Методическая статья

Проверенная lc-MS/MS Panel для количественной оценки 11 лекарствоустойчивых противотуберкулезных препаратов в малых образцах волос

DOI:

10.3791/60861

⸱

19 мая 2020 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Obstetrics, Gynecology and Reproductive Sciences, TB Hair Analysis Laboratory, University of California San Francisco, 2Department of Epidemiology and Biostatistics, University of California San Francisco, 3Department of Medicine, Division of HIV, Infectious Diseases, and Global Medicine, University of California San Francisco, 4Department of Medicine, Division of Pulmonary and Critical Care Medicine, University of California San Francisco

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Современные методы анализа приверженности пациентов сложным режимам лекарственно-туберкулезного (ДР-ТБ) могут быть неточными и ресурсоемкими. Наш метод анализирует волосы, легко собранную и хранящуюся матрицу, на концентрации 11 препаратов DR-TB. Используя LC-MS/MS, мы можем определить уровни субнанограммы наркотиков, которые могут быть использованы, чтобы лучше понять соблюдение препарата.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Лекарственно-туберкулезный (ДР-ТБ) представляет собой растущую угрозу для общественного здравоохранения, и оценка уровней терапевтических препаратов может иметь важные клинические преимущества. Уровни плазменных препаратов являются текущей оценки золотого стандарта, но требуют флеботомии и холодной цепи, и захватить только совсем недавнее соблюдение. Наш метод использует волосы, матрицу, которая легко собирается и отражает долгосрочное соблюдение, для тестирования на 11 противотуберкулезных препаратов. Предыдущая работа нашей группы показывает, что уровень антиретровирусных препаратов в волосах связан с исходами ВИЧ. Наш метод лечения препаратов Д-БД-ТБ использует 2 мг волос (3 см, проксимальных к корню), которые измельчаются и извлекаются в метанол. Образцы анализируются с помощью одного метода LC-MS/MS, количественно опрометив111 препаратов за 16 мин. Более низкие пределы количественной оценки (ЛЛО) для 11 препаратов варьируются от 0,01 нг/мг до 1 нг/мг. Присутствие препарата подтверждается сравнением соотношений двух переходов масс-спектрометрии. Образцы количественно с использованием области соотношение препарата к deuterated, 15N-, или 13C-помечены наркотиков изотополог. Мы использовали кривую калибровки в диапазоне от 0,001-100 нг/мг. Применение метода к удобному образцу образцов волос, собранных у пациентов с ДБ-ТБ при непосредственно наблюдаемой терапии (ДОТ), показало уровень препарата в волосах в линейном динамическом диапазоне девяти из одиннадцати препаратов (изониазид, пиразинамид, этамбутол, линезолид, левофлоксацин, моксифоксикацин, клоназимин, лобэк, претоманид). Ни один пациент не был на протионамид, и измеренные уровни для этионамид были близки к его LLO (с дальнейшей работой вместо изучения пригодности метаболита этионамид для мониторинга воздействия). Подводя итог, мы описываем разработку мульти-аналитовой панели для препаратов д-р-ТБ в волосах как метод терапевтического мониторинга лекарственных средств во время лечения лекарственно-устойчивого ТБ.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В XXI веке лекарственно-устойчивый ТБ (ДР-ТБ) является развивающейся катастрофой для и без того слабых национальных программ борьбы с туберкулезом, причем только за последние 5 лет число подтвержденных случаев заболевания удвоилось, что составляет почти треть всех случаев смерти, связанных с устойчивостью к противомикробным препаратам во всем мире1,2. Успешное лечение Д-ТБ обычно требует более длительных и более токсичных схем второй линии, чем лечение тБ, чувствительного к наркотикам. Кроме того, пациенты с DR-ТБ часто имеют значительные ранее существовавшие проблемы с соблюдением, что способствовало появлению резистентности первоначально3.

В отличие от ВИЧ-инфекции, где вирусные нагрузки могут быть использованы для мониторинга лечения, суррогатные конечные точки лечения при ТБ задерживаются и ненадежны на индивидуальном уровне4. Мониторинг приверженности пациента, важный предиктор субтерапевтической концентрации противотуберкулезных препаратов и неудачи лечения, также является сложной задачей. Самостоятельно сообщил и совпадение соблюдения страдает от отзыва предвзятости и желание угодить поставщикам5,6. Таблетки рассчитывает и лекарства системы мониторинга событий (MEMS) может быть более объективным7, но не измеряют фактическое потребление наркотиков8,9,10. Уровни лекарственных средств в биоматрисах могут обеспечить как присоединение, так и фармакокинетические данные. Таким образом, уровни плазмы наркотиков обычно используются в терапевтических мониторинга наркотиков11,12. Однако в контексте мониторинга соблюдения лекарственных средств уровни плазмы представляют собой кратковременное воздействие и ограничены значительной внутри- и межпациентной изменчивостью при определении соответствующего диапазона ссылки на присоединение. Эффекты "белого пальто", когда присоединение улучшается до посещения клиники или исследования, еще больше осложняет способность уровней плазмы обеспечивать точные модели пристыковки препарата13.

Волосы является альтернативной биоматрицы, которые могут измерять долгосрочное воздействие наркотиков14,15. Многие препараты и эндогенные метаболиты включаются в матрицу белка волос из системного кровообращения по мере роста волос. Поскольку этот динамичный процесс продолжается во время роста волос, количество препарата, отложенного в матрице волос, зависит от непрерывного присутствия препарата в обращении, что делает волосы отличным временным считыванием препарата. Волосы как биоматрицы имеет дополнительное преимущество легко собираться без необходимости холодной цепи для хранения и отгрузки по сравнению с кровью. Кроме того, волосы не являются биоопасными, что обеспечивает дополнительные преимущества осуществимости в этой области.

Уровни волос наркотиков уже давно используются в судебно-медицинской экспертизы16. За последнее десятилетие уровни антиретровирусной (АРВ) волос продемонстрировали полезность в оценке приверженности препаратам в лечении и профилактике ВИЧ, в которые внесла вклад наша группа. Уровни АРВ волос оказались самыми сильными независимыми предикторами исходов лечения при ВИЧ-инфекции17,,18,,19,,20,,21. Чтобы определить, будут ли уровень волос больных Д-БД-ТБ иметь такую же полезность в прогнозировании результатов лечения, мы использовали LC-MS/MS для разработки и проверки метода анализа 11 препаратов DR-TB в небольших образцах волос. В качестве первоначальной оценки эффективности анализ, мы измерили уровни DR-TB наркотиков в удобной выборке пациентов с DR-TB, получающих непосредственно наблюдаемую терапию (DOT) в Западной Капской провинции, южная Африка22.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все пациенты предоставили письменное информированное согласие до сбора образцов волос. Мы получили одобрение Совета по институциональному обзору от Университета Кейптауна и Калифорнийского университета в Сан-Франциско.

1. Выборка волос

  1. Получить письменное информированное согласие.
  2. Используйте чистые ножницы, чтобы вырезать примерно 20-30 скальп волос пряди из затылочной области как можно ближе к коже головы, как это возможно.
  3. Поместите ленту вокруг дистальной стороны волос, чтобы указать направленность. Сложите образец волос в квадрат алюминиевой фольги и хранить при комнатной температуре. Этикетка дистального конца волос, чтобы избежать возможного загрязнения от дополнительной обработки проксимального конца.
  4. В дополнение к образцам пациентов, собирать "пустые волосы": образец волос на волосах головы от тех, кто не принимал лекарства от туберкулеза. Соберите большое количество (30 мг пустых волос на каждые 20 образцов пациента).

2. Добыча наркотиков

  1. Этикетка бисовые трубки. Каждый образец пациента требует одной трубки. Этикетка 12 труб от "C0" до "C11", по одному для каждой из 12 точек калибровки. Этикетка трубки для низкого контроля качества, трубка для среднего контроля качества, и трубка для контроля высокого качества. Наконец, пометьте трубку для Matrix Blank.
  2. Откройте квадрат алюминиевой фольги, содержащий образец волос. Если образец волос длиннее 3 см, стричь волосы на 3 см от проксимального конца и используйте эту проксимальную часть для анализа.
  3. Взвесить 2 мг образца волос в бисочной трубке.
  4. Взвесить 2 мг пустых волос в 16 дополнительных бисовых трубок. Они будут использоваться в качестве калибровочных точек, контроля качества и матрицы пустыми. Трубки будут следовать той же процедуре экстракции, что и образцы пациента, помимо того, что они были шипами со стандартами сапогев на уровнях, указанных в шагах 2.8 и 2.9.
  5. Поместите все бисовые трубки в гомогенизатор. Запуск гомогенизатора на скорости 6,95 м/с. Запуск в течение двух циклов по 30 с каждый, с 15-м периодом отдыха между двумя циклами.
  6. Сделайте внутреннюю стандартную смесь и добавьте ее в образцы.
    1. Добавьте 40 мл метанола в объемную колбу объемом 50 мл.
    2. В янтарных стеклянных флаконах сделайте смеси внутренних стандартов, показанных в таблице 1,используя метанол в качестве растворителя.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Метанол очень волатильный. Оставьте все флаконы ограничены во время этого процесса, чтобы предотвратить потерю из-за испарения.
    3. Из этих смесей добавьте объем, показанный в таблице 1, к объемной колбе объемом 50 мл. Затем заполните колбу до 50 мл метанолом.
    4. Крышка и смешать объемную колбу. Добавьте 500 л смеси к каждой из распыленных волосяных трубок, за исключением матричной пустой трубки. Добавьте 500 метанола в матричную пустую трубку.
  7. Сделать эталонные стандартные смеси.
    1. Составить аккуратные эталонные стандарты следующих препаратов с метанолом, чтобы получить концентрацию показано в таблице в шаге 2.7.2. Требуется только 1 мл следующих концентраций.
    2. Добавьте 1768 л метанола в флакон, а затем добавьте количество эталонного стандарта, перечисленного в таблице 2, к тому же флакону, чтобы получить 2 мл окончательного тома. Этикетка этот флакон "Ref Std Mix 1x". Вихрь.
    3. Спайк 100 Зл из "Ref Std Mix 1x" в 900 л метанола в новом флаконе. Этикетка этот флакон "Ref Std Mix 10x". Вихрь.
    4. Спайк 100 злотили из "Ref Std Mix 10x" в 900 л метанола в новом флаконе. Этикетка этот флакон "Ref Std Mix 100x". Вихрь.
    5. Спайк 100 злотили из "Ref Std Mix 100x" в 900 л метанола в новом флаконе. Этикетка этот флакон "Ref Std Mix 1000x". Вихрь.
  8. Спайк калибровки кривой труб, добавив количество Ref Std Mix описано в таблице 3.
  9. Создавайте кк-миксы и трубки контроля качества.
    1. Этикетка 5 флаконов "КК-А" через "КК-Е".
    2. Добавьте следующие количества метанола в пять помеченных флаконов:
      КК-А: 990 л
      КК-Б: 940 л
      КК-С: 950 л
      КК-Д: 980 л
      КК-Е: 950 л
       
    3. Используя 1 мг/мл запасов лекарств, созданных в шаге 2.7.1, добавьте 10 кЛ к конкретным флаконам, перечисленным ниже. Для запасов БДЗ и CLF, которые находятся на уровне 0,5 мг/мл, добавьте 20 qL к перечисленным ниже флаконам.
      КК-А: PTH
      КК-Б: ЭМБ, КЛФ, БДЗ, ПТМ
      КК-С: INH, LFX, ЛЗД, MFX, ПЗА
      КК-Д: PTH, EMB
      КК-Е: CLF, БДЗ, ПТМ

      ПРИМЕЧАНИЕ: Некоторые препараты присутствуют в нескольких смесей.
    4. Этикетка флакон, как "КК-A df100". Разбавить 10 зл кв.м. кК-А в 990 л метанола.
    5. Этикетка флакон, как "Низкий КК акции". Добавьте в этот флакон 1832 йл метанола. Добавить количество кк смеси подробно описано ниже:
      КК-A df100: 80 л
      КК-Б: 8 л
      КК-С: 80 л
       
    6. Этикетка флакон, как "Средний КК акции". Добавьте в этот флакон 760 метанола. Добавить количество кк смеси подробно описано ниже:
      КК-A df100: 800 л
      КК-Б: 40 л
      КК-С: 400 л
       
    7. Этикетка флакон, как "Высокий кК акции". Добавьте в этот флакон 1376 метанола. Добавить количество кк смеси подробно описано ниже:
      КК-Д: 160 л
      КК-Е: 320 л
      MFX, 1 мг/мл акций: 16 л
      INH, 1 мг/мл бульона: 32 л
      LFX, 1 мг/мл бульона: 32 л
      ЛЗД, 1 мг/мл бульона: 32 л
      ПЗА, 1 мг/мл бульона: 32 л
       
    8. Спайк 10 Л Низкий кК запасов в низкий кК бисочник трубки.
    9. Спайк 10 Л. Средний кк акций в середине КК бисочник трубки.
    10. Спайк 10 Л Высокий кк акций в высокой кК бисочник трубки.
  10. Поместите все трубки в горячий шейкер на 2 ч при 37 градусах Цельсия. Встряхивание должно быть достаточно медленным, чтобы вода не выплескивается на трубки.
  11. Удалите трубки из шейкера. Перенесите жидкость из бисерных трубок в новые микроцентрифугные трубки. Этикетка этих микроцентрифуговых труб таким же образом.
  12. Добавьте 500 метанола в старые трубки. Кепка и вихрь.
  13. Во второй раз перенесите жидкость из бисерных трубок в соответствующую микроцентрифуговую трубку. Это нормально для передачи измельченных волос. Это в конечном итоге будет центрифугизм.
  14. Центрифуга микроцентрифуговых труб оков в течение 10 мин при 2800 х г.
  15. Аккуратно удалите жидкость и перенесите ее в новые центрифуги с соответствующими этикетками. Будьте осторожны, чтобы не беспокоить или передать волосы гранулы.
  16. Испаряйся жидкости в центрифуговых трубках до сухости при 32 градусах Цельсия.
  17. Восстановите образцы, добавив 200 кЛ подвижной фазы А (Вода класса HPLC с 1% формической кислотой) в сухие трубки. Вихрь.
  18. Перенесите жидкость на янтарные флаконы с 250 вставками.

3. Подготовка LC-MS/MS

  1. Сделайте один литр мобильной фазы А (HPLC-класса воды с 1% фомической кислоты), добавив некоторые HPLC-класса воды в однолитровой объемной колбы. Затем добавьте 10 мл из йgt;95% для модной кислоты, что колба, а затем заполнить линию с HPLC класса воды.
    1. Сделайте один литр мобильной фазы B (ацетонитрил с 0,1% фомической кислоты), добавив некоторые ацетонитрила в однолитровую объемную колбу. Затем добавьте 1 мл из йgt;95% formic кислоты, что колба, а затем заполнить к линии с ацетонитрилом.
  2. Установите 2 х 100 мм колонки с 2,5 мкм размер частицы и 100 й пор размер с полярным endcapped, эфир-связанных фениловых шариков полностью из пороса кремнезема в колонном отсеке. Убедитесь, что столбец также имеет производитель рекомендуется охранник картридж установлен.
  3. Откройте программное обеспечение для сбора данных и конфигурацию оборудования с двойным нажатием кнопки. Выделите LCMS и нажмите На кнопку «Активировать профиль».
    1. Нажмите новый подпроект, или, если другие подпроекты уже существуют, нажмите Копировать Подпроект. Назовите подпроект.
    2. Нажмите новый документ. Метод приобретенияс двойным нажатием кнопки . Нажмите Mass Spec в окне метода приобретения.
    3. Измените отсев типа сканирования на MRM (MRM). Убедитесь, что Полярность настроена на положительный.
    4. Нажмите список импорта и выберите файл .csv MDR-TB LCMS метод transitions.csv, который включен в дополнительные материалы.
    5. Прокрутите вниз и установите Продолжительность до 16.751 мин. Соответствующее время цикла и количество циклов будут автоматически заполняться.
    6. В левой боковой панели нажмите Интегрированный клапан Valco. Убедитесь, что имя позиции для шага 0 является A. В столбце Total Time (min) введите в первом ряду 0,4 и 13 во втором ряду.
    7. В столбце Position установите строку от 1 до B и строку от двух до А.
    8. В левой боковой панели, нажмите Binary Pump. Установите таблицу градиента и частоты потока в соответствии с таблицей 4.
    9. В левой боковой панели нажмите Autosampler. Изменение объема инъекций до 10 зл. Нажмите кнопку Контроль температуры включен и установить до 4 градусов по Цельсию.
    10. В левой боковой панели щелкните Колонка Сравнение. Установите как правую, так и левую температуру до 50 градусов по Цельсию.
    11. Закрыть и сохранить метод.
  4. Создайте пакет, нажав новый документ и выбрав пакет приобретения. Введите заданный имя и выберите вновь созданный метод из панели выпадающих.
    1. В электронной таблице создайте пакет, который следует этому порядку: кривая калибровки, контроль качества, образцы пациента, кривая калибровки, контроль качества, образцы пациента, кривая калибровки, контроль качества. Добавьте пустые инъекции растворителя в начале и конце бега, а также до и после кривой калибровки, контроля качества и образцов пациентов. Положите по крайней мере восемь растворителя пустые инъекции после инъекций кривой калибровки и высокое качество контроля флакон для того, чтобы уменьшить analyte переноса.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Больше пустых инъекций растворителя, возможно, потребуется добавить в зависимости от возраста столбца.
    2. В столбце, прилегающей к именам выборки, введите в соответствующем положении автосэмпера для соответствующего флакона.
    3. Нажмите Добавить набор. В всплывающем окне введите количество образцов в пакете.
    4. Копировать и вставить образец имен и флаконов из электронной таблицы в недавно созданной партии.
    5. Перейдите на вкладку Отправить. Нажмите кнопку Отправить.
  5. Система равновесия путем вставки линии растворителя А в мобильную фазу А и линию растворителя B в мобильную фазу B. Откройте клапан очистки на бинарном насосе.
    1. Установите состав растворителя до 50% B при скорости потока 4 мл/мин. Включите бинарный насос.
    2. После 5 мин, снижение потока до 0,3 мл/ мин. Закройте клапан очистки. Проверьте наличие утечек.
    3. В программном обеспечении нажмите Equilibrate на верхней панели инструментов. Установить время, чтобы йgt;5 мин, нажмите OK.
    4. После того, как инструмент уравновесится, модули в правом нижнем углу окна будут выглядеть зелеными. Проверьте, что давление стабилизировалось, а затем запустите партию, нажав Start Sample.

4. Анализ данных

  1. После завершения пакета откройте программное обеспечение для количественной оценки. Нажмите значок палочки, чтобы создать новую таблицу результатов.
    1. Нажмите «Прожектор», чтобы перейти к соответствующей папке, а затем выделите файл данных и нажмите на стрелку правого указания, чтобы переместить данные в выбранную область. Нажмите далее.
    2. Выберите Создать новый метод и нажмите Новый. Ввуй новый метод количественной оценки имя и нажмите Сохранить, а затем далее.
    3. Выберите первую инъекцию средней точки калибровки. Нажмите Далее.
    4. Тик пометить все переходы внутренних стандартов в колонке IS.
    5. Для переходов к количественной оценки для эталонных стандартов выберите соответствующее ИС в колонке IS Name. Нажмите далее.
    6. Прокрутите переходы, чтобы гарантировать точность автоматическовыбранного времени хранения. Убедитесь, что гауссианский сглаживание установлен на 1,5. Все остальные параметры по умолчанию могут оставаться такими, как есть (т.е. процент шума 100%, Базовая Sub. Окно 2.00 мин, Пик Расщепление 2 балла).
      ПРИМЕЧАНИЕ: При желании измените параметры автоматической интеграции в этой точке. Поскольку эти параметры меняются на основе установки инструментов, мы не включили наши здесь.
    7. Нажмите Finish, чтобы применить метод количественной оценки к партии.
  2. Нажмите в левом верхнем верхнем отображении кнопки обзора пика для просмотра хроматограмм. Перейдите через переходы с помощью левой боковой панели. Прокрутите каждую инъекцию каждого перехода квантификатора и при необходимости интегрируйте правильный пик.
    1. Чтобы вручную интегрировать пик, нажмите на кнопку включить ручной интеграции режиме, увеличить в хроматограмму, нажав и перетаскивая по x- или y-оси, а затем нарисовать линию от одной базовой линии к другой базовой, определяя пик. На рисунке 3 показаны две хроматограммы: одна, которая имеет INH, и, следовательно, была интегрирована вручную, и другая, которая не имеет INH.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Все инъекции должны быть интегрированы с использованием тех же параметров. Пиковая ширина может служить ориентиром для придерживания этих параметров, но иногда пиковая ширина будет отличаться. Для количественной оценки пика время удержания должно быть в пределах 0,15 мин от ожидаемого времени удержания для этого аналита (как определено в эталонных максимумах стандарта), качественно подтвержденное как имеюще ожидаемое соотношение квантификатора (как показано на рисунке 2),и иметь соотношение сигнала к шуму более 10.
  3. В столбце типа образца установите инъекции кривой калибровки (за исключением инъекций кривой чистой калибровки) в Standard. Установите инъекции контроля качества для контроля качества. Оставьте оставшиеся инъекции неизвестными.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Это будет установлено во всех переходах.
  4. В столбце Фактической Концентрации введите концентрации, обнаруженные в таблице 5 для всех кривой калибровки и инъекций контроля качества.
  5. Нажмите на секунду с верхнего левого отображения кнопки кривой калибровки. Нажмите кнопку Регрессии.
  6. Установите тип взвешивания до 1/x и нажмите OK.
  7. Проверка кривой калибровки и образцов контроля качества, чтобы гарантировать, что партия успешно работала.
    1. Для каждого переходного периода квантификатора (не внутренних стандартных переходов) посмотрите на точность впрыска кривой калибровки (в столбце Accuracy). По крайней мере две трети точек калибровки должны иметь точность в пределах 80-120%.
    2. Для калибровочных точек, находящихся далеко за пределами ожидаемой точности, инъекция может быть выбросом. Исключите выбросы, если их расчетная концентрация составляет более двух стандартных отклонений от двух других инъекций этого флакона. Нажав на "и пик" не найдено кнопку над каждой хроматограммы.
    3. Убедитесь, что R-значение отображается выше кривой калибровки является 0,975.
    4. Убедитесь, что все инъекции контроля качества имеют точность в пределах 80-120%.
  8. Если все вышеперечисленные условия будут выполнены, партия прошла, и образцы могут быть количественно. Нажмите "Оторите" в панели инструментов, а затем нажмите Копировать всю таблицу. Вставьте стол в электронную таблицу.
  9. Возьмите среднее значение расчетной концентрации двух инъекций образца, чтобы определить заявленную концентрацию каждого образца.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Иллюстрация хроматограммы с подтвержденными уровнями всех 11 препаратов ПРОТИВТ-ТБ показана на рисунке 1. Время удержания для каждого аналита может меняться при использовании различных инструментов и столбцов, поэтому точное время удержания должно определяться индивидуально.

Извлеченные ионные хроматограммы (EICs) для одного конкретного препарата (изониазид, INH) в одном из калибраторов (пустой образец волос шипами с DR-TB наркотиков эталонных стандартов) показаны...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы сообщаем здесь протокол для метода мы разработали и подтвердили для количественной оценки 11 противотуберкулезных препаратов, используемых в лечении DR-Tb в небольших образцах волос с помощью LC-MS/MS. Ни один другой метод количественной оценки этих 11 препаратов в волосах не был ранее разработан, проверен и опубликован. Наш метод может количественно суб-нанограмму уровня препаратов только в 20-30 прядей волос примерно 3 см (см) в длину (2 мг) и уже были проверены22. Низкий вес волос проанализи...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эта работа была поддержана Национальным институтом аллергии и инфекционных заболеваний RO1 AI123024 (Со-ИП: Джон Меткалф и Моника Ганди).

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы хотели бы поблагодарить профессора Кертана Дхеды, д-ра Али Эсмаила и Мариетджи Преториус из Института легких Кейптаунского университета, которые способствовали сбору образцов волос для исследования. Авторы также с благодарностью признают вклад участников этого исследования.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Инъекционные флаконы объёмом 2 млAgilent Technologies5182-0716
Инъекционные вставки для инъекций на 250 мклAgilent Technologies5181-8872
Разрыв бусинок 24OMNI International19001
Трубки с разрывом шариков (набор для бусинок 2 мл, керамические 2,8 мм, микротрубки 2 мл)OMNI International19628
БедакилинToronto Research ChemicalsB119550
Бедаквилин-d6Toronto Research ChemicalsB119552
КлофазиминToronto Research ChemicalsC324300
Клофазимин-d7Toronto Research ChemicalsC324302
Одноразовые пробирки для культуры известкового стеклаVWR60825-425
ЭтамбутолToronto Research ChemicalsE889800
Этамбутол-d4Toronto Research ChemicalsE889802
ЭтионамидToronto Research ChemicalsE890420
Этионамид-d5ClearSynthCS-O-06597
Муравьиная кислотаСигма-ОлдричF0507-100mL
Стеклянные бутылкиКорнинг1395-1L
Hot ShakerBellco Glass Inc7746-32110
HPLCAgilent TechnologiesInfinity 1260
Ацетонитрил ВЭЖХ классаHoneywell015-4
Метанол класса HPLCHoneywell230-1L
Вода класса HPLCAqua Solutions IncW1089-4L
ИзониазидToronto Research ChemicalsI821450
Изониазид-d4Toronto Research ChemicalsI821452
Колонка LC, Synergi 2.5 мкм Polar RP 100 A 100 x 2 ммФеноменэкс00D-4371-B0
Патрон LCФеноменэксAJ0-8788
Держатель патрона LCФеноменэксAJ0-9000
Программное обеспечение для количественной оценки LC-MS/MSSciexМультиквант 2.1
ЛевофлоксацинСигма-Олдрич1362103-200MG
Левофлоксацин-d8Toronto Research ChemicalsL360002
ЛинезолидToronto Research ChemicalsL466500
Linezolid-d3Toronto Research ChemicalsL466502
Микроцентрифугные трубкиE& K Scientific695554
МоксифлоксацинToronto Research ChemicalsM745000
Моксифлоксацин-13C, d3Toronto Research ChemicalsM745003
MS/MSSciexTriple Quad 5500
OPC 14714Toronto Research ChemicalsO667600
Претоманид (PA-824)Toronto Research ChemicalsP122500
ПротионамидToronto Research ChemicalsP839100
Протионамид-d5Toronto Research ChemicalsP839102
ПиразинамидToronto Research ChemicalsP840600
Пиразинамид-15N, d3Toronto Research ChemicalsP840602
Колпачки перегородки для инъекцийAgilent Technologies5185-5862
Испаритель Turbovap LVБиотаж103198/11

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. WHO. Global Tuberculosis Control 2017. , Geneva. Available from: www.who.int/tb/publications/global_report/en/ (2017).
  2. WHO. Tuberculosis. , Geneva. Available from: www.who.int/mediacentre/factsheets/fs104/en/ (2017).
  3. Kurbatova, E. V., et al. Predictors of poor outcomes among patients treated for multidrug-resistant tuberculosis at DOTS-plus projects. Tuberculosis (Edinb). 92, 397-403 (2012).
  4. Dheda, K., et al. The epidemiology, pathogenesis, transmission, diagnosis, and management of multidrug-resistant, extensively drug-resistant, and incurable tuberculosis. Lancet Respiratory Medicine. , (2017).
  5. Berg, K. M., Arnsten, J. H. Practical and conceptual challenges in measuring antiretroviral adherence. Journal of Acquired Immunodeficiency Syndromes (JAIDS). 43, Suppl 1 79-87 (2006).
  6. Kagee, A., Nel, A. Assessing the association between self-report items for HIV pill adherence and biological measures. AIDS Care. 24 (11), 1448-1452 (2012).
  7. Haberer, J. E., et al. Adherence to antiretroviral prophylaxis for HIV prevention: a substudy cohort within a clinical trial of serodiscordant couples in East Africa. PLoS Medicine. 10 (9), 1001511(2013).
  8. Pullar, T., Kumar, S., Tindall, H., Feely, M. Time to stop counting the tablets. Clinical Pharmacology & Therapeutics. 46 (2), 163-168 (1989).
  9. Liu, H., et al. A comparison study of multiple measures of adherence to HIV protease inhibitors. Annals of Internal Medicine. 134 (10), 968-977 (2001).
  10. Wendel, C., et al. Barriers to use of electronic adherence monitoring in an HIV clinic. Annals of Pharmacotherapy. 35, 1010-1101 (2001).
  11. Ruiz, J., et al. Impact of voriconazole plasma concentrations on treatment response in critically ill patients. Clinical Pharmacology & Therapeutic. , (2019).
  12. Saktiawati, A. M., et al. Optimal sampling strategies for therapeutic drug monitoring of first-line tuberculosis drugs in patients with tuberculosis. Clinical Phamacokinetics. , (2019).
  13. Podsadecki, T. J., Vrijens, B. C., Tousset, E. P., Rode, R. A., Hanna, G. J. "White coat compliance" limits the reliability of therapeutic drug monitoring in HIV-1-infected patients. HIV Clinical Trials. 9 (4), 238-246 (2008).
  14. Cuypers, E., Flanagan, R. J. The interpretation of hair analysis for drugs and drug metabolites. Clinical Toxicology. 56 (2), 90-100 (2018).
  15. Knitz, P., Villain, M., Crimele, V. Hair analysis for drug detection. Therapeutic Drug Monitoring. 28 (3), 442-446 (2006).
  16. Barroso, M., Gallardo, E., Vleira, D. N., Lopez-Rivadulla, M., Queiroz, J. A. Hair: a complementary source of bioanalytical information in forensic toxicology. Bioanalysis. 3 (1), 67-79 (2011).
  17. Gandhi, M., et al. Atazanavir concentration in hair is the strongest predictor of outcomes on antiretroviral therapy. Clinical Infectious Diseases. 52 (10), 1267-1275 (2011).
  18. Koss, C. A., et al. Hair concentrations of antiretrovirals predict viral suppression in HIV-infected pregnant and breastfeeding Ugandan women. AIDS. 29 (7), 825-830 (2015).
  19. Pintye, J., et al. Brief Report: Lopinavir Hair Concentrations Are the Strongest Predictor of Viremia in HIV-Infected Asian Children and Adolescents on Second-Line Antiretroviral Therapy. Journal of Acquired Immune Deficiency Syndromes (JAIDS). 76 (4), 367-371 (2017).
  20. Baxi, S. M., et al. Nevirapine Concentration in Hair Samples Is a Strong Predictor of Virologic Suppression in a Prospective Cohort of HIV-Infected Patients. PLoS One. 10 (6), 0129100(2015).
  21. Gandhi, M., et al. Antiretroviral concentrations in hair strongly predict virologic response in a large HIV treatment-naive clinical trial. Clinical Infectious Diseases. 5, 1044-1047 (2019).
  22. Gerona, R., et al. Simultaneous analysis of 11 medications for drug resistant TB in small hair samples to quantify adherence and exposure using a validate LC-MS/MS panel. Journal of Chromatography B. 1125, 121729(2019).
  23. Metcalfe, J., et al. Association of anti-tuberculosis drug concentration in hair and treatment outcomes in MDR- and XDR-TB. European Respriatory Journal Open Research. 5 (2), (2019).
  24. Metcalfe, J. Z., O'Donnell, M. R., Bangsberg, D. R. Moving Beyond Directly Observed Therapy for Tuberculosis. PLoS Medicine. 12 (9), 1001877(2015).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи