Здесь мы представляем элегантный протокол для оценки в vivo вакцины эффективность и принимающих иммунных реакций. Этот протокол может быть адаптирована для модели вакцины, которые изучать вирусных, бактериальных, или паразитарные патогенов.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Оценка хост возбудитель ответы и эффективность вакцины в мышей
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Вакцины являются 20го века медицинское чудо. Они значительно сократили заболеваемости и смертности, вызванных инфекционными заболеваниями и способствовала поразительное увеличение продолжительности жизни во всем мире. Тем не менее определения эффективности вакцины остается проблемой. Новые данные свидетельствуют о том, что текущий бесклеточной вакцины (aPV) для Bordetella коклюша (B. коклюша) индуцирует субоптимальные иммунитет. Таким образом одной из основных задач является разработка следующего поколения вакцина, которая побуждает защитного иммунитета без негативных побочных эффектов вакцины поклеточного (ДПВ). Здесь мы описываем протокол, который мы использовали для тестирования эффективности перспективных, Роман адъюванта, которая искажает иммунные реакции на защитный Th1/Th17 фенотип и способствует лучше Распродажа B. коклюша вызов из мышиных дыхательных путей. Эта статья описывает протокол для мыши иммунизации, Бактериальная вакцинация, ткани для сбора урожая и анализа иммунных реакций. С помощью этого метода, в рамках нашей модели, мы успешно раскрыты важнейших механизмов, вызвали перспектива, следующего поколения бесклеточной коклюшной вакцины. Этот метод может применяться для любой модели инфекционных заболеваний с целью определения эффективности вакцины.
Введение
Вакцины являются одним из величайших достижений XX века общественного здравоохранения, однако мы до сих пор не полностью понимаем механизмы, которыми успешно вакцины стимулируют защитные иммунитет. Определение молекулярной подписей (например., маркеры активации клеток, расширение клеточных подтипы и шаблонов экспрессией генов) индуцированных после вакцинации предоставляет множество информации для прогнозирования и создании эффективных иммунный ответ. Сложность хост возбудитель ответов не могут быть реплицированы адекватно с использованием в vitro клетки культуры системы1. В естественных условиях вакцины модели предназ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Все эксперименты с живых животных были проведены после протоколом, утвержденным Огайо государственного университета IACUC IACUC руководящим принципам. Мышей C57Bl/6 использовались во всех прививок и инфекции. Как мужчины, так и женские мышей используются в каждой группе в соответствии с руководящими принципами NIH. Количество животных каждого группы определяется мощность расчеты, основанные на предсказал различия в результатах среди экспериментальных групп. Например, 8 мышей каждой группы дадут 80% мощности при α = 0,05 (2-сторонняя) для 2-Пример t- тест, чтобы обнаружить различия в результатах интерес 1.33 стандартных отклонений (SDs).
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Описанная модель показывает метод для оценки эффективности вакцины и иммунные реакции во время взаимодействия хост возбудителя. Рисунок 1 изображает представитель вакцины для иммунизации и заразить мышей и урожай тканей для анализа. Рисунок 2 демонстрирует настройку системы анестезии, занятых побудить мышей, позволяя следователей поставить прививки и бактериальных Инокулянты. Рисунок 3 показывает при.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Всеобъемлющий протокол, описанную здесь, для изучения вакцины индуцированной иммунитет к B. коклюша инфекции также позволит оценки принимающей ответов на целый ряд других патогенов. Протокол рассматриваются методы доставить прививки, определить вакцины эффективность следующих возбудителя вызов и параллельно рассечение иммунной функции. В адаптации протокол для того, чтобы изучить другие патогены, несколько параметров должны быть изменены. Они включают, но не ограничиваются, режим животных анестезии, состав вакци.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы не имеют ничего сообщать.
Благодарности
Эта работа была поддержана 1R01AI125560-01 и запуск средства от университета штата Огайо.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Индукционная камера 2 л | Vet Equip | 941444 | |
| Fluriso | Vet One | V1 501017 | подойдет любая марка |
| Bordet Gengou Agar Base | BD bioscience | 248200 | |
| Казеин | Sigma | C-7078 | |
| Казаминокислоты | VWR | J851-500G | Ситечко Scholte (SS) медиакомпоненты |
| L-глутаминовая кислота | Исследовательская продукция Int | G36020-500 | |
| L-пролин | Исследовательская продукция Int | P50200-500 | |
| Хлорид натрия | Fisher | BP358-10 | |
| Фосфат калия одноосновной | Fisher | BP362-1 | |
| Хлорид калия | Fisher | P217-500 | |
| Хлорид магния гексагидрат | Fisher | M2670-500G | |
| Хлорид кальция | Fisher | C75-500 | |
| Трис основание | Fisher | BP153-1 | |
| L-цистеин HCl | Fisher | BP376-100 | SS медиа добавки |
| Сульфат железа гептагидрат | Sigma | F-7002 | |
| Ниацин | Исследовательские продукты Int | N20080-100 | |
| Глутатион | Исследовательская продукция Int | G22010-25 | |
| Аскорбиновая кислота | Исследовательская продукция Int | A50040-500 | |
| RPMI 1640 | ThermoFisher Scientific | 11875093 | |
| FBS | Sigma | F2442-500mL | любой источник в США, неинактивированный при нагревании |
| гентамицин | ThermoFisher Scientific | 15710064 | |
| B-меркаптоэтанол | Fisher | BP176-100 | |
| 15mL тканевая шлифовальная машина | Wheaton | 357544 | любой аналогичной марки подходит |
| Аккумуляторный ручной гомогенизатор | Kontes/Sigma | Z359971-1ЕА | любой аналогичной марки подходят |
| инструменты - ножницы, кривые ножницы, щипцы, тонкие щипцы, треугольные распределители | любой марки подходят | ||
| шприцы | 3мл BD bioscience | 309657 | |
| конические трубки 15мл | Fisher | ||
| 1,5 мл микрофуговые пробирки | Denville | C2170 | |
| 70 мкм клеточные фильтры | Fisher | ||
| 60 мм планшеты | ThermoFisher Scientific | 130181 | |
| 48-луночные планшеты для культивирования тканей | ThermoFisher Scientific | 08-772-1C | |
| 1 мл инсулиновый шприц 28G1/2 | Fisher Scientific/Excel Int. | 14-841-31 | |
| Мышь ИФН-гамма ИФА Ready-SET-Go! Набор | Invitrogen / eBioscience | 50-173-21 | |
| Мышь IL-17 ELISA Ready-SET-Go! Набор | Invitrogen / eBioscience | 50-173-77 | |
| Мышь IL-5 ELISA Ready-SET-Go! Набор | Invitrogen / eBioscience | 50-172-09 |
Ссылки
- Tacken, P. J., Figdor, C. G. Targeted antigen delivery and activation of dendritic cells in vivo: steps towards cost effective vaccines. Seminars in Immunology. 23 (1), 12-20 (2011).
- Kilgore, P. E., Salim, A. M., Zervos, M. J., Schmitt, H. J.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
