Мы представляем простой цитогенетических техника, с помощью 4′, 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) для определения частоты оплодотворения и первичного соотношение инвазивных вредитель haplodiploid Bemisia tabaci.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Определения скорости оплодотворение яйца Bemisia tabaci с помощью цитогенетического техника
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Несколько видов роста сокососущих белокрылки являются одними из наиболее разрушительных наземных вредителей во всем мире благодаря урожая ущерба, который они наносят и вирусов растений, которые они вектор. Несмотря на многочисленные исследования биологии этих видов в различных средах параметра ключа истории жизни, потомство соотношения полов, уделялось мало внимания, но имеет важное значение для прогнозирования динамики народонаселения. Основной секс отношение (соотношение полов в откладки яиц) Bemisia tabaci никогда не сообщалось, но можно найти путем определения скорости оплодотворение яйца это насекомое haplodiploid. Этот метод предполагает dechorionation яйца с отбеливателем, ряд шагов фиксации и применение общего ДНК флуоресцентные пятна, DAPI (4′, 6-diamidino-2-phenylindole, ДНК связывающих Люминесцентную краску), для привязки к мужского и женского pronuclei. Здесь мы представляем технику и пример его применения, чтобы проверить ли облигатно бактерии, риккетсии sp. nr. bellii, влияние первичной соотношение полов B. tabaci. Этот метод может помочь в демографических исследований белокрылки, или определения, если распределении секс существует с некоторых экологических раздражителей.
Введение
Изучение распределения секс, или относительно инвестиций в мужские и женские потомство, является краеугольным камнем поведенческой экологии1,2,3. В дополнение к своей власти для тестирования адаптивные модели поведения зная стратегию распределения секс организма может улучшить модели динамики его населения. У многих видов распределение секса контролируется матерей. Чтобы определить распределение секса, важно определить основной соотношение полов или доля женщин в то время яйцо осаждения. Хотя соотношение полов в взрослых с появлением могут предоставлять ключи для секса выделе....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Примечание: Убедитесь, что вся работа выполняется при комнатной температуре в хорошо проветриваемом помещении или под вытяжного шкафа. Все «капли» в этом протоколе определены как 5 – 20 мкл, в зависимости от предпочтений оператора.
1. Начальная настройка
- Разрешить женского белокрылки к разведению на чистые листья. Для откладки яиц Аренас примерами клип клетки или листья, вырезать под размер на агаре в чашке Петри. Сделайте покрываемых отверстие в клетке клип или Петри Обложка для вставки и удаления взрослых. Кроме того, быстро поместить сосуд собранных взрослых на льду и, затем, хранение их на лист. Ограничить вре....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Чтобы проверить ли риккетсии влияет на скорость Оплодотворение самок MEAM1 B. tabaci , мы воспитал риккетсии-инфицированных (R+) или неинфицированных (R–) B. tabaci вигны растений (Vigna unguiculata) в отдельные клетки на 27 ° C, относительная влажность 70% и 16 h свет/8 h темные фотопериода. + R и R– , четвертый instar белокрылки были тщательно удалены из листьев и изолированных в 200 мкл газа трубы........
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Этот протокол является первым, чтобы захватить оплодотворение ставки или первичной соотношение полов B. tabaci. Задача настоящего Протокола является, что она требует исследователей научиться обрабатывать белокрылки яйца быстро, обеспечить не более, чем 1 час прошло с тех пор яйца были oviposited до тех пор, пока они являются фиксированными. Во время предварительных экспериментов яйца, которые были исправлены в 3 ч или более postoviposition были слишком стар, чтобы наблюдать за оплодотворение, syngamy имели место.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы не имеют ничего сообщать.
Благодарности
Это исследование финансировалось NSF Грант (DEB-1020460) для М.Ш.Х и USDA AFRI Грант (2010-03752) для М.Ш.Х Авторы благодарят Brennan зер для окрашивания белокрылки яйца с большим мастерством и Дзэн. Авторы благодарят Майка Рихль за разрешение использовать его флуоресцентный микроскоп для изображений. Авторы благодарят Сюзанн Келли и Марко Gebiola за яйца изображений. Авторы благодарят за помощь в решающие моменты в ходе экспериментов Сюзанн Келли и Джимми Конвей.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 1x PBS | Any | ||
| 1x TBST | Any | 5x раствор, изготовленный из 30 г Tris, 43,8 г NaCl, 5 мл Tween-20 и 1,0 г NaN3 pH 7,5, и доведенный до 1 л с водой для ПЦР | |
| Отбеливатель | Clorox | Любой бытовой отбеливатель будет работать, если его можно разбавить до 0,83% Гипохлорит натрия | |
| Прозрачный лак для ногтей | Любой | ||
| DAPI дилактат | Santa Cruz Biotechnology | sc300415 | |
| Этанол | Любой | разбавленный до 70% EtOH | |
| Флуоресцентный микроскоп | Nikon | Nikon Eclipse 50i был использован в этом эксперименте, но любой флуоресцентный микроскоп с фильтром возбуждения 340/380 нм и увеличением не менее 4-10x можно использовать | |
| Ледяная уксусная кислота | Mallinckrodt | UN2789 | |
| Глицерин | Для | ||
| микроскоп | Wild | Микроскоп Wild M5A, но любой микроскоп, где оператор может четко видеть яйца белокрылки, может быть использован | |
| Микроскоп Крышки слайдов | Любые | методы предназначены для крышек слайдов размером 18 мм х 18 мм. Для больших крышек слайдов потребуется добавить больше монтажных носителей. | |
| Предметные стекла для микроскопа | Любые | ||
| штифты Minuten Nadel | BioQuip | 1208SA | Pins Minuten nadel опциональны для изготовления в качестве зондов с наконечниками для пипеток |
| NaCl | Any | ||
| NaN3 | Any | ||
| n-пропилгаллат | Sigma/Santa Cruz Biotechnology | P3130/sc-250794 | |
| Parafilm | Bemis | ||
| Pasteur пипетки | Fisher Scientific | 13-678-20A | Fisherbrand Одноразовые боросиликатные стеклянные пипетки Пастера 5,75 дюйма. Горелка Бунзена также может потребоваться, если оператор хочет удлинить и сузить пипетки |
| Вода для ПЦР | Любые | ||
| наконечники для пипеток | Любые | наконечники для пипеток необязательны для изготовления в виде зондов с минутными штифтами | |
| Надель Маленькая лампа-капельница | Любая | Должна быть установлена на пипетке Пастера | |
| Tris | Any | ||
| Tween-20 | Any |
Ссылки
- Charnov, E. L. Sex ratio in spatially structured populations. The Theory of Sex Allocation. May, R. M. , Princeton University Press. Princeton, NJ. 67-92 (1982).
- Godfray, H. C. J. Parasitoids: behavioral and evolutionary ecology. , Princeton University Press. Princeton, NJ. (1994).
- Bourke, A. F. G., Franks, N. R.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
