Method Article

Метод микроэлектрода Impalement для записи Мембраны Потенциал из канналедированной средней мозговой артерии

DOI:

10.3791/59072

⸱

July 2nd, 2019

 ,  , 
1Department of Pharmacology and Toxicology, University of Mississippi Medical Center

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Основная цель этой статьи заключается в предоставлении подробной информации о том, как записывать мембранный потенциал (Vм) из средней мозговой артерии с помощью метода микроэлектрода impalement. Каннулированная средняя мозговая артерия уравновешивают, чтобы получить миогенный тон, и стенка сосуда пронзили с помощью микроэлектродов высокого сопротивления.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мембранныйпотенциал (V м) сосудистых гладких мышечных клеток определяет тонус сосудов и, таким образом, приток крови к органу. Изменения в экспрессии и функции ионных каналов и электрогенных насосов, которые регулируют Vм в условиях заболевания потенциально может изменить Vм,сосудистый тон, и кровоток. Таким образом, необходимо базовое понимание электрофизиологии и методов, необходимых для точной записи Vм в здоровых и больных состояниях. Этот метод позволит модулировать Vm с помощью различных фармакологических агентов для восстановления Vм. Хотя Есть несколько методов, каждый со своими преимуществами и недостатками, эта статья предоставляет протоколы для записи Vм из каннуляющих сосудов сопротивления, таких как средняя мозговая артерия с помощью метода микроэлектродов impalement. Средние мозговые артерии могут получить миогенный тон в миографической камере, а стенка сосуда пронзили с помощью микроэлектродов высокого сопротивления. Сигнал Vm собирается с помощью электрометра, оцифровывается и анализируется. Этот метод обеспечивает точное считывание Vм стенки сосуда, не повреждая клетки и не изменяя мембранное сопротивление.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мембранный потенциал (Vм) клетки относится к относительной разнице ионного заряда по плазменной мембране и относительной проницаемости мембраны к этим ионам. Vm генерируется дифференциальным распределением ионов и поддерживается ионными каналами и насосами. Ионные каналы, такие как Kq, Na,и Clй внести существенный вклад в отдых Vм. Сосудистые гладкие мышечные клетки (VSMCs) выражают более четырех различных типов Каналов Kи 1, два типа напряжения-gated Ca2 "каналов (VGCC)2, более двух типов Cl- каналы3

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Самцы крыс были размещены в центре по уходу за животными в УГМК, который одобрен Ассоциацией по оценке и аккредитации лабораторного ухода за животными (AAALAC). На протяжении всего исследования животные имели свободный доступ к пище и воде. Звери содержались в контролируемой среде с температурой 24 х 2 градусов по Цельсию, уровень влажности 60-80% и 12 ч светлых/темных циклов. Все протоколы были утверждены Комитетом по уходу за животными и использованию УГМК.

1. Подготовка оборудования

  1. Поместите двойной дифференциальный электрометр(см. ТаблицуМатериалов) близко к камере судна и в нужном месте.
  2. Подключите....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Представленный метод можно надежно использовать для записи Vм в каниulated сосудах. Краткая процедура, описывающая, как изолировать MCA от мозга представлена на рисунке 1A. После отделения мозга от черепа, MCA был расчленен и помещен в чашку Петри, содержащую низкий уровень содержания кальция PSS. Часть соединительной ткани, которая была прикреплена была также расчленена вместе с MCA с помощью пружинных ножниц и щипцы, чтобы предотвратить поврежден.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эта статья предоставляет необходимые шаги о том, как использовать острый метод микроэлектрода impalement для записи Vм от консервированной подготовки судна. Этот метод широко используется и предлагает высококачественные, последовательные записи Vm, которые отвечают на широкий спектр экспериментальных вопросов.

Некоторые критические соображения и шаги по устранению неполадок описаны здесь, чтобы обеспечить успех метода. Качество микроэлектрода (его резкость и устойчивость).......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторам нечего раскрывать.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эта работа была частично поддержана грантами от программы интрамуральной поддержки (IRSP) от УГМК, Грантом развития ученых AHA (13SDG14000006), присужденными Малликарджуне Р. Паббиди.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Dissection Instruments
Диссекционный микроскопNikon Instruments Inc., NYEclipse Ti-S
Kleine Guillotine Type 7575Harvard Apparatus, MA73-198
Littauer Bone CutterFine science tools16152-15
Moria MC40 Ультратонкие щипцыИнструменты для тонкой науки11370-40
Хирургические ножницы Острый-тупойИнструменты для тонкой науки14008-14
ШовГарвардский аппарат72-3287
Пружинные ножницы VannasИнструменты для тонкой науки15018-10
Инструменты для электрофизиологии
Устройство с зарядовой связью камерыQimaging, , BCRetiga 2000R
Дифференциальный электрометр усилительWPIFD223A
Встроенный преобразователь давленияHarvard Apparatus, MAMA1 72-4496
МикроманипуляторThor labsPCS-5400
МикроэлектродыWarner Instruments LLC, CTG200-6,
Micro Fil (шприц из микрофибры)WPIMF28G67-5
Держатель микроэлектродовWPIMEH1SF
Миограф для живых систем Контрольно-измерительные приборы, VTCH-1-SH
PullerSutter Instrument, Сан-Рафаэль, КалифорнияP-97
Стол без вибрацииTMC3435-14
< strong>Softwares
Clampex 10Молекулярные устройства
p Clamp 10Молекулярные устройства
Программное обеспечение для визуализацииNikon, NYNIS-элементы
Chemicals
NaClSigmaS7653
KClSigmaP4504
MgSO4SigmaM7506
CaCl2 SigmaC3881
HEPESSigmaH7006
GlucoseSigmaG7021
2PO4SigmaS0751
NaHCO3SigmaS5761
Aneshetic Vaporiser Parkland Научный V3000PK

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Nelson, M. T., Quayle, J. M. Physiological roles and properties of potassium channels in arterial smooth muscle. American Journal of Physiology. 268, C799-C822 (1995).
  2. Hughes, A. D. Calcium channels in vascular smooth muscle cells. Journal of Va....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Membrane PotentialMicroelectrode ImpalementMiddle Cerebral ArteryVascular Smooth MuscleElectrophysiology RecordingMyograph ChamberBorosilicate MicroelectrodesPotassium Chloride FillingElectrometer AmplifierCannulated Vessel Preparation

Related Articles