Методическая статья

Выделение и характеристика человека пуповины производные мезенхимальных стволовых клеток из доношенных и недоношенных новорожденных

DOI:

10.3791/58806

⸱

26 января 2019 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Pediatrics, Kobe University Graduate School of Medicine, 2Department of Pathology, Kobe Children's Hospital, 3Department of Pediatrics, Hyogo College of Medicine, 4Department of Developmental Pediatrics, Shizuoka Children's Hospital, 5Department of Pediatrics, Nihon University School of Medicine

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Пуповина человека (UC) могут быть получены в течение перинатального периода в результате преждевременных, термин и postterm доставки. В этом протоколе мы описываем изоляции и характеристика UC-производные мезенхимальных стволовых клеток (UC-МСК) из плодов/младенцев на 19-40 недель гестации.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мезенхимальных стволовых клеток (МСК) имеют значительный терапевтический потенциал и привлечь все больший интерес в области биомедицины. MSCs первоначально изолирован и характеризуется из костного мозга (БМ), то приобрел от тканей, включая жировой ткани, синовиальной оболочки, кожи, пульпы зуба и плода придатки как плаценты, пуповины кровь (УКБ) и пуповины (UC). MSCs являются популяции гетерогенных клеток с емкостью для (1) соблюдения пластик в условиях стандартной культуры, (2) поверхность маркер выражения CD73+/CD90+/CD105+/CD45 /CD34––/CD14–/CD19 –/HLA-DR– фенотипов и (3) trilineage дифференцировку в адипоциты, остеоциты и хрящевые клетки, как в настоящее время определяется международным обществом клеточной терапии (ИКСТ). Хотя BM является наиболее широко используемым источником MSCs, захватнический характер стремления BM этически ограничивает его доступность. Пролиферации и дифференцировки потенциала MSCs полученные от БМ в целом снижение с возрастом донора. В отличие от плода MSCs, полученные из UC имеют преимущества как энергичный распространения и дифференциации потенциал. Существует без этических озабоченность для UC выборки, как она обычно рассматривается как медицинские отходы. Человека UC начинает развиваться с продолжающийся рост амниотической полости в 4-8 недель гестации и продолжает расти до достижения 50-60 см в длину, и это может быть изолированы в период всей новорожденных доставки. Чтобы разобраться в патофизиологии сложных заболеваний, мы использовали UC-производные MSCs (UC-MSCs) от младенцев, роды на различных сроках гестации. В этом протоколе мы описываем, изоляции и характеристика UC-MSCs из плодов/младенцев в 19-40 недель гестации.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мезенхимальных стволовых клеток (МСК) первоначально изолированы и характеризуется из костного мозга (БМ)1,2 , но также можно получить из различных тканей, включая жировой ткани, синовиальной оболочки, кожи, пульпы зуба и плода придатков 3. MSCs признаны популяции гетерогенных клеток, которые могут размножаться и дифференцироваться в адипоциты, остеоциты и хондроцитов. Кроме того, MSCs обладают способностью перейти на сайты травмы, подавлять и модуляции иммунного ответа, переделывать и ремонт повреждений. В настоящее время MSCs из разных источников привлекали растущий интерес как источник для клеточной терапии против целого ряда сложных заболеваний, включая трансплантат – versus – хост болезнь, инфаркт миокарда и ишемии миокарда4,5 .

Хотя BM является наиболее хорошо изученных источником MSCs, инвазивность BM аспирации этически ограничивает его доступность. Пролиферации и дифференцировки потенциала MSCs полученные от БМ в целом снижение с возрастом донора. В отличие от плода MSCs полученные от плода придатки как плаценты, пуповины кровь (УКБ), и пуповины (UC) имеют преимущества, включая менее этические соображения относительно отбора проб и надежное распространение и дифференциации потенциал6 , 7. среди плода придатки, которые обычно удаляются как медицинские отходы, UCB и UC считаются плода орган, в то время как плацента считается fetomaternal. Кроме того плаценты и UCB необходимо пробы и собранных в точный момент новорожденных доставки, тогда как плаценты и UC могут быть собраны и обработаны после родов новорожденных. Соответственно UC является многообещающим источником MSC для клетки терапии8,9.

Человека UC начинает развиваться с прогрессивной расширения амниотической полости в 4-8 недель гестации, продолжает расти до 50-60 см в длину и могут быть изолированы в течение всего периода новорожденного доставки10. Чтобы разобраться в патофизиологии сложных заболеваний, мы используем UC-производные MSCs (UC-MSCs) от младенцев, роды в различных сроках гестации11,12. В этом протоколе мы опишем, как изолировать и характеризуют UC-MSCs из плодов/младенцев в 19-40 недель гестации.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Использование человеческой образцы для этого исследования был одобрен этическим Комитетом Кобе выпускник школы медицины университета (утверждение № 1370 и 1694) и в соответствии с утвержденными руководящими принципами.

1. изоляция и культура UC-МСК

Примечание: UC-MSCs были успешно изолированные, культурный, и расширенный (более чем прохождения номер 4) из более чем 200 ПСК подвергается этот протокол. Среди более чем 200 ПСК, 100% показали успешный UC-MSC изоляции, менее 5% показали случайного загрязнения, меньше, чем 15% показали рост арест, и более чем 80% показали успешное расширение UC-MSC.

  1. Собирайте UC.
    1. Подготовьте пластиковый Тюбик 50 мл, асептических ножниц и бутылка 500 мл альфа изменение орла минимальных основных средних (альфа MEM) при 4 ° C.
    2. Асептически вырезать из UC с хирургические ножницы на приблизительно 5-10 см в длину и собирать его вскоре после рождения новорожденных путем операции кесарева сечения.
    3. Сразу же место UC в пластиковый Тюбик 50 мл и добавить 20-30 мл альфа мем в трубу.
    4. Храните UC при комнатной температуре (RT), до тех пор, пока он перевозится в лабораторию.
      Примечание: Асептический UC может храниться в сыворотки свободной среде RT до 2 дней. Таким образом UC, полученные из соседней больницы могут быть собраны, если он доставляется в лабораторию в течение 2 дней.
  2. Вскрыть UC.
    1. Подготовьте пластиковый лоток, стерилизованные ножницы, щипцы, пипетки 10 мл, 25 мл пипетки, два блюда культуры ткани 60 мм, фосфат амортизированное saline (PBS), очищенный фермента смеси (см. Таблицу материалов, воссоздана с стерильных PBS в концентрации 13 Wünsch единиц/мл и хранятся при температуре-80 ° C) и бутылка 500 мл среды сокращение сыворотке (см. Таблицу материалы).
    2. Разминка PBS, очищенный фермента смеси, ограничена RT. сыворотки среднего и среднего культуры [альфа-MEM содержащий 10% плода бычьим сывороточным (ФБС) и 1% раствора и антибиотик противогрибковое (AA) температуре 4 ° C]
    3. Взять из UC из трубки и поместите его в пластиковый лоток.
    4. Весят и вскрыть 5 g UC с стерилизованные ножниц.
    5. Залейте 10 мл 70% этанола UC для стерилизации с помощью пипетки 10 мл.
    6. Вымойте UC с 10 мл PBS, дважды с помощью пипетки 10 мл.
    7. Место UC в тканевой культуры блюдо стерилизованные 60 мм (см. рис. 1, шаг 1).
    8. Добавьте 10 мл среды сокращение сыворотке в блюдо.
    9. Добавьте 0,5 мл очищенной фермента смесей до конечной концентрации приблизительно 0,62 Wünsch единиц/мл.
      Примечание: Использование очищенных ферментных смеси вместо традиционных коллагеназы было показано для улучшения урожайности и жизнеспособности UC-MSCs изолированы от UC.
    10. Нарежьте UC 2-3 мм с стерилизованные ножницы и щипцы (см. рис. 1, шаг 2).
      Примечание: Этот процесс занимает около 30 минут.
    11. Инкубируйте UC штук при 37 ° C на 30 мин в 5% CO2 инкубатора.
    12. Вырежьте куски частично переваривается UC на более мелкие куски, которые легко проходят через пипетку 25 мл.
      Примечание: Этот процесс занимает около 30 минут.
    13. Инкубируйте мелкие UC при 37 ° C 15-45 минут в 5% CO2 инкубатора.
      Примечание: Инкубационный необходимо продолжать до тех пор, пока гомогенатах становятся вязкими. Общее пищеварение время составляет около 120 мин. В случае использования ПСК из недоношенных новорожденных, однако, время пищеварение может быть сокращен потому что те легко вырезать и переваривается.
  3. Изолируйте UC-MSCs.
    1. Подготовьте четыре пластиковых труб 50 мл и 500 мл бутылка питательной среды.
    2. Гомогенат трутневых UC делят на два 50 мл пластиковых трубок с помощью пипетки 25 мл, с примерно 7,5 мл в каждую пробирку.
    3. Добавить 20 мл питательной среды в каждую пробирку и хорошо перемешать.
    4. Фильтр каждый UC огневки через стрейнер ячейки 100 мкм, помещены в верхней части новой коллекции 50 мл трубки, с помощью пипетки 25 мл для сбора UC-производные клетки.
      Примечание: Этот процесс занимает около 15 минут каждый, как усваивается UC решение является липким.
    5. Центрифуга две трубы на 1000 x g за 5 мин.
    6. Тщательно удалить супернатант и отменить его.
    7. Ресуспензируйте клетки окатышей в две трубы с 5 мл питательной среды.
    8. Перевести суспензию клеток в новой пластины 60 мм и культуры при 37 ° C в 5% CO2 инкубатора (см. рис. 1, шаг 3).
  4. Культура UC-MSCs.
    1. Разогреть PBS, трипсин ЭДТА (0,25 w/v%) и культура среднего (альфа MEM содержащий 10% FBS и 1% AA) для RT.
    2. Когда клетки прикреплены к плите 60 мм, удалите питательной среды и мыть с 5 мл PBS дважды, чтобы удалить мусор и красные кровяные клетки.
      Примечание: Прилагаемый клетки обычно появляются на 3-5 дней после первоначального покрытия (см. рис. 1, шаг 4).
    3. Заменить питательной среды дважды в неделю и инкубировать при 37 ° C в 5% CO2 инкубатора до 90-100% confluency.
      Примечание: Это обычно занимает 7-14 дней после первоначального покрытия.
    4. Вымыть клетки с 5 мл PBS дважды, добавить 0,5 мл трипсина-ЭДТА и инкубировать при 37 ° C за 5-10 мин.
    5. Когда клетки становятся округлые и отсоединена, добавить 9 мл питательной среды и хорошо перемешайте до инактивирует трипсина.
    6. Перевести суспензию клеток в новой 100 мм пластины и культуры при 37 ° C в 5% CO2 инкубатора (см. рис. 1, шаг 5).
    7. Заменить питательной среды дважды в неделю и инкубировать при 37 ° C в 5% CO2 инкубатора до 90-100% confluency.
      Примечание: Это обычно занимает 4-8 дней после первоначального покрытия.
    8. Вымыть клетки с 10 мл PBS дважды, добавляют 1 мл трипсина ЭДТА и инкубировать при 37 ° C за 5-10 мин.
    9. Когда клетки становятся округлые и отсоединена, добавить 9 мл питательной среды и хорошо перемешайте до инактивирует трипсина.
    10. Перевести суспензию клеток в два новых 100 мм пластин и культуры при 37 ° C в 5% CO2 инкубатора (см. рис. 1, шаг 5).
    11. Повторить субкультуры (1:2 расколы) до десятой проход (см. рис. 1, шаг 5).
      Примечание: Потому что клетки культивировали меньше вырожденная условиях склонны достичь ранее арест оружия, важно для прохода клетки с Сплит соотношении 1:2.
    12. Использование ячейки на пятый-восьмой проход для анализа клеток поверхности маркер, дифференциация assay клетки и других экспериментов.
      Примечание: Чтобы сохранить активные распространения для как можно дольше, клетки обычно культивировали в более чем 70-80% вырожденная условий.

2. поверхности маркер выражения UC-МСК

  1. Подготовка клетки в 100 мм пластины и разъединять их с 1 мл раствора трипсина ЭДТА при 37 ° C за 5-10 мин.
  2. Добавьте 9 мл питательной среды и центрифуги на 1000 x g за 5 мин.
  3. Аспирационная супернатант и выбросьте его.
  4. Ресуспензируйте клетки окатышей с 10 мл PBS и центрифуги на 1000 x g для 5 минут повторите этот шаг Стиральная дважды.
  5. Ресуспензируйте клетки с буфера потока цитометрии (FCM) (PBS, содержащие ЭДТА 2 мм и 10% блокировки реагент) на ~ 1 × 106 клеток/мл.
  6. Передача 50-100 мкл суспензии клеток в 1,5 мл; Добавить фикоэритрин (PE)-конъюгированных антител против CD14, CD19, CD34, CD45, CD73, CD90, CD105 или HLA-DR; и инкубировать на льду по 45 мин.
  7. Вымыть клетки с ТСМ буфер дважды и 50-100 мкл 0,2% раствор красителя жизнеспособности (см. Таблицу материалы).
  8. Инкубируйте на RT 15 мин, вымыть клетки с ТСМ буфер дважды и фильтр клетки через стрейнер ячейки 70 мкм.
  9. Запустите клетки через плату FCM и анализировать полученные результаты, с использованием программного обеспечения ТСМ согласно инструкциям производителя.

3. Trilineage дифференциация UC-МСК

  1. Выполните adipogenesis.
    1. Готовят суспензию клеток в среде культуры в концентрации 5 × 103 клеток/мл.
    2. Пластина 1 мл суспензии клеток в пластине 12-Ну и инкубировать при 37 ° C в 5% CO2 инкубатора для ~ 24 h.
    3. Замените адипогенном дифференциации среднего питательной среды (см. Таблицу материалы) и инкубации при 37 ° C в 5% CO2 инкубатора для 2-3 недели. Изменить адипогенном дифференциации среднего дважды в неделю.
    4. Вымойте клетки с PBS три раза.
    5. Инкубировать клетки в 4% раствор формальдегида для 30 мин на RT.
    6. Вымойте клетки с PBS три раза и с 60% изопропиловый спирт в три раза.
    7. Готовят 0,5% нефти красный O раствор путем растворения 84 мг нефти красный O в 10 мл 100% изопропиловый спирт и добавление 6,7 мл дистиллированной воды. Пятно клетки с 1 мл 0,5% раствора нефти красный O в РТ за 20 мин.
    8. Вымыть клетки с 60% изопропиловый спирт три раза и визуализировать под микроскопом.
  2. Выполните Остеогенез.
    1. Готовят суспензию клеток в среде культуры в концентрации 14 × 10 кл/мл.
    2. Пластина 1 мл суспензии клеток в пластине 12-Ну и инкубировать при 37 ° C в 5% CO2 инкубатора для ~ 24 h.
    3. Замените osteogeneic дифференциации среднего питательной среды (см. Таблицу материалы) и инкубации при 37 ° C в 5% CO2 инкубатора для 1-2 недели. Смена Остеогенные дифференциации среднего дважды в неделю.
    4. Вымойте клетки с PBS три раза.
    5. Инкубировать клетки в 4% раствор формальдегида для 30 мин на RT.
    6. Вымойте клетки с PBS три раза.
    7. Подготовить раствор 2% ализарин красный S, растворяя 200 мг ализарин красный S с 10 мл дистиллированной воды. Пятно клеток в 1 мл 2% раствора ализарин красный S на RT на 3 мин.
    8. Промыть скважин с PBS три раза и визуализировать под микроскопом.
  3. Выполните chondrogenesis.
    1. Готовят суспензию клеток в среде культуры в концентрации 1.67 × 10 кл/мл.
    2. Положите капельку 5 мкл суспензии клеток на центр хорошо в 12-ну пластине (micromass культуры) и инкубировать при 37 ° C в 5% CO2 инкубатора для 2-3 ч.
    3. Аккуратно добавить 1 мл хондрогенном дифференциация среды (см. Таблицу материалы) и инкубации при 37 ° C в 5% CO2 инкубатора для 4-7 дней. Смена хондрогенном дифференциации среднего дважды в неделю.
    4. Вымойте клетки с PBS три раза.
    5. Инкубировать клетки в 4% раствор формальдегида для 30 мин на RT.
    6. Вымойте клетки с PBS три раза.
    7. Готовят раствор 0,05% толуидиновый синий растворяют 250 мг толуидиновый синий с 500 мл 0,1 М натрия ацетата буфер с рН 4.1. Пятно клетки с 1 мл 0,05% раствора толуидиновый синий на RT 30 мин.
    8. Вымыть клетки с PBS три раза и визуализировать под микроскопом.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Процедуры из коллекции UC MSC культуре резюмируются в рисунке 1. UC приблизительно 5-10 см в длину могут быть собраны из всех новорожденных, доставлено путем операции кесарева сечения. UC начинает развиваться в 4-8 недель гестации и продолжает расти до 50-60 см в длину, как показано на рисунке 2. Существует две артерии (A), один из Вены (V), шнур накладки (CL) и Уортон желе (WJ) в UC, как показано на рис. 3

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

MSCs могут быть изолированы от различных тканей и являются гетерогенной популяция клеток, которые не все Экспресс же фенотипические маркеры. Здесь мы изложили протокол, который проведет сбор и рассечение UC от преждевременных и срочных младенцев и позволяет изоляции и культуры UC-MSCs. После этого протокол мы успешно изолированные UC-MSCs, которые удовлетворяют критериям ИКСТ19 из плодов/младенцев на 19-40 недель гестации и продемонстрировали, что они представляют некоторые аспекты патофизиологии ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы не имеют ничего сообщать.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эта работа была поддержана дотаций для Scientific Research (C) (номер гранта: 25461644) и молодых ученых (B) (предоставление номера: 15 K 19614, 26860845, 17 K 16298) из JSP-страницы KAKENHI.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Пластиковая трубка объемом 50 млAS One Coporation, Осака, ЯпонияViolamo 1-3500-22
12-луночная пластинаAGC Techno Glass, Токио, ЯпонияIwaki 3815-012
Тарелка 60 ммAGC Techno Glass, Токио, ЯпонияIwaki 3010-060
Сетчатый фильтр для ячеек (100 μ m)Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA Falcon 35-2360
Сетчатый фильтр (70 μ m)Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA Falcon 35-2350
Alpha MEMWako Pure Chemical, Осака, Япония135-15175
Фетальная бычья сывороткаSigma Aldrich, Сент-Луис, Миссури172012
Уменьшенная сывороточная средаThermo Fisher Scientific, waltham, MAOPTI-MEM Gibco 31985-070
Антибиотик-антимикотикThermo Fisher Scientific, Waltham, MA Gibco 15240-062
Trypsin-EDTAWako Pure Chemical, Осака, Япония209-16941
PBSTakara BIO, Шига, ЯпонияT900
Очищенные смеси ферментовRoche, Мангейм, ГерманияLiberase DH Research Grade 05401054001
PE-конъюгированное первичное антитело мыши против CD14BD Bioscience, Франклин Лейкс, Нью-Джерси347497Лот: 3220644, RRID: AB_400312
ПЭ-конъюгированное первичное антитело мыши против CD19BD Bioscience, Franklin Lakes, NJ340364Лот: 3198741, RRID: AB_400018
первичное мышиное первичное антитело ПЭ против CD34BD Bioscience, Франклин Лейкс, Нью-Джерси555822Лот: 3079912, RRID: AB_396151
первичное мышиное антитело ПЭ-конъюгированное против CD45BD Bioscience, Франклин Лейкс, Нью-Джерси555483Лот: 2300520, RRID: AB_395875
ПЭ-конъюгированное первичное антитело мыши против CD73BD Bioscience, Франклин Лейкс, Нью-Джерси550257Лот: 3057778, RRID: AB_393561
ПЭ-конъюгированное первичное антитело мыши против CD90BD Bioscience, Франклин Лейкс, Нью-Джерси555596Лот: 3128616, RRID: AB_395970
ПЭ-конъюгированное мышиное первичное антитело против CD105BD Bioscience, Франклин Лейкс, Нью-Джерси560839Лот: 4339624, RRID: AB_2033932
ПЭ-конъюгированное первичное антитело мыши против HLA-DRBD Bioscience, Franklin Lakes, NJ347367Лот: 3219843, RRID: AB_400293
ПЭ-конъюгированная мышь IgG1 k изотипBD Bioscience, Франклин Лейкс, Нью-Джерси555749Лот: 3046675, RRID: AB_396091
ПЭ-конъюгированная мышь IgG2a k изотипBD Bioscience, Франклин Лейкс, Нью-Джерси555574Лот: 3035934, RRID: AB_ 395953
ПЭ-конъюгированная мышь IgG2b k изотипаBD Bioscience, Франклин Лейкс, Нью-Джерси555743Лот: 3098896, RRID: AB_396086
Красительжизнеспособности BD Bioscience, Франклин Лейкс, Нью-ДжерсиКорректируемое окрашивание жизнеспособности 450 562247
Блокирующий реагентDainippon Pharmaceutical, Осака, ЯпонияBlock Ace UKB80
FCMBD Bioscience, Франклин Лейкс, Нью-ДжерсиBD FACSAria  III Сортировщик
Программное обеспечениеFCM BD Bioscience, Франклин Лейкс, Нью-ДжерсиBD FACSДива
Среда для дипогенной дифференцировкиInvitrogen, Карлсбад, КалифорнияStemPro Дифференцировка адипогенеза A10070-01
Остеогенная дифференцировочная средаInvitrogen, Карлсбад, CAStemPro Набор для дифференцировки остеогенеза A10072-01
Хондрогенная дифференцировка Средний Invitrogen, Карлсбад, КалифорнияНабор для дифференцировки хондрогенеза StemPro A10071-01
ФормальдегидPolyscience, Уорригтон, Пенсильвания16% Ультрачистый формальдегид EM Grade #18814
Масло красный OСигма Олдрич, Сент-Луис, МиссуриO0625
Аризарин Ред SСигма Олдрич, Сент-Луис, МиссуриA5533
Толуидин СинийСигма Олдрич, Сент-Луис, Миссури
МикроскопKeyence, Осака, ЯпонияBZ-X700
клеток198161

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Friedenstein, A. J., Petrakova, K. V., Kurolesova, A. I., Frolova, G. P. Heterotopic of bone marrow. Analysis of precursor cells for osteogenic and hematopoietic tissues. Transplantation. 6 (2), 230-247 (1968).
  2. Caplan, A. I. Mesenchymal stem cells. Journal of Orthopaedic Research. 9 (5), 641-650 (1991).
  3. Crisan, M., et al. A perivascular origin for mesenchymal stem cells in multiple human organs. Cell Stem Cell. 3 (3), 301-313 (2008).
  4. Bianco, P., Robey, P. G., Simmons, P. J. Mesenchymal Stem Cells: Revisiting History, Concepts, and Assays. Cell Stem Cell. 2 (4), 313-319 (2008).
  5. Bianco, P. 34;Mesenchymal" stem cells. Annual Review of Cell and Developmental Biology. 30 (1), 677-704 (2014).
  6. Baksh, D., Yao, R., Tuan, R. S. Comparison of proliferative and multilineage differentiation potential of human mesenchymal stem cells derived from umbilical cord and bone marrow. Stem Cells. 25 (6), 1384-1392 (2007).
  7. Manochantr, S., et al. Immunosuppressive properties of mesenchymal stromal cells derived from amnion, placenta, Wharton's jelly and umbilical cord. Internal Medicine Journal. 43 (4), 430-439 (2013).
  8. Arutyunyan, I., et al. Umbilical Cord as Prospective Source for Mesenchymal Stem Cell-Based Therapy. Stem Cells International. 6901286, (2016).
  9. Davies, J. E., Walker, J. T., Keating, A. Concise Review: Wharton's Jelly: The Rich, but Enigmatic, Source of Mesenchymal Stromal Cells. Stem Cells Translational Medicine. 6 (7), 1620-1630 (2017).
  10. Zhu, D., Wallace, E. M., Lim, R. Cell-based therapies for the preterm infant. Cytotherapy. 16 (12), 1614-1628 (2014).
  11. Iwatani, S., et al. Gestational Age-Dependent Increase of Survival Motor Neuron Protein in Umbilical Cord-Derived Mesenchymal Stem Cells. Frontiers in Pediatrics. 5, 194(2017).
  12. Iwatani, S., et al. Involvement of WNT Signaling in the Regulation of Gestational Age-Dependent Umbilical Cord-Derived Mesenchymal Stem Cell Proliferation. Stem Cells International. , 8749751(2017).
  13. Mennan, C., et al. Isolation and characterisation of mesenchymal stem cells from different regions of the human umbilical cord. BioMed Research International. 916136, (2013).
  14. Capelli, C., et al. Minimally manipulated whole human umbilical cord is a rich source of clinical-grade human mesenchymal stromal cells expanded in human platelet lysate. Cytotherapy. 13 (7), 786-801 (2011).
  15. Lu, L. L., et al. Isolation and characterization of human umbilical cord mesenchymal stem cells with hematopoiesis-supportive function and other potentials. Haematologica. 91 (8), 1017-1026 (2006).
  16. Tong, C. K., et al. Generation of mesenchymal stem cell from human umbilical cord tissue using a combination enzymatic and mechanical disassociation method. Cell Biology International. 35 (3), 221-226 (2011).
  17. Han, Y. F., et al. Optimization of human umbilical cord mesenchymal stem cell isolation and culture methods. Cytotechnology. 65 (5), 819-827 (2013).
  18. Paladino, F. V., Peixoto-Cruz, J. S., Santacruz-Perez, C., Goldberg, A. C. Comparison between isolation protocols highlights intrinsic variability of human umbilical cord mesenchymal cells. Cell Tissue Bank. 17 (1), 123-136 (2016).
  19. Dominici, M., et al. Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement. Cytotherapy. 8 (4), 315-317 (2006).
  20. Mareschi, K., et al. Expansion of mesenchymal stem cells isolated from pediatric and adult donor bone marrow. Journal of Cellular Biochemistry. 97 (4), 744-754 (2006).
  21. Choumerianou, D. M., et al. Comparative study of stemness characteristics of mesenchymal cells from bone marrow of children and adults. Cytotherapy. 12 (7), 881-887 (2010).
  22. Hong, S. H., et al. Ontogeny of human umbilical cord perivascular cells: molecular and fate potential changes during gestation. Stem Cells and Development. 22 (17), 2425-2439 (2013).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи