Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Подготовка Гушукан (GSK) Гранулы для In Vivo и In Vitro Эксперименты

7K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/59171

⸱

9 мая 2019 г.

 ,  ,  ,  ,  , 
1Longhua Hospital, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, 2Spine Institute, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, 3Key Laboratory of Theory and Therapy of Muscles and Bones, Ministry of Education, 4School of Rehabilitation Science, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine

В этой статье

Краткое содержание

В этой статье содержится подробный протокол для подготовки рабочего решения гранул Гущукана для исследований на животных и гранул ГСК, содержащих сыворотку для экспериментов in vitro. Этот протокол может быть применен к фармакологическим исследованиям травяных лекарств, а также рецепты как для in vivo, так и для экспериментов in vitro.

Аннотация

Традиционная китайская травяная медицина играет роль альтернативного метода в лечении многих заболеваний, таких как постменопаузальный остеопороз (POP). Gushukang (GSK) гранулы, на рынке рецепт в Китае, имеют кости защитные эффекты в лечении Pop. Перед введением в организм, одна стандартная процедура подготовки обычно требуется, которая направлена на содействие освобождению активных компонентов из сырых трав и повышения фармакологических эффектов, а также терапевтических результатов. Это исследование предлагает подробный протокол для использования GSK гранулы в in vivo и in vitro экспериментальных анализов. Сначала авторы предоставляют подробный протокол для расчета соответствующих животным доз гранул для исследования in vivo: взвешивания, растворения, хранения и администрирования. Во-вторых, в этой статье описаны протоколы микро-КТ сканирования и измерения параметров костей. Была проведена оценка подготовки образцов, протоколов работы микроКТ-машины и количественной оценки параметров костей. В-третьих, готовятся гранулы ГСК, содержащие сыворотку, а наркосодержащая сыворотка добываема для экстракорпорированного остеокластогенеза и остеобластогенеза. Гранулы ГСК вводили два раза в день крысам в течение трех дней подряд. Затем кровь собирали, центрифугировали, инактивировали и отфильтровывали. Наконец, сыворотка была разбавлена и используется для выполнения остеокластогенеза и остеобластогенеза. Описанный здесь протокол можно считать эталоном фармакологических исследований фитотравных рецептурных препаратов, таких как гранулы.

Введение

Традиционная китайская медицина (ТКМ) является одним из важных дополнительных и альтернативных подходов к лечению остеопороза1,2. Отвар воды является основной и наиболеечасто используемой формой формулы 3. Однако есть и недостатки: плохой вкус, неудобства для перевозки, короткий срок годности и непоследовательные протоколы, ограничивающие использование, а также лечебные эффекты. Чтобы избежать вышеуказанных недостатков, а также проводить лучшие эффекты, гранулы были разработаны и широко используются4. Хотя многие исследования исследовали фармакологические механизмы одного или более эффективных компонентов из гранул5,6,7, точные механизмы и основные фармакологические процессы по-прежнему трудно определить. Это потому, что слишком много эффективных компонентов из одного гранулы могут одновременно оказывать аналогичные или противоположные эффекты4. Таким образом, разработка одного стандартного протокола для подготовки гранул перед доставкой в организм не только будет иметь большое влияние на терапевтические результаты, но также требуется как для in vivo и in vitro анализы.

Кроме того, лечебные эффекты гранул в клинике трудно подтвердить и точно определить с помощью in vitro или ex vivo исследований, что создает проблему, потому что фармакологические механизмы являются слишком сложными. Для решения этой проблемы, препарат-содержащей сыворотки был впервые предложен Ташино в 1980-х8. С тех пор, многочисленные исследователи применяются препарат-содержащей сыворотки для фитотерапии, в том числе гранулы9,10,11. В настоящее время выбор сыворотки, содержащей наркотики, для исследования in vitro рассматривается как одна из стратегий, которая тесно имитирует физиологические условия.

Гранулы Гушуканга (ГСК) были разработаны для лечения постменопаузального остеопороза (POP) на основе клинической практики в свете теории ТКМ. Гранулы GSK предотвращают потерю костной массы у озвиэктомизированных (OVX) мышей in vivo, подавляют остеокластическую резорбцию костей и стимулируют остеобластическое формирование костей4. Следовательно, Li et al.12 обнаружили, что гранулы GSK обладают костными защитными эффектами у мышей OVX, повышая активность рецепторов кальция для стимуляции формирования костей. Для подтверждения костно-защитного эффекта, а также фармакологических эффектов гранул ГСК авторы здесь предоставляют детальную процедуру подготовки рабочих растворов и препарата (GSK granule)-содержащей сыворотки. Кроме того, в этой статье описывается применение гранул ГСК в модели остеопоротической мыши OVX и Гранул-содержащей GSK сыворотке для экстракорпорированного остеокластогенеза/остеобластогенеза.

Гранулы GSK состоят из нескольких трав13,14 и могут быть полностью растворены в сольном легко. Таким образом, солин служит в качестве транспортного средства. Шам-управляемых мышей (Шам) и OVX мышей вводили такой же объем сольника, как гранулы управляемых мышей. Эквивалентные дозы гранул ГСК для мыши были рассчитаны на основе уравнения Meeh-Rubner15. Это уравнение не только имеет преимущество получения безопасных дозах, но и гарантирует фармакологические эффекты15. Три дозы гранул ГСК были созданы следующим образом: (1) GSKL: OVX - низкодозированные гранулы ГСК, 2 г/кг/день. (2) GSKM: OVX - среднедозные гранулы ГСК, 4 г/кг/день. (3) ГСКХ: OVX - высокодозные гранулы ГСК, 8 г/кг/день. Мыши в группах GSKL, GSKM и GSKH интрагастрически вводили гранулы ГСК. Карбонат кальция (600 мг/таблетка) с витамином D3 (125 международных единиц/таблетка), например, в зрелом и продаваемый продукт (например, кальтрат «CAL» для лечения и профилактики остеопороза, был использован в качестве положительного контроля.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все экспериментальные процедуры были выполнены с одобрения Институционального комитета по уходу и использованию животных Шанхайского университета ТКМ (SY2016040005).

1. Подготовка и администрирование рабочего решения ГСК

  1. Рассчитайте эквивалентные дозы гранул GSK для мыши.
    1. Рассчитайте поверхность тела на основе уравнения Meeh-Rubner15: поверхность тела К х (вес тела2/3)/1000, где значения K 10,6 для человека и 9,1 для мыши. Предполагая, что вес человеческого тела 70 кг, то поверхность человеческого тела (м2) 10,6 х (702/3)/1000 1,8 м2. Предполагая, что вес тела мыши 20 г (0,02 кг; например, 1 месяц, женщина, C57/BL6), затем поверхность тела мыши (м2) 9,1 х (0,022/3)/1000 й 0,0067 м2.
    2. На основе расчетной поверхности тела вычислите коэффициент преобразования тела для человека и мыши. Человек: 70 кг/1,8 м2 и 39. Мышь: 0,02 кг/0,0067 м2 и 3. Гранулы ГСК 20 г/70 кг х 39/3 х 3,72 г/кг 4 г/кг.
    3. Основываясь на массе тела 20 г на мышь, вычислите эквивалентную дозировку для мыши: 4 г/кг х 0,02 кг и 0,08 г.
    4. Рассчитайте три эквивалентные дозы гранул ГСК на основе 20 мышей на группу и вмешательство продолжительностью 3 месяца (90 дней): (1) GSKL (OVX ) низкодозированные гранулы ГСК (2 г/кг/день): 0,04 г мыши/день х 20 мышей х 90 дней день): 0,08 г мыши/день х 20 мышей х 90 дней, 144 г. (3) ГСК (OVX - высокодозные гранулы ГСК, 8 г/кг/день): 0,12 г мыши/день х 20 мышей х 90 дней
      ПРИМЕЧАНИЕ: Подготовьте дополнительные 20% гранул ГСК на практике, чтобы компенсировать потери.
  2. Рассчитайте объем гранул ЫГК на мышь на основе массы тела15:например, объем (V) 0,24 мл/мышь/день.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Объем внутрижелудочного администрирования для мыши составляет 0,12 мл/10 г.
  3. Взвесить 10-дневные суммы трех доз гранул ГСК. Взвешивание 8 г, 16 г и 24 г гранул ГСК и служить в качестве GSKL, GSKM и GSKH, соответственно.
  4. Рассчитайте эквивалентную дозу карбоната кальция с витамином D3 (CAL) для мыши на основе уравнения Meeh-Rubner15, как в шагах 1.1.1 и 1.1.2: Дозировка CAL 2 таблетки/70 кг х 39/3 и 0.372 таблетки/кг 0.4 таблетки/кг.
  5. На основе массы тела 20 г на мышь (например, 1 месяц, женщины, C57/BL6), вычислить эквивалентную дозировку CAL для мыши: 0,4 таблетки/кг х 0,02 кг и 0,008 таблетки. Затем вычислите эквивалентную дозу CAL на основе 20 мышей на группу и вмешательства продолжительностью 3 месяца (90 дней): 0,008 таблетки х 20 х 90 и 14,4 таблетки. Взвесить 10-дневный стоимость CAL (1,6 таблетки).
  6. Растворения
    1. Поместите 8 г гранул ГСК в трубку 50 мл. Добавьте 48 мл сольяила и встряхните трубку, чтобы полностью раствориться.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Стандартом для полного растворения является отсутствие отложений. Полное роспуск может быть дополнительно подтверждено, если gavage игла может составить рабочий раствор, а затем изгнать его плавно.
    2. Повторите шаг 1.5.1 с 16 г и 24 г гранул ГСК.
    3. Поместите 1,6 таблетки (стоимость 10 дней) CAL в трубку 50 мл. Добавьте 48 мл сольяила и встряхните трубку, чтобы полностью раствориться.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Рабочие решения могут храниться при -4 градусов и готовиться каждые 10 дней.
  7. Интрагастрическое администрирование
    1. Возьмитесь за задней части мыши (1 месяц, женщина, C57/BL6) с мышью вперед и убедитесь, что она остается твердо в этом положении. Держите мышь спокойной в течение 2'3 минут до администрации.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Убедитесь, что исследователь может четко видеть переднюю часть мыши. Носите перчатки, чтобы предотвратить укусы мышей, особенно для новых исследователей.
    2. Поместите иглу гаважа (размер: #12, 40 мм) в рабочий раствор гранул GSK и нарисуйте 0,24 мл рабочего раствора.
    3. Положите gavage иглы в мышь через одну сторону рта, пока gavage иглы достигает желудка.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Для подтверждения gavage игла достигла желудка: (1) Gavage игла сталкивается с чувством сопротивления. Между тем, мышь показывает действие глотания до gavage игла проходит физическое сужение пищевода. (2) Введите около 0,5 мл рабочего раствора в мышь и подождите 1 минуту. Если нет раствора выходит из мыши, это означает, что gavage игла достигла желудка.
    4. Введите рабочий раствор гранулы ГСК (0,24 мл/мышь) в желудок, а затем вытяните иглу гаваге. Верните мышь в клетку.
    5. Повторите шаг 1.6.4 с раствором CAL и введите 0,24 мл раствора CAL на мышь.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Объем решения CAL рассчитывается как шаг 1.2.

2. Микро-КТ сканирование

  1. T Ибия уборка и подготовка
    1. Интраперитонетически анестезирует мышь 300 мл/100 г 80 мг/кг кетамина на следующий день после 90-дневного вмешательства. Используйте щепотку иглы ног, чтобы подтвердить, является ли мышь полностью обезглавлина. Отсутствие ответа не указывает на успешную анестезию. Затем убить мышь с вывихом шейки матки.
    2. Закрепите мышь руками и ногами на пене с галсами.
    3. Отрежьте кожу ножницами (размер: 8,5 см) и пинцетом (размер: 10 см) ног от проксимальной до дистального конца, а затем собирайте tibias.
    4. Сразу же положить тибии в 70% этилового спирта и вымыть в течение 3 раз.
  2. Оберните левую голени мыши губкой пеной и положите ее в пробную трубку (диаметр 35 мм, длина 140 мм).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Длинная ось образца должна быть вместе с осязаевой трубкой образца. Убедитесь, что проксимальный конец голени указывает вверх.
  3. Запуск скан-машины micro-CT 80
    1. Запустите скан-машину микро-CT 80 при комнатной температуре.
    2. Установите образец трубки в микро-CT 80 и начните сканирование поперечного сечения со следующими параметрами сканирования: размер пикселя 15,6 мкм, напряжение трубки 55 кВ, ток трубки 72 мз, время интеграции 200 мс, пространственное разрешение 15,6 мкм, разрешение пикселей 15,6 мкм и матрица изображения 2048 x 2048.
      ПРИМЕЧАНИЕ: отверждающая кость отличается от корковой кости путем предварительного сканирования. Область сканирования голени определяется как отвертки костной области от 5 мм ниже косой плато до дистального конца.
  4. Количественная оценка параметра кости
    1. После завершения сканирования поперечного сечения, получить изображения левой тибиас.
    2. Установите порог плотности до 245–1000. Используйте программу оценки микро-КТ V6.6 для измерения следующих параметров кости: плотность костного минерала (BMD), объем костной ткани над общим объемом (BV/TV), трабекулярный номер кости (Tb.N), трабекулярная толщина костей (Tb.Th), а также разделение костной трабекулярной кости ( Tb.Sp).

3. Подготовка сыворотки крови для экспериментов in vitro

  1. Расчет
    1. На основе крысиного тела вес 0,2 кг (1 месяц, женщина, Sprague-Dawley), рассчитать дозировку ГСК гранулы: человеческая дозировка / день х вес тела человека х К / вес тела крысы 20 г / 70 кг / день х 70 кг х K (K 0,018) / 0,2 кг 2 г/ кг/ кг.
      ПРИМЕЧАНИЕ: K является фармакологическим коэффициентом трансформации между человеком и мышью15 (K no 0.018).
    2. Повторите шаг 3.1.1 и вычислите следующие дозы.
      1. Рассчитайте дозировку GSKL: 10 г/70 кг/день х 70 кг x K/0.2 кг 1 г/кг/день.
      2. Рассчитайте дозировку GSKM: 20 г/70 кг/день х 70 кг x K/0.2 кг 2 г/кг/день.
      3. Рассчитайте дозировку GSKL: 40 г/70 кг/день х 70 кг x K/0.2 кг 4 г/кг/день.
      4. Рассчитайте дозировку CAL: 2 таблетки /70 кг/день х 70 кг x K/0.2 кг и 0,2 таблетки/кг/день.
    3. Рассчитайте общую дозировку гранул GSK и CAL.
      1. Рассчитайте общую дозировку для GSKL: 1 г/кг/день х 0,2 кг х 6 крыс х 3 дня и 3,6 г.
      2. Рассчитайте общую дозировку для GSKM: 2 г/кг/д/д/днх 0,2 кг х 6 крыс х 3 дня и 7,2 г.
      3. Рассчитайте общую дозировку для GSKH: 4 г/кг/день х 0,2 кг х 6 крыс х 3 дня и 14,4 г.
      4. Рассчитайте дозировку CAL 0,2 таблетки/кг/день х 0,2 кг х 6 крыс х 3 дня и 0,72 таблетки.
        ПРИМЕЧАНИЕ: В общей сложности 10 мл GSK гранулы содержащие сыворотки необходимо подготовить 100 мл культуры среды (20% ГСК гранул-содержащих сыворотки). Каждая крыса (6 крыс/группа), как ожидается, обеспечит 1,5-2 мл Гранулсодержащих Сыворотки GSK после центрифугации.
    4. Рассчитайте объем гранул ГСК на одну крысу на основе массы тела15: например, объем (V) 2 мл/крыса/день.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Объем внутрижелудочного введения для крыс составляет 0,1 мл/10 г.
  2. Взвесить 3-дневные стоит три дозы гранул ГСК. Взвешивание 3,6 г, 7,2 г и 14,4 г гранул ГСК и служить гскл, GSKM и GSKH, соответственно. Взвешивание 0,72 таблетки для группы CAL.
  3. Поместите 7,2 г гранул ГСК в трубку 50 мл. Добавьте 36 мл сольяила и встряхните трубку, чтобы полностью раствориться. Повторите это с 3,6 г и 14,4 г гранул ГСК.
  4. Повторите раздел 1.6 для внутрижелудочного администрирования с рабочим решением 2 мл ГСК.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Администрирование того же объема солимного (2 мл на крысу) для подготовки сыворотки и служит пустой контрольной группой для пробирки.
  5. Приготовление Сыворотки, содержащей ГСК
    1. Интраперитонетически обезопажывает крыс 300 мл/100 г 80 мг/кг кетамина 1 ч после последней введения гранул ГСК. Используйте щепотку иглы ног, чтобы подтвердить, является ли крыса полностью обезглавлина. Отсутствие ответа не указывает на успешную анестезию.
    2. Выставить живот на дно грудной клетки крыс с помощью прямых действующих ножниц после обрезки кожи и брюшной полости.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Хирургический инструмент должен быть стерилизован при высоких температурах и высоком давлении перед использованием. Хирургическая область должна быть стерилизована с 70% этанола во время сбора крови.
    3. Удалите соединительную ткань брюшной аорты с помощью бумажной бумаги, чтобы подвергнуть сосуду четко.
    4. Нарисуйте кровь из брюшной аорты с помощью шприца 10 мл, 22 G. Затем снимите иглу и перенесите кровь в стерильную трубку 15 мл. Обычно, 6'8 мл крови могут быть получены от одной крысы.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Каждая крыса должна быть сохранена жизни при рисовании крови. Одним из показателей является то, что брюшной аорты пульсирует, когда крыса жива. Крыса мертва после того, как кровь срисована.
    5. Держите трубку в вертикальном положении при комнатной температуре в течение 30-60 минут, пока кровь не сгустиется в трубке. Затем центрифуги трубки на 500-600 х г в течение 20 мин. Перенесите все супернатанты (сыворотки) из одной группы (6 крыс) в одну стерильную трубку 50 мл и встряхните, чтобы перемешать.
    6. Инактивируйте сыворотку, инкубируя в водяной бане 56 градусов по Цельсию в течение 30 мин. Фильтруй сыворотку с помощью гидрофильных фильтров для хранения политетерсульфона размером 0,22 мкм. Хранить при -80 градусах по Цельсию для длительного использования (менее 1 года).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Отфильтрованная сыворотка может быть использована для витро остеокластогенеза и остеобластогенеза.
  6. Приложения
    1. В пробирке остеокластогенез
      1. Разбавить три дозы ГСК-содержащих сыворотки (GSKL, GSKM, GSKH) в соотношении 1:4 с минимальным среды Орла (з-МЭМ), содержащих L-глутамин, рибонуклеозиды, и деоксирибонуклеозы.
        ПРИМЕЧАНИЕ: Убедитесь, что конечная концентрация ГСК-содержащей сыворотки для витро остеокластогенеза и остеообластогенеза составляет 20%.
      2. Добавьте разбавленную ГСК-содержащую сыворотку (200 л/с. ) от шага 3.6.1.1 к макрофагам костного мозга (BMM) от 4-6 недельных мышей C57BL/6 для остеокластогенеза и стимулируют BMM с макрофагом колонии-стимулирующего фактора (M-CSF, 10 ng/mL) и активатера для ядерного фактора-КБ лиганд (RANKL, 100 нг/мл), как уже говорилось ранее2.
    2. В пробирке остеобластогенез
      1. Повторите шаг 3.6.1.1.
      2. Добавьте разбавленную ГСК-содержащую сыворотку (2 мл/ну) к костной мезенхимальной стволовым клеткам (BMSCs) от 4-6 недельных мышей C57BL/6 для генерации остеобласта, как ранее описано16.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Результаты микро-КТ сканирования показали, что мыши OVX показали значительную потерю костной массы по сравнению с мышами сольников(рисунок 1A). Вмешательство (90 дней) гранул ГСК значительно увеличило ПРО, особенно в группе ГСКМ(рисунок 1B). Параметры костной структуры, такие как BMD, BV/TV, Tb.N и Tb.Th, были количественно оценены. ГСК granule лечения привело к увеличению BMD, BV / ТВ, Tb.N и Tb.Th но уменьшилась Tb.Sp

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Гранулы агентов ТКМ стали одним из распространенных вариантов для формулировок или рецептов. Гранулы GSK состоят из нескольких травяных лекарств, основанных на клиническом опыте или теории ТКМ, и они оказывают лучшие лечебные эффекты с меньшим количеством побочных эффектов4. По сравнению с отваром воды, гранулы имеют такие преимущества: хороший вкус, удобство доставки, длительное хранение, стандартный протокол и последовательные лечебные эффекты, а также более высокую производительность. В настоящ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Это исследование было поддержано грантами Национального фонда естественных наук Китая (81804116, 81673991, 81770107, 81603643 и 81330085), программой инновационной команды, Министерством науки и технологий Китая (2015RA4002 к WYJ), программе для инновационной команды, Министерство науки и технологий Китая (2015RA4002 к WYJ), программе для инновационной команды, Министерство науки и технологий Китая (2015RA4002 к WYJ), программе для инновационной команды, Министерство науки и технологий Китая (2015RA4002 к WYJ), программе для инновационной команды, Министерство науки и технологий Китая (2015RA4002 к WYJ), программа для Инновационная команда, Министерство образования Китая (IRT1270 в WYJ), Шанхайский медицинский центр хронических заболеваний TCM (2017-01010 до WYJ), Три года действий по ускорению разработки плана традиционной китайской медицины (2018-2020)-CCCX-3003 в WYJ), и национальные ключевые проекты в области научно-исследовательских разработок (2018YFC1704302).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
α-MEMHyclone
лаборатории		SH30265.018Для клеточных культур
бета;-глицерофосфатSigmaG5422Остеобластогенез
Кальтрат (CAL)WyethL96625Animal interventation
C57BL/6 мышейSLAC Laboratory
Animal Co. Ltd.		Случайныйпрепарат Айнимал
ДексаметсомСигмаD4902
ДиметилсульфоксидСигмаD2438Клетка замороженная
Этилендиамин тетрауксусная кислота (ЭДТА)Сангон Биотех60-00-4Образцы лечат
фетальную бычью сывороткуGibcoFL-24562Для клеточной культуры
Гушукан гранулыканчэн companyin ChinaZ20003255Травяной рецепт
Световой микроскопOlympus BX50Olympus BX50Изображения для остеокластогенеза
L-Аскорбиновая кислота 2-фосфат секинагнея пластинчатый гиклетSigmaA8960-5GОстеобластогенез
МикроскопLeicaDMI300BOsteocast и остеобласт представьте
M-CSFPeprotechAF-300-25-10Остеокластогенез
и мю; icro-CTScanco
Medical AG		μ CT80 рентгенограмма микротомографКостный структурный анальсиз
RANKLPeprotech11682-HNCHFОстеокластогенез
Sprague DawleySLAC Laboratory
Animal Co. Ltd.		RandomBlood Collection
Tartrate-resistant Acid Phosphate (TRAP) KitSigma-Aldrich387A-1KTTRAP окрашивание
&

Ссылки

  1. Shu, B., Shi, Q., Wang, Y. J. Shen (Kidney)-tonifying principle for primary osteoporosis: to treat both the disease and the Chinese medicine syndrome. Chinese Journal of Integrative Medicine. 21 (9), 656-661 (2015).
  2. Zhao, D., et al. The naturally derived small compound Osthole inhibits osteoclastogenesis to prevent ovariectomy-induced bone loss in mice. Menopause. 25 (12), 1459-1469 (2018).
  3. Liu, S. F., Sun, Y. L., Li, J., Dong, J. C., Bian, Q. Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In vivo and In vitro Experiments. Journal of Visualized Experiments. (123), e55654(2017).
  4. Wang, Q., et al. The systemic bone protective effects of Gushukang granules in ovariectomized mice by inhibiting osteoclastogenesis and stimulating osteoblastogenesis. Journal of Pharmacological Sciences. 136 (3), 155-164 (2018).
  5. Bian, Q., et al. Oleanolic acid exerts an osteoprotective effect in ovariectomy-induced osteoporotic rats and stimulates the osteoblastic differentiation of bone mesenchymal stem cells in vitro. Menopause. 19 (2), 225-233 (2012).
  6. Zhao, D., et al. Oleanolic acid exerts bone protective effects in ovariectomized mice by inhibiting osteoclastogenesis. Journal of Pharmacological Sciences. 137 (1), 76-85 (2018).
  7. Tang, D. Z., et al. Osthole Stimulates Osteoblast Differentiation and Bone Formation by Activation of β-Catenin-BMP Signaling. Journal of Bone and Mineral Research. 25 (6), 1234-1245 (2010).
  8. Tashino, S. "Serum pharmacology" and "serum pharmaceutical chemistry": from pharmacology of Chinese traditional medicines to start a new measurement of drug concentration in blood. Therapeutic Drug Monitoring Research. 5, 54-64 (1988).
  9. Fu, L., et al. Ex vivo Stromal Cell-Derived Factor 1-Mediated Differentiation of Mouse Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells into Hepatocytes Is Enhanced by Chinese Medicine Yiguanjian Drug-Containing Serum. Evidence Based Complement Alternative Medicine. , 7380439(2016).
  10. Cao, Y., Liu, F., Huang, Z., Zhang, Y. Protective effects of Guanxin Shutong capsule drug-containing serum on tumor necrosis factor-alpha induced endothelial dysfunction through nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase and the nitric oxide pathway. Experimental and Therapeutic. 8 (3), 998-1004 (2014).
  11. Chen, X., et al. Application of serum pharmacology in evaluating the antitumor effect of Fuzheng Yiliu Decoction from Chinese Medicine. Chinese Journal of Integrative Medicine. 20 (6), 450-455 (2014).
  12. Li, X. L., Wang, L., Bi, X. L., Chen, B. B., Zhang, Y. Gushukang exerts osteopreserve effects by regulating Vitamin D and Calcium metabolism in ovariectomized mice. Journal of Bone Mineral Metabolism. , 1-11 (2018).
  13. Cui, S. Q., et al. Mechanistic study of Shen (Kidney)tonifying prescription Gushukang in Preventing and Treating Primary Osteoporosis. Journal of Chinese Medical University. 30 (16), 351-354 (2001).
  14. Wang, Y., Shang, K., Li, Y. K., Tao, X. L. Effect of gushukang on osteoclast cultured from type I diabetic rat in vitro-a preliminary study. Chinese Journal of Bone Tumor and Bone Disease. 3 (12), 22-24 (2004).
  15. Zhang, Y. P. Pharmacology Experiment. , 2nd edition, People’s medical publishing house. Beijing, China. (1996).
  16. Zhao, D. F., et al. Cyclophosphamide causes osteoporosis in C57BL/6 male mice: suppressive effects of cyclophosphamide on osteoblastogenesis and osteoclastogenesis. Oncotarget. 8 (58), 98163-98183 (2017).
  17. Zhong, L. L., et al. A randomized, double-blind, controlled trial of a Chinese herbal formula (Er-Xian decoction) for menopausal symptoms in Hong Kong perimenopausal women. Menopause. 20 (7), 767-776 (2013).
  18. Zhang, D. Issues and strategies for study of serum pharmcology in oncology. Zhong Yi Yan Jiu. 17 (5), 13-14 (2004).
  19. Nair, A. B., Jacob, S. A simple practice guide for dose conversion between animals and human). Journal of Basic and Clinical Pharmacy. 7 (2), 27-31 (2016).
  20. Xu, X., et al. Protective effect of the traditional Chinese medicine xuesaitong on intestinal ischemia-reperfusion injury in rats. International Journal of Clinical and Experiments Medicine. 8 (2), 1768-1779 (2015).
  21. Jiang, Y. R., et al. Effect of Chinese herbal drug-containing serum for activating-blood and dispelling-toxin on ox-LDL-induced inflammatory factors' expression in endothelial cells. Chinese Journal of Integrative Medicine. 18 (1), 30-33 (2012).
  22. Li, Y., Xia, J. Y., Chen, W., Deng, C. L. Effects of Ling Qi Juan Gan capsule drug-containing serum on PDGF-induced proliferation and JAK/STAT signaling of HSC-T6 cells. Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi. 21 (9), 663-667 (2013).
  23. Guo, C. Y., Ma, X. J., Liu, Q., Yin, H. J., Shi, D. Z. Effect of Chinese herbal drug-containing serum for activating blood, activating blood and dispelling toxin on TNF-alpha-induced adherence between endothelial cells and neutrophils and the expression of MAPK pathway. Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 35 (2), 204-209 (2015).
  24. Li, Y. K. Some issues in methology of Chinese herbs serum pharmcology. Zhong Yao Xin Yao Yu Lin Chuang Yao Li. 10 (5), 263(1999).
  25. Zhang, L., et al. A review of Chinese herbs serum pharmcology methodological study. Nan Jing Zhong Yi Yao Da Xue Xue Bao. 18 (4), 254(2002).
  26. Pacifici, R. Estrogen, cytokines, and pathogenesis of postmenopausal osteoporosis. Journal. Bone Mineral Research. 11, 1043-1051 (1996).
  27. Ammann, P., et al. Transgenic mice expressing soluble tumor necrosis factor-receptor are protected against bone loss caused by estrogen deficiency. Journal Clinical Investigation. 99, 1699-1703 (1997).
  28. Kimble, R. B., et al. Simultaneous block of interleukin-1 and tumor necrosis factor is required to completely prevent bone loss in the early postovariectomy period. Endocrinology. 136, 3054-3061 (1995).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Больше статей

Гранулы Gu-shukangэксперименты in vivoмикрокомпьютерная томографияизмерение параметров костной тканиприготовление сывороткианализ остеокластогенезаанализ остеобластогенезазондовое введениезабор крови
Подготовка Гушукан (GSK) Гранулы для In Vivo и In Vitro Эксперименты
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.