Методическая статья

Автоматизированная центробежная система Counterflow для мелкомасштабной обработки ячеек

DOI:

10.3791/60423

⸱

12 декабря 2019 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1The Ritchie Centre, Hudson Institute of Medical Research, 2Department of Obstetrics and Gynaecology, Monash University, 3Scinogy, 4Australian Regenerative Medicine Institute, Monash University

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Автоматизация является ключом к наращиванию масштабов и управлению затратами в производстве ячеек. Данная рукопись описывает использование устройства обработки центробежных клеток против потока для автоматизации буферного обмена и шагов концентрации клеток для мелкомасштабной биообработки.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Успешная коммерциализация генной и клеточной терапии требует производственных процессов, которые являются экономически эффективными и масштабируемыми. Обмен буферами и концентрация продукта являются важными компонентами для большинства производственных процессов. Однако на ранних стадиях разработки продукта эти шаги часто выполняются вручную. Ручная тупиковая центробежка для буферного обмена является трудоемкой, дорогостоящей и не масштабируемой. Закрытая автоматизированная система может эффективно устранить этот трудоемкий шаг, но реализация может быть сложной задачей. Здесь мы описываем недавно разработанное устройство обработки ячеек, которое подходит для обработки ячеек малого и среднего масштаба и направлено на преодоление разрыва между ручной обработкой и крупномасштабной автоматизацией. Этот протокол может быть легко применен к различным типам и процессам клеток путем изменения скорости потока и скорости центрифугирования. Наш протокол продемонстрировал высокое восстановление клеток с более коротким временем обработки по сравнению с ручным процессом. Клетки, извлеченные из автоматизированного процесса, также поддерживали скорость распространения. Устройство может быть применено в качестве модульного компонента в закрытом производственном процессе для размещения таких этапов, как буферный обмен, формулировка ячейки и криоконсервация.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ландшафт современной медицины быстро преобразился благодаря последним разработкам в области генной и клеточной терапии (GCT). Будучи одной из наиболее быстро растущих областей в области трансляционных исследований, сектор GCT также сталкивается с уникальными и беспрецедентными проблемами. В дополнение к надежным клиническим результатам, эффективные и экономически эффективные производственные процессы имеют важное значение для коммерческого успеха GCT, который особенно трудно достичь в мелкомасштабной обрабатывающей промышленности1. Стоимость времени, труда и гарантий качества увеличивается, когда каждая партия клеток производит только несколько....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Подготовка реагентов и ячеек для буферного обмена

  1. Подготовка буферов (см. Таблица материалов) в классе 2 ламинарный капот потока. Используя шприц и игольную сборку, удалите 50 мл соблюй раствора из солен-мешка 500 мл. Замените это с 50 мл 20% человеческого сыворотки альбумина (HSA), чтобы сделать 2% HSA в сольном, который будет служить в качестве буфера стирки.
  2. Удалите клетки из сосудов культуры и выполнить количество клеток, чтобы определить количество исходных клеток и жизнеспособность путем трипан синий исключение. Загрузите клетки в сумку для передачи.
    ПРИМЕЧАНИЕ: В этом протоколе юркатные клетки культивировались в RPMI, ....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В этом протоколе мы использовали ячейки Jurkat и MSC в качестве репрезентативных примеров для демонстрации автоматизированного процесса обмена буферами. В ходе процесса, jurkat клетки и MSCs разделяют те же шаги обработки с различиями в центробежной силы и скорости насоса, которые контролируют скорость потока (Таблица 1). На рисунке 2 показаны репрезентативные изображения, снятые камерой о том, как жидкое клеточное ложе может появиться в процессе обмена буфером. Как правило,.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Описанный автоматизированный протокол обмена буфером прост и удобен для пользователя. Тем не менее, есть несколько ключевых шагов в этом протоколе, которые имеют решающее значение и требуют особого внимания. По нашему опыту, при обработке более крупных клеток, таких как MSC (средний диаметр 10-15 мкм) каждый запуск должен включать по крайней мере 1 х 107 клеток для достижения оптимального восстановления клеток (Рисунок 4B). Обработка небольших клеток, таких как кл.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

SW, IF и DJ являются coO, cTO и генеральным директором Scinogy Pty. Ltd. Доступ к устройству ХФУ также предоставила компания Scinogy.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эта работа поддерживается Викторианской правительством оперативной программы поддержки инфраструктуры, а также викторианской правительства технологии ваучер, предоставляемый Департаментом экономического развития, рабочих мест, транспорта и ресурсов. RL является получателем Национального совета по здравоохранению и медицинским исследованиям Карьера развития стипендий. AL является лауреатом Австралийской премии последипломного образования.

....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
20 мл шприцы с замком ЛюэраBD302830
20% Сывороточный альбумин человека (HSA)CSL BehringAUST R 46283
4-(Диметиламино)бензальдегидSigma-Aldrich156477-25г
500мл внутривенно мешок с физрастворомFresenius KabiK690521
Антибиотик-антимикотикThermo Fisher Scientific15240112
Автоматический счетчик клеток (графиня)Thermo Fisher ScientificN/A
Камерные горки для подсчета клетокThermo Fisher ScientificC10228
Коктейль для стимуляции клеток (500x)Thermo Fisher Scientific00-4970-93
Пакеты для переноса клетокTerumoT1BBT060CBB
CellTiter AQueous One Solution Cell Proliferation Analysis (MTS)PromegaG3582
ЦентрифугаEppendorf5810R
DMEM: F12 mediaThermo Fisher Scientific11320082
EnVision планшетный ридерPerkin ElmerN/A
Фетальная бычья сыворотка (FBS)Thermo Fisher Scientific10099141
Интерлейкин 2 человека (IL2) KitPerkin ElmerAl221C
Люэр (женский) фитингиCPCLF41
ПК ноутбук или ПКпланшет ASUSН/Д
Считыватель пластин (SpectraMax i3)Молекулярный приборн/д
Рекомбинантный человеческий ИФН-&гамма;PeproTech300-02
Противоточная центрифуга Rotea Противоточная центрифугаScinogyN/A Rotea
одноразовый набор для обработкиScinogyN/A
RPMI медиаThermo Fisher Scientific11875119
Хирургические ножницыProSciTech420SS
Трихлоруксусная кислотаSigma-AldrichT6399-250G
Трипан Синий морилкаThermo Fisher ScientificT10282
Фермент расщепления трипсина (фермент TrypLE Express)Thermo Fisher Scientific12604013

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Lopes, A. G., Sinclair, A., Frohlich, B. Cost Analysis of Cell Therapy Manufacture: Autologous Cell Therapies, Part 1. BioProcess International. 16 (3), (2018).
  2. Hampson, B., Ceccarelli, J. Factories of the future: Can Patient-Sp....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи