клубочков, такие как сферическая структура с прикрепленными пред-или постартериолярными или трубчатыми структурами, выделены для тех, кто новичок в методе кислотного мацерации (рис. 1).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

При хорошей экспериментальной технике метод кислотного мацерации идеален для оценки количества нефрона в целой почке. Хотя почка растворяется в кислоте, клубочков остаются в значительной степени нетронутыми и легко поддаются идентификации, что делает подсчет индивидуальных клубочков относительно легким и понятным. Метод кислотного мацерации особенно выгоден по нескольким причинам. Во-первых, метод кислотного мацерации является быстрым и удобным методом, который требует относительно мало с точки зрения расхода и физически.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Эта работа была поддержана в части национальными институтами здоровья, национальное сердце, Лунг, и институт крови (R01HL107632).

....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Изофлурановая анестезияAbbott Laboratories05260-05
Изофлурановая система испарителя и расходомерBraintree ScientificVP IВключает подачу кислорода медицинского класса
Leica Инвертированный микроскоп DMIL LEDLeica Microsystems DMILLEDЛюбая марка также подходит
Цифровая водяная баняFisher Scientific2239Любая марка также подходит
ToughCut Тонкие хирургические ножницыFine Science Tools14058-11режущая кромка 25 мм, длина 11,5 см; Советы: острый-острый; Форма наконечника: прямые
микрорассекающие щипцы 4 1/4 дюйма.Biomed Res Instruments, Inc10-1760
Доска из плексигласа с изогнутым наконечником 5 дюймов x 7 дюймов.любой источник подходитн/дЛюбая марка также подходит
Шестиугольная чашка для взвешивания из полистиролаFisher Scientific02-2002-100Любая марка также подходит
Бритвенные лезвияFisher Scientific12-640Однолезвийная углеродистая сталь 0,009
Марлевые губки 4 x 4 дюйма 8 слоевFisher ScientificMSD-1400250
10x концентрат фосфатный буферный физиологический раствор (PBS)Sigma AldrichP5493-4Lразбавить до 1х 
6 Н Раствор гидрохлорриновой кислотыSigma Aldrich3750-32
15 мл коническая центрифужная пробиркаFisher Scientific14-959-70CЛюбая марка также подходит
50 мл коническая центрифужная пробиркаFisher Scientific14-959-49AЛюбая марка также подходит
Одноразовый шприц 5 млCole PalmerEW-07944-06Любая марка также подходит
18G1.5 одноразовый иглаFisher Scientific14-826-5DЛюбая марка также подходит
21G1.5 одноразовая иглаFisher Scientific14-826-5BЛюбая марка также подходит
12-луночные многолуночные планшеты для клеточных культур с крышкойCole Palmer#FW-01959-06Любая марка также подходит
Полипропиленовый модульный штатив для пробирокCole Palmer#EW-06733-00Способен вмещать конические пробирки объемом 15 и 50 мл; Подойдет и любая марка

Ссылки

  1. Hall, J. E., Guyton, A. C. Guyton and Hall Textbook of Medical Physiology. , 13th, Elsevier. Philadelphia, PA. (2016).
  2. Wang, X., Garrett, M. R. Nephron number, hypertension, and CKD: physiological and genetic insight from humans and animal models. Physiological Genomics.....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи