Method Article

Авторадиографии как простой и мощный метод для визуализации и характеристика фармакологического целей

DOI:

10.3791/58879

⸱

March 12th, 2019

 ,  ,  , 
1Department of Drug Design and Pharmacology, Faculty of Health and Medical Sciences, University of Copenhagen, 2Neurobiology Research Unit and CIMBI, Copenhagen University Hospital, 3Department of Clinical Physiology, Nuclear Medicine & PET, Copenhagen University Hospital

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Методом авторадиографии обычно используется для изучения привязки radioligands в разделах ткани для определения качественных или количественных фармакологии.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В vitro авторадиографии стремится визуализации анатомического распределения протеин интереса в ткани экспериментальных животных, а также людей. Метод основан на конкретной привязки лиганд своей биологической цели. Таким образом замороженные ткани секции инкубируют с решением лиганд, и привязки к целевому впоследствии локализуется путем обнаружения радиоактивного распада, например, с помощью светочувствительной пленки или фосфора изображений пластины. Результате цифровой autoradiograms отображения замечательные пространственного разрешения, который позволяет количественной и локализации лиганд привязки в различных анатомических структур. Кроме того количественная оценка позволяет фармакологическая характеристика сродство лиганда с помощью константы диссоциации (dK), константы ингибирования (Kя), а также плотность сайтов связывания (BМакс) в отдельных тканях. Таким образом метод предоставляет сведения о локализации целевого и лигандом избирательности. Здесь техника проявляется с autoradiographic характеристика высокоспецифичные гамма-оксимасляная кислота (ГОМК) привязки сайтов в ткани мозга млекопитающих, с особым упором на методологические соображения относительно привязки пробирного параметры, выбор лиганд и метод обнаружения.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторадиографии — это метод, который предоставляет изображения радиоактивного распада. Метод обычно используется для изучения распределения ткани протеина интереса в vitro на основе конкретных фармакологических взаимодействия между радиоизотопами соединения и его цель. Это обеспечивает прямую информацию о избирательность лигандом для целевого объекта. Радиоавтографией в пробирке может также использоваться для количественного определения фармакологических привязки параметров radioligands, таких как Константа диссоциации (dK) и плотности сайтов связывания (BМакс), а также для определения Ингибирование константа (iK) кон....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все животные обработка была выполнена в соответствии с руководящими принципами датского инспекции экспериментов животных.

Примечание: Протокол, описанные здесь охватывает Подготовка тканей (т.е., ткани мозга мыши), в пробирке autoradiographic assay достаточно подробно для создания метода в новой лаборатории, воздействие фосфора изображений пластины, а также последующие денситометрических анализ autoradiograms (рис. 2) с целью локализации и количественного определения привязки лиганд в различных анатомических структур. Для гистологической сравнения включен протокол для количество кресил фиолето....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

С помощью описанных протокола, анатомические распределение сайтов связывания ГОМК высокоспецифичные был визуализирован с радиоизотопами ГОМК аналог [3H] HOCPCA в мозг мыши, который был сокращен на корональных, сагиттальной и горизонтальные секции (рис. 3 ). Высокий уровень привязки наблюдались в гиппокампе и коры, Нижняя привязки в полосатом теле и не был обнаружен в мозжечке, соответствующих предыдущих моделей сообщил выражение высокоспецифичные Г.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Качество autoradiographic assay чаще всего определяется чувствительность лиганд. Важным фактором является выбранный радиоизотопных, которая дается путем наличия известных лигандами или осуществимость конкретных методов маркировки приносить лигандов с соответствующей удельной активностью (то есть, количество радиоактивности на единицу моль лиганд)23и с ограниченным количеством химической деградации. Большое количество radioligands известных лигандов помечены с тритием9

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы заявляют отсутствие конфликта интересов.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Работа была поддержана Фондом компании «Лундбек» (Грант R133-A12270) и Ново Нордиск Foundation (Grant NNF0C0028664). Авторы благодарят доктор Aleš Marek на поставку лиганд [3H].

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Абсолютный этанолMerck Millipore107017
уксусной кислотеSigma-AldrichA6283
BAS-TR2040 Imaging PlateGE Healthcare Life Science2895648120x40 см - Чувствительный к тритию
Крезил фиолетовый ацетатSigma-AldrichC5042-10G
DPX (неводный монтажный материал для микроскопии)Merck Millipore100579
O.C.T. Compound, 12 x 125 млСакура4583Ткань-Тек
ПараформальдегидСигма-Олдрич16005-1KG-R
Superfrost Плюс слайдыVWR631-9483предметные стекла микроскопа
Тканя-Тек Ручной набор для окрашивания предметного стеклаСакура Finetek Дания ApS4451
Стандарт трития на глазахАмерикан Радиомаркированные Химикаты, Инк.ART 0123
Заменитель ксилолаSigma-AldrichA5597

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Upham, L. V., Englert, D. F. Handbook of Radioactivity Analysis. , Elsevier Inc. 1063-1127 (2003).
  2. Manuel, I., et al. Neurotransmitter receptor localization: From autoradiography to imaging mass spectrometry. ACS Chemical Neuroscience. 6, 362-373 (2015).
  3. Pavey,....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

AutoradiographyRadioligand BindingTissue SectioningPhosphor ImagingProtein TargetsBrain TissueBinding AssaySignal To NoiseAnatomical DistributionPharmacological Analysis

Related Articles