Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Химически-индуцированной модели карциногенеза кожи Использование диметилбенцзазаии и 12-O-Tetradecanoyl Phorbol-13-Ацетат (DMBA-TPA)

15K просмотров

DOI:

10.3791/60445

19 декабря 2019 г.

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

Двухступенчатый кожный канцерогенез индуцируется двумя местно прикладными химическими веществами. Мутаген 7,12-диметилбенцзазазазас) вызывает мутации в эпидермальных клетках и непрерывное применение стимулятора общего роста 12-O-Tetradecanoyl phorbol-13-ацетат ускоряет формирование папилломы кожи.

Аннотация

Рак является одним из самых разрушительных заболеваний человека. Экспериментальные модели рака важны для получения информации о сложном интерплене различных типов клеток и генов в продвижении прогрессирования опухоли и предоставить платформу для тестирования эффективности различных терапевтических подходов. Одной из наиболее часто используемых экспериментальных моделей воспалительного рака является двухступенчатая модель канцерогенеза DMBA-TPA. Формирование опухоли индуцируется в этой модели путем местного применения двух различных химических веществ, 7,12-диметилбенза (DMBA) и 12-O-Tetradecanoyl форбол-13-ацетат (TPA), которые вместе вызывают образование папилломы в коже. В качестве основного результата является формирование папилломы в коже, модель является идеальным, надежным и воспроизводимым способом решения как инициации опухоли (без опухолевого выживания) и прогрессирования опухоли (количество и размер видимых опухолей). Эффекты лечения DMBA-TPA передаются через воспалительный механизм, что делает эту модель особенно подходящей для изучения роли иммунной системы в формировании опухоли. Тем не менее, эта модель ограничивается кожи и других поверхностей, где химические вещества могут быть применены на. Подробный протокол предоставляется в этой статье, чтобы успешно использовать модель.

Введение

Рак является одной из ведущих причин смерти в мире. Поэтому существует спрос на разработку надежных экспериментальных моделей заболеваний, чтобы лучше понять болезнь, а также изучить потенциальные терапевтические подходы. Один из наиболее часто используемых экспериментальных моделей in vivo для изучения развития рака кожи является химически индуцированной двухступенчатой модели канцерогенеза кожи1,2. Модель предоставляет инструмент для изучения инициации опухоли, поощрения и прогрессирования в дополнение к конкретным событиям, таким как инфильтрация иммунных клеток и ангиогенез.

Для....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Описанный здесь протокол был одобрен Национальным комитетом по этике животных Финляндии (протокольный номер ESAVI/23659/2018).

1. Экспериментальные животные, реагенты и оборудование

  1. Используйте возраст и половые мышки. Начните исследование в возрасте 7-9 недель, потому что кожа у большинства мышей находится в telogen (покойная фаза) вокруг этого возраста2.
  2. Наблюдайте за поведением животных во время исследования и если они борются, что часто случается с самцами, размещайте их отдельно. Драки могут вызвать порезы кожи, которые способствуют образованию опухоли. Самки мышей предпочитают из-за их менее....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Основным результатом является выживание (т.е. папиллома бесплатно) время между лечением или генотипгруппы. Вторичным результатом является количество папиллом в неделю в каждой группе(рисунок 2). Ожидаемые результаты являются статистически значимой разницей в свободном времени папилломы и в количестве папиллом между экспериментальными (двумя или более) группами. Рекомендуется подсчитать количество папиллом и нарисовать кривую во время этапа продвижения (TPA), чтобы получить представление о ра.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

DMBA-TPA-индуцированных рака кожи является одним из наиболее часто используемых моделей рака, поскольку он является высоко воспроизводимым и предоставляет информацию о прогрессии опухоли от начала до злокачественности. Ключевой показатель исхода, образование папилломы, легко и надежно количествен. Модель касается одновременно инициации опухоли (безопухолевого выживания), так и прогрессирования (числа и размеры опухоли). Модель подходит для изучения различных соединений, таких как потенциальные терапевтические препараты, .......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Эта работа финансировалась Академией Финляндии (гранты 25013080481 и 25013142041 (I.J.), 286377 и 295814 (M.P.), 287907 (T.J.)), P'ivikki и Sakari Sohlberg Foundation (M.P., T.J.), Финский медицинский фонд (T.P.), Конкурентное государственное исследование Финансирование экспертной зоны ответственности университетской больницы Тампере (грант 9V049 и 9X044 (M.P.), 9X011 и 9V010 (T.J.)), Конкурентное государственное научно-исследовательское финансирование экспертной зоны ответственности лабораторий Fimlab (грант X51409 (I.J.)), Tays Фонд поддержки (I.J., M.P., T.J.), Фонд туберкулеза Тампере (I.J., M.P., T.J.), Финский культурный фонд (M.V.), Фонд Пауло (T.P.), Онкологич....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Градуированный фильтрующий наконечник RPT XL 1000 мкл (стерильный), заправитьStarlabS1182-1730-C
300 мкл RTP (стерильный), заправитьStarlabS1180-9710-C
7,12-диметилбенз[а]антрацен (DMBA)SigmaD3254-100MGВреден при проглатывании и может вызвать рак. Хранить в защищенном от света месте.
АцетонСигма1000141011быстро испаряется и является легковоспламеняющимся.
Attane vet 1000 мг/гPiramal Critical Care LimitedЖидкий изофлуран для ингаляций
Машинка для стрижки на батарейках IsisAlbert Kerlb GmbHGT421Для бритья шерсти
CONTRAfluran-RestgasfilterZeoSys GmbHДля анестезии
Linex Nature N1030 Линейка 30 смСкобы Бизнес-преимущество60383Для измерения папиллом
Средняя CO2 камера 300 x 200 x 200 мм - RedVetTech Solutions LtdAN045ARДля жертвы
MekasoftMekalasi23008Крышка стола
Мыши (Balb/c JRj)ЛабораторииЖанвье Другие штаммы также возможны
Мыши (C57BL/6JRj)ЛабораторииДругие штаммы также возможны
Panasonic Lumix DMC-FS5 Цифровая камераPanasonic
ПараформальдегидMerck30525-89-4Для гистологических образцов
Phorbol 12-миристат 13-ацетат, он же 12-оттрадеканилфорбол-13-ацетат (TPA)EnzoBML-PE160-0001
Прецизионные весы PLJ-C/PLJ-GKERN & SOHN GmbHPLJ 600-3CM
Предустановленная система CO2-2 Камера-S/S КорпусVetTech Solutions LtdAN044BXДля жертвы
РНКlaterQiagen76104Для образцов нуклеиновых кислот
Такта пипетка 100-1000 мклSartoriusLH-729070
Такта пипетка 20-200 мклSartoriusLH-729060
UNO Анестетик Ключ НаполнительScintica Instrumentation inc.Для анестезии
UNO Face Mask for MouseScintica instrumentation inc.Для анестезии
UNO FM2200 РасходомерScintica instrumentation inc.Для анестезии
UNO Gas Exhaust UnitScintica instrumentation inc.Для анестезии
UNO Induction BoxScintica instrumentation inc.Для анестезии
UNO200VAP VaporizerScintica instrumentation inc.Для анестезии
градуированный фильтрующий наконечник Жанвье

Ссылки

  1. DiGiovanni, J. Multistage carcinogenesis in mouse skin. Pharmacology & Therapeutics. 54 (1), 63-128 (1992).
  2. Abel, E. L., Angel, J. M., Kiguchi, K., DiGiovanni, J. Multi-stage chemical carcinogenesis in mouse skin: fundamentals and applications. Nature Protocols.....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Модель DMBA TPAинициация опухолипрогрессирование опухолиформирование папилломыиммуногистохимияпроточная цитометрияанализ экспрессии генованализ белковмеры безопасности