Методическая статья

Биопсия и витрификация человека

23.3K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/59625

⸱

26 июля 2019 г.

 ,  ,  ,  , 
1G.EN.E.R.A. Centers for Reproductive Medicine, 2DAHFMO, Unit of Histology and Medical Embryology, Sapienza University of Rome

В этой статье

Краткое содержание

Для эффективного проведения предимплантационного генетического тестирования требуется карангоцистая биопсия и витрификация. Подход, предусматривающий последовательное открытие zona pellucida и извлечение 7-8 трофектодермных клеток в день 5-7 после оплодотворения, ограничивает как количество необходимых манипуляций, так и воздействие эмбриона на неоптимальные условия окружающей среды.

Аннотация

Биопсия Blastocyst выполняется для получения надежной генетической диагностики во время циклов ЭКО с предимплантационным генетическим тестированием. Затем идеальный рабочий процесс влечет за собой безопасный и эффективный протокол витрификации, в связи с временем поворота диагностических методов и переноса выбранного эмбриона (ы) на физиологический эндометрий в следующем естественном цикле. Подход к биопсии, охватывающий последовательное открытие zona pellucida и извлечение 5-10 трофектодермных клеток (в идеале 7-8), ограничивает как количество необходимых манипуляций, так и воздействие эмбриона на неоптимальные условия окружающей среды. После надлежащей подготовки, техника была воспроизводима между различными операторами с точки зрения сроков биопсии (8 мин, в диапазоне 3-22 мин в зависимости от количества эмбрионов к биопсии на блюдо), убедительные диагнозы, полученные (97,5%) и живой коэффициент рождаемости после vitrified-разогретый euploid blastocyst передачи (Зgt;40%). Выживаемость после биопсии, витрификации и потепления составила 99,8%. Скорость повторного расширения на 1,5 ч от потепления была выше, чем 97%, в значительной степени зависит от сроков между биопсией и витрификации (в идеале 30 мин), бластоцист морфологического качества и день биопсии. В общем, лучше vitrify рухнул бластоцист; поэтому в циклах, не связанных с PGT, может быть выполнена лазерная искусственная усадка, чтобы вызвать коллапс эмбриона до криоконсервации. Наиболее перспективной перспективой будущего является неинвазивный анализ средств массовой информации культуры ЭКО после бластоциста культуры в качестве предположительного источника эмбриональной ДНК. Однако этот потенциальный авангард все еще находится в стадии расследования, и еще предстоит определить и утвердить надежный протокол.

Введение

Основной целью современной эмбриологии человека является максимизация числа живорождений на стимулируемый цикл и сокращение затрат, времени и усилий для достижения беременности. Для достижения этой цели должны быть использованы проверенные подходы к отбору эмбрионов для выявления репродуктивно компетентных эмбрионов в когорте, полученных в ходе цикла ЭКО. Согласно последним данным, бластоцист культура1 в сочетании с комплексным хромосомным тестированием и витрифицированной теплой euploid переносэмбриона эмбриона (ET) является наиболее эффективной основой для повышения эффективности ЭКО2. Очевидно, что тестирование анеуплоидии требует эмбрионального образца, который в настоящее время в основном представлен из нескольких клеток, извлеченных из трофектодерма (TE), т.е. раздела бластоциста, который дает происхождение эмбриона приложения (например, плацента) во время беременности . Помимо анализа кариотипа, также мутации одного гена могут быть оценены из биопсии Т как часть клинической стратегии, известной как предимплантационное генетическое тестирование (PGT; -A для анеуплоидий, -SR для структурных хромосомных перестановок, -M для моногенных заболеваний). Другие методы биопсии яйцеклеток/эмбрионов были теоретизированы и приняты клинически на протяжении последних десятилетий, а именно биопсия полярных тел и биопсия бластомеров. Однако их использование в настоящее время сокращается, поскольку их процедурные недостатки (например, более высокая рабочая нагрузка и риск для репродуктивного воздействия) и диагностические ограничения (например, вопросы анализа одной ячейки) неявно препятствуют достаточному балансу между издержками, рисками и льготы (для обзора см.3).

В этой работе один из основных протоколов биопсии TE тщательно описан вместе с последующими процедурами витрификации, нагревания и передачи. Рабочий процесс здесь изложены идеально подходит для занят PGT единицы.

Как уже описано ранее нашей группой4,5, процедура включает в себя последовательное открытие zona pellucida полностью расширенных бластоцистых и удаление нескольких тЭцклеток (в среднем 7-8). По сравнению с днем 3 лазерной помощи штрихучийметод биопсии 6, эта процедура может облегчить ежедневный график ЭКО единицы, где деликатные процедуры, такие как бластоциста биопсии и витрификации, должны быть своевременно выполнены. Как только бластоцист достигает своего полного расширения, биопсия может быть проведена путем выбора т.д. клеток для удаления, тем самым предотвращая риск грыжи внутренней клеточной массы (ICM), что в противном случае сделать процедуру сложной. В литературе, третий протокол бластоциста биопсии также был описан, который включает в себя лазерной помощи штриховки осуществляется после эмбриона уже достигли стадии бластоциста, за несколько часов до процедуры5,7. Однако этот подход занимает больше времени и в основном подходит для единиц ЭКО, которые внедряют биопсию TE в руках малоопытных операторов и с учетом умеренно-низкой ежедневной рабочей нагрузки.

Интрацитоплазматическая инъекция спермы (ICSI)8 должна быть консолидированной техникой, если она направлена на проведение генетического анализа при ЭКО. Аналогичным образом, надлежащая система культуры для безопасного сбора эмбрионов до стадии бластоциста имеет решающее значение для осуществления стратегии биопсии TE. Достаточное количество инкубаторов, а также использование низкого уровня кислородного напряжения являются ключевыми предпосылками для этого, чтобы не скомпрометировать бластоциста скорость9. В то же время, эффективная программа криоконсервации необходима для безопасного управления циклом PGT. В последнее десятилетие, внедрение витрификации увеличила эмбрион крио-выживаемости даже до йgt;99%10,11. Это обеспечило достаточно времени для выполнения генетического тестирования и отложить перенос эмбриона на следующий менструальный цикл, на нестимулируемый и, вероятно, более восприимчивый эндометрий12.

Биопсия TE и витрификация требуют выполнения задач, требующих строгих навыков, и их эффективность может варьироваться в зависимости от неопытных операторов. Поэтому проводится специальный учебный период, прежде чем позволять каждому оператору проводить эти процедуры клинически; кроме того, необходимо периодически оценивать повышение квалификации операторов путем мониторинга ключевых показателей эффективности (КПИ) для процедур криоконсервации и биопсии. Каждая клиника ЭКО должна установить внутренние KPI для этой цели, которые должны приблизитьте те, опубликованные международными консорциумами и / или результаты, опубликованные справочными лабораториями.

TE биопсии, витрификации потепления и свидетельские процедуры являются проверенными методами в нашем подразделении, которые были стандартизированы во всех операторов, участвующих, как сообщалось в трех предыдущих публикациях11,13,14 .

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Протокол для биопсии бластоциста человека, описанный здесь, следует руководящим принципам G.EN.E.R.A. Комитет по этике человеческих исследований.

ПРИМЕЧАНИЕ: Обратитесь к таблице материалов для необходимых материалов. Дополнительный необходимый материал включает в себя лабораторную обувь и снаряжение, хирургическую маску, крышку для волос, хирургические перчатки, постоянный нетоксичный маркер, щипцы и дезинфицирующее средство. Использование хирургического платья, одноразовых хирургических перчаток, маски для лица, покрытия для волос является обязательным для предотвращения риска заражения. Все рабочие зоны, а также оборудование, участвующее в процессе, должны быть тщательно очищены лабораторным дезинфицирующим средством (например, Oosafe) перед началом любой процедуры. Все расходные материалы и используемые средства массовой информации должны быть стерильными и индивидуально упакованы или алицитированы. Предлагается использовать специальную рабочую станцию для биопсии и труб и ограничить доступ области только к операторам, участвующим в процедуре (эмбриолог и свидетель).

1. Подготовка за день до процедуры биопсии

  1. Подготовка пост биопсии культуры блюдо.
    1. Поместите 6 капель 20 -Л ЭКО культуры среды (Таблица материалов) в IVF культуры блюдо и наложения с 6 мл предварительно разогретого минерального масла для эмбриона культуры (Таблица материалов).
    2. Добавьте еще 10 кЛ среды культуры ЭКО к каждой капле. Инкубировать ночь при 37 градусах Цельсияв контролируемой атмосфере (5% O 2, 6% CO2).
  2. Приготовьте 4-хорошую тарелку ЭКО для промывки бластоциста после биопсии.
    1. Поместите 600 л среды культуры ЭКО в первые две скважины и наложение с 300 л предварительно разогретого минерального масла для эмбриональной культуры.
    2. Инкубировать ночь при 37 градусах Цельсияв контролируемой атмосфере (5% O 2, 6% CO2).
  3. Распределите 1,5 л погрузочного раствора(Таблицаматериалов) в каждой трубке ПЦР, которая будет использоваться для трубтт ТЭ, вращайте его и держите при 4 градусах Цельсия.

2. Подготовка в День процедуры биопсии

  1. Приготовьте блюдо из биопсии.
    1. Поместите 3 капли из 10-хЛ HEPES-буферизированной среды (дополненный человеческим сывороточным альбумином)(Таблица Материалов) в ряд в блюдо культуры ЭКО.
    2. Повторите шаг 1.1.1 в зависимости от количества доступных бластоцистых (до 4 бластоцистых на блюдо) и наложения с 6 мл предварительно разогретого минерального масла для эмбриональной культуры.
    3. Инкубировать блюдо при 37 градусах По Цельсию, по крайней мере 1 ч, прежде чем выполнять процедуру биопсии.

3. Blastocyst Отбор и оценка

  1. Оценка бластоциста в соответствии с его расширением и морфологическим появлением ICM и TE(рисунок 1).
    ПРИМЕЧАНИЕ:     Критерии классификации были адаптированы из Gardner и Schoolcraft15 и ранее описаны Capalbo et al. и Cimadomo et al.4,11.
    1. Определите размер и класс расширения как: Для полностью вылупившихся бластоциста, B для вылупления бластоциста, C для полностью расширенного бластоциста, и D для не расширенного бластоциста (эти эмбрионы биопсифицируются только в том случае, если они не расширяются дальше до дня 7).
    2. Определите класс ICM: 1 для заметного ICM с несколькими строго упакованными ячейками; 2 для различимых с несколькими, но примерно упакованными клетками; 3 для трудно различить с очень немногими низкокачественными клетками.
    3. Определите TE класс следующим образом: 1 для хорошо организованного эпителия с несколькими клетками; 2 для свободного эпителия с несколькими клетками; 3 для нескольких и/или больших некачественных ячеек.

4. Биопсия Трофиктодерма

  1. Выполните биопсию TE на всех жизнеспособных полностью расширенных бластоцистых (желательно c класса для размера и расширения).
  2. Установите удерживающие и биопсиальные пипетки для каждой процедуры биопсии. Рекомендации для биопсии пипетка следующие: 30 мкм внутреннего диаметра, 35 "угол наклона, 0,75 мм расстояние кончик согнуть.
  3. Пометьте блюдо биопсии с деталями пациента (имя и фамилия женщины, дата рождения и ID), а затем номер каждой капли с эмбриона и цикла идентификаторов. Используйте постоянный нетоксичный маркер.
  4. Перенесите бластоцист с 300 мкм зачистки пипетки на первую каплю биопсии блюдо и промыть его для того, чтобы удалить избыток культуры среды. Затем переместите бластоцист во вторую каплю блюда из биопсии.
  5. Переместите блюдо в перевернутый микроскоп и премьер биопсии пипетка успокоительной некоторых средств от третьей капли биопсии блюдо.
  6. На 20-кратное увеличение, сориентировать бластоциста, чтобы иметь четкое представление о ICM. Когда он визуализирован в 7 часов (напротив области, которая будет направлена на удаление т.д. клеток), закрепите эмбрион на удерживающих пипетке(рисунок 2a).
  7. Сосредоточьтесь на zona pellucida и удостоверьтесь, что и пипетки, и бластоцист находятся в одной координационной плоскости.
  8. Переключитесь на лазерную цель (время пульса 0,3 мс, 6,5 мкм) и расположите лазерную указку на zona pellucida на противоположной стороне ICM. Просверлите zona pellucida через лазерные импульсы 2х3(рисунок 2b).
  9. Аккуратно нажмите биопсии пипетка против zona pellucida и удар некоторые среды через нарушение, чтобы отделить клетки TE от его внутренней поверхности и ускорить крах бластоциста (Рисунок 2c).
  10. После того, как TE отделена(Рисунок 2d), введите через отверстие (при необходимости, сделать его шире с последним лазерным импульсом) и aspirate несколько клеток TE (в идеале 7'813,16) в биопсии пипетка с нежным всасыванием (Рисунок 2e).
  11. Слегка переместите биопсию пипетку назад при применении умеренного всасывания, чтобы растянуть целевые клетки(рисунок 2f).
  12. Направьте лазер к самой тонкой части аспирированных клеток и огонь 2'5 лазерных импульсов на стыках между клетками, чтобы отделить клетки-мишени от тела эмбриона (Рисунок 2g). Сроки лазерных импульсов и количество импульсов могут быть скорректированы в зависимости от качества бластоциста; однако, постарайтесь свести их к минимуму, чтобы избежать клеточного лиза.
  13. После отделения TE фрагмент от бластоциста(Рисунок 2h),выпустить его в тот же биопсии падение далеко от бластоциста. Это необходимо, чтобы предотвратить их от всасывается снова в биопсии пипетка (Рисунок 2i).
  14. Отпустите бластоциста из удерживающей пипетки и быстро поднимите обе пипетки, чтобы фрагмент не прилип к ним.
  15. Сфотографировать биопсии фрагмент для целей контроля качества(рисунок 3).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Если больше, чем один бластоцист должен быть биопсии в процедуре (до четырех на биопсию блюдо), изменить биопсии пипетка с новым для предотвращения перекрестного загрязнения между эмбрионами.
  16. Повторите шаги 4.1-4.13.
  17. Переместите блюдо из биопсии обратно в ламинарный капот потока.
  18. Этикетка пост-биопсии культуры блюдо с парой ID, и каждая капля с эмбрионом и цикл ID.
  19. В присутствии свидетеля, промыть бластоциста в чистой среде ЭКО, и, наконец, переместить его к его соответствующей капли пост-биопсии блюдо.
  20. Переместите постбиопсии блюдо в инкубатор в контролируемой атмосфере(37 градусов по Цельсию, 6% CO 2, 5% O2) до витрификации. Рекомендуется выполнять витрификации в течение 30 минут от процедуры биопсии, чтобы предотвратить бластоцист повторного расширения.

5. Тюбинг

ПРИМЕЧАНИЕ: Вся процедура должна проводиться в присутствии свидетеля и внутри ламинарного капота при комнатной температуре. Во время процедуры держите трубки ПЦР в стойке холодной трубки на льду(дополнительная рисунок 1).

  1. Пометьте трубки ПЦР постоянным нетоксичным маркером.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Маркировка должна осуществляться по требованию генетической лаборатории. Как правило, имя и фамилия пациента (инициалы), пара ID, эмбрион а также идентификатор цикла (например: JD 12345 1.2 для эмбриона N.1 2-го цикла, принадлежащего Джейн Доу, чья пара ID составляет 12345). Идентификатор эмбриона должен быть сообщен также буквами на теле трубки.
  2. Пометьте крышку 60 мм х 15 мм культуры блюдо (труба блюдо) с биопсии эмбрионов идентипов (Дополнительныйрисунок 1) и подготовить две 10 капель биопсии стирального раствора (Таблица материалов) в нем.
  3. Прайм 140 мкм зачистки пипетка(Дополнительный Рисунок 1) с некоторыми биопсии стиральный раствор из второй капли трубки блюдо.
  4. Поместите блюдо биопсии под стереомикроскоп, чтобы легко визуализировать фрагмент TE (ы).
  5. Аккуратно выпустите немного раствора для мытья биопсии на фрагмент TE; затем, загрузить его в зачистки пипетка.
  6. Переместите фрагмент TE на вторую каплю раствора для мытья биопсии в трубке и тщательно промойте его 2–3 раза.
  7. Перенесите фрагмент TE на дно трубки ПЦР (ранее помеченной после нее) с помощью погрузочного раствора, уделяя внимание, чтобы не касаться его стен с кончиком зачистки пипетки.
  8. Повторите процедуру от шага 5.3 до шага 5.7 для каждого фрагмента TE, обращая внимание использовать новый капилляр для каждого фрагмента TE.
  9. В конце процедуры труб, положить все ПЦР трубки в мини-центрифуги, и спина их в течение нескольких секунд.
  10. Храните образцы при -20 градусов до отгрузки их в родящееся генетическую лабораторию для тестирования.

6. Бластоцист Витрификация

  1. Vitrify рухнул бластоцисты в течение 30 минут от биопсии TE, чтобы предотвратить их повторное расширение.
  2. Пометьте пластину витрификации женскими деталями и идентификаторами бластоциктов, которые должны быть витрифицированы.
  3. Пометьте поддержку витрификации (ы) с именем и фамилией женщины, удостоверением личности пары, удостоверением эмбриона, который будет загружен на него, а также датой процедуры. Используются специальные криомаркировки, которые сохраняют свою целостность даже при очень низкой температуре (-196 градусов по Цельсию).
  4. При комнатной температуре, обойтись 0,3 мл раствора равновесия (ES) (Таблица материалов) для каждого бластоциста, который будет vitrified.
  5. В присутствии свидетеля, переместить бластоциста в ES с помощью 300 мкм зачистки пипетки.
  6. Оставьте бластоцист в ES на 13-15 мин. После первоначального сокращения объема будет наблюдаться постепенное повторное расширение.
  7. Заполните небольшую охлаждающую стойку жидким азотом (LN2) и поместите его под ламинарный капот потока.
  8. Распределить 300 л раствора витрификации (VS)(Таблицаматериалов) во второй скважине. После того, как бластоцист полностью перевыполнили, перенесите его в раствор VS на 1 мин и прополоскайте его, чтобы разбавить ES.
  9. В присутствии свидетеля, загрузить бластоциста на витрификации поддержки и заботиться об удалении избытка VS. Тонкая пленка раствора должна окружить бластоцист.
  10. Окунитесь витрификации поддержки в LN2 и переместить его энергично, с тем чтобы уменьшить риск образования пузырьков близко к образцу.
  11. Поместите защитную крышку, сохраняя при этом витрификацию поддержки погружен в LN2.
  12. В присутствии свидетеля, переместить витрификации поддержки в долгосрочной перспективе LN2 резервуар для хранения.

7. Искусственное усадка небиопсиированных blastocystss

  1. Если биопсия TE не проводится, искусственно разрушаются бластоцисты непосредственно перед витрификации(рисунок 4).
    1. Переместите культурное блюдо из инкубатора в перевернутый микроскоп и сосредоточьтесь на выбранном эмбрионе.
    2. Переключитесь на лазерную цель (предустановленный импульс: 0,3 мс, 6,5 мкм), нацеливай на zona pellucida на противоположной стороне ICM, затем направьте лазерные импульсы 1-2 на соединения между клетками TE на безопасном расстоянии от ICM. Бластоцисты должны рухнуть менее чем за 5 минут.
  2. Продолжить с витрификации рухнул бластоцист, как описано в разделе 6.

8. Передаваемые Blastocyst потепление

  1. В день ET, подготовить ET 4-колой пластины, поместив 600 л предварительно уравновешенных ЭКО культуры среды для каждой скважины. Инкубировать при 37 градусах Цельсия вконтролируемой атмосфере (5% O 2, 6% CO2),при выполнении бластоциста потепления.
  2. Пометьте согревающую тарелку с именем и фамилией женщины, удостоверением личности пары, идентификатором эмбриона, который будет нагреваться в нем.
  3. Распределите 1 мл оттаивания раствора (TS) (Таблица материалов) в ОДНО-хорошее блюдо ЭКО (Дополнительнаярисунок1) и подогрейте его до 37 градусов по Цельсию в термостате, по крайней мере 1 ч перед началом процедуры.
  4. Заполните небольшую охлаждающую поддержку LN2 и поместите ее в ламинарный капот потока в непосредственной близости от рабочей зоны.
  5. Перед началом процедуры проверьте информацию о витрификации, представленную на опоре витрификации. Все идентиматы должны соответствовать генетическому отчету, а бластоцист для согреться должен быть выбран среди передаваемых. Во время процедуры требуется свидетель.
  6. Возьмите одно-хорошо блюдо, содержащее подогрев ТС из термостата и поместите его на подогревом этапе под стереомикроскоп.
  7. Потяните за защитную крышку в LN2 с помощью щипков.
  8. Окунитесь быстро кончик витрификации поддержки в 37 КС TS.
  9. Под микроскопическим наблюдением осторожно перемещайте поддержку витрификации до тех пор, пока бластоцист не будет освобожден от кончика.
  10. Оставьте бластоциста в общей сложности 1 мин в ТС, обращая внимание, чтобы держать его в нижней части TS.
  11. При комнатной температуре выделяем 200 л раствора разбавления (DS)(Таблицаматериалов) на первом колодце пластины витрификации.
  12. Передача бластоциста в DS и поместить его в нижней части колодца, выпустив некоторые ТС на вершине его, чтобы создать своего рода градиент. Оставьте на 3 мин.
  13. Распределить 200 л стирального раствора (WS) в 2 различных скважинах (WS1 и WS2).
  14. Перенесите бластоцист на WS1 и поместите его на дно скважины, выпустив некоторые DS среды на вершине его. Затем перенесите бластоцист на WS2 и оставьте его нетронутым в течение 1 мин.
  15. Пометьте пост-разогревную ET пластину с именем женщины и фамилией, идентификатор омицы пары, ID эмбриона, который будет культивирован в нем.
  16. В присутствии свидетеля, передача разогретого бластоциста к предварительно уравновешенной культуре среды в пост-потепления ET пластины.
  17. Промыть бластоцист в первом колодце ET пластины и поместите его во второй колодец.
  18. Перенесите блюдо после потепления в инкубатор в контролируемой атмосфере (37 градусов по Цельсию, 6% CO2,5% O2) и культуры бластоциста, по крайней мере 1,5 ч, прежде чем проверить его выживание и повторное расширение.
    ПРИМЕЧАНИЕ: На рисунке 5 показаны примеры вырожденных, крио-выживших, но не вновь расширенных и крио-выживших и полностью расширенных бластоцистых.

9. Перенос эмбрионов

  1. Чтобы выполнить ET, поместите блюдо на разогретой стадии ламинарного капота потока, так что эмбрион виден под микроскопом при низком увеличении.
  2. Возьмите около 0,4 мл среды культуры ЭКО. Закрепите наконечник шприца твердо в приемном конце внутреннего катетера, а затем отпустите среду до 0,1 мл.
  3. Среда культуры аспирируется до наблюдения эмбрионов, попадающих в катетер (минимальное количество носителей: 10–15 л).
  4. Поместите катетер в пластиковый корпус и перейдите в операционную и поместите внутренний катетер во внешний направляющий выступ.
  5. Как только достиг матки, нажмите шприц поршень, чтобы освободить эмбрион (ы). Отпустите очень медленно среды, пока поршень читает 0,1 мл.
  6. Возьмите катетер обратно в лабораторию и проверьте под микроскопом, что эмбрион был перенесен.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Рисунок 6 представляет собой схему всех результатов процедуры биопсии, которая может быть принята для стандартизации протокола и контроля за работой каждого оператора. Основным процедурным результатом является сроки завершения биопсии/биопсии; основным техническим результатом является качество участка, произведенного после генетического тестирования, что может привести либо к окончательному или безрезультатного диагнозу, последний из которых требует повторной...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Только опытные опытные эмбриологи, прошедшие свой учебный период, должны выполнять как биопсию TE, так и витрификацию бластоциста. Кроме того, свидетель обязан контролировать процедуры и гарантировать эффективную прослеживаемость во время i) движения биопсии бластоциста из биопсии блюдо (Дополнительная рисунок 1) в пост-биопсии блюдо (Дополнительная рисунок 1 ), затем к пластине витрификации(Дополнительная фигура1) и, наконец, к поддержке витрификации (Дополнительная

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

AG и RM собрали данные и составили рукопись. УК проанализировала данные, составила репрезентативные результаты, выполнила статистику и пересмотрела рукопись. FMU и LR обеспечили критическое обсуждение результатов и всей рукописи.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Equipment
Электронный контроллер пипетокFisher Scientific710931
Flexipet Набор регулируемых ручекCookG18674Держатель стриппера
Gilson PipetmanGilson66003p20
IVF Электронная свидетельская системаCooperSurgical Fertility & Геномные решенияRI Witness ART Система управления
инвертированным микроскопомNikonEclipse TE2000-U
Капюшон ламинарного потокаЭКО TECHКласс А воздушный поток
Лазерный объективRISaturn 5
МикроинъекторыNikon NarishigeNT-88-V3
Мини-центрифуга для ПЦР-пробирокEppendorfCSLQSPINдля ПЦР-пробирок 0,2 мЛл
СтереомикроскопLeicaLeica M80
ТермостатPanasonicMCO-5AC-PE
Тригазовый инкубаторPanasonicMCO-5M-PE02/CO2
Расходные материалы
Biopsy пипеткаRI7-71-30FB3572030 &; м ID, квартира 35 &d; C
CryolockCryolockCL-R-CT
CSCM completeIrvine Scientific90165Питательная среда для ЭКО с добавлением
HSA Embryo Transfer CatheterCookG17934
Flexipet pipetteCookG26712140µ м стриппинг наконечник
для пипетки Flexipet pipetteCook G46020300&микро; m Наконечники для зачистки пипеток
Держатель пипеткиRI7-71-IH35/2030 &; м ID, квартира 35 &d; C
Сывороточный альбумин человекаIrvine Scientific9988
ЭКО Одна лункаСокол353653
Минеральное масло для культивирования эмбрионовIrvine Scientific9305
Модифицированная среда HTFIrvine Scientific90126Хепес-буферизованная среда
Nuclon Delta SurfaceThermofisher scientific176740Чашка для ЭКО 4- колодец тарелка с раздвижной крышкой
Primaria Чашка для клеточных культурCorning35380260 мм x 15 мм
ReproplateKitazato83016
Серологическая пипеткаFalcon357551 10мл
Стерильные одноразовые наконечникиGilson Eppendorf0030 075.021200 &; L
Набор трубокПредоставлен генетической лабораториейПЦР-пробирки (0,2 мл), загрузочный раствор, раствор для промывки биопсии
Среда для витрификацииKitazatoVT801Уравновешивающая и витрификационная
среда Согревающая средаKitazatoVT802Растворы для размораживания и разбавления
Cold Tube Штатив Biocision XTPCR96

Ссылки

  1. Glujovsky, D., Farquhar, C., Quinteiro Retamar, A. M., Alvarez Sedo, C. R., Blake, D. Cleavage stage versus blastocyst stage embryo transfer in assisted reproductive technology. Cochrane Database of Systematic Reviews. (6), CD002118(2016).
  2. Dahdouh, E. M., Balayla, J., Garcia-Velasco, J. A. Comprehensive chromosome screening improves embryo selection: a meta-analysis. Fertility and Sterility. 104 (6), 1503-1512 (2015).
  3. Cimadomo, D., et al. The Impact of Biopsy on Human Embryo Developmental Potential during Preimplantation Genetic Diagnosis. Biomedical Research International. 2016, 7193075(2016).
  4. Capalbo, A., et al. Correlation between standard blastocyst morphology, euploidy and implantation: an observational study in two centers involving 956 screened blastocysts. Human Reproduction. 29 (6), 1173-1181 (2014).
  5. Capalbo, A., et al. Implementing PGD/PGD-A in IVF clinics: considerations for the best laboratory approach and management. Journal of Assisted Reproduction and Genetics. , (2016).
  6. McArthur, S. J., Leigh, D., Marshall, J. T., de Boer, K. A., Jansen, R. P. Pregnancies and live births after trophectoderm biopsy and preimplantation genetic testing of human blastocysts. Fertility and Sterility. 84 (6), 1628-1636 (2005).
  7. Kokkali, G., et al. Birth of a healthy infant following trophectoderm biopsy from blastocysts for PGD of beta-thalassaemia major. Human Reproduction. 20 (7), 1855-1859 (2005).
  8. Rienzi, L., Ubaldi, F., Anniballo, R., Cerulo, G., Greco, E. Preincubation of human oocytes may improve fertilization and embryo quality after intracytoplasmic sperm injection. Human Reproduction. 13 (4), 1014-1019 (1998).
  9. Wale, P. L., Gardner, D. K. The effects of chemical and physical factors on mammalian embryo culture and their importance for the practice of assisted human reproduction. Human Reproduction Update. 22 (1), 2-22 (2016).
  10. Rienzi, L., et al. Oocyte, embryo and blastocyst cryopreservation in ART: systematic review and meta-analysis comparing slow-freezing versus vitrification to produce evidence for the development of global guidance. Human Reproduction Update. 23 (2), 139-155 (2017).
  11. Cimadomo, D., et al. Associations of blastocyst features, trophectoderm biopsy and other laboratory practice with post-warming behavior and implantation. Human Reproduction. , (2018).
  12. Evans, J., et al. Fresh versus frozen embryo transfer: backing clinical decisions with scientific and clinical evidence. Human Reproduction Update. 20 (6), 808-821 (2014).
  13. Capalbo, A., et al. Consistent and reproducible outcomes of blastocyst biopsy and aneuploidy screening across different biopsy practitioners: a multicentre study involving 2586 embryo biopsies. Human Reproduction. 31 (1), 199-208 (2016).
  14. Cimadomo, D., et al. Failure mode and effects analysis of witnessing protocols for ensuring traceability during PGD/PGS cycles. Reproductive Biomedicine Online. 33 (3), 360-369 (2016).
  15. Gardner, D. K., Schoolcraft, B. Towards Reproductive Certainty: Infertility and Genetics Beyond 1999. Jansen, R., Mortimer, D. , Parthenon Press. 377-388 (1999).
  16. Cimadomo, D., et al. Inconclusive chromosomal assessment after blastocyst biopsy: prevalence, causative factors and outcomes after re-biopsy and re-vitrification. A multicenter experience. Human Reproduction. , (2018).
  17. de Boer, K. A., Catt, J. W., Jansen, R. P., Leigh, D., McArthur, S. Moving to blastocyst biopsy for preimplantation genetic diagnosis and single embryo transfer at Sydney IVF. Fertility and Sterility. 82 (2), 295-298 (2004).
  18. Capalbo, A., Rienzi, L. Mosaicism between trophectoderm and inner cell mass. Fertility and Sterility. 107 (5), 1098-1106 (2017).
  19. McCoy, R. C., et al. Evidence of Selection against Complex Mitotic-Origin Aneuploidy during Preimplantation Development. PLoS Genetics. 11 (10), e1005601(2015).
  20. Scott, R. T., Upham, K. M., Forman, E. J., Zhao, T., Treff, N. R. Cleavage-stage biopsy significantly impairs human embryonic implantation potential while blastocyst biopsy does not: a randomized and paired clinical trial. Fertility and Sterility. 100 (3), 624-630 (2013).
  21. Lee, H., et al. Live births after transfer of rebiopsy and revitrification of blastocyst that had “no diagnosis” following trophectoderm biopsy. Fertility and Sterility. 106 (3), e164(2016).
  22. Capalbo, A., et al. Diagnostic efficacy of blastocoel fluid and spent media as sources of DNA for preimplantation genetic testing in standard clinical conditions. Fertility and Sterility. 110 (5), 870-879 (2018).
  23. Hammond, E. R., Shelling, A. N., Cree, L. M. Nuclear and mitochondrial DNA in blastocoele fluid and embryo culture medium: evidence and potential clinical use. Human Reproduction. 31 (8), 1653-1661 (2016).
  24. Vera-Rodriguez, M., et al. Origin and composition of cell-free DNA in spent medium from human embryo culture during preimplantation development. Human Reproduction. 33 (4), 745-756 (2018).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи