Методическая статья

Микроинъекционная система комбинированных инфузийных препаратов и электрофизиологии

DOI:

10.3791/60365

⸱

13 ноября 2019 г.

 ,  ,  , 
1Department of Ophthalmology and Visual Sciences, University of Utah, 2Department of Biomedical Engineering, University of Utah, 3Department of Electrical Engineering and Computer Science, University of California, Irvine, 4Department of Biomedical Engineering, University of California, Irvine

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы представляем микроинъекционную систему, предназначенную для электрофизиологии и вспомогательную доставку экспериментальных зондов (т.е. наносенсоров, микроэлектродов) с дополнительным истоядерным инфузией. Широко доступные микрофлюидные компоненты соединены с канюлей, содержащей зонд. Пошагонный протокол для микроинъекционной конструкции включен, с результатами во время инфузии мусцимола в коре макаки.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эта микроинъекционная система предназначена для инфузии, электрофизиологии, а также доставки и извлечения экспериментальных зондов, таких как микроэлектроды и наносенсоры, оптимизированные для повторного использования бодрствующих, ведя себя животными. Микроинъекционная система может быть настроена для нескольких целей: (1) простое расположение канюли для размещения экспериментального зонда, который в противном случае был бы слишком хрупким, чтобы проникнуть в dura mater, (2) микрофлюидный вливание препарата, либо независимо или в сочетании с канюлей, содержащей экспериментальный зонд (т.е. микроэлектрод, наносенсор). В этом протоколе мы объясняем шаг за шагом строительство микроинъекционных, его связь с микрофлюидными компонентами, а также протокол для использования системы in vivo. Микрофлюидные компоненты этой системы позволяют доставлять объемы в нанолитровой шкале с минимальным ими повреждениями. Вливание препарата может быть выполнено самостоятельно или одновременно с экспериментальными зондами, такими как микроэлектроды или наносенсоры в бодрствуя, ведя себя животное. Применение этой системы варьируется от измерения воздействия препарата на корковую электрическую активность и поведение до понимания функции конкретной области коры головного мозга в контексте поведенческой производительности на основе измерений зонда или наносенсора. Чтобы продемонстрировать некоторые возможности этой системы, мы представляем пример инфузии мусцимола для обратимой инактивации лобного глазного поля (FEF) в резус макаке во время рабочей задачи памяти.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Электрофизиология и методы инъекций наркотиков широко используются в нейробиологии для изучения нейронной активности и поведения, in vivo, у грызунов и приматов. За последние три десятилетия, усовершенствования ранних моделей инъекций позволило более точной и менее инвазивной техники, а также одновременной записи и инъекции наркотиков в конкретных участках мозга1,2,3. Для приматов, в частности, способность точно доставлять небольшие объемы с минимальным повреждением тканей имеет решающее значение, если метод должен быть использован для изучения передовых когнитивных функций, которые требуют высококвалифицированных животных. Последние достижения включают хронические электрофизиологические и химические измерения в сочетании со стимуляцией с использованием имплантированных зондов4,а комбинированная запись и микрофлюидная доставка лекарств недавно были опробованы у грызунов5. Описанная здесь система инъекционных упругов позволяет электрофизиологическую запись, стимуляцию и точную доставку лекарств, и она уже успешно внедрена в нескольких лабораториях приматов6,7,8.

Растущая доступность деликатных, специализированных датчиков, таких как наносенсоры9,10 с нейронауки приложений, требует надежного метода для получения зонда через dura mater без повреждения хрупких наноразмерных устройств или микроэлектродных советов.

Мы разработали систему микроинъекционных, которая преодолевает технические проблемы, связанные с объединением этих методов с использованием легкодоступных, недорогих компонентов, и облегчает две основные функции: (i) Возможность размещения хрупкого экспериментального зонда, например микроэлектрод или наносенсор, через dura mater и нервную ткань, защищены от любых повреждений. Эта функциональность позволяет размещение экспериментального зонда в целевых местах, доставлены с помощью канюли в качестве руководства через нервную ткань. ii) способность использовать микроэлектрод для проведения экспериментов, сочетающих электрофизиологию и электрическую стимуляцию с инъекцией наркотиков.

Наша система использует направляющий трубку, чтобы проникнуть в дюру, наряду с канюлей, которая функционирует как для доставки лекарств (при использовании системы для микроинфузии) и обеспечивает дополнительную защиту для микроэлектрода или наносенсора (как при прохождении через дюру и нервной ткани). Эта система может быть легко построена с широко коммерчески доступных компонентов, которые являются недорогими и легко найти. Мы минимизируем урон проникновения, используя канюли малого диаметра (внешний диаметр OD - 235 мкм, идентификатор внутреннего диаметра - 108 мкм).

Здесь мы представляем пошаговые инструкции по микроинъекционной конструкции и конфигурации микрофлюидной системы. Мы объясняем шаги, необходимые для использования микроинъекционных, независимо или в сочетании с микрофлюидной системы для инъекций наркотиков. Аналогичный подход может быть применен с любым хрупким экспериментальным зондом, таким как наносенсор9,10. Зонд может быть фронт- или заднее-загружено в канюльу (в зависимости от конструкции), и будет защищен от повреждений при проникновении в дюру и нервной ткани. Мы приводим в пример данные эксперимента in vivo с нечеловеческими приматами, в котором мы использовали микроэлектрод вольфрама для выполнения электрической стимуляции, а затем вводили мусцимол в лобное глазное поле (FEF), в то время как животное выполняло задачу по извлечению памяти саккад (MGS).

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Экспериментальные процедуры последовали За Национальным и национальным руководством по здравоохранению по уходу и использованию лабораторных животных и Руководящими принципами и политикой Общества неврологии. Протоколы экспериментальных и поведенческих процедур были одобрены Институциональным комитетом по уходу и использованию животных Университета штата

1. Строительство microinjectrode для стимуляции и записи(Рисунок 1a)

  1. Измерьте длину канюли и зонда (в этом примере наносенсор). Зонд должен быть длиннее канюли по длине, чтобы выступать от кончика канюли (в зависимости от конструкции зонда) плюс примерно 2 см.
  2. Под увеличителем или микроскопом (увеличение в 10 раз) загрузите зонд в канюльу; по возможности задняя загрузка предпочтительнее для защиты кончика зонда.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Этот шаг, выполняемый вручную, является сложной задачей. Рекомендуется практиковать с микроэлектродом под увеличительным стеклом, прежде чем пытаться с фактическим экспериментальным зондом.
  3. Передайте канюлу (содержащую зонд) через верхний ферруле, Т-соединение и нижнюю ферруля.
    1. Если зонд является всего лишь одним проводом без каких-либо вложений, загрузите его в канулу и вставьте сборку в Т-образец из нижней ферруле. Верхняя часть канюли (плоской стороны) должна быть расположена в середине Т-соединения, в нижней части, но не верхней ferrule. Экспериментальный зонд или биосенсор должны выступать над верхней верхней ферруле.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Изготовленные на заказ феррулетакже также могут быть изготовлены путем бурения отверстия в прятки ferrule с использованием микро-сверло битов, размер отверстия, основанного на диаметре, необходимом для ужесточения канюли к Т-соединению.
  4. Используйте ключ от ферруа, чтобы затянуть ферруты на верхней и нижней части Т-соединения. Не затягивайте. Небольшой кусок трубки могут быть добавлены для укрепления поддержки электродов в верхней ferrule.
  5. Солдер золото прижимает к каждому из зонд терминалов (сигнал, земля и т.д.), в соответствии с спецификациями зонда.
  6. Отрегулируйте относительное положение зонда и канюли. Измерьте расстояние, которое зонд выступает от канюли под увеличением, и отрегулируйте вручную от верхнего конца (зонд может свободно скользить в пределах ferrules).
  7. Добавьте эпоксидный клей между золотыми штырями и верхним феррулем, чтобы прикрепить зонд к ферруле.
  8. Отвиндить верхний феррул, чтобы утянуть зонд внутри канюли. Визуально подтвердите, что зонд полностью находится в канюле под увеличением.
  9. Прикрепите инжерод к микроприводу.

2. Строительство микроинъекционного для вливания наркотиков(рисунок 1b)

  1. Прикрепите «нескрепитемый» или плоский конец канюли к нижней части Т-соединения с помощью ферруле. Используйте ключ от ферруа, чтобы затянуть феррул.
  2. Прикрепите небольшой кусочек капиллярной трубки (1,5 см) к верхней части Т-соединения, пройдя его через стандартный ферруле. Затяните с ферруечным гаечным ключом.
  3. Загружайте микроэлектрод через капиллярные трубки, Т-соединение, канюли и соответствующие феррулесы.
  4. Убедитесь, что задний конец электрода выступает менее чем на 1 см от задней части капиллярной трубки, а кончик электрода выступает из канюли на нужном расстоянии на нижней стороне. Положение электрода можно вручную регулировать с топ-энда.
  5. Приспойка золотой штырь к микроэлектродного терминала.
  6. Добавьте эпоксидный клей между золотым штырем и верхним феррулем, чтобы прикрепить микроэлектрод к ферруле.
  7. Отвиндить верхний феррул, чтобы втянуть зонд внутрь канюли. Визуально подтвердите, что микроэлектрод полностью убран в канюлу.

3. Строительство микрофлюидной цепи(рисунок 2)

  1. Поместите доску на стабильную поверхность. Поместите два трехсторонних клапана параллельно самым длинным сторонам доски, около 6 дюйма, кроме одного порта (тот, который всегда открыт) лицом друг к другу. Используйте винты, чтобы зафиксировать клапаны на доске.
  2. Поместите линейку рядом с клапанами (для измерения и отслеживания движения жидкостей внутри капиллярных труб).
  3. Загрузите смесь масла с низкой вязкостью и пищевой краситель (маркер) в обойный шприц и поместите в насос Маркера. Вырежьте один кусок капиллярных труб и используйте стандартные феррулеи и разъемы Luer-lock для подключения шприца к одному из портов на входе клапана. Это "линия маркера".
  4. Отрежьте короткий кусок капиллярных труб для "линии правителя". Используйте стандартные феррулеты для затягивания к облицовочные порты клапанов.
  5. Отрежьте 2 более длинних части тюбингка капилляра для того чтобы соединить клапан выхода к microinjectrode, и соединить насос снадобья к вхозатому клапану (использовать стандартные ferrules).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Длина этих двух линий зависит от экспериментальной установки, одна должна быть достаточно долго, чтобы достичь от инфузионного аппарата к животному, а другой от насоса наркотиков ввода клапана. Используйте расщепуляющий камень, чтобы вырезать капиллярные трубки.

4. Установка микроинъекционных на микропривод(рисунок 3)

  1. Убедитесь, что микроэлектрод / экспериментальный зонд убирается в канюле до монтажа.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Направляя трубка должна быть в положении в микроприводе.
  2. Прикрепите специально изготовленный адаптер к микроинъекционному роду.
  3. Топ-загрузить микроинъекциончерезь через направляющий трубку и закрепить его в адаптер с помощью винтов.
  4. Измерьте положение микропривода (глубину), при котором микроинъекционный выступ выступает из направляющей трубки, а затем втягивайте его на 1 см, чтобы подготовиться к вставке.
  5. Для микроинфузионных экспериментов соедините «линию мозга» с неиспользованным Открытием Т-соединения микроинъекционного родоначальника. Используйте стандартный феррулей и затяните с ферруечным гаечным ключом.

5. Промывка и подготовка микрофлюидной системы

  1. Расположите микропривод с микроинъекционом над мусорным стаканом.
  2. Нагрузка хлоргексидина (например, нольвазан; растворяется при 20 г/л) в 1 мл герметичный шприц и поместите его в насос препарата. Поверните направление потока клапанов таким образом, что жидкость идет от насоса наркотиков через клапан к линии клапана и из "линии мозга".
  3. Промыть схему хлоргексидином, используя низкую скорость потока (50-200 л/мин) в течение как минимум 10 мин. Повторите шаги 5,2 через 5,3 со стерильным сольнием, а затем воздухом.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Важно, чтобы проверить на наличие утечек на данном этапе. Аккуратно применять без ворса салфетки на перекрестках, чтобы помочь выявить любые утечки жидкости через феррулей.
  4. Загрузите препарат в 500 л герметичный шприц, сжать воздух, а затем поместить в насос наркотиков. Поток на 50 л /мин, пока несколько капель течет из микроинъекционных.
  5. Замочите направляющей трубки в хлоргексидин (растворяется при 20 г/л) в течение 15 мин.
  6. Поверните направление выходного клапана к «линии промывки». Предварительный насос Маркер до ясного края цвета и масла наблюдается на линии линейки. Убедитесь, что всегда есть масло между препаратом и цветом, чтобы не смешивать два водорастворимых материалов и потерять острый край между ними. Отметьте исходное положение этой линии масла/красителя (с куском ленты или маркером).
  7. Поверните направление выходного клапана к линии мозга.

6. Выполнение записи или инфузионный эксперимент

ПРИМЕЧАНИЕ: Шаги обработки животных будут варьироваться в зависимости от лаборатории и эксперимента. Следующие шаги должны быть выполнены после необходимых хирургических настройки и подготовки была выполнена, чтобы разоблачить dura. После проведения эксперимента все необходимые постпроцедурные шаги должны быть выполнены в соответствии с утвержденными институционально протоколами.

  1. Прикрепите микропривод к камере звукозаписи. Опустите направляющий трубку, чтобы проникнуть в дюру.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Направляя трубка не должна проникать дальше, чем дюра, чтобы избежать повреждения коры.
  2. Нижняя микроинъекция примерно до 2 мм над местом для записи / инъекции в мозг.
  3. Затяните верхний ферруле (выступающий микроэлектрод/биосенсор) и подключите золотые булавки к системе записи. Продолжайте продвигать микроинъекционные роды к целевому объекту.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Не забудьте включить расстояние, которое микроэлектрод выходит за пределы канюли в расчетах.
  4. Для инфузионных экспериментов используйте ручной насос микросиринга для перемещения колонки масла на 1 см каждые 3 мин (60 нл/мин). Как только желаемый объем был настоян, переключите выходный клапан к линии промывки.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Объем влитого будет варьироваться в зависимости от модели видов и области мозга целевых. Более быстрые скорости потока могут повредить нервную ткань.
  5. Когда эксперименты будут завершены, убирать микроинъекционные в направляющей трубке (оставьте зонд торчал). Затем удалите микропривод для промывки. Промыть микрофлюидную систему, описанную в шагах 5.1-5.5. для подготовки к повторному использованию.
    ПРИМЕЧАНИЕ: По нашему опыту, микроинъекционные будет длиться в течение нескольких применений, если надлежащий уход принимается. Качество электрофизиологической записи падает быстрее, чем возможность инъекции.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы выполнили инъекции агониста ГАМК (muscimol) для обратимой инактивации лобного поля глаза (FEF), в то время как животное выполнило памяти руководствоваться saccade задача11. В этой задаче представлены фиксации животного и периферическая визуальная цель. Зверь поддерживает фиксацию, вспоминая целевое местоположение, и как только точка фиксации исчезает, выполняет саккадное движение глаз к запоминаемому месту, чтобы получить награду. Микроинъекция была построена в соответствии с инструкциями на рисунке 1b. Объем инфузии для примерного эксперимента составил 850 нл. Поведенческая производительность на память руководствоваться саккад (MGS) задача в различных местах и времени по отношению к муцимол инфузии показано на рисунке 4. Наибольший дефицит производительности наблюдался на 2 до 3 ч после вливания.

figure-results-1
Рисунок 1: Шаг за шагом изготовление микроинъекционных. ()Конфигурация для использования независимо от микрофлюидной системы. Каннула и зонд измеряются для того, чтобы подтвердить, что кончик зонда может быть торчал на нужной длине (например, 150 мкм). Зонд загружается в канюлу. Канюля проходит через Т-перекресток и крепится на нижней стороне, с плоским концом в середине Т-соединения; задний конец зонда продолжается через верхний ферру. Микроинъекция завершается пайки золотые булавки на каждом из зонда терминалов и добавление клея между ними и верхней ferrule для стабильности. Подключение к системе приобретения зависит от конструкции зонда. В этом примере наш зонд представляет собой наносенсор с тремя проводами. (b)Конфигурация для использования с микрофлюидной системой. Для того чтобы соединить microinjectrode к микрофлюидной системе, часть капиллярных труб используется для верхней стороны T-соединения. Зонд может быть спереди или сзади загружен. Микрофлюидная линия затем подключена к третьему открытию Т-соединения. В этом примере мы использовали микроэлектрод. Смотрите увеличенное изображение кончика канюли, в которой микроэлектрод был торчал, затягивая верхний ферру. Ознакомьтесь со таблицей материалов для списка элементов, используемых в строительстве. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.

figure-results-2
Рисунок 2: Микрофлюидическая система. Конфигурация с двумя клапанами позволяет контролировать направление потока в направлении микроинъекций или к линии промывки для устранения неполадок. Схема опирается на два 3-портовых клапанов, соединенных с использованием капиллярных труб и стандартных феррулей. Газонепроницаемые шприцы используются для переноски и введения инфузионного препарата и маркера. Программируемый шприц-насос позволяет автоматически промывки системы и загрузки препарата. Ручной насос микросиринга позволяет осуществлять контролируемые инъекции и визуализацию. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.

figure-results-3
Рисунок 3: Монтаж микроинъекционных на гидравлический микропривод с и без впрыска. Шаг 4.1: Адаптер на заказ позволяет прикреплять микроинъекционные роды к микроприводу. Один винт прикрепляет адаптер к микроприводу; два винта обеспечивают микроинъекционные в адаптер. Верхний феррул должен быть отвинчен по крайней мере 2 оборота для того, чтобы защитить кончик микроэлектрода / экспериментального зонда при загрузке микроинъекционного в направляющей трубке микропривода. Шаг 4.3: Вставьте микроинъекцион в направляющей трубке сверху. Шаг 4.4: При выполнении микроинфузии, подключите линию препарата к третьему Т-соединению открытия с помощью пластика ferrule. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.

figure-results-4
Рисунок 4: Память руководствоваться саккад задачи во время мусцимола инфузии в FEF. ()Микроинъекция была помещена в правом полушарии, области FEF. (b)Поведенческая производительность во время задачи MGS, в которой восемь целей размещаются периферийно. Мы побежали 4 блоков задачи MGS, до и в три раза после инъекции. Полярный сюжет показывает производительность (эксцентриситет) в каждое из этих времен (цвет), для разных локаций относительно точки фиксации (угол на полярном участке). Производительность явно снизилась в левом визуальном гемифилде 2 ч после инъекции (синий след, левая половина полярного участка). (c)Saccade следы для 8 периферических мест памяти до (слева) и после инъекции мусцимола в FEF (справа, 1 и 3 ч после вливания). Точность саккад в левом визуальном гемифилде (левая половина полярных участков) снизилась после инъекции мусцимола. Масштабирование в градусах визуального угла (dva). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В настоящее время имеется несколько методов для одновременной доставки лекарств и электрофизиологии. Наша система предназначена для того, чтобы иметь гибкость, которая будет использоваться для записи независимо или в сочетании с инъекцией наркотиков, и иметь возможность точно разместить любой хрупкий экспериментальный зонд, такой как наносенсор или микроэлектрод, защищенный от любых повреждений, через матер дюра и нервную ткань. Система позволяет точно контролировать объемы вливания препарата невооруженным глазом (17 нЛ точность показана в предыдущих исследованиях в нашей лаборатории3).

Существуют более специализированные системы для инъекций давления с меньшими диаметрами12. Эти системы позволяют создать несколько сайтов звукозаписи, однако сложная настройка программного и аппаратного обеспечения, необходимого для управления системой, сопряжена с более высокими издержками для каждого из компонентов и имеет меньшую гибкость в взаимодействии с экспериментальными зондами, которые еще не коммерциализированы в больших масштабах. Кроме того, наш инъекционный имплантат не требует хронического имплантата и обеспечивает большую степень гибкости: совместим с биосенсорами для измерения химических и электрофизиологических сигналов, и способен вливать наркотики, а также, с потенциалом для измерения влияния локализованных вливаний наркотиков на эти реакции.

Конструкция позволяет экспериментальному зонду выступать после проникновения dura, чтобы избежать повреждения конструкции зонда. Эта функция позволяет многофункциональности устройства, проникать в дюру, не рискуя повредить любой экспериментальный зонд, такие как нанометровые наносенсоры10. Тем не менее, существует ограничение длины, которое может быть торчало, ограничено числом поворотов ферруле, ограниченный 1 мм для стандартных феррулей. Существует минимальное повреждение тканей из-за небольшого диаметра канюли (228 мкм).

В эксперименте мы показали, система была использована для выполнения контролируемой доставки muscimol для обратимой инактивации FEF, одновременно с электрической стимуляции или внеклеточной записи (один нейрон, локальный потенциал поля) с использованием микроэлектрод. Этот эксперимент в FEF требует микростимуляции FEF для подтверждения векторов саккад до инактивации, и препарат был влился для изучения рабочей памяти во время обратимой инактивации FEF. Маловероятно, что запись из одного и того же изолированного одиночного нейрона может быть сохранена до и после инъекции препарата; однако мы смогли зафиксировать локальные полевые потенциалы до и после вливания. Здесь мы показываем эксперимент, сочетающий инъекцию, запись и электрическую стимуляцию.

Как только он настроен, метод является очень надежным и надежным. Однако, из-за осадков малых молекул (например, соли) в небольшой трубе и портах, после каждого эксперимента требуется тщательная промывка, чтобы микрофлюитика не допускать препятствий и утечек. Благодаря простоте всей цепи, каждый компонент может быть заменен самостоятельно для легкого устранения неполадок.

Хотя метод был продемонстрирован в области FEF в не-человеческого примата, принцип может быть применен к любой другой области мозга, где некоторые комбинации электрической стимуляции, записи и инъекции наркотиков желательно, в видах размер грызунов или больше.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эта работа была поддержана финансированием со стороны Национальных институтов здравоохранения (NIH), грантов EY026924 и EY014800 (b.N.), неограниченный грант от исследований по предотвращению слепоты, Inc., Нью-йорк, Нью-йорк на кафедре офтальмологии и визуальных наук, Университет и стартовые фонды, предоставленные R.E. Инженерной школой Генри Самуили и кафедрой электротехники Калифорнийского университета в Ирвине. Этот метод основан на предыдущем докладе аналогичного метода, разработанного в лаборатории доктора Тирин Мур, опубликованном в Noudoost и Moore 2011, Journal of Neuroscience Methods. Авторы благодарят доктора Келси Кларк за ее комментарии к рукописи.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
3-линейные ручные клапаныLabSmithManual 3-port Selector Valve (MV201-C360)https://products.labsmith.com/mv201-manual-3-port-selector-valve/#. XNYEC9NKh26
CanjulaeVita Needle Company304 Трубка из нержавеющей стали, внешний диаметр 228μ m, внутренний диаметр 165μ mТаблица датчиков трубок Vita Needle Master
Раскалывающий каменьMolexCbreaking stone 1" x 1" (деталь No 1068680064)Настоятельно рекомендуется следовать методу расщепления капиллярных трубок: https://www.cmscientific.com/info_sheets/cleaving_procedure.pdf
Clorhexidine diacetateWalmartДезинфицирующее средство Nolvasan solution (AAP311)Используется для промывки микрофлюидных контуров, растворяется при 20 г/л
Customadapter Customprovider-Custommachined adapter для подключения микроинжектора к гидравлическому микроприводу
ДрайверLabSmithT7 TORX для установки винтов макетной платы (LS-TORX Driver)https://products.labsmith.com/ls-torx-driver/#. XO8sndNKh25
Эпоксидный клейLabSmithДвухкомпонентный высокопрочный эпоксидный клей (LS-EPOXY) для склеивания металла и пластикаhttps://products.labsmith.com/ls-epoxy-12ml-epoxy-adhesive/#. XO8t89NKh24
FerruleLabSmithЦельный фитинг (C360-100) для подключения капилляров, сквозное отверстие размером 360&мкм; m OD капилляр<a href="https://products.labsmith.com/one-piece-fitting#. XNYEaNNKh24">https://products.labsmith.com/one-piece-fitting#. XNYEaNNKh24Ferrule
PlugLabSmithOne-Piece Plug (C360-101) для использования в любом порту -C360https://products.labsmith.com/one-piece-fitting-plug/#. XNYFl9NKh24
Накидной ключLabSmith1/8" шестигранный ключ для установки цельных фитингов и заглушек (LS-HEX 1/8" шестигранный ключ)https://products.labsmith.com/ls-hex-1-8-hex-wrench/#. XO8sqtNKh24
Газоплотный шприцHamilton Company500μ L газонепроницаемый шприц модель 1750 (81220) и газоплотный шприц объемом 1 мл модель 1001 (81320)https://www.hamiltoncompany.com/laboratory-products/syringes/81220#top
Золотые штифтыAim-CambridgeMale позолоченный обжимной соединитель (40-9856M)https://www.masterelectronics.com/aim-cambridge-cinch-connectivity-solutions/409856m-10109145.html
безворсовые салфеткиKimberly Clark KimtechScience Kimwipes Delicate Taskбезворсовые салфетки, используемые для выявления утечек в системе
Жидкий пищевой красительMcCormick & Co. Жидкое пищевое краситель на водной основе, черное жидкое пищевое краситель (52100581873)https://www.mccormick.com/spices-and-flavors/extracts-and-food-colors/food-colors/black-food-color
Масло низкой вязкостиClearco Products Co.Чистая силиконовая жидкость октаметилтрисилоксан с вязкостью 1cSt при 25°С; C (PSF-1cSt)http://www.clearcoproducts.com/pure-silicone-super-low-viscosity.html
Luer-Lock соединительLabSmithLuer-Lock Adapter (C360-300), гнездовой штуцер для подключения шприца Luer Lock к 360μ m капиллярная трубкаhttps://products.labsmith.com/luer-lock-adapter-assembly#. XO81MtNKh24Микро
сверлоGraingerMicro сверло, 0.23мм (414H85)https://www.grainger.com/category/machining/drilling-and-holemaking/drill-bits/machining-drill-bits/micro-drill-bits
МикроэлектродFHCметалл микроэлектрод, вольфрам с эпоксидной изоляциейhttps://www.fh-co.com/category/metal-microelectrodes
Масляный гидравлический микроманипуляторNarishige GroupМасляный гидравлический микроманипулятор с прикрепленной направляющей трубкой (MO-96)http:// products.narishige-group.com/group1/MO-96/chronic/english.html
Капиллярная трубка PolymicroMolexPolymicro Гибкая капиллярная трубка из плавленого диоксида кремния (TSP150375), внешний диаметр 375&микро; м, внутренний диаметр 150&микро; mКапиллярная трубка Polymicro
Программируемый шприцевой насосСтандартный аппарат HarvardInuse/Withdraw Pump, программируемый (70-2213)https:// www.harvardapparatus.com/standard-infuse-withdraw-pump-11-pico-plus-elite-programmable-syringe-pump.html
RulerEmpireНержавеющая сталь 6" Жесткая линейка (27303)http://www.empirelevel.com/rulers.php
Набор винтовLabSmithНабор крепежных винтов клапана (LS-SCREWS .25), винты для формирования резьбы (2-28 x 1/4") до Установите клапаны на макетную платуhttps://products.labsmith.com/ls-screws-25#. XO8widNKh24
Стандартная макетная платаLabSmith4" x 6" платформа (LS600), с расстоянием между отверстиями 0,25" для монтажа жидкостного контураhttps://products.labsmith.com/standard-breadboard/#. XO8xDdNKh24
Физраствор стерильный (хлорид натрия) 0,9%Baxter0,9% Хлорид натрия стерильныйСтерильный внутривенный инфузионный
Стерильные шприцевые фильтрыMillipore SigmaMilliporeSigma™ Millex™-GP Стерильные шприцевые фильтры с мембраной PES (SLGPM33RS)https://www.fishersci.com/shop/products/emd-millipore-millex-sterile-syringe-filters-pes-membrane-green-4/slgpm33rs
Stoelting ручной микрошприцевой насосStoelting CompanyРучная инфузия/вывод насос (51222)https://www.stoeltingco.com/manual-infusion-withdrawal-pump-2649.html
Т-образный соединительLabSmithInterconnect tee (C360-203) для объединения потоков потока, для использования с 360μ m OD капиллярная трубкаhttps://products.labsmith.com/interconnect-tee#. XO8z8dNKh24

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Chen, L. T. L., Goffart, L., Sparks, D. L. A simple method for constructing microinjectrodes for reversible inactivation in behaving monkeys. Journal of Neuroscience Methods. 107 (1-2), 81-85 (2001).
  2. Crist, C. F., Yamasaki, D. S. G., Komatsu, H., Wurtz, R. H. A grid system and a microsyringe for single cell recording. Journal of Neuroscience Methods. 26 (2), 117-122 (1988).
  3. Noudoost, B., Moore, T. A reliable microinjectrode system for use in behaving monkeys. Journal of Neuroscience Methods. 194 (2), 218-223 (2011).
  4. Zhang, S., et al. Real-time simultaneous recording of electrophysiological activities and dopamine overflow in the deep brain nuclei of a non-human primate with Parkinson's disease using nano-based microelectrode arrays. Microsystems & Nanoengineering. 4, (2018).
  5. Altuna, A., et al. SU-8 based microprobes for simultaneous neural depth recording and drug delivery in the brain. Lab on a Chip. 13 (7), 1422-1430 (2013).
  6. Noudoost, B., Clark, K. L., Moore, T. A Distinct Contribution of the Frontal Eye Field to the Visual Representation of Saccadic Targets. Journal of Neuroscience. 34 (10), 3687-3698 (2014).
  7. Rajalingham, R., DiCarlo, J. J. Reversible Inactivation of Different Millimeter-Scale Regions of Primate IT Results in Different Patterns of Core Object Recognition Deficits. Neuron. 102 (2), 493(2019).
  8. Katz, L. N., Ates, J. L. Y., Pillow, J. W., Huk, A. C. Dissociated functional significance of decision-related activity in the primate dorsal stream. Nature. 535 (7611), 285(2016).
  9. Esfandyarpour, R., Esfandyarpour, H., Javanmard, M., Harris, J. S., Davis, R. W. Microneedle biosensor: A method for direct label-free real time protein detection. Sensors and Actuators B-Chemical. 177, 848-855 (2013).
  10. Esfandyarpour, R., Yang, L., Koochak, Z., Harris, J. S., Davis, R. W. Nanoelectronic three-dimensional (3D) nanotip sensing array for real-time, sensitive, label-free sequence specific detection of nucleic acids. Biomedical Microdevices. 18 (1), (2016).
  11. Bahmani, Z., Daliri, M. R., Merrikhi, Y., Clark, K., Noudoost, B. Working Memory Enhances Cortical Representations via Spatially Specific Coordination of Spike Times. Neuron. 97 (4), 967-979 (2018).
  12. Veith, V. K., Quigley, C., Treue, S. A Pressure Injection System for Investigating the Neuropharmacology of Information Processing in Awake Behaving Macaque Monkey Cortex. JoVE: Journal of Visualized Experiments. (109), (2016).

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи