Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Синтез и Bioconjugation тиоловых реактивной реагентов для создания сайта выборочно изменять Immunoconjugates

9.3K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/59063

⸱

6 марта 2019 г.

 ,  ,  , 
1Department of Chemistry, Hunter College of the City University of New York, 2Ph.D. Program in Chemistry, Graduate Center of the City University of New York, 3Department of Radiology, Memorial Sloan Kettering Cancer Center, 4Department of Radiology, Weill Cornell Medical College

В этой статье

Краткое содержание

В этом протоколе мы будем описывать синтез СТРУЧКИ, phenyoxadiazolyl метил на основе сульфона реагент для сайта селективные крепление грузов тиолы биомолекул, особенно антител. Кроме того мы будем описывать синтеза и характеристика бифункциональных хелатором СТРУЧКИ подшипника и его спряжение модель антитела к.

Аннотация

Maleimide подшипник бифункциональных зонды были использованы на протяжении десятилетий для сайта селективные модификации тиолы в биомолекулы, особенно антител. Еще на основе maleimide конъюгатов отображения ограниченное стабильности в естественных условиях, потому что succinimidyl тиоэфиры связь может пройти ретро Майкл реакции. Это, конечно, может привести к выпуска радиоактивных полезных данных или обмена с биомолекулами тиоловых подшипник в обращении. Оба этих процессов может производить повышенной активности концентрации в здоровых органов, а также снижение активности концентрации в тканях-мишенях, обусловило уменьшение контрастность изображений и ниже терапевтические показатели. В 2018 году, мы сообщили создание модульный, стабильный и легко доступны phenyloxadiazolyl метил сульфона реагент — называли «СТРУЧКИ» — как платформы на базе тиоловых bioconjugations. Мы наглядно продемонстрировали, что на основе СТРУЧКИ сайт селективного bioconjugations можно воспроизвести и энергично создать однородную, четко определенных, весьма иммунореактивных и высокостабильных radioimmunoconjugates. Кроме того доклинические эксперименты в мышиных моделях колоректального рака показали, что эти сайт выборочно помечены radioimmunoconjugates выставка намного превосходят в естественных условиях производительности по сравнению с radiolabeled антитела синтезируются через на основе maleimide спряжения. В этом протоколе мы будем описывать четырехступенчатая синтез СТРУЧКИ, создание бифункциональных СТРУЧКИ подшипник вариант вездесущие хелатором DOTA (СТРУЧКИ-DOTA) и спряжение СТРУЧКИ-DOTA к трастузумаб HER2-таргетинг антитела.

Введение

Радиофармацевтические химики давно эксплуатируемых избирательности и специфичность антител для биомаркеров болезни для обеих ядерных изображений и целевых радиотерапии1. Далеко и прочь наиболее общий подход к radiolabeling антител основывается на неизбирательное придание radiolabeled протезно групп или radiometal энтеросорбенты аминокислоты — наиболее часто lysines — в рамках структуры иммуноглобулина ( Рисунок 1A)2. Хотя эта стратегия является безусловно эффективным, его случайные, сайт неспецифический характер может создать проблемы. В частности традиционные bioconjugation подходы производят плохо определены и гетерогенных immunoconjugates состоит из смеси тысяч различных regioisomers, каждый со своим собственным набором биологических и фармакологические свойства3. Кроме того случайных bioconjugation могут препятствовать иммунореактивности антител, если груз добавляется иммуноглобулина антиген связывая доменов.

С годами разнообразные bioconjugation участкам и сайт селективные стратегии были разработаны с целью решения этих проблем4,5. Наиболее распространенные из этих подходов основывается на лигирование maleimide подшипник зондов сульфгидрильных групп, по которым (рис. 1B). IgG1 антитела естественно содержат 4 Интер цепи дисульфидных мостов, связей, которые могут быть выборочно сведены к дают бесплатные тиолы способных претерпевает Майкл реакции с малеинимидов в форме succinimidyl тиоэфиры облигаций. Использование тиолами и малеинимидов, безусловно, улучшение по сравнению с традиционными методами и широкий спектр maleimide подшипник синтонов и бифункциональных хелаторов в настоящее время доступны. Однако важно отметить, что эта методология имеет также серьезные ограничения. На основе Maleimide immunoconjugates выставку ограниченное стабильности в естественных условиях, потому что тиоэфиры связь может пройти ретро Майкл реакции (рис. 2)6,,78,9, 10. это, конечно, может привести к выпуска радиоактивных полезных данных или обмен с биомолекулами тиоловых подшипник в обращении (например, глутатион или альбумина в сыворотке крови). Оба из этих процессов можно увеличения концентрации деятельности в здоровых органов, а также уменьшение концентрации деятельности в тканях-мишенях, обусловило уменьшение контрастность изображений и ниже терапевтические показатели. Были разработаны несколько альтернативных тиоловых реактивной реагентов в попытке обойти эти проблемы, включая tosylates, bromo - и Иодо acetyls и винил сульфонов11,12,13, 14 , 15 , 16 , 17. Однако все эти подходы имеют ограничения, которые препятствуют их широкое применение.

Около пяти лет назад, в лаборатории в конце Карлос Barbas III научно-исследовательском институте Скриппса пионером в использовании phenyloxadiazolyl метил сульфонов как реагенты для селективного формирования высокостабильных связей с тиолами (Рисунок 1 c и рис. 3) 18 , 19. авторы заняты phenyloxadiazolyl метил сульфон подшипник вариант флуоресцеин изменить несколько антител, спроектирован, чтобы содержать остатки свободной цистеина, в конечном счете производства immunoconjugates с более высокой стабильности, чем аналогичные конструкции, созданные с помощью датчиков на основе maleimide. Увидев этой перспективной работы, мы были несколько удивлены тем, что эта технология использовалась только вряд в радиохимии и еще не было вообще используется в синтезе бифункциональных хелаторов или radioimmunoconjugates20,21 . Эта нехватка приложений, однако, вскоре начал делать больше смысла: несколько попыток закупки реагент от Sigma-Aldrich привело к получения сложных смесей продуктов разложения с < 15% нужного соединения. Кроме того, обобщение сообщенных реагент себя был не является реалистичным вариантом либо, как опубликованные синтетических маршрут несколько громоздкой и требует сложных органической химии оборудование, большинство радиохимии и Молекулярное воображение лаборатории — включая ours — просто не обладают.

В ответ на эти препятствия мы намереваемся создать легко доступны и очень стабильной phenyloxadiazolyl метил сульфона реагент, который может быть получен через надежную и разумно снисходительный синтетических маршрут. Ранее в этом году, мы сообщили создание модульный, стабильный и легко доступны phenyloxadiazolyl метил сульфона реагент — называли «СТРУЧКИ» — как платформы на основе тиоловых bioconjugations (Рисунок 1 c и рис. 3)22. Ключевое различие между СТРУЧКИ и реагент сообщил Barbas, et al. является, что бывший использует анилин кольцо, прикрепленное к phenyloxadiazolyl метил сульфона остаток, в то время как последняя имеет фенола в таком же положении (рис. 4). Это изменение облегчает более простой и доступной синтетических маршрутов, а также — если наш опыт с коммерчески доступные соединения является символом — более стабильной окончательный реагент. В этой работе, мы также синтезируется пару СТРУЧКИ подшипник бифункциональных хелаторов — СТРУЧКИ-ДФО и СТРУЧКИ-CHX-A''-DTPA — содействовать созданию 89Zr - и 177Лу меченых radioimmunoconjugates, соответственно. Как мы будем обсуждать, мы продемонстрировали, что на основе СТРУЧКИ сайт селективного bioconjugations можно воспроизвести и энергично создать однородную, четко определенных, весьма иммунореактивных и высокостабильных radioimmunoconjugates. Кроме того доклинические эксперименты в мышиных моделях колоректального рака показали, что эти сайт выборочно помечены radioimmunoconjugates выставку Улучшенный в естественных условиях производительности по сравнению с radiolabeled антитела синтезируются через на основе maleimide спряжения.

Сквозные цель этой работы заключается в содействии созданию четко, однородной, очень стабильный и высоко иммунореактивных immunoconjugates для приложений в vitro и in vivo. Синтетический подход является достаточно простым, чтобы выполняться в почти любой лаборатории, и родитель СТРУЧКИ реагента могут быть изменены с множеством различных энтеросорбенты, флуорофоров или грузов. В этот протокол и сопровождающих видео мы будем описывать простые, четырехступенчатая синтез СТРУЧКИ (рис. 5); Создание СТРУЧКИ подшипник вариант DOTA, широко используемый хелатором для координации 64Cu, 68Ga, 111, 177Лу и 225переменного тока (рис. 6); и bioconjugation СТРУЧКИ-DOTA в модели антитела, трастузумаб HER2-таргетинг IgG1 (рис. 7).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

1. синтез 4-[5-(methylthio)-1,3,4-oxadiazol-2-yl]-aniline (1)

Примечание: Из-за света чувствительность комплекса, держите все реакции в фольги, покрытой судов.

  1. В 10 мл вокруг нижней колбе, растворить 100 мг (0,517 ммоль, эквивалентный 1) 5-(4-aminophenyl)-1,3,4-oxadiazole-2-thiol в 3 мл метанола.
  2. В этот раствор добавить 360 мкл diisopropylethylamine (DIPEA; 2.07 ммоль; 4 эквиваленты; безводный) и малых магнитных перемешать бар. Обложка колбу с резиновой пробкой и перемешать раствор на 10 минут при комнатной температуре.
  3. С помощью шприца стекла 1 мл, засуните отверстие через резиновую пробку и быстро добавить 32 мкл (0,517 ммоль, эквивалентный 1) йодометан в этой смеси. Позвольте смеси реагировать на 45 минут при комнатной температуре.
    Примечание: Из-за потенциального вредного воздействия йодометан, эта реакция должно быть сделано в химической зонта.
  4. Установите водяной бане роторный испаритель до 40 ° C и медленно снижают давление для удаления растворителя позволить белое вещество.
  5. Растворяют твердые в 3 мл этилацетата и мыть по крайней мере три раза с 5 мл раствора карбоната натрия 0,1 М, используя воронку separatory.
    Примечание: Периодически принимать спот тесты водной фазы под УФ-лампы; как только ничего не видно под лампу, вы можете остановить стирок.
  6. Собирать органические фазы в воронку separatory и промойте его водой до тех пор, пока рН водной фазы достигает 6,8-7,0 (с помощью РН бумаги).
  7. Собирать органические фазы и добавлять сульфат магния для удаления любых следов воды.
    Примечание: Сульфат магния следует добавить небольшой шпателем, после чего следует закрученных решение. Если до сих пор видны мелкие частицы сушильного агента, решение сухой. Если нет, добавить небольшое количество сульфата магния, до тех пор, пока можно увидеть тонкодисперсных частиц.
  8. Фильтр смесь с использованием средних стекло фритта или фильтровальной бумаги.
  9. Испарится летучих веществ, используя роторный испаритель, процесс, который должен произвести необходимый продукт как белые иглы.

2. синтез tert-butyl[18-({4-[5-(methylthio)-1,3,4-oxadiazol-2-yl]phenyl}amino)-15,18-dioxo-4,7,10-trioxa-14-azaoctadecyl] карбамат (2)

Примечание: Из-за света чувствительность комплекса, держите все реакции в фольги, покрытой судов.

  1. В 25 мл вокруг нижней колбе, распустить 387 мг (0,92 ммоль, 1.0 эквивалент) NBoc-N′-succinyl-4,7,10-trioxa-1,13-tridecanediamine 10 мл дихлорметаном.
  2. В этот раствор добавить 480 мкл (2.76 ммоль, 3 эквиваленты) DIPEA, 264 мг (1,38 ммоль; 1,5 эквиваленты) N-этил - N′-[3-(диметиламино) пропил] Карбодиимиды гидрохлорид (EDCI) и 200 мг (0.97 ммоль, 1.1 эквиваленты) 1. Уплотнение сосуда с стеклянной пробкой и пусть реакции перемешать в течение 5 дней при комнатной температуре.
    Примечание: Помните Испарения дихлорметаном. Если необходимо, добавьте больше на протяжении недели.
  3. Вымойте смесь в воронку separatory раствором 1 М соляной кислоты (3 x 5 мл).
  4. Собирать органические фазы и продолжать мыть его в воронку separatory, сначала с раствором 1 М Na2CO3 (2 x 5 мл), а затем с водой (3 x 5 мл).
  5. Собирать органические фазы и добавлять сульфат магния для удаления любых следов воды (см. шаг 1.7). Фильтр смесь с использованием средних стекло фритта или фильтровальной бумаги.
  6. Использование роторный испаритель, удалите летучих растворителей при сниженном давлении для позволить беловатого твердых.
  7. Повторно распустить этот твердый в 10 мл этилацетата и осадка продукта через постепенное (например, 2 мл, в то время) Добавление 30 мл циклогексан.
  8. Фильтр решение с фильтровальной бумаги или среднего стекла фритта для получения продукта как белый порошок.

3. синтез tert-butyl[18-({4-[5-(methylsulfonyl)-1,3,4-oxadiazol-2-yl]phenyl}amino)-15,18-dioxo-4,7,10-trioxa-14-azaoctadecyl] карбамат (3)

Примечание: Из-за света чувствительность комплекса, держите все реакции в фольги, покрытой судов.

  1. В 10 мл раунд нижней колбе растворяют 30 мг (0,05 ммоль; 1 эквивалент) 2 в 4 мл дихлорметаном.
  2. Медленно, добавить в эту смесь в 49 мг (0,2 ммоль; 4 эквиваленты) 70% m хлорпербензойной кислоты и охватывают реакционный сосуд с стеклянной пробкой. Перемешайте раствор на ночь при комнатной температуре, в конечном итоге приносит желтая смесь.
  3. Вымойте желтая смесь в воронку separatory, сначала с 0,1 М раствором NaOH (3 x 5 мл), а затем с водой (3 x 5 мл).
  4. Сухие органические фазы с магния сульфатом и фильтровать смесь с использованием средних стекло фритта или фильтровальная бумага.
  5. Использование роторный испаритель, удалите растворителей при сниженном давлении для получения продукта как бледные тела.

4. синтез N1-(3-{2-[2-(3-aminopropoxy)ethoxy]-ethoxy}propyl)-N4- сукцинимидные {4-[5-(methylsulfonyl)-1,3,4-oxadiazol-2-yl] фенил} (бобы)

  1. В 25 мл вокруг нижней колбе, растворяют 30 мг 3 2.0 мл дихлорметаном.
  2. Добавить 400 мкл trifluoroacetic кислоты и печатью колбу с стеклянной пробкой.
  3. Перемешайте смесь реакции при комнатной температуре на 3 часа.
  4. Использование роторный испаритель, удалите летучих веществ при пониженном давлении при комнатной температуре, оставляя жирных следов.
  5. Распустить маслянистый остаток 7 мл воды и, используя воронку separatory, мыть с этилацетат (3 x 4 мл). Держите водный слой.
  6. Lyophilize водный слой, чтобы позволить СТРУЧКИ как белый порошок.
    Примечание: Коэффициенты молярной абсорбции для СТРУЧКИ на 280 и 298 Нм составляет 9900 и 12400 см-1M-правовая-1, соответственно.

5. синтез СТРУЧКИ-DOTA

  1. В пробки microcentrifuge 1,5 мл растворяют 10 мг СТРУЧКИ в 300 мкл диметилсульфоксида (0,018 ммоль; 1 эквивалент) и добавить 26 мкл n, N-diisopropylethylamine (0,15 ммоль; 8 эквиваленты).
  2. Распустить 15.2 мг в 100 мкл диметилсульфоксид DOTA-Bn-НК (0.02 ммоль; 1,2 эквиваленты) и объединить это решение с решением от шаг 5.1. Уплотнение пробки microcentrifuge.
  3. Разрешить реакция инкубировать на ночь при комнатной температуре.
  4. Очищайте продукт с помощью реверс фаза C18 хроматография ВЭЖХ для удаления любых непрореагировавшего DOTA-Bn-NCS.
    Примечание: Время удержания зависят очевидно оборудование ВЭЖХ каждой лаборатории (насосы, колонки, трубы и т.д.), и соответствующие элементы управления должны выполняться до очистки. Однако представить пример, если градиент 5: 95 MeCN/H2O (оба с 0.1% TFA) до 70: 30 MeCN/H2O (оба с 0.1% TFA) используются более 30 минут, полу препаративные 19 x 250 мм C18 столбец и скорость потока 6 мл/мин , СТРУЧКИ, p-СКС-Bn-DOTA и СТРУЧКИ-DOTA будут иметь время удержания вокруг 14.4, 18.8 и 19.6 мин, соответственно. Все три соединения могут контролироваться в 254 Нм.

6 bioconjugation СТРУЧКИ-DOTA в трастузумаб

Примечание: Этот шаг, мы начали с фондовых раствором трастузумаб 16.4 мг/мл.

  1. В трубке microcentrifuge 1,5 мл привязки низкое содержание белка разбавляют 61 мкл трастузумаб Стоковый раствор (1 мг; 6.67 нмоль, эквивалентный 1) с 859 мкл-фосфатный буфер (рН 7,4).
  2. К этой смеси добавьте 6.7 мкл свежеприготовленные 10 мм раствора TCEP в H2O (66,7 нмоль, 10 эквиваленты).
  3. Подготовить раствор 1 мг/мл СТРУЧКИ-DOTA в ДМСО и добавить 73 мкл раствора этой СТРУЧКИ-DOTA в реакционной смеси (66.67 нмоль, 10 эквиваленты).
  4. Уплотнение пробки microcentrifuge и инкубировать и решение для 2 часа при комнатной температуре.
  5. После 2 часов очищайте immunoconjugate, с использованием предварительно упакованные одноразовые размер исключения опреснительной столбца.
    1. Во-первых сбалансировать размер исключение столбцов, как описано поставщиком для удаления консервантов в столбце во время хранения. Типичная процедура включает в себя мытье столбце 5 раз с объемом PBS, что соответствует объему столбца: 5 x 2,5 мл ФСБ.
    2. Затем добавьте смесь реакции в столбце Размер исключения, отмечая объем реакционной смеси.
    3. После того, как реакционную смесь вступил столбца, добавьте соответствующее количество PBS довести общий объем раствора добавляется в столбец до 2,5 мл. Например если спряжение реакция привела к общим объемом 1,3 мл, 1,2 мл дополнительных PBS будет нужно быть добавлены к столбцу.
    4. Наконец собирайте продукта с помощью 2 мл PBS как элюента.
  6. Концентрат окончательный immunoconjugate с центробежной фильтрации единиц с 50 kDa молекулярный вес отсечения.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Первые четыре шага этого протокола — синтез СТРУЧКИ — были разработаны для быть прочным и надежным. Deprotonation и замена 5-(4-aminophenyl)-1,3,4-oxadiazole-2-thiol сформировать желаемый тиоэфиры продукта дает тиоэфиры в > 99% доходности после всего за 45 минут. Далее перевязка между 1 и N-Boc-N'-succinyl-4,7,10-trioxa-1,13-tridecanediamine было достигнуто через стандартный пептид муфты процедуры, что приводит к коллекции продукта (2) в 55% доходности...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

В настоящем докладе мы решили не включать любые протоколы для radiolabeling или в естественных условиях экспериментов. Причины просты. Что касается первого, radiolabeling на основе СТРУЧКИ immunoconjugate не отличается от того из immunoconjugate, синтезируются с помощью других bioconjugation стратегии, и эти процедуры были всесторонне рассмотрены в других странах2 . Что касается последнего специфика доклинических в экспериментах in vivo (то есть, мыши модели, дозы и т.д.) могут широко варьироватьс...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы не имеют ничего сообщать.

Благодарности

Авторы благодарят доктор Sai Kiran Шарма за полезные беседы.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
5-(4-аминофенил)-1,3,4-оксадиазол-2-тиолSigma-Aldrich675024
1,5 мл LoBind Микроцентробежная пробиркаEppendorf925000090
1,5 мл Микроцентробежная пробиркаFisherbrand05-408-129
АцетонитрилFisher ScientificA998-4
Amicon Ultra-2 Центробежный фильтрующий блокEMD Millipore
ЦиклогексанFisher ScientificC556-4
ДихлорметанFisher ScientificAC383780010
ДиизопропилэтиламинMP Biomedicals, LLC150915
ДиметилсульфоксидFisher Scientific31-727-5100ML
этилацетатFisher ScientificE145 4
Соляная кислотаFisher ScientificA144-500
ЙодометанSigma-Aldrich289566-100G
Сульфат магнияAcros Organics413485000
м-хлорпербензойная кислотаSigma-Aldrich273031
метанолFisher ScientificA412 1
NBoc-N′- сукцинил-4,7,10-триокса-1,13-тридекандиаминСигма-Олдрич671401хранить при -80 °°С; C
N-этил-N′- [3- (диметиламино)пропил] карбодиимида гидрохлоридSigma-Aldrich3450
фосфат буферизованный физиологический растворSigma-AldrichP5493 10× Концентрация
p-SCN-Bn-DOTAMacrocyclicsB-205хранить при -80 ° C
Sephadex G-25 в обессоливающих колоннах PD-10GE Healthcare17085101
карбонат натрияSigma-AldrichS7795
гидроксид натрияFisher ScientificS318-1
TCEPThermoFischer Scientific20490
ТриэтиламинFisher ScientificAC157911000
Трифторуксусная кислотаFisher ScientificA116-50
EN300000141G

Ссылки

  1. Wu, A. M. Antibodies and antimatter: The resurgence of immuno-PET. Journal of Nuclear Medicine. 50 (1), 2-5 (2009).
  2. Zeglis, B. M., Lewis, J. S. A practical guide to the construction of radiometallated bioconjugates for positron emission tomography. Dalton Transactions. 40 (23), 6168-6195 (2011).
  3. Agarwal, P., Bertozzi, C. R. Site-specific antibody-drug conjugates: the nexus of bioorthogonal chemistry, protein engineering, and drug development. Bioconjugate Chemistry. 26 (2), 176-192 (2015).
  4. Adumeau, P., Sharma, S. K., Brent, C., Zeglis, B. M. Site-specifically labeled immunoconjugates for molecular imaging-part 1: Cysteine residues and glycans. Molecular Imaging and Biology. 18 (1), 1-17 (2016).
  5. Adumeau, P., Sharma, S. K., Brent, C., Zeglis, B. M. Site-specifically labeled immunoconjugates for molecular imaging-part 2: Peptide tags and unnatural amino acids. Molecular Imaging and Biology. 18 (1), 153-165 (2016).
  6. Alley, S. C., et al. Contribution of linker stability to the activities of anticancer immunoconjugates. Bioconjugate Chemistry. 19 (3), 759-765 (2008).
  7. Baldwin, A. D., Kiick, K. L. Tunable degradation of maleimide-thiol adducts in reducing environments. Bioconjugate Chemistry. 22 (10), 1946-1953 (2011).
  8. Shen, B. -Q., et al. Conjugation site modulates the in vivo stability and therapeutic activity of antibody-drug conjugates. Nature Biotechnology. 30 (2), 184-189 (2012).
  9. Jackson, D., et al. In vitro and in vivo evaluation of cysteine and site specific conjugated herceptin antibody-drug conjugates. Plos One. 9 (1), (2014).
  10. Ponte, J. F., et al. Understanding how the stability of the thiol-maleimide linkage impacts the pharmacokinetics of lysine-linked antibody-maytansinoid conjugates. Bioconjugate Chemistry. 27 (7), 1588-1598 (2016).
  11. Stimmel, J. B., et al. Site-specific conjugation on serine -> cysteine variant monoclonal antibodies. Journal of Biological Chemistry. 275 (39), 30445-30450 (2000).
  12. Li, L., et al. Reduction of kidney uptake in radiometal labeled peptide linkers conjugated to recombinant antibody fragments. site-specific conjugation of DOTA-peptides to a cys-diabody. Bioconjugate Chemistry. 13 (5), 985-995 (2002).
  13. Li, J., Wang, X. H., Wang, X. M., Chen, Z. L. Site-specific conjugation of bifunctional chelator BAT to mouse IgG(1) Fab' fragment. Acta Pharmacologica Sinica. 27 (2), 237-241 (2006).
  14. Tinianow, J. N., et al. Site-specifically Zr-89-labeled monoclonal antibodies for ImmunoPET. Nuclear Medicine and Biology. 37 (3), 289-297 (2010).
  15. Li, L., et al. Site-specific conjugation of monodispersed DOTA-PEGn to a thiolated diabody reveals the effect of increasing PEG size on kidney clearance and tumor uptake with improved 64-copper PET imaging. Bioconjugate Chemistry. 22 (4), 709-716 (2011).
  16. Khalili, H., Godwin, A., Choi, J. -w, Lever, R., Brocchini, S. Comparative binding of disulfide-bridged PEG-Fabs. Bioconjugate Chemistry. 23 (11), 2262-2277 (2012).
  17. Koniev, O., Wagner, A. Developments and recent advancements in the field of endogenous amino acid selective bond forming reactions for bioconjugation. Chemical Society Reviews. 44 (15), 5495-5551 (2015).
  18. Patterson, J. T., Asano, S., Li, X., Rader, C., Barbas, C. F. Improving the serum stability of site-specific antibody conjugates with sulfone linkers. Bioconjugate Chemistry. 25 (8), 1402-1407 (2014).
  19. Toda, N., Asano, S., Barbas, C. F. III Rapid, stable, chemoselective labeling of thiols with Julia-Kocienski-like reagents: A serum-stable alternative to maleimide-based protein conjugation. Angewandte Chemie-International Edition. 52 (48), 12592-12596 (2013).
  20. Zhang, Q., et al. Last-step enzymatic F-18-fluorination of cysteine-tethered RGD peptides using modified Barbas linkers. Chemistry-a European Journal. 22 (31), 10998-11004 (2016).
  21. Chiotellis, A., et al. Novel chemoselective F-18-radiolabeling of thiol-containing biomolecules under mild aqueous conditions. Chemical Communications. 52 (36), 6083-6086 (2016).
  22. Adumeau, P., Davydova, M., Zeglis, B. M. Thiol-reactive bifunctional chelators for the creation of site-selectively modified radioimmunoconjugates with improved stability. Bioconjugate Chemistry. 29, 1364-1372 (2018).
  23. Sakamoto, J., Kojima, H., Kato, J., Hamashima, H., Suzuki, H. Organ-specific expression of the intestinal epithelium-related antigen A33, a cell surface target for antibody-based imaging and treatment in gastrointestinal cancer. Cancer Chemotherapy and Pharmacology. 46, S27-S32 (2000).
  24. Sakamoto, J., et al. A phase I radioimmunolocalization trial of humanized monoclonal antibody huA33 in patients with gastric carcinoma. Cancer Science. 97 (11), 1248-1254 (2006).
  25. Junutula, J. R., et al. Site-specific conjugation of a cytotoxic drug to an antibody improves the therapeutic index. Nature Biotechnology. 26 (8), 925-932 (2008).
  26. Pillow, T. H., et al. Site-specific trastuzumab maytansinoid antibody-drug conjugates with improved therapeutic activity through linker and antibody engineering. Journal of Medicinal Chemistry. 57 (19), 7890-7899 (2014).
  27. Boswell, C. A., et al. Enhanced tumor retention of a radiohalogen label for site-specific modification of antibodies. Journal of Medicinal Chemistry. 56 (23), 9418-9426 (2013).
  28. Boswell, C. A., et al. Impact of drug conjugation on pharmacokinetics and tissue distribution of anti-STEAP1 antibody-drug conjugates in rats. Bioconjugate Chemistry. 22 (10), 1994-2004 (2011).
  29. Alvarez, V. L., et al. Site-specifically modified 111In labelled antibodies give low liver backgrounds and improved radioimmunoscintigraphy. Nuclear Medicine and Biology. 13 (4), 347-352 (1986).
  30. Strop, P., et al. Location matters: SIte of conjugation modulates stability and pharmacokinetics of antibody drug conjugates. Chemistry, Biology. 20 (2), 161-167 (2013).
  31. Hallam, T. J., Wold, E., Wahl, A., Smider, V. V. Antibody conjugates with unnatural amino acids. Molecular Pharmaceutics. 12 (6), 1848-1862 (2015).
  32. Axup, J. Y., et al. Synthesis of site-specific antibody-drug conjugates using unnatural amino acids. Proceedings of the National Academy of Sciences. 109 (40), 16101-16106 (2012).
  33. Lang, K., Chin, J. W. Cellular incorporation of unnatural amino acids and bioorthogonal labeling of proteins. Chemical Reviews. 114 (9), 4764-4806 (2014).
  34. Yamasaki, R. B., Osuga, D. T., Feeney, R. E. Periodate oxidation of methionine in proteines. Analytical Biochemistry. 126 (1), 183-189 (1982).
  35. Wang, W., et al. Impact of methionine oxidation in human IgG1 Fc on serum half-life of monoclonal antibodies. Molecular Immunology. 48 (6-7), 860-866 (2011).
  36. O'Shannessy, D. J., Dobersen, M. J., Quarles, R. H. A novel procedure for labeling immunoglobulins by conjugation to oligosaccharide moieties. Immunology Letters. 8 (5), 273-277 (1984).
  37. Panowski, S., Bhakta, S., Raab, H., Polakis, P., Junutula, J. R. Site-specific antibody drug conjugates for cancer therapy. Mabs. 6 (1), 34-45 (2014).
  38. Hu, M. D., et al. Site-specific conjugation of HIV-1 tat peptides to IgG: a potential route to construct radioimmunoconjugates for targeting intracellular and nuclear epitopes in cancer. European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 33 (3), 301-310 (2006).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

PODSDOTAHER2
Синтез и Bioconjugation тиоловых реактивной реагентов для создания сайта выборочно изменять Immunoconjugates
Свяжитесь с нами
Рекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

Авторские права © 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.