Оценка хост возбудитель ответы и эффективность вакцины в мышей

Summary

Здесь мы представляем элегантный протокол для оценки в vivo вакцины эффективность и принимающих иммунных реакций. Этот протокол может быть адаптирована для модели вакцины, которые изучать вирусных, бактериальных, или паразитарные патогенов.

Abstract

Вакцины являются 20^го века медицинское чудо. Они значительно сократили заболеваемости и смертности, вызванных инфекционными заболеваниями и способствовала поразительное увеличение продолжительности жизни во всем мире. Тем не менее определения эффективности вакцины остается проблемой. Новые данные свидетельствуют о том, что текущий бесклеточной вакцины (aPV) для Bordetella коклюша (B. коклюша) индуцирует субоптимальные иммунитет. Таким образом одной из основных задач является разработка следующего поколения вакцина, которая побуждает защитного иммунитета без негативных побочных эффектов вакцины поклеточного (ДПВ). Здесь мы описываем протокол, который мы использовали для тестирования эффективности перспективных, Роман адъюванта, которая искажает иммунные реакции на защитный Th1/Th17 фенотип и способствует лучше Распродажа B. коклюша вызов из мышиных дыхательных путей. Эта статья описывает протокол для мыши иммунизации, Бактериальная вакцинация, ткани для сбора урожая и анализа иммунных реакций. С помощью этого метода, в рамках нашей модели, мы успешно раскрыты важнейших механизмов, вызвали перспектива, следующего поколения бесклеточной коклюшной вакцины. Этот метод может применяться для любой модели инфекционных заболеваний с целью определения эффективности вакцины.

Introduction

Вакцины являются одним из величайших достижений XX века общественного здравоохранения, однако мы до сих пор не полностью понимаем механизмы, которыми успешно вакцины стимулируют защитные иммунитет. Определение молекулярной подписей (например., маркеры активации клеток, расширение клеточных подтипы и шаблонов экспрессией генов) индуцированных после вакцинации предоставляет множество информации для прогнозирования и создании эффективных иммунный ответ. Сложность хост возбудитель ответов не могут быть реплицированы адекватно с использованием в vitro клетки культуры системы¹. В естественных условиях вакцины модели предназ....

Protocol

Все эксперименты с живых животных были проведены после протоколом, утвержденным Огайо государственного университета IACUC IACUC руководящим принципам. Мышей C57Bl/6 использовались во всех прививок и инфекции. Как мужчины, так и женские мышей используются в каждой группе в соответствии с руководящими принципами NIH. Количество животных каждого группы определяется мощность расчеты, основанные на предсказал различия в результатах среди экспериментальных групп. Например, 8 мышей каждой группы дадут 80% мощности при α = 0,05 (2-сторонняя) для 2-Пример t- тест, чтобы обнаружить различия в результатах интерес 1.33 стандартных отклонений (SDs).

Results

Описанная модель показывает метод для оценки эффективности вакцины и иммунные реакции во время взаимодействия хост возбудителя. Рисунок 1 изображает представитель вакцины для иммунизации и заразить мышей и урожай тканей для анализа. Рисунок 2 демонстрирует настройку системы анестезии, занятых побудить мышей, позволяя следователей поставить прививки и бактериальных Инокулянты. Рисунок 3 показывает при.......

Discussion

Всеобъемлющий протокол, описанную здесь, для изучения вакцины индуцированной иммунитет к B. коклюша инфекции также позволит оценки принимающей ответов на целый ряд других патогенов. Протокол рассматриваются методы доставить прививки, определить вакцины эффективность следующих возбудителя вызов и параллельно рассечение иммунной функции. В адаптации протокол для того, чтобы изучить другие патогены, несколько параметров должны быть изменены. Они включают, но не ограничиваются, режим животных анестезии, состав вакци.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Индукционная камера 2 л	Vet Equip	941444
Fluriso	Vet One	V1 501017	подойдет любая марка
Bordet Gengou Agar Base	BD bioscience	248200
Казеин	Sigma	C-7078
Казаминокислоты	VWR	J851-500G	Ситечко Scholte (SS) медиакомпоненты
L-глутаминовая кислота	Исследовательская продукция Int	G36020-500
L-пролин	Исследовательская продукция Int	P50200-500
Хлорид натрия	Fisher	BP358-10
Фосфат калия одноосновной	Fisher	BP362-1
Хлорид калия	Fisher	P217-500
Хлорид магния гексагидрат	Fisher	M2670-500G
Хлорид кальция	Fisher	C75-500
Трис основание	Fisher	BP153-1
L-цистеин HCl	Fisher	BP376-100	SS медиа добавки
Сульфат железа гептагидрат	Sigma	F-7002
Ниацин	Исследовательские продукты Int	N20080-100
Глутатион	Исследовательская продукция Int	G22010-25
Аскорбиновая кислота	Исследовательская продукция Int	A50040-500
RPMI 1640	ThermoFisher Scientific	11875093
FBS	Sigma	F2442-500mL	любой источник в США, неинактивированный при нагревании
гентамицин	ThermoFisher Scientific	15710064
B-меркаптоэтанол	Fisher	BP176-100
15mL тканевая шлифовальная машина	Wheaton	357544	любой аналогичной марки подходит
Аккумуляторный ручной гомогенизатор	Kontes/Sigma	Z359971-1ЕА	любой аналогичной марки подходят
инструменты - ножницы, кривые ножницы, щипцы, тонкие щипцы, треугольные распределители			любой марки подходят
шприцы	3мл BD bioscience	309657
конические трубки 15мл	Fisher
1,5 мл микрофуговые пробирки	Denville	C2170
70 мкм клеточные фильтры	Fisher
60 мм планшеты	ThermoFisher Scientific	130181
48-луночные планшеты для культивирования тканей	ThermoFisher Scientific	08-772-1C
1 мл инсулиновый шприц 28G1/2	Fisher Scientific/Excel Int.	14-841-31
Мышь ИФН-гамма ИФА Ready-SET-Go! Набор	Invitrogen / eBioscience	50-173-21
Мышь IL-17 ELISA Ready-SET-Go! Набор	Invitrogen / eBioscience	50-173-77
Мышь IL-5 ELISA Ready-SET-Go! Набор	Invitrogen / eBioscience	50-172-09