Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Наночастицы полиэтиленимина покрытием оксида железа как средство для доставки малые интерферирующие РНК макрофаги In Vitro и In Vivo

8.3K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/58660

⸱

5 февраля 2019 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Key Laboratory of Ministry of Education for Developmental Genes & Human Diseases, Institute of Life Sciences and School of Medicine, Southeast University, 2State Key Laboratory of Bioelectronics, Jiangsu Key Laboratory for Biomaterials & Devices, School of Biological Science & Medical Engineering, Southeast University

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

Мы описываем метод использования полиэтиленимина (PEI)-покрытием суперпарамагнетическим оксида железа наночастицы для transfecting макрофагов с siRNA. Эти наночастицы могут эффективно поставлять малых интерферирующих РНК к макрофагов в пробирке и в естественных условиях и молчание экспрессии генов цели.

Аннотация

Из-за их решающую роль в регулировании иммунной реакции Макрофаги непрерывно были предметом интенсивных исследований и представляют собой многообещающие терапевтические целевой многих расстройств, таких как аутоиммунных заболеваний, атеросклероза и рак. Сайленсинга генов, опосредованного системой РНК-интерференции является ценным подход выбора зонд и манипулировать функции макрофагов; Однако transfection макрофагов с siRNA часто считается чтобы быть технически сложным, и в настоящее время, доступны несколько методик, посвященный siRNA передачи макрофагов. Здесь мы представляем протокол использования наночастиц полиэтиленимина покрытием суперпарамагнетическим оксида железа (пей-SPIONs) в качестве транспортного средства для доставки целевых интерферирующей РНК макрофагов. Пей-SPIONs способны привязки и полностью конденсации siRNA, когда массовая доля Fe: siRNA достигает 4 и выше. В пробирке, эти наночастицы могут эффективно поставлять малых интерферирующих РНК в первичных макрофагов, а также в Макрофаг как RAW 264.7 клеток линии, без ущерба для жизнеспособности клеток при оптимальной дозе для transfection, и, в конечном счете, они вызывают малых интерферирующих РНК опосредованной целевой сайленсинга генов. Помимо используется для в vitro трансфекции siRNA, пей-SPIONs также являются перспективным инструментом для доставки siRNA макрофагов в естественных условиях. С учетом его комбинированных особенностей магнитные свойства и способность заставлять замолчать гена системно управляемых Пей-SPION/siRNA частицы, как ожидается, не только чтобы модулировать функции макрофагов, но и для включения макрофаги образы и отслеживаются. По сути, пей-SPIONs представляют собой простой, безопасный и эффективный синцитиального платформу для доставки siRNA макрофагов в пробирке и в естественных условиях.

Введение

Макрофаги являются тип innate иммунных клеток, распространен во всех тканях организма, хотя и в разных количествах. Производя различные цитокины и других посредников, они играют важнейшую роль в принимающей обороны против вторжения патогенных микроорганизмов, в ткани ремонт после травмы и в поддержании гомеостаза ткани1. Из-за их важности макрофаги непрерывно были предметом интенсивных исследований. Однако, несмотря на его распространенности в ген регулирования и исследования функции, малых интерферирующих РНК опосредованной генов меньше шансов на успех в макрофагах, потому что эти клетки — в частности, первичного макрофаги — зачастую трудно transfect. Это можно объяснить сравнительно высокой степени токсичности связанные с наиболее устоявшихся трансфекции подходов, в которых клеточной мембраны является химически (например, полимеров и липидами) или физически (например, путем электропорации и Джин пушек) нарушается позволить siRNA молекул через мембрану, тем самым значительно снижая макрофаги жизнеспособности2,3. Кроме того макрофаги, посвященный фагоцитов богаты деструктивные ферментов. Эти ферменты могут нарушить целостность siRNA, ослабляет эффективность глушителя, даже если ген специфического siRNA был доставлен в ячейке3,4. Таким образом эффективный siRNA Макрофаг целевой системы доставки необходимо защищать целостность и стабильность малых интерферирующих РНК во время доставки4.

Становится все более очевидным, что неблагополучных макрофаги замешаны в инициации и прогрессирования некоторых общих клинических расстройств как аутоиммунных заболеваний, атеросклероза и рак. По этой причине, модулирует функции макрофагов с, например, siRNA формируется как привлекательный методологию для лечения этих расстройств по5,6,7. Хотя был достигнут значительный прогресс, главной задачей стратегии на основе малых интерферирующих РНК лечения является бедным ячейки специфика системно управляемых siRNA и недостаточно siRNA поглощение макрофагами, которые соответственно приводят к нежелательным побочным эффектам. По сравнению с свободной нуклеиновые кислоты терапевтов, которые обычно не имеют оптимальное ячейки избирательности и часто приводят к негативным последствиям, загруженных наркотиков наночастиц (NPs), ввиду их спонтанной склонность быть захвачен ретикулоэндотелиальной системы,-цели могут быть спроектированы для пассивной ориентации макрофагов в естественных условиях, позволяя для улучшения терапевтической эффективности с минимальными побочными эффектами8. Текущий NPs, изучены для доставки молекул РНК включают неорганических nanocarriers, различные липосомы и полимеров9. Среди них полиэтиленимина (PEI), тип катионных полимеров, способных привязки и конденсации нуклеиновых кислот в стабилизированное NPs, показывает высокий РНК, обеспечивая потенциал9,10. PEI защищает нуклеиновые кислоты от ферментативного и nonenzymatic деградации, является посредником при их передаче через клеточную мембрану и способствует их внутриклеточного релиз. Хотя первоначально введено как реагент доставки ДНК, пей впоследствии был продемонстрирован быть привлекательной платформой для в естественных условиях доставки siRNA, либо локально или системно9,10.

Наночастицы суперпарамагнетическим оксида железа (SPIONs) показали большие перспективы в биомедицине, вследствие их магнитные свойства, биосовместимость, сопоставимого размера биологически важных объектов, высокий коэффициент площадь поверхности и объем и легко адаптируется поверхностью для bioagent крепления11. Например из-за их потенциальной полезности в качестве контрастного вещества и быстрое поглощение макрофагами, SPIONs появились как любимый клинический инструмент для изображения ткани макрофагами12. В то время как SPIONs также были широко изучены как нуклеиновые кислоты доставки транспортных средств11,13,14,15, к нашему знанию, литература содержит несколько сообщений о SPIONs как носитель для Макрофаг целевой siRNA доставки. Для доставки генов, SPIONs их поверхность обычно покрыты слоем гидрофильные катионных полимеров, на которые отрицательно заряженных нуклеиновые кислоты может быть электростатически привлекают и привязал. Здесь мы представляем метод синтеза SPIONs, поверхность которых изменяется с низким молекулярным весом (10 кДа), разветвленные Пей (пей-SPIONs). Затем эти магнитные nanoplatforms заняты уплотнить siRNA, образуя комплексы Пей-SPION/siRNA, позволяющие транспорта малых интерферирующих РНК в клетку. Мы причина что спонтанное фагоцитоза SPIONs клеток ретикулоэндотелиальной системы16, в сочетании с сильной способности привязки и конденсации нуклеиновых кислот, пей, оказывает Пей-SPIONs подходит для эффективной перевозки малых интерферирующих РНК в макрофаги. Представленные здесь данные поддерживают возможности подавления экспрессии гена Пей-SPION/малых интерферирующих РНК опосредованной в макрофагах в культуре, а также в естественных условиях.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все методы, которые были проведены с участием живых животных в соответствии с животное уход и использовать руководящие принципы Юго-Восточный университет, Китай.

1. Подготовка Пей SPIONs

  1. Подготовка олеиновая кислота модифицированных SPIONs
    1. Растворите FeCl3•6H2O и FeSO4•7H2O в воде под защитой N2.
      1. Добавьте 28 g O FeCl3•6H2и 20 г FeSO4•7H2O 80 мл обессоленной воды в стакан. Ввести N2 в воду через проводник стекла и размешать до полного растворения твердых веществ.
      2. Нагрейте смесь реакции до 72 ° C со скоростью перемешивания 800 об/мин, последующим добавлением 40 мл воды аммиака (28%). Мешайте в течение 5 мин.
    2. Добавить 9 мл олеиновой кислоты каплям в вышеупомянутых раствор и размешать в 72 ° C для 3 h.
    3. Прохладный полученный раствор до комнатной температуры (RT). Осадок решение через магнитной сепарации.
    4. Вымойте преципитат, содержащие SPIONs 3 x с абсолютного этилового спирта и, затем, разогнать осадок в 100 мл-гексана.
  2. Подготовка dimercaptosuccinic кислота модифицированных SPIONs
    1. Добавить 800 мг олеиновой кислоты (OA)-изменен SPIONs, диспергированных в 200 мл-гексана, и 400 мг dimercaptosuccinic кислоты (ДМСА) в 200 мл ацетона, разогнали в три шеи колбу в водяной бане при температуре 60 ° C.
      Примечание: Чтобы определить концентрацию OA-модифицированных SPION, полученные на предыдущем шаге, Возьмите небольшой объем (например, 1 мл) SPION дисперсии, испарения гексана и весят полученный порошок.
    2. Добавьте 200 мкл триэтиламин каплям в вышеупомянутых раствор с перемешивая при 1000 об/мин и орошения.
    3. После 5 h перемешивания и орошения получите черный осадок, магнитной сепарации.
    4. Разогнать гидрофильные SPIONs в деионизированной воде однородно, регулируя рН раствора с помощью Тетраметиламмония гидроксид.
  3. Подготовка Пей SPIONs
    1. Добавить ДМСА модифицированных SPION коллоидного раствора каплям в раствор (10 кДа) PEI в три шеи колбе 500 мл под механического перемешивания при 1000 об/мин 2 h (WFe: WPEI = 1:3).
      Примечание: Заряд и размер Пей-SPIONs зависимости от соотношение WFe для WPEI. WFe: WPEI соотношение 1:3 может быть хорошей отправной точкой для синтеза Пей-SPIONs подходит для доставки siRNA.
    2. Добавьте полученный раствор в трубу ультрафильтрации, имеющие молекулярный вес отсечки 100 кДа и содержание 15 мл; затем центрифуги на 5400 x g за 10 мин до оставшийся раствор 1 мл. Добавьте деионизированной воды решение сделать объемом 15 мл снова и повторите описанный выше процесс 10 x для получения конечного продукта. Затем фильтр решение через фильтр 0,22 мкм и хранения конечного продукта при 4 ° C.
    3. Определите концентрацию Fe Пей-SPIONs колориметрическим методом с использованием фенантролиновый17. Разбавить Пей-SPIONs с дейонизированной стерильной воды до концентрации 1 мг Fe/мл и хранить при 4 ° C.
    4. Разбавляют 10 мкл раствора Пей-SPION (1 мг Fe/мл) до 1 мл с дейонизированной водой; затем протестируйте его гидродинамические размер и Зета потенциальных устройством динамического рассеяния света.
      Примечание: Подготовьте Пей-SPIONs в диапазоне около 30-50 Нм. В этом диапазоне размеров влияние размера NP на Связывание siRNA и клеточного поглощения не представляется значительным. Пей-SPIONs подшипник средняя Зета потенциал более чем 37 mV могут быть токсичными в диапазоне доз для transfection и цитотоксичность assay должны выполняться для обеспечения безопасности. Поверхности заряд и гидродинамические размеров наночастиц можно управлять в пределах требуемого диапазона, регулируя PEI содержание.

2. Подготовка и электрофорез геля агарозы Пей-SPION/siRNA ЯИЭ

  1. Разбавьте siRNA с РНКазы свободной воды приносить конечная концентрация 20 мкм (0.26 мкг/мкл).
  2. Подготовьте пять свободных РНКазы microcentrifuge трубки помечены 0, 1, 2, 4 и 8. Метки представляют собой соотношение веса различных Fe: siRNA. Накапайте 3 мкл siRNA решения всех трубок (~0.8 мкг siRNA/трубки).
  3. Добавьте 0, 0,8, 1.6, 3.2, и 6.4 мкг Fe в виде Пей-SPIONs для трубки помечены 0, 1, 2, 4 и 8, соответственно. Сохраните объем общей выборки каждой трубы менее 20 мкл. Смешайте нежно закупорить вверх и вниз.
  4. Инкубируйте смеси на RT 30 мин разрешить комплекс формирования Пей-SPION/siRNA. В течение этого периода сделайте 3% агарозном гель с высокой чистоты агарозы.
    Примечание: Дополнительные Пей-SPION/siRNA комплексы с другими Fe: siRNA соотношения (например, 5 или 6) могут быть подготовлены и испытаны.
  5. Добавить 1 мкл 6 x ДНК загрузки буфера за 5 мкл пример и осторожно перемешать. Загрузить все образцы и запустить электрофорез на 5 V/см до тех пор, пока бромфеноловый синий мигрирует по мере две трети длины геля. Пятно гель бромидом ethidium (EB) для 15-20 мин.
    Примечание: Следует использовать буфер электрофореза свежеприготовленные и решения EB.
  6. Визуализируйте siRNA банды под УФ изображений системы. Проверьте Fe: siRNA коэффициенты на котором siRNA образует комплексы с Пей-SPIONs, и в результате, группы, представляющие бесплатно siRNA отсталых или не поддаются обнаружению.

3. transfection RAW264.7 макрофагов в пробирке

  1. Культура клетки RAW264.7 Макрофаг как мыши в 10 см блюдо с помощью DMEM завершить среднего содержащий 10% плода бычьим сывороточным (ФБС) на 100 ед/мл пенициллин за 100 мкг/мл стрептомицина при 37 ° C в 5% CO2 инкубатора.
  2. Один день до трансфекции, аспирационная среднего из клеток и промойте их фосфат амортизированное saline (рН 7,4). Добавьте 1 мл 0,25% трипсина на 10 см блюдо. Trypsinize RAW264.7 клетки около 5-10 мин при 37 ° C в 5% CO2 инкубатора.
  3. Когда большинство клеток отдельный (после 5-10 мин), добавьте 5 мл DMEM полного среднего блюдо, чтобы инактивировать трипсина. Накапайте вверх и вниз, чтобы разогнать кластеры клеток в одиночных камерах.
  4. Суспензию клеток передавать стерильные 15 мл Конические трубки. Центрифуги, на 300 g x 3 мин на RT. удалить супернатант.
  5. Ресуспензируйте клетки с 5 мл свежего DMEM полного среднего и подсчитать количество ячеек.
  6. Плита 9 x 104 клетки на хорошо в 6-ну плита с 2 мл полного DMEM среды и инкубировать при 37 ° C в 5% CO2 инкубатора для около 24 часов.
    Примечание: При использовании тарелку другого размера, отрегулируйте плотность покрытием клеток пропорционально относительной площади поверхности так, что клетки достигают 80% confluency в то время transfection.
  7. Когда ячейка confluency составляет 80%, извлеките носитель из клеток и заменить его с 1 мл раствора DMEM полного среднего за хорошо. Пластину можно вернуть инкубатора пока не пей-SPION/siRNA комплексы были подготовлены и готовы к использованию (около 30 мин).
  8. Подготовить Пей-SPION/siRNA комплексы: рассчитать количество комплексов Пей-SPION/siRNA, необходимые для transfection эксперимент. В 1,5 мл бесплатно РНКазы microcentrifuge трубку Смешайте соответствующее количество Пей-SPIONs с малых интерферирующих РНК в соотношении данной Fe: siRNA. К примеру, подготовить Пей-SPION/siRNA NPs, содержащие 100 мкг Fe в Fe: siRNA соотношении 4, добавить 100 мкл (1 мг Fe/мл) Пей-SPIONs до 96 мкл интерферирующей РНК (0.26 мкг/мкл), а затем осторожно смешивая его с микропипеткой. Инкубируйте 30 мин на RT.
    Примечание: Подготовка тома Пей-SPION/siRNA комплекса, что составляет 10% сверх общей массы окончательный счет для любых непредвиденных потерь. Сделайте Пей-SPION/siRNA комплексов на низких Fe: siRNA коэффициенты, при которых молекул siRNA полностью погружены на ОПЭ-SPIONs и, следовательно, небольшое количество Пей-SPIONs может использоваться для минимизации потенциальных цитотоксичности. Экспериментальный экспериментов (гель отсталости пробирного) для оптимизации соотношения Fe: siRNA являются необходимыми.
  9. Выньте пластину 6-ну из инкубатора (шаг 3.7). Добавьте необходимый объем Пей-SPION/siRNA комплекса каплям каждой скважины и вихрем пластину осторожно, чтобы обеспечить равномерное распределение. Возвращение пластину в инкубаторе до оценки клеточного поглощения или гена нокдаун эффективности (1-3 d).
    Примечание: Transfecting макрофагов с Пей-SPION/малых интерферирующих РНК в концентрации ~ 15 мкг Fe/мл может максимизировать эффективность трансфекции при минимизации потенциальных цитотоксичности.

4. Системные доставка малых интерферирующих РНК в макрофагов крыс с экспериментального артрита

  1. Получение конкретного возбудителя бесплатный мужской крыс Вистара которые 7 недель. Приучать крыс для 7 d до использования и их обеспечения надлежащей пищей и водой. Вызвать артрит адъювантной (AA) у крыс как описано18.
  2. Подготовьте Пей-SPION/siRNA комплексы, как описано в шаге 3.8.
  3. Inject Пей-SPION/siRNA NPs (0,3 мг siRNA/кг) в AA крыс через Вену хвост. Оценки клеточного поглощения через, например, проточной цитометрии, ткань накопление через, например, в реальном времени флуоресценции изображений системы, или терапевтические эффекты на основе, например, клинические, гистологическое и рентгенографических анализы в нужный момент очка18.
    Примечание: Для клеточных и тканевых накопление исследований, лечения крыс с одной инъекции желаемого ЯИЭ; для терапевтических исследований придать крыс с NPs протестированных 1 x в неделю в течение трех недель подряд.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Размер и Зета потенциал Пей-SPIONs, приготовленные этот протокол были в диапазоне от 29-48 Нм (полиизопрена индекс: 0.12 - 0,23) и 30-48 м, соответственно. Они были стабильными в воде при температуре 4 ° C в течение 12 месяцев без очевидных агрегации. Чтобы оценить их siRNA привязки способности, пей-SPIONs были смешаны с малых интерферирующих РНК в различных соотношениях вес Fe: siRNA. Рисунок 1 показывает, что когда массовая доля Fe: siRNA достигает 4 и выше...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Макрофаги являются тугоплавкие transfect часто используемые синцитиального подходы, например, электропорация, Катионный липосомы и липидов видов. Здесь мы описали надежный и эффективный метод для transfect макрофагов с siRNA. Используя настоящий Протокол, свыше 90% Макрофаг как RAW 264.7 клеток (рис. 2B) и крыса перитонеальных макрофагов18 может transfected с siRNA без заметного ущерба жизнеспособность клеток. Этот метод зависит от доставки платформы Пей-SPION, которы...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы не имеют ничего сообщать.

Благодарности

Эта работа была поддержана Фонд национального естественных наук Китая (81772308) и Национальный исследовательский ключ и Программа развития Китая (№ 2017YFA0205502).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
DMEMGibcoC11995500BTWarm in 37° C водяная баня перед применением
Фетальная бычья сывороткаGibcoA31608-02
Пенициллин/стрептомицин (1,5 мл)Gibco15140122
Набор для анализа MTS на основе тетразолияPromegaG3582Для анализа цитотоксичности
RAW 264.7 клеточная линияCell Bank of Chinese Academy of Sciences, Шанхай, КитайTCM13
Планшеты для культуры тканей (6-луночные)Corning3516
Чашки для культивирования тканей (10 см)Пробирки Corning430167
без РНКазы (1,5 мл)AXYGENMCT-150-C
(15 мл)Corning430791
трипсинGibco25200-056
Крысы WistarШанхайский центр экспериментальных животных Китайско
Академия Наука
Bacillus Calmette– Gué Лиофилизированный порошок rinNational
Institutes for Food and Drug Control, Китай		для индукции адъювантного артрита у крыс
siRNA GenePharma(Шанхай, Китай)
Cy3-siRNARiboBio (Гуанчжоу, Китай)
Полиэтиленимин (10 кДа)Aladdin Chemical Reagent Co., Ltd.
Аммиачная водаAladdin Chemical Reagent Co., Ltd.
Олеиновая кислотаАладдин Химический реагент Ко., Лтд.
ДиметилсульфоксидАладдин Химический реагент Ко., Лтд.
FeSO4 и бык; 7H2OSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd10012118
FeCl3• 6H2OSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd10011918
Димеркаптоянтарная кислотаAladdin Chemical Reagent Co., Ltd.
ультрафильтрационная трубкаMilliporeUFC910096
раствор гидроксида тетраметиламмонияAladdin Chemical Reagent Co., Ltd.
Анализатор размера частиц и дзета-потенциалаMalvern, АнглияNano ZS90
Центрифужные пробирки E107079A112077O108484D103272D107254T100882

Ссылки

  1. Murray, P. J., Wynn, T. A. Protective and pathogenic functions of macrophage subsets. Nature Reviews Immunology. 11 (11), 723(2011).
  2. Maeß, M. B., Wittig, B., Lorkowski, S. Highly efficient transfection of human THP-1 macrophages by nucleofection. Journal of Visualized Experiments. (91), e51960(2014).
  3. Zhang, X., Edwards, J. P., Mosser, D. M. The Expression of Exogenous Genes in Macrophages: Obstacles and Opportunities. Macrophages and Dendritic Cells. , Springer. 123-143 (2009).
  4. Zhang, M., Gao, Y., Caja, K., Zhao, B., Kim, J. A. Non-viral nanoparticle delivers small interfering RNA to macrophages in vitro and in vivo. PLoS ONE. 10 (3), e0118472(2015).
  5. Davignon, J. -L., et al. Targeting monocytes/macrophages in the treatment of rheumatoid arthritis. Rheumatology. 52 (4), 590-598 (2012).
  6. Brown, J. M., Recht, L., Strober, S. The promise of targeting macrophages in cancer therapy. Clinical Cancer Research. 23 (13), 3241-3250 (2017).
  7. Karunakaran, D., et al. Targeting macrophage necroptosis for therapeutic and diagnostic interventions in atherosclerosis. Science Advances. 2 (7), e1600224(2016).
  8. Prosperi, D., Colombo, M., Zanoni, I., Granucci, F. Drug nanocarriers to treat autoimmunity and chronis inflammatory diseases. Seminars in Immunology. 34, 61-67 (2017).
  9. Höbel, S., Aigner, A. Polyethylenimines for siRNA and miRNA delivery in vivo. Wiley Interdisciplinary Reviews: Nanomedicine and Nanobiotechnology. 5 (5), 484-501 (2013).
  10. Whitehead, K. A., Langer, R., Anderson, D. G. Knocking down barriers: advances in siRNA delivery. Nature Reviews Drug Discovery. 8 (2), 129(2009).
  11. Liu, G., et al. N-Alkyl-PEI-functionalized iron oxide nanoclusters for efficient siRNA delivery. Small. 7 (19), 2742-2749 (2011).
  12. Weissleder, R., Nahrendorf, M., Pittet, M. J. Imaging macrophages with nanoparticles. Nature Materials. 13 (2), 125(2014).
  13. Magro, M., et al. Covalently bound DNA on naked iron oxide nanoparticles: Intelligent colloidal nano-vector for cell transfection. Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-General Subjects. 1861 (11), 2802-2810 (2017).
  14. Abdelrahman, M., et al. siRNA delivery system based on magnetic nanovectors: Characterization and stability evaluation. European Journal of Pharmaceutical Sciences. 106, 287-293 (2017).
  15. Zhang, H., Lee, M. -Y., Hogg, M. G., Dordick, J. S., Sharfstein, S. T. Gene delivery in three-dimensional cell cultures by superparamagnetic nanoparticles. ACS Nano. 4 (8), 4733-4743 (2010).
  16. Moghimi, S. M., Hunter, A. C., Murray, J. C. Long-circulating and target-specific nanoparticles: theory to practice. Pharmacological Reviews. 53 (2), 283-318 (2001).
  17. Harvey, A. E. Jr, Smart, J. A., Amis, E. Simultaneous spectrophotometric determination of iron (II) and total iron with 1, 10-phenanthroline. Analytical Chemistry. 27 (1), 26-29 (1955).
  18. Duan, J., et al. Polyethyleneimine-functionalized iron oxide nanoparticles for systemic siRNA delivery in experimental arthritis. Nanomedicine. 9 (6), 789-801 (2014).
  19. Fröhlich, E. The role of surface charge in cellular uptake and cytotoxicity of medical nanoparticles. International Journal of Nanomedicine. 7, 5577(2012).
  20. Wu, Y., et al. Ultra-small particles of iron oxide as peroxidase for immunohistochemical detection. Nanotechnology. 22 (22), 225703(2011).
  21. Xia, T., et al. Polyethyleneimine coating enhances the cellular uptake of mesoporous silica nanoparticles and allows safe delivery of siRNA and DNA constructs. ACS Nano. 3 (10), 3273-3286 (2009).
  22. Mocellin, S., Provenzano, M. RNA interference: learning gene knock-down from cell physiology. Journal of Translational Medicine. 2 (1), 39(2004).
  23. Courties, G., et al. et al.In vivo RNAi-mediated silencing of TAK1 decreases inflammatory Th1 and Th17 cells through targeting of myeloid cells. Blood. 116 (18), 3505-3516 (2010).
  24. Zolnik, B. S., Gonzalez-Fernandez, A., Sadrieh, N., Dobrovolskaia, M. A. Minireview: nanoparticles and the immune system. Endocrinology. 151 (2), 458-465 (2010).
  25. Mulens-Arias, V., Rojas, J. M., Pérez-Yagüe, S., Morales, M. P., Barber, D. F. Polyethylenimine-coated SPIONs trigger macrophage activation through TLR-4 signaling and ROS production and modulate podosome dynamics. Biomaterials. 52, 494-506 (2015).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Доставка малых интерферирующих РНКтрансфекция макрофаговдоставка siRNA in vitroдоставка siRNA in vivoсинтез наночастицмагнитная сепарацияанализ методом проточной цитометриианализ сайленсинга геновоценка жизнеспособности клеток
Наночастицы полиэтиленимина покрытием оксида железа как средство для доставки малые интерферирующие РНК макрофаги In Vitro и In Vivo
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.