Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Надежных и воспроизводимых критического размера сегментарный бедренной дефект модель крыс, стабилизировалось с пользовательской внешних фиксаторов

8.8K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/59206

⸱

24 марта 2019 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Orthopedics and Rehabilitation, University of Wisconsin-Madison, 2Department of Biomedical Engineering, University of Wisconsin-Madison, 3Summit Orthopedics

В этой статье

Краткое содержание

В естественных условиях млекопитающих модели критического размера костных дефектов имеют важное значение для исследователей, изучая механизмы заживления и ортопедической терапии. Здесь мы представляем собой протокол для создания воспроизводимых, сегментарный, бедренной дефектов в крыс, стабилизировалась, с использованием внешней фиксации.

Аннотация

Ортопедические исследования опирается на животных моделей для изучения механизмов кости Исцеление в естественных условиях , а также исследовать новые методы лечения. Критического размера сегментарный дефекты являются сложными для лечения клинически, и исследовательские усилия могли бы извлечь пользу из надежной, амбулаторный малых животных модели сегментарный бедренной дефекта. В этом исследовании мы представляем оптимизированные хирургический протокол для создания последовательного и воспроизводимые критический дефект диафизарных 5 мм в крыса бедра, стабилизировалось с внешних фиксаторов. Диафизарных ostectomy была выполнена с использованием пользовательских джиг поставить 4 Kirschner провода bicortically, которые были стабилизированы с устройством адаптированы внешних фиксаторов. Осциллирующий пилой был использован для создания дефекта. Коллагеновая губка одиночку или коллагена губкой, смоченной в rhBMP-2 был имплантирован в дефект, и исцеление кости контролируется более 12 недель, используя рентгенограммы. После 12 недель крысы были принесены в жертву, и гистологический анализ проводился на подакцизные управления и лечить бедра. Дефектов костей, содержащие только коллагеновая губка привело к не союз, в то время как лечение rhBMP-2 принесли формирования периостальная черствым и новые костного ремоделирования. Также восстановленные после имплантации и внешней фиксации животных оказалась успешной в стабилизации бедренной дефектов более 12 недель. Этот обтекаемый хирургические модель может применяться легко изучать кости Исцеление и тестировать новые ортопедические биоматериалов и регенеративной терапии в естественных условиях.

Введение

Ортопедической травматологии фокусируется на лечении широкого спектра сложных переломов. Критические диафизарных сегментарный кость, которую дефекты доказали трудным для лечения клинически обусловлено снижение регенерационной способности окружающие мышцы и надкостницы, а также отказ от локализованных ангиогенеза1. Современные методы включают постановляющей части фиксации с костной пластикой, задержкой подсадка кости (Masquelet), кости транспорта, фьюжн или ампутация2,3,4. У большинства пациентов, которые имеют амбулаторного функции сохранены после их травмы, с хорошо функционирующей Дистальная конечностей конечности бабло, несомненно, лучшее лечение вариант5. Эти аварийные процедуры часто требуют поэтапного хирургических вмешательств течение длительного лечения. Некоторые авторы полагают, что выше по сравнению с внутренней фиксации для этих приложений из-за повреждения снижение тканей во время имплантации, уменьшилось имплантированных площадь поверхности и увеличение послеоперационной приспособляемость этой внешней фиксации Фиксатор пластинчатый6. Однако перспективных рандомизированное контролируемое испытание ведется в настоящее время чтобы помочь прояснить этот спор внутренней против внешней фиксации в тяжелой открытых переломов голени7. К сожалению с либо лечения выбран, значительных осложнений и провал ставки сохраняются8,9. С либо метод лечения, что касается потери сегментарный кости хирург должны бороться с сегментарный диафизарных дефекты, которые представляют серьезные проблемы. Исправления сегментарный дефектов необходимо максимизировать кости стабилизации и одновременно повысить Остеогенные процесс10,11.

Благодаря клиническое значение, но ниже объема, критического размера диафизарных сегментарный дефектов эффективной, воспроизводимые животной модели необходимо, чтобы исследовательские группы для продвижения методов лечения и в конечном итоге улучшить клинические исходы. Исследователи должны учиться в vivo физиологическое заживление механизмов в млекопитающих животных модели. Хотя такие модели внешней фиксации уже существуют12,13,14,15, мы надеемся обеспечить более надежный метод для профсоюзов, в необработанной животных, уменьшение расходов путем выбора материалы доступные фиксатором и наброски прямой хирургический протокол для легко приложения для будущих исследований. Основная цель настоящего Протокола заключается в создание надежных и воспроизводимых модель критический дефект диафизарных крыс. Процедура оценивалась путем оценки стабилизации и кости Исцеление в крыса бедра свыше 12 недель. Вторичные цели включали: сделать доступным модель стоимости для максимально эффективной, упрощение хирургический подход и стабилизации и обеспечение этического заботу о животных. Авторы и исследовательская группа провела предварительные эксперименты с широкий спектр разных биоматериалов и потенциальных регенеративной терапии для улучшения исцеление в этой сегментарный дефекта.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Крысы, используемые в данном исследовании получил ежедневного ухода в соответствии с руководящими принципами AVMA для эвтаназии животных: 2013 издания16. Институциональный уход животных использования в университете Висконсин-Мэдисон оцениваются и Комитет одобрил этот экспериментальный протокол, до начала проекта.

1. Животные

  1. Используйте беспородных Sprague-Dawley самцах массой около 350 г.

2. Подготовка костных морфогенетических белков-2 (rhBMP-2) смоченной губкой подмости

Примечание: Подготовка леса должно происходить только перед имплантацией в бедренной кости (см. шаг 6.14).

  1. Следуйте инструкциям производителя для использования комплекта трансплантата установленных кости rhBMP-2, содержащие коллаген Губка, лиофилизированные rhBMP-2 и стерильной водой для растворения17. Сохранения стерильности, воссоздания rhBMP-2 с стерильной воды до концентрации 1,5 мг/мл.
  2. С помощью стерильными ножницами и стерильные правителя, обрежьте rhBMP-2 пропитанной коллагеновая губка перестроить соответствовать 5 мм x 3 мм x 3 мм дефекта.
  3. С помощью шприца, равномерное распределение раствора rhBMP-2 над коллагеновая губка таким образом, чтобы она поглощается.

3. Подготовка пользовательских внешней фиксации устройства

Примечание: Смотрите Рисунок 1A для более полного перечня размеры.

  1. Вырезать алюминия тонколистового (тип 6061, 0,088" толщина) до двух штук (1.4" x 6") с использованием jigsaw или другой подходящий инструмент.
  2. Смонтировать один кусок в фрезерный станок и, используя мельница сверло карбид 90°-точка 1/8", пазы четыре «V» (видимая область 0,035" по глубокой) вдоль пополам. Оставьте другой кусок, без сокращений.
  3. Вырезать отдельные пластины шириной 0,3" из двух частей (рис. 1B). Измерить и Просверлите отверстия для винтов для потока 4-40. Нажмите плита с пазами «V» с резьбой 4-40. Просверлите пластину без канавки для дрели #4 винт тела.
  4. Песок оба произведения Закруглить углы и уменьшить вес (рис. 1 c).
  5. Винт куски вместе с 4-40, 18-8 нержавеющей стали кнопку головкой (0,25"), так что пазов заподлицо с простой пластины (рис. 1 d)

4. цистит процедуры и обезболивание

  1. Побудить анестезии, поместив крыса в камере индукции, обеспечивая 4 L O2мин. с 4% изофлюрановая.
    Предупреждение: Исследовательский персонал должны избегать ингаляционной анестезии газов и поддержания надлежащего Худ и вентиляции в лаборатории.
  2. Удалить крысы из камеры после того, как крыса теряет восстанавливающих рефлекс, приложите носовой конус и место в дозе поддержание анестезии через нос (O2 скорость доставки до 2-3 Л/мин и 0,8% изофлюрановая).
  3. Место крысы на грелку или под потепления свет для предотвращения переохлаждения.
  4. Подтвердите адекватной глубины анестезии, защемления ног или тестирования глазной рефлекс.
  5. Применение смазки для глаза, чтобы предотвратить высыхание роговицы.
  6. Доставить подкожно расширенного выпуска бупренорфин (1 мг/кг) на ствол/спинку крысы, далеко от хирургической сайта, чтобы обеспечить анальгезии на срок до 3 дней после операции.

5. асептический подготовка и антибактериальной профилактики

  1. Бритье вокруг hindleg, используя 13го ребра, ноги, спинной срединной и брюшной срединной линии в качестве поля.
  2. Скраб брился области с помощью стерильные марлевые 2 x 2, пропитанной с 10% повидон йод следуют 70% EtOH (4 раза каждый, чередуя).
  3. Администрировать внутримышечной инъекции цефазолина (20 мг/кг), в постановляющей части четырехглавой мышцы.
  4. Администрировать Энрофлоксацин (0,25 мг/мл) в питьевой воде для 7 дней после операции для продолжения антибактериальной защиты.
  5. Место крыс на лечебные корма (например, Uniprim) в течение всего исследования для предотвращения инфекции тракта PIN-код.
  6. Обратиться двойной мазь с антибиотиком кожи контактный интерфейс раз ежедневно в течение 3 дней после операции.
    Примечание: Во избежание любой внешней фиксации ПИН или зажим, разрыхление, которая может способствовать развитию инфекции.

6. хирургическая процедура

Примечание: Сделать согласованные усилия, чтобы поддерживать стерильные области и область и следовать стерильных во всем объеме дела.

  1. Расширить бритая ноги через перфорированную, ясно липкой Пелерина и покрытия хирургических скамейке в стерильных полотенца для создания поля, стерильный.
  2. Ощупывайте бедренной кости и использовать #15 лезвие для создания передне-боковой разрез через кожу, простирающейся от надколенника к большей вертела в проксимального отдела бедренной кости.
  3. Тщательно надрезать поперечной ножки фасции вдоль межмышечной перегородки для разделения lateralis мышц мышц четырехглавой кпереди от бедра кзади до боковой бедренной подвергается. Сохраните похититель ягодичной сухожилие вставки на более вертела.
  4. Выполните тщательного, рассечение продольных мягких тканей атравматической и разоблачить бедренной кости в его середине диафиза, начиная на боковой поверхности. Для этого используйте лезвие #15 аккуратно вырезать мышцы от основной кости, сохраняя лезвие параллельное против контура поверхности кости. Используйте периостальная Лифт поднимать мышцы от подвергаются кости, как она рассекается и перейти вокруг оси бедра до 7-10 мм Центральной диафиза была очищена от мягких тканей со всех сторон для подготовки к ostectomy.
    Примечание: Во избежание повреждения медиального бедренной кости сосудисто-нервного пучка.
  5. Вставьте четыре провода 1,0 мм Киршнер (k): 2 проксимальных и дистальных в бедра перпендикулярно боковой бедренной кости, 2 направлен прямо бокового к медиальному. Убедитесь, что все контакты участвовать оба коре (bicortical) для надлежащей стабильности (рис. 2A).
  6. Начните с дистальной большинство ПИН во-первых, просто на уровне боковой надмыщелок. Место джиг заподлицо боковыми дистальной бедренной кости и k-проволоку 1.0 резьбовой наконечник.
  7. Сохранение позиции джиг на кости, определите, где наиболее проксимальный контакт войдет кости, основанный на джиг отверстия. После того, как определяется позиция, тщательно надрезать параллельно волокна ягодичной сухожилия, необходимые для создания небольшой разрыв в ткани для проксимальной контактный пройти через, таким образом минимизируя ятрогенные повреждения сухожилия. Дрель 1,0 мм беспотоковая k провод в этот разрыв, опять таки гарантируя, что ПИН привлекает обе коре (рис. 2B).
  8. Сохранять позицию джиг в контакте с костью и просверлить два k-1,0 мм резьбовые провода, один на обе стороны дефекта будущего сайта. Убедитесь, что контакты участвовать оба коре (рис. 2 c).
  9. Место внешних фиксаторов бар уровня 1 см выше кожи и плотно, винт блокировки панели на месте. Обрезать излишки ПИН длины (Рисунок 2D).
  10. Подготовиться ostectomy (дефект создание), поместив небольшой, изогнутые втягивающего вокруг передней и задней бедренной кости для защиты окружающих мягких тканей, мышц и сосудисто-нервного пучка. Используя ~ 5 мм сагиттальной осциллирующие пилы, очень осторожно создать сегментарный дефект 5 мм через середину диафиза. Примените, свет, даже давление с пилой, чтобы избежать ненужных перелом (Рисунок 2E).
  11. Примените небольшое количество орошения (комнатной температуре 0.9% стерильный физиологический (NS)) по мере необходимости при создании дефекта во избежание теплового некроз кости.
  12. Промойте рану, используя 10 мл NS после создания дефекта.
  13. Администрировать 0,1 мл 0,25% бупивакаин с эпинефрина (1: 200, 000) в рану как болеутоляющее и сосудосуживающие.
  14. Вставить леску (5 x 3 x 3 мм) коллагеновая губка или rhBMP-2 смоченной губкой (из шага 2) в дефект. Каждый леску следует надлежащим образом размера занимаемых длину и объем дефекта, помогая Губка оставаться в положении.
    Примечание: на данный момент, мРНК комплексов может быть подготовлен и вводят изложенные в шагах 7.1-7.3 ниже при выполнении визуализации биолюминесценции.
  15. Закройте плоскости мышцы с помощью простого Прерванный шаблона с рассасывающиеся шовные 4-0. Закройте слой кожи с помощью шаблона работает subcuticular с 4-0 рассасывающиеся шовные и кожи клей, чтобы закрыть пробелы вокруг выступающие штифты.
  16. Удаление крысы из носовой конус, оставаясь на грелке и мониторинга непрерывно до тех пор, пока крыса способна постоянно сохранять вертикальное положение. На данный момент место в чистой клетке для восстановления.

7. Подготовка complexed мРНК и биолюминесценции изображений

Примечание: Transfection с мРНК комплексы должны выполняться во время операции за 1 день до изображений свечения. Используйте стерильные приемы при обработке мРНК.

  1. Смесь 10 мкл мРНК кодировки для Gaussia Люцифераза (фондовых концентрация составляет 1 мкг/мкл) с 30 мкл липидный transfecting агента.
  2. Разрешите для мРНК липидных комплексов к форме, инкубации по крайней мере 5 минут при комнатной температуре. Липидный transfecting агент будет конденсируются молекулы мРНК, их стабилизации и повышения эффективности transfection.
    Примечание: Если сразу не используются комплексы, храните их в ice для максимум 1 час.
  3. С помощью 20 мкл пипетки с отфильтрованной советы, придать половина объема мРНК комплексов в проксимальном и дистальном концы дефекта, соответственно.
  4. Следующий день, 3 мин до изображений, анестезировать крыса, используя вдыхаемого изофлюрановая как описано в шаге 4.1.
  5. Расположите крыса в в естественных условиях imaging камеры оснащены носовой конус, обеспечивая техническое обслуживание изофлюрановая (0,8% изофлюрановая, скорость доставки2 O 2-3 Л/мин).
  6. Придать целентеразин высокомобильна в физиологического раствора в дозе 4 мг/кг веса тела в непосредственной близости от дефекта.
  7. Приобрести биолюминесценции изображения с в vivo imaging системы (ИВИС) согласно инструкциям производителя18.

8. изображений протокол

  1. После калибровки равнина радиографический машина, рентгеновские системы19, анестезировать крыс с помощью вдыхаемого изофлюрановая как описано выше (см. Шаг 4.1) и положение крыса в носовой конус с вдыхаемого изофлюрановая (0,8% изофлюрановая, O2 скорость доставки 2-3 Л/мин) на рентгенограмме бедренной переднезаднем (AP).
    1. В то время как крыса в грудной recumbency, заранее хирургические задних конечностей вперед, сгибание на бедра и задушить сустава. Flex коленному суставу до приблизительно 90°. Лента с лапой подошвенной стороны вниз, недалеко от стенки тела. Положение голени вперед от бедра, чтобы исключить возможность наложения кости. Предоставлять небольшие похищения бедра, место полупрозрачный губкой (примерно 15 мм толщиной) в районе паха. Затем получите изображение (черепно хвостового) передней задней бедренной кости.
  2. Повторите это мнение радиографический бедренной AP, сразу же после операции, 4 недели, а 12 недель. Использовать ленту и марля надлежащим образом позиционировать конечности животного для качества и последовательного изображений.
  3. Удаление крысы из носовой конус и мониторинга непрерывно до тех пор, пока крыса способна постоянно сохранять вертикальное положение. Затем место обратно в клетке.

9. гистологические процедура

  1. Усыпить крыс в камере с ингаляционных CO2 согласно AVMA этических стандартов16.
  2. После эвтаназии брить задних конечностей, удалить кожу из постановляющей части конечности и disarticulate бедра на бедра. Тщательно удалите все мягкие ткани из постановляющей части бедра (включая все мышцы, сухожилия и связки). Оставьте только тонкий слой мышц, окружающих дефект сайт для защиты регионе исцеления от случайного повреждения во время вскрытия.
  3. Место бедренной кости в 10% нейтральных буферизуются формалин при комнатной температуре 3-4 дней для фиксации. Держите формалина 15:1 соотношение объема тканей. Измените решение, как только на полпути через процесс фиксации.
  4. Известь бедренной кости в раствор рН 6,5 15% Этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА) для 3-4 недели. Собирайте серийный рентгенограммы, чтобы определить конечную точку декальцинации.
  5. Пополам бедренной продольно с разрубки от кзади в середине сагиттальной плоскости. Представить ткани для встраивания Стандартный парафин и гематоксилином и эозином (H & E).
  6. Отправьте H & E слайды патологоанатом для гистологической оценки.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Операции были проведены в приблизительно один час один хирург с помощью одного помощника. После хирургической оптимизации интра - и послеоперационных осложнений значительно были сведены к минимуму и использовать джиг аппарата обеспечивается постоянный размер (5 x 3 x 3 мм) и локализации бедренной дефектов. Крысы были амбулаторного сразу после восстановления от анестезии и не иметь любые изменения поведенческих моделей; их походка была не болеутоляющие, и они, по всей видимости, не беспоко...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Малые животные модели ортопедических травм, таких как полный переломов включить исследования, который исследует механизмы остеогенез и оценки терапевтический потенциал биоматериалов20. Это исследование представляет крыса сегментарный дефект модель стабилизировать посредством пользовательских внешних фиксаторов, что лаборатории и биомедицинская инженерия команда может легко воспроизвести для дальнейших исследований-несущей osteosynthetic кости ремонт.

Предыдущие исследов...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы заявляют, что без финансовых интересов или выгоды. Там было никаких выгод, полученных прямо или косвенно авторы этой статьи.

Благодарности

Эта работа была поддержана NIH оборудование Грант 1S10OD023676-01 с дополнительной поддержки, предоставляемой через университет Висконсин отделения ортопедии и реабилитации и школа медицины и общественного здравоохранения. Мы хотим отметить UW Карбоне рака центр поддержки Грант Р30 CA014520 и использования их маленький животное визуализации объекта, а также NIH обучения Грант 5T35OD011078-08 для поддержки H. Мартина. Мы также благодарим Майкла и Мэри Сью Шеннон за их поддержку опорно регенерации партнерства.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
0,9% Стерильный физиологический растворBaxter2F7124Используется для орошения раны и регидратации
10% Йод/повидонCareFusion1215016Используется для подготовки кожи
10% Нейтральный буферизованный формалинVWR89370094Используется в качестве фиксатора
1 мм бесрезьбовая проволока КиршнераDePuy SynthesVW1003.15Стерилизованная, используется для наиболее проксимального контакта
Резьбовая проволока Киршнера 1 ммDePuy SynthesVW1005.15Стерилизованная, используется для 3 самых дистальных прорезей для булавок
2x2 МарляCovidien4006130Стерилизованная, используется для подготовки кожи и впитывания крови
4-0 Vicryl SutureEthicon4015304Используется для закрытия мышечных и кожных слоев
4-40 x 0,25",18-8 нержавеющая сталь пуговичная головка колпачковые винтыУниверсальныйвнешний фиксатор сборка
4200 Аккумуляторный драйверStrykerOR-S-4200Используется для сверления проводов киршнера
4х4 марляCovidien1219158Стерилизованный, используется для абсорбции крови
70% ЭтанолИспользуется для подготовки кожи
BaytrilBayer Healthcare LLC, Подразделение ветеринарии312.10010.3Добавляется в воду в качестве антибиотика
ЦефазолинХикма Фармацевтика8917156Предоперационный антибиотик
CleanCap Gaussia Luciferase mRNA (5moU)TriLink BiotechnologiesL-7205Модифицированная мРНК, кодирующая Gaussia Luciferase, держать на льду во время использования
Нативный коэлентеразинNanoLight Technology303Субстрат для Guassia Luciferase, используется для оценки активности люциферазы in vivo
Двойная мазьантибиотика Johnson & Johnson consumer Inc8975432Применяется на местах штифтов после операции в качестве ухода за раной
Dual Cut MicrobladeStryker5400-003-410Используется для создания 5-миллиметрового дефекта в бедренной кости
Этилендиамин Тетрауксусная кислота (ЭДТА)FisherBP120-500Используется для декальцинации кости для подготовки к гистологии
Бупренорфин с пролонгированным высвобождением БупренорфинЗооФармИспользуется в качестве 3-дневного обезболивания
Фенестрированный простыни3M1204025Используются для установления стерильного поля
Шнур наконечника для TPSStrykerOR-S-5100-4NИспользуется для создания дефекта 5 мм в бедренной
кости ГрелкаK& H Pet Products121239Поддержание температуры тела крыс
Шестиугольная головка ОтверткаWiha263/1/16 " X 50Затяжка внешнего фиксатора
Индукционная камераОбщаяанестезия для крыс
Инфузия коллагеновой губки с рекомбинантным человеческим костным морфогенным белком-2Medtronic7510200Клинически значимое лечение, используемое в качестве положительного контроля
ИзофлуранClipper10250Анестезия для крыс
IVISPerkin Elmer124262Биолюминесцентный метод визуализации
JigCustomИспользуется для установки бикортикальных штифтов
Lipofectamine MessengerMAXFisher ScientificLMRNA003комплекс мРНК, обеспечивающий доставку мРНК
Sensorcaine-MPF (Bupivicane (0,25%) и эпинефрин (1:200,000))APP Pharmaceuticals, LLCNDC 63323-468-37Применяется на месте хирургического вмешательства для облегчения боли и сужения сосудов
Стерильная водаHospira8904653Используется в качестве растворителя для порошка цефазолина
Титановые пластины внешнего фиксатораИзготовлено на заказИзготовлено на месте с использованием титанового лома и фрезерного станка
Total Performance System (TPS) КонсольStrykerOR-S-5100-1Используется для создания дефекта 5 мм в бедренной кости
TPS MicroSaggital ПилаStrykerOR-S-5100-34Используется для создания дефекта 5 мм в бедренной кости
Ультрафокусный факситрон с DXAФакситрон Радиографическаявизуализация высокого разрешения
для крыс UniprimEnvigoTD.06596Лечебная диета для крыс
Универсальный переключатель для TPSStrykerOR-S-5100-9Используется для создания 5 мм дефект бедренной кости
Vetbond Tissue Adhesive3M1469Ушивание кожи
Диета

Ссылки

  1. Filipowska, J., Tomaszewski, K. A., Niedźwiedzki, Ł, Walocha, J. A., Niedźwiedzki, T. The role of vasculature in bone development, regeneration and proper systemic functioning. Angiogenesis. 20 (3), 291-302 (2017).
  2. Charalambous, C. P., Akimau, P., Wilkes, R. A. Hybrid monolateral-ring fixator for bone transport in post-traumatic femoral segmental defect: A technical note. Archives of Orthopaedic and Trauma Surgery. 129 (2), 225-226 (2009).
  3. Xing, J., et al. Establishment of a bilateral femoral large segmental bone defect mouse model potentially applicable to basic research in bone tissue engineering. The Journal of Surgical Research. 192 (2), 454-463 (2014).
  4. Chadayammuri, V., Hake, M., Mauffrey, C. Innovative strategies for the management of long bone infection: A review of the Masquelet technique. Patient Safety in Surgery. 9 (32), (2015).
  5. Koettstorfer, J., Hofbauer, M., Wozasek, G. E. Successful limb salvage using the two-staged technique with internal fixation after osteodistraction in an effort to treat large segmental bone defects in the lower extremity. Archives of Orthopaedic and Trauma Surgery. 132 (19), 1399-1405 (2012).
  6. Fragomen, A. T., Rozbruch, S. R. The mechanics of external fixation. The Musculoskeletal Journal of Hospital for Special Surgery. 3 (1), 13-29 (2007).
  7. O’Toole, R. V., et al. A prospective randomized trial to assess fixation strategies for severe open tibia fractures: Modern ring external fixators versus internal fixation (FIXIT Study). Journal of Orthopaedic Trauma. 31, S10-S17 (2017).
  8. Fürmetz, J., et al. Bone transport for limb reconstruction following severe tibial fractures. Orthopedic Reviews. 8 (1), 6384(2016).
  9. Dohin, B., Kohler, R. Masquelet’s procedure and bone morphogenetic protein in congenital pseudarthrosis of the tibia in children: A case series and meta-analysis. Journal of Children's Orthopaedics. 6 (4), 297-306 (2012).
  10. Einhorn, T. A., Gerstenfeld, L. C. Fracture healing: Mechanisms and interventions. Nature Reviews Rheumatology. 11, 45-54 (2015).
  11. Pascher, A., et al. Gene delivery to cartilage defects using coagulated bone marrow aspirate. Gene Therapy. 11 (2), 133-141 (2004).
  12. Glatt, V., Matthys, R. Adjustable stiffness, external fixator for the rat femur osteotomy and segmental bone defect models. Journal of Visualized Experiments. (92), (2014).
  13. Betz, O. B., et al. Direct percutaneous gene delivery to enhance healing of segmental bone defects. The Journal of Bone and Joint Surgery. 88 (2), 355-365 (2006).
  14. Fang, J., et al. Stimulation of new bone formation by direct transfer of osteogenic plasmid genes. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 93 (12), 5753-5758 (1996).
  15. Kaspar, K., Schell, H., Toben, D., Matziolis, G., Bail, H. J. An easily reproducible and biomechanically standardized model to investigate bone healing in rats, using external fixation. Biomedizinische Technik. 52 (6), Berlin. 383-390 (2007).
  16. Leary, S., et al. AVMA guidelines for the euthanasia of animals: 2013 edition. American Veterinary Medical Association. , (2013).
  17. McKay, W. F., Peckham, S. M., Badura, J. M. A comprehensive clinical review of recombinant human bone morphogenetic protein-2 (INFUSE Bone Graft). International Orthopaedics. 31 (6), 729-734 (2007).
  18. Living lmage Software. , Perkin Elmer. (2006).
  19. Bassett, J. H. D., Van Der Spek, A., Gogakos, A., Williams, G. R. Quantitative X-ray imaging of rodent bone by faxitron. Methods in Molecular Biology. , 499-506 (2012).
  20. Histing, T., et al. Small animal bone healing models: Standards, tips, and pitfalls results of a consensus meeting. Bone. 49 (4), 591-599 (2011).
  21. Lieberman, J. R., et al. The effect of regional gene therapy with bone morphogenetic protein-2-producing bone-marrow cells on the repair of segmental femoral defects in rats. The Journal of Bone and Joint Surgery. 81 (7), 905-917 (1999).
  22. Tsuchida, H., Hashimoto, J., Crawford, E., Manske, P., Lou, J. Engineered allogeneic mesenchymal stem cells repair femoral segmental defect in rats. Journal of Orthopaedic Research. 21 (1), 44-53 (2003).
  23. Jiang, H., et al. Novel standardized massive bone defect model in rats employing an internal eight-hole stainless steel plate for bone tissue engineering. Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 12 (4), 2162-2171 (2018).
  24. Baltzer, A. W., et al. Genetic enhancement of fracture repair: Healing of an experimental segmental defect by adenoviral transfer of the BMP-2 gene. Gene Therapy. 7 (9), 734-739 (2000).
  25. Li, Y., et al. Bone defect animal models for testing efficacy of bone substitute biomaterials. Journal of Orthopaedic Translation. 3 (3), 95-104 (2015).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Больше статей

Критический размер дефектамодель кости крысыосциллирующая костная пилаустановка спиц Киршнераколлагеновая губкатерапия rhBMP-2анализ заживления костигистологическое исследование
Надежных и воспроизводимых критического размера сегментарный бедренной дефект модель крыс, стабилизировалось с пользовательской внешних фиксаторов
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.