Здесь мы описываем пошаговый протокол хирургического деформирования аорты в хорошо зарекомендовавшей себя мышиной модели сужения аорты. Эта процедура не только позволяет изучить механизмы, лежащие в основе обратного ремоделирования и регрессии гипертрофии левого желудочка, но и протестировать новые терапевтические варианты, которые могут ускорить восстановление миокарда.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Изучение обратного ремоделирования левого желудочка путем дебандинга аорты у грызунов
* These authors contributed equally
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Чтобы лучше понять обратное ремоделирование левого желудочка (LV), мы описываем модель грызунов, в которой после ремоделирования ЛЖ, вызванного полосаткой аорты, мыши подвергаются ОР при удалении сужения аорты. В этой статье мы описываем пошаговую процедуру для выполнения минимально инвазивной хирургической деформирования аорты у мышей. Эхокардиография впоследствии использовалась для оценки степени гипертрофии и дисфункции сердца при ремоделировании ЛЖ и ОР и для определения наилучших сроков деформирования аорты. В конце протокола была проведена терминальная гемодинамическая оценка сердечной функции, а также собраны образцы для гистологических исследований. Мы показали, что дебандинг связан с хирургической выживаемостью 70-80%. Более того, через две недели после дебандирования значительное снижение желудочковой после нагрузки запускает регрессию желудочковой гипертрофии (~20%) и фиброз (~26%), восстановление диастолической дисфункции, оцениваемой нормализацией наполнения левого желудочка и концевого диастолического давления (E/e' и LVEDP). Деформирование аорты является полезной экспериментальной моделью для изучения РН ЛЖ у грызунов. Степень восстановления миокарда варьируется между субъектами, поэтому имитирует разнообразие ОР, которое происходит в клиническом контексте, например, замена аортального клапана. Мы пришли к выводу, что модель полосирования/де-де-полосатки аорты представляет собой ценный инструмент для разгадывания новых идей о механизмах ОР, а именно регрессии сердечной гипертрофии и восстановлении диастолической дисфункции.
Введение
Сужение поперечной или восходящей аорты у мыши является широко используемой экспериментальной моделью для гипертрофии сердца, вызванной перегрузкой давления, диастолической и систолической дисфункции и сердечной недостаточности1,2,3,4. Сужение аорты первоначально приводит к компенсированной концентрической гипертрофии левого желудочка (LV) для нормализации напряжениястенки 1. Однако при определенных обстоятельствах, таких как длительная сердечная перегрузка, эта гипертрофия недостаточна для уменьшения напряжения стенк....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Все эксперименты на животных соответствуют Руководству по уходу за лабораторными животными и их использованию (публикация NIH No 85–23, пересмотрено в 2011 году) и португальскому закону о благополучии животных (DL 129/92, DL 197/96; С. 1131/97). Компетентные местные органы власти утвердили этот экспериментальный протокол (018833). Семинедельные самцы мышей C57B1/J6 содержались в соответствующих клетках, с регулярной средой 12/12 ч светло-темного цикла, температурой 22 °C и влажностью 60% с доступом к воде и стандартной диетой ad libitum.
1. Подготовка хирургического поля
- Продезинфицируйте место операции 70% спиртом и поместите одн....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Послеоперационное и позднее выживание
Периоперационная выживаемость при процедуре бандажировки составляет 80%, а смертность в течение первого месяца обычно составляет <20%. Как упоминалось ранее, успех операции по дебандированию сильно зависит от того, насколько инвазивной была предыдущая операция. После кривой обучения уровень смертности во время процедур дебандинга составляет около 25%. Для этого смертность приходится в основном на смертельные случаи во время хирургической процедуры, включая разр.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Предложенная здесь модель имитирует процесс ремоделирования РН и РР после полосирования и дебандирования аорты соответственно. Таким образом, он представляет собой отличную экспериментальную модель для продвижения наших знаний о молекулярных механизмах, участвующих в неблагоприятном ремоделировании ЛЖ, и для тестирования новых терапевтических стратегий, способных вызвать восстановление миокарда у этих пациентов. В этом протоколе подробно описываются шаги по созданию животной модели аортального бандажа и де-демандирования.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
У авторов нет конфликта интересов.
Благодарности
Авторы благодарят Португальский фонд науки и техники (FCT), Европейский союз, Quadro de Referência Estratégico Nacional (QREN), Fundo Europeu de Desenvolvimento Regional (FEDER) и Programa Operacional Factores de Competitividade (COMPETE) за финансирование исследовательского подразделения UNIC (UID/IC/00051/2013). Этот проект поддерживается FEDER через COMPETE 2020 – Programa Operacional Competitividade E Internacionalização (POCI), проект DOCNET (NORTE-01-0145-FEDER-000003), поддерживаемый региональной операционной программой Norte Portugal (NORTE 2020), в рамках соглашения о партнерстве с Португалией 2020 года, через Европейский фонд регионального развития (ERDF), п....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Абсорбционные копья | F.S.T | 18105-03 | Для абсорбции жидкостей во время операции |
| Лезвия | F.S.T | 10011-00 | Для выполнения разреза кожи |
| Бупренорфин | Buprelief | Препарат для обезболивания | |
| Catutery | F.S.T | 18010-00 | Для предотвращения обескровливания |
| Советы Catutery | F.S.T | 18010-01 | Для профилактики обескровливание |
| ватный тампон | Johnson's | Для впитывания жидкости во время операции | |
| Крем для депиляции Veet | Для обезвреживания животного | ||
| Одноразовый чехол для операционного стола | MEDKINE | DYND4030SB | Для покрытия операционной зоны |
| Эхо-зонд | Siemens | Sequoia 15L8W | Регистрация ультразвукового сигнала |
| Эхокардиограф | Siemens | Acuson Sequoia C512 | Регистрация ультразвукового сигнала |
| Концессиональный CO<суб>2 монитор | Kent Scientific | CapnoStat | Для контроля насыщения выдоха |
| Щипцы/пинцет | F.S.T | 11255-20 | Для рассечения тканей и аорты |
| Щипцы/пинцет | F.S.T | 11272-30 | Для рассечения тканей и аорты |
| Щипцы/пинцет | F.S.T | 11151-10 | Для рассечения тканей и аорты |
| Щипцы/пинцет | F.S.T | 11152-10 | Для рассечения тканей и аорты |
| Газовая система | Penlon Sigma Delta | Для анестезии и искусственной вентиляции | |
| легких Гемостатики | F.S.T | 13010-12 | Для наложения швов до затягивания аорты |
| Гемостатики | F.S.T | 13011-12 | Для удержания шва перед затягиванием аорты |
| Вспомогательные средства для лигирования | F.S.T | 18062-12 | Для наложения шва вокруг аорты |
| Магнитный ретрактор | F.S.T | 18200-20 | Для удержания животного в правильном положении |
| Иглодержатель | F.S.T | 12503-15 | Для наложения швов на животное |
| Игла 26G | B-BRAUN | Для использования в качестве формы с диаметром сужения аорты | |
| Кислород | Воздушный Ликид | Для анестезии и искусственной вентиляции | |
| Полипропиленовый шов | Vycril | W8304/W8597 | Для наложения швов на животное и для сужения |
| Повидон-йод раствор | Betadine® | Кожный антисептик | |
| PowerLab | Millar instruments | ML880 PV петля PowerLab 16/30 | PV Аквизиция |
| Пульсоксиметр | Kent Scientific | MouseStat | Для контроля частоты сердечных сокращений и сатурации |
| крови PVAN программное обеспечение Millar | Instruments | Для анализа гемодинамических данных | |
| PV петля катетера | Millar instruments | SPR-1035. 1.4 F | PV петля Сигнал Ретрактор Aquisition |
| F.S.T | 17000-01 | Для лучшего обзора аорты | |
| Ручка скальпета | F.S.T | 10003-12 | Для выполнения разреза кожи |
| Ножницы | F.S.T | 15070-08 | Для разрезания шва при операции по растяжению |
| Ножницы | F.S.T | 14084-09 | Для разреза другого материала во время операции, например, шва, papper |
| Sevoflurane | Baxter | 533-CA2L9117 | |
| Модуль контроля температуры | Kent Scientific | RightTemp | Для контроля температуры тела животного |
| Вентилятор | Kent Scientific | PhysioSuite | Для вентиляции животного |
| Водяная баня | Thermo Scientific™ | TSGP02 | Для поддержания температуры воды, достаточной для нагрева петли P-V катеров |
Ссылки
- Arany, Z., et al. Transverse aortic constriction leads to accelerated heart failure in mice lacking PPAR-gamma coactivator 1alpha. Proceedings of the National Academy of Science U. S. A. 103 (26), 10086-10091 (2006).
- Tavakoli, R., Nemska, S., Jamshidi, P., Gassmann, M., Frossard, N.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
