Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Производство ближнего инфракрасного чувствительного, Core-Shell платформа доставки вакцин

4.4K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/60569

⸱

20 октября 2020 г.

 ,  , 
1Department of Biomedical Engineering, Texas A&M University

В этой статье

Краткое содержание

В этой статье описаны протоколы, используемые для производства новой платформы доставки вакцин, "polybubbles", чтобы предотвратить задержку релиза взрыва. Полиэфиры, включая поли (молочно-когликолевая кислота) и поликарлактор, использовались для формирования полипубблов, а в качестве груза использовались небольшие молекулы и антиген.

Аннотация

Стратегии доставки вакцин, которые могут ограничить воздействие груза органическим растворителем, позволяя при этом новые профили выпуска, имеют решающее значение для улучшения охвата иммунизацией во всем мире. Здесь вводится новая инъекционной, ультрафиолетово-излечимая и отсроченный взрыв, позволяющая платформу доставки вакцины под названием polybubbles. Груз вводили в полиэфирные полипублы, которые образовались в 10% карбоксиметицеллюлозы на основе аквеозного раствора. Этот документ включает в себя протоколы для поддержания сферической формы полигубблов и оптимизации размещения и удержания груза, чтобы максимизировать количество груза в полигублах. Для обеспечения безопасности с помощью анализа нейтронной активации анализировался содержание хлорированного растворителя в полиббле. Выпуск исследования были проведены с небольшими молекулами в качестве груза в полибюбл, чтобы подтвердить задержку выброса взрыва. Чтобы еще больше продемонстрировать потенциал для доставки груза по требованию, золотые нанороды были смешаны в полимерной оболочке, чтобы обеспечить ближнее инфракрасное лазерное активацию.

Введение

Ограниченный охват иммунизацией приводит к смерти 3 миллионов человек, специально вызванных болезнями, предотвратимыми с помощью вакцин1. Неадекватные условия хранения и транспортировки приводят к потере функциональных вакцин и тем самым способствуют сокращению глобальной иммунизации. Кроме того, неполная вакцинация из-за несоблюдения требуемых графиков вакцинации также вызывает ограниченный охват вакцинацией, особенно в развивающихся странах2. В течение рекомендованного периода для получения уколов требуется несколько визитов к медицинскому персоналу, что ограничивает процент населения полной вакцинацией. Поэтому необходимо разработать новые стратегии контролируемой доставки вакцин для преодоления этих проблем.

Текущие усилия по разработке технологий доставки вакцин включают эмульсионные полимерныесистемы 3,,4. Тем не менее, груз часто подвергается большему количеству органических растворителей, которые потенциально могут вызвать агрегацию и денатурацию, особенно в контекстебелкового груза 5,,6. Мы разработали новую платформу доставки вакцин, "polybubbles", которые потенциально могут в доме несколько грузовых отсеков при минимизации объема груза, который подвергаетсярастворителя 7. Например, на нашей платформе polybubble core-shell в центре полиббля вводится один грузовой карман диаметром 0,38 мм (SEM). В этом случае площадь поверхности груза, подвергаемого воздействию органического растворителя, составит примерно 0,453 мм2. После рассмотрения плотности упаковки сфер (микрочастиц) в сфере (грузовом депо), фактический объем микрочастиц (10 мкм в диаметре), которые могли бы поместиться в депо составляет 0,17 мм3. Объем одной микрочастицы составляет 5,24х10-8 мм 3 и, таким образом, количество микрочастиц частиц, которые могут поместиться депо составляет 3,2x106 частиц. Если каждая микрочастица имеет 20 грузовых карманов (в результате двойной эмульсии) диаметром 0,25 мкм, то площадь поверхности груза, подвергаемого воздействию органического растворителя, составляет 1274мм 2. Таким образом, грузовое депо в полигубле имеет в 2800 раз меньше площади поверхности, подверженной воздействию органического растворителя, по сравнению с органическим растворителем, подвергаемого воздействию грузов в микрочастицах. Таким образом, наша платформа на основе полиэстеров потенциально может уменьшить количество грузов, подверженных воздействию органического растворителя, что в противном случае может привести к агрегации и нестабильности грузов.

Полибублы образуются на основе принципа фазового разделения, при котором полиэстер в органической фазе вводится в аковый раствор, что приводит к сферическому пузырю. Груз в aqueous фазе можно впрыснуть в центр polybubble. Другой грузовой отсек потенциально может быть достигнут в полибюбл, смешивая другой груз с полимерной оболочкой. Полибуббл на данном этапе будет податливым, а затем будет вылечен, чтобы привести к твердой структуре полипуббл с грузом в середине. Сферические полигублы были выбраны помимо других геометрических форм для увеличения грузоподъемности в полибюбле при минимизации общего размера полигубля. Полибуббли с грузом в центре были выбраны, чтобы продемонстрировать задержку релиза взрыва. Polybubbles были также включены с ближнего инфракрасного (NIR) - чувствительный (т.е., theranostic-поддержки) агент, а именно золотые нанороды (AuNR), чтобы вызвать повышение температуры полипублей. Этот эффект потенциально может способствовать более быстрой деградации и может быть использован для контроля кинетики в будущих приложениях. В этой статье мы описываем наш подход к формированию и характеристике полигубблов, для достижения задержки выброса всплеска из полигублов, а также для включения AuNR в полибузы, чтобы вызвать NIR-активацию.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

1. Синтез поликапролакиона триакрилата (PCLTA)

  1. Сухой 3,2 мл 400 Da polycaprolacyone (PCL) триол ночь на 50 градусов по Цельсию в открытой 200 мл круглой нижней колбы и K2CO3 в стеклянном флаконе при 90 градусов по Цельсию.
  2. Смешайте триол с 6,4 мл дихлорметана (DCM) и 4,246 г карбоната калия (K2CO3) под аргон.
  3. Смешайте 2,72 мл хлорида акрилового хлорида в 27,2 мл DCM и добавьте dropwise к реакционной смеси в колбе более 5 мин.
  4. Обложка реакционной смеси с алюминиевой фольгой и оставить его нетронутым при комнатной температуре в течение 24 ч под аргоном.
  5. После 24 ч, фильтр реакционной смеси с помощью фильтровальной бумаги на воронку Buchner под вакуумом, чтобы отбросить избыточные реагенты.
  6. Осадок фильтрата из шага 1.5, который содержит endcapped полимера в диэтил эфира в 1:3 (vol/vol) и rotovape при 30 градусов по Цельсию, чтобы удалить диэтил эфира.

2. Формирование полигуббл

ПРИМЕЧАНИЕ: Инъекционный полимер в деионизированной (DI) воде приведет к тому, что полифублы мигрируют на дно флакона, что приведет к уплощенему дну. Используйте 10% (wt/vol) карбоксиметил целлюлозы (CMC) заполнить стеклянный флакон вместо того, чтобы избежать уплощения поликубл.

  1. Подготовка 10% (wt/vol) CMC раствор в воде DI.
  2. Заполните стеклянный флакон 0,92 мл с 0,8 мл 10% CMC с помощью 1 мл передачи трубы.
  3. Смешайте 1000 мг/мл 14 кДа PCL в DCM и синтезировать PCLTA в 1:3 (vol/vol) для общего объема 200 л или подготовить 200 л 1000 мг/мл 5 кДа поли (молочно-когликолевая кислота) диакрилат (PLGADA) в хлороформе.
  4. Смешайте смесь 2-гидрокси-4"-(2-гидроксиэтокси)-2-метилпропиофенон (фотоинициатор) с полимером (PLGADA или PCL/PCLTA) смесью в 0.005:1 (vol/vol).
  5. Загрузите 200 мкл полимерной смеси в стеклянный шприц 1 мл, установленный на шприц-насосе, который соединен с дозаторной трубкой из нержавеющей стали с внутренним диаметром 0,016 дюйма.
  6. Используйте микромотор для управления движением вперед и назад полимерной трубки, чтобы ввести полимер в 10% CMC в стеклянном флаконе, чтобы сформировать полипуббл.
  7. Лечить полигублы под ультрафиолетовым (УФ) на 254 нм длины волны для 60 с при 2 Вт / см2.
  8. Вспышка заморозить polybubbles в жидком азоте и лиофилизируют на ночь на 0,010 мбар вакуума и при -85 градусов по Цельсию.
  9. Отделяйте полигублы от высушенного CMC с помощью типсов и мыть полигубблы с водой DI, чтобы удалить любые остаточные CMC. Обратите внимание, что другие полимеры могут быть использованы, вероятно, с изменениями, чтобы изменить релиз кинетики.

3. Модуляция диаметра полипубля

  1. Заполните стеклянный флакон 0,92 мл с 10% CMC с помощью трубы передачи 1 мл.
  2. Смешайте PCL/PCLTA в 1:3 (vol/vol) с 1000 мг/мл 14kDa PCL и синтезировать PCLTA. Смешайте фотоинициатор с полимерной смесью в 0.005:1 (vol/vol).
  3. Загрузите полимерную смесь в стеклянный шприц 1 мл, установленный на шприц-насосе, который соединен с дозаторной трубкой из нержавеющей стали с внутренним диаметром 0,016 дюйма.
  4. Используйте микромотор для управления движением вперед и назад полимерной трубки, чтобы ввести полимер в 10% CMC в стеклянном флаконе, чтобы сформировать полипуббл.
  5. Для получения полигубблов различных диаметров, варьировать скорость дозирования от 0,0005 до 1 йл/с.
  6. Сделайе снимки флакона с полибубблами разного диаметра.
  7. Используйте ImageJ для количественной оценки диаметра полигублов и использования размера флакона в качестве шкалы.

4. Центрирование грузов в пределах полигуббл

  1. Модуляция вязкости PCL/PCLTA с использованием K2CO3:
    ПРИМЕЧАНИЕ: Вязкость PLGADA не должна быть изменена с помощью K2CO3, потому что вязкость 5 kDa PLAGDA при 1000 мг/мл достаточна для центраирования груза.
    1. Добавьте K2CO3 (который был выделен после реакции PCLTA) к PCLTA в различных концентрациях, включая 0 мг/мл, 10 мг/мл, 20 мг/мл, 40 мг/мл и 60 мг/мл.
    2. Измерьте динамическую вязкость растворов, изменив скорость стрижки с 0 до 1000 1/с с помощью реометрии.
    3. Вручную впрыскивайте груз в середину (обратитесь к шагу 4.2 для подготовки грузовой смеси) из полигубблов, которые были сформированы с использованием решений PCL/PCLTA с различными концентрациями K2CO3 (шаг 4.1.1). Определите оптимальную концентрацию K2CO3, наблюдая, какое решение из шага 4.1.1 может привести к удержанию груза в середине.
  2. Центрирование груза (уже показанная осуществимость с небольшими молекулами) с CMC
    1. Смешайте груз с 5% (wt/vol) CMC в ротаторе на ночь, чтобы увеличить вязкость груза.
    2. Вручную введите 2 МКЛ грузовой смеси в полигуббл и приступить к УФ-лечения на 254 нм длины волны для 60 с при 2 Вт /см 2.
    3. Вспышка заморозить polybubbles в жидком азоте в течение 30 с и лиофилизовать ночь на 0,010 мБар вакуума и при -85 градусов по Цельсию.
    4. Отделяйте полигублы от высушенного CMC с помощью типсов и мыть водой DI, чтобы удалить остатки CMC.
    5. Разрежьте полибуббл пополам и изображение половинки с помощью конфокальные микроскопии, чтобы гарантировать, что груз по центру (ссылка на шаг 6 для возбуждения и выбросов длин волн используется).

5. Формула груза

ПРИМЕЧАНИЕ: В формуле Polybubble могут быть различные типы грузов, включая небольшие молекулы, белки и нуклеиновые кислоты.

  1. Основываясь на предыдущих исследованиях, в случае белковых грузов, используйте excipients в том числеполиэтиленгликоль(PEG) 6 , поливинилпирролидон (PVP), игликополимеры 6 для повышения стабильности белка во время полибубл формулировки.
  2. Форма полигублов на основе протокола в шаге 2.
  3. Приготовьте антигенный раствор, добавив 17,11 г трегалозы в 625 мл антигена ВИЧ gp120/41.
  4. Вручную ввит 1 МКЛ антигенового раствора в середине полиббл.
  5. Откройте полигублы в дни 0, 7, 14 и 21, и записывают флуоресценцию антигена с возбуждением и выбросами длин волн 497 нм и 520 нм, соответственно.
  6. Определите функциональность антигена, используя связанный с ферментами иммуносорбентный анализ (ELISA) и используйте 5% обезжиренного молока в качестве блокирующего буфера.

6. Выпуск грузов

ПРИМЕЧАНИЕ: Малая молекула или антиген могут быть использованы в качестве грузового типа

  1. Маленькая молекула
    1. Инкубировать поликубблы с центром acriflavine в 400 йл фосфатного буфера солевого раствора (PBS) при 37 градусов по Цельсию, 50 градусов по PLGADA polybubbles и при 37 C, 50 КК, 70 C для PCL / PCLTA polybubbles.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Причина, по которой мы рекомендуем тестирование выше температуры тела является а) имитировать температуру (50 градусов по Цельсию), при которой полигуббл достигает во время лазерирования золотых нанородов (AuNRs) в PCL и PLGA; и б) ускорить процесс деградации ПХЛ (50 градусов по Цельсию, 70 градусов по Цельсию).
    2. В каждый момент времени, собирать supernatants и заменить 400 йл свежего PBS.
    3. Используйте считыватель пластин для количественной оценки интенсивности флуоресценции в собранных супернатантах.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Используйте ex/em 416 nm/514 nm для acriflavine.
  2. Антигена
    1. Инкубировать поликубблы с центром бычьего альбумин сыворотки (BSA)-488 в 400 йл PBS при 37 градусов по Цельсию, 50 градусов по PLGADA polybubbles и при 37 градусов по Цельсию, 50 кк для PCL / PCLTA polybubbles.
    2. В каждой точке времени, собирать supernatants и заменить 400 йл свежих PBS.
    3. Используйте считыватель пластин для количественной оценки интенсивности флуоресценции в собранных супернатантах. Используйте ex/em 497 nm/520 nm для BSA-488.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Исследование выпуска при температуре 70 градусов по Цельсию для полибблей PCL/PCLTA не должно проводиться, чтобы избежать разоблачения антигена до экстремальной температуры.

7. Токсичность

  1. Количественная оценка содержания хлора в полигублах с использованием анализа нейтронной активации (NAA)
    1. Используйте полибублы, которые были лиофилизированы для 2, 4, 6, 20 и 24 ч для этого исследования в вакууме 0.010 mBar и при -85 C.
    2. Измерьте 5-9 мг полигублов и поместите их на флаконы облучения LDPE.
    3. Приготовьте 1000 г/мл раствора калибровки хлора из национального института стандартов и технологий (NIST) - отслеживаемого калибровочного раствора.
    4. Используйте 1-мегаваттный реактор Triga для проведения нейтронных облучений на каждом образце при скорости нейтронной беглости 9,1 ×10 12 /см 2на 600 с.
    5. Перенесите полигублы на необлученые флаконы.
    6. Используйте детектор HPGe для получения гамма-спектров для 500 с после 360 с интервалов распада.
    7. Используйте программное обеспечение NAA от canberra Industries для анализа данных.
  2. Количественная оценка содержания хлора, высвобождаемого из полигублов с использованием NAA
    1. Инкубировать полибублы, которые были лиофилизированы в одночасье (при вакууме 0,010 мбара и при -85 градусов по Цельсию) в 400 МКЛ PBS при 37 градусов по Цельсию.
    2. Соберите супернатанты на неделях 1, 2 и 3 после инкубации.
    3. Проанализируйте супернатанты на содержание хлора с помощью NAA с помощью того же метода, что описано выше в шаге 7.1.

8. AuNR Синтез Киттлер, S., и др.8

  1. Приготовьте раствор для посева AuNR, смешивая 250 л хлороауновой кислоты 10 мМ (HAuCl4),7,5 мл бромистого цетримония 100 мМ (CTAB) и 600 л 10 мл 10 мл ледяного борогидрида натрия натрия (NaBH4).
  2. Подготовьте раствор роста, смешивая 40 мл 100 мл CTAB, 1,7 мл 10 мл HAuCl4,250 л нитрата серебра (AgNO3)и 270 л аскорбиновой кислоты 17,6 мг/мл в трубку.
  3. Энергично смешайте 420 мл семенного раствора с раствором роста при 1200 об/мин в течение 1 мин. Затем оставьте смесь спокойно реагировать на 16 ч.
  4. Удалите излишки реагентов из смеси путем центрифугирования при 8000 × в течение 10 минут и отбросьте супернатант.

9. Гидрофобизация AUNRs Солиман, М.Г., и др.9

  1. Отрегулируйте рН 1,5 мл синтезированных стабилизированных АТБ 10 с использованием гидроксида натрия 1 мМ (NaOH).
  2. Перемешать раствор с 0,1 мл 0,3 мМм метилированного ПЕГ (mPEG) тиола при 400 об/мин на ночь.
  3. Смешайте PEGylated AuNRs с 0,4 M додедиламин (DDA) в хлороформ при 500 об/мин в течение 4 дней.
  4. Pipet из верхнего органического слоя, содержащего гидрофобных AUNRs и хранить при 4 градусов по Цельсию до будущего использования.

10. NIR-активация полигубблов

  1. Смешайте раствор полимера (PLGADA или PCL/PCLTA) с гидрофобными auNRs в 1:9 (vol/vol).
  2. Добавить фотоинициатор в смесь полимер-AuNR в 0.005:1 (vol/vol).
  3. Форма polybubbles путем впрыскивания полимера-AuNR смеси в 0,92 мл стеклянный флакон с 10% CMC (wt/vol) (ссылка на шаг 2).
  4. Лечить полигублы на 254 нм длины волны для 60 с при 2 Вт / см2.
  5. Вспышка заморозить в жидком азоте на 30 с и лиофилизовать на ночь при 0,010 мбар вакуума и при -85 градусов по Цельсию.
  6. Отделить сушеные полигузы с помощью типсов и мыть водой DI, чтобы удалить остатки CMC.
  7. Инкубировать полигублы в 400 МКЛ PBS при 37 градусов по Цельсию.
  8. Активировать полигублы с помощью 801 нм NIR лазера на 8A в течение 5 минут каждый понедельник, среду и пятницу.
  9. Возьмите перспективные инфракрасные (FLIR) изображения полибюбл до и после лазерной активации для получения температурных значений.
  10. Рассчитайте температурные различия между до и после лазерной активации на основе температурных значений на снимках FLIR.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Polybubbles были широко охарактеризованы с помощью SEM и NAA. Груз был успешно центрирован, чтобы привести к задержке релиза взрыва. Polybubbles были также успешно лазерной активации из-за присутствия AUNRs в полигублов.

Характеристика Полигоббл
Polybubbles вводили в aqueous раствор без CMC привело к сплющенный полипуббл из-за их контакта с нижней части стеклянного флакона (Рисунок 1

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Современные технологии и вызовы
Микро- и наночастицы на основе эмульсии широко используются в качестве носителей лекарств. Хотя релиз кинетики груза из этих устройств были тщательно изучены, контроль выброса всплеска кинетики была серьезной проблемой11. Универсальность и функциональность грузов также ограничены в системах на основе эмульсии из-за воздействия груза на избыток аквозных и органических растворителей. Белковые грузы часто не совместимы с микро- и наночастицами из-за...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Мы хотели бы поблагодарить д-ра Брайана Э. Томлина, связанного с лабораторией элементарного анализа в отделе химии ТАМУ, который помогал с анализом активации нейтронов (NAA).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
1-ступенчатый ультра-тетраметилбезидин (TMB)-фермент-связанный иммуноферментный анализ (ИФА) Субстратный растворThermo Scientific34028
2-гидрокси-2-метилпропиофенонTCI AMERICAH0991
450 нм стоп-раствор для субстрата TMBAbcamab17152
АкрилоилхлоридSigma AldrichA24109-100G
AcriflavineChem-Impex International22916
Безводный этиловый эфирFisher ChemicalE138-500
Anti-HIV1 gp120 антитело, конъюгированное с пероксидазой хрена (HRP)
Бычий сывороточный альбумин (BSA)Fisher BioReagentsBP9700100
конъюгаты красителя BSA-CF488InvitrogenA13100
Бромзалициловая кислотаAcros OrganicsAC162142500
карбоксиметилцеллюлозой (CMC)Millipore Sigma80502-040
Centrimonium bromide (CTAB)MP BiomedicalsICN19400480
хлороформаFisher ChemicalC2984
Буфер покрытияAbcamab210899
Дихлорметан (DCM)Sigma Aldrich270997-1L
Диэтиловый эфирFisher ChemicalE1384
ДодеациламинAcros OrganicsAC117665000
Доксорубицина гидрохлоридFisher БиореагентыBP251610
L-аскорбиновая кислотаAcros OrganicsA61 100
Legato 100 Шприцевой насосKD Scientific14 831 212
mPEG тиолLaysan BioNC0702454
обезжиренное сухое молокоAndwin ScientificNC9022655
карбонат калияAcros OrganicsAC424081000
Фосфатный солевой буферFisher BioReagentsBP3991
(Poly(caprolactone)Sigma Aldrich440744-250G
(Poly(капролактон) триолAcros OrganicsAC190730250
Поли (молочная ко-гликолевая кислота) диакрилатCMTec280050
Карбонат калияAcros OrganicsAC424081000
Рекомбинантный ВИЧ1 gp120 + gp41 белокAbcamab49054
Нитрат серебраAcros OrganicsS181 25
Натрий борогидридFisher ChemicalS678 10
Тетрахлорауриновая кислотаFisher ChemicalG54 1
ТрегалозаAcros OrganicsNC9022655
ТриэтиламинAcros OrganicsAC157910010

Ссылки

  1. World Health Organization. Global Immunization: Worldwide Disease Incidence. , Children's Hospital of Philadelphia. https://www.chop.edu/centers-programs/vaccine-education-center/global-immunization/diseases-and-vaccines-world-view (2018).
  2. Paul, A., Bera, M., Gupta, P., Singh, N. D. P. o-Hydroxycinnamate for sequential photouncaging of two different functional groups and its application in releasing cosmeceuticals. Organic and Biomolecular Chemistry. 17 (33), 7689-7693 (2019).
  3. Kumari, A., Yadav, S. K., Yadav, S. C. Biodegradable polymeric nanoparticles based drug delivery systems. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 75 (1), 1-18 (2010).
  4. Dai, C., Wang, B., Zhao, H. Microencapsulation peptide and protein drugs delivery system. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 41 (2-3), 117-120 (2005).
  5. Souery, W. N., et al. Controlling and quantifying the stability of amino acid-based cargo within polymeric delivery systems. Journal of Control Release. 300, 102-113 (2019).
  6. Wang, W. Advanced protein formulations. Protein Science. 24 (7), 1031-1039 (2015).
  7. Lee, J., et al. An ultraviolet-curable, core-shell vaccine formed via phase separation. Journal of Biomedical Materials Research Part A. , (2019).
  8. Kittler, S., Hickey, S. G., Wolff, T., Eychmüller, A. Easy and Fast Phase Transfer of CTAB Stabilised Gold Nanoparticles from Water to Organic Phase. Zeitschrift für Physikalische Chemie. 229, 235(2015).
  9. Soliman, M. G., Pelaz, B., Parak, W. J., del Pino, P. Phase Transfer and Polymer Coating Methods toward Improving the Stability of Metallic Nanoparticles for Biological Applications. Chemistry of Materials. 27 (3), 990-997 (2015).
  10. Arun Kumar, S., Good, J., Hendrix, D., Yoo, E., Kim, D., Deo, K. A., Jhan, Y. Y., Gaharwar, A. K., Bishop, C. J. Nanoengineered Light-Activatable Polybubbles for On?Demand Therapeutic Delivery. Adv. Funct. Mater. , 2003579(2020).
  11. Wuthrich, P., Ng, S. Y., Fritzinger, B. K., Roskos, K. V., Heller, J. Pulsatile and delayed release of lysozyme from ointment-like poly(ortho esters). Journal of Controlled Release. 21 (1), 191-200 (1992).
  12. Wang, W. Instability, stabilization, and formulation of liquid protein pharmaceuticals. International Journal of Pharmaceutics. 185 (2), 129-188 (1999).
  13. Wong, D. Y., Hollister, S. J., Krebsbach, P. H., Nosrat, C. Poly(epsilon-caprolactone) and poly (L-lactic-co-glycolic acid) degradable polymer sponges attenuate astrocyte response and lesion growth in acute traumatic brain injury. Tissue Engineering. 13 (10), 2515-2523 (2007).
  14. Davoodi, P., et al. Drug delivery systems for programmed and on-demand release. Advanced Drug Delivery Reviews. 132, 104-138 (2018).
  15. Huang, Y. C., Lei, K. F., Liaw, J. W., Tsai, S. W. The influence of laser intensity activated plasmonic gold nanoparticle-generated photothermal effects on cellular morphology and viability: a real-time, long-term tracking and monitoring system. Photochemical and Photobiological Sciences. 18 (6), 1419-1429 (2019).
  16. Link, S., Burda, C., Nikoobakht, B., El-Sayed, M. A. Laser-Induced Shape Changes of Colloidal Gold Nanorods Using Femtosecond and Nanosecond Laser Pulses. The Journal of Physical Chemistry B. 104 (26), 6152-6163 (2000).
  17. U.S. Environmental Protection Agency. Chlorine. , https://www.epa.gov/sites/production/files/2016-09/documents/chlorine.pdf (2000).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Производство ближнего инфракрасного чувствительного, Core-Shell платформа доставки вакцин
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.