В Vivo Ориентация нейронных клеток-предшественников в Ferret Neocortex от In Utero Electroporation

Nereo Kalebic; Barbara Langen; Jussi Helppi; Hiroshi Kawasaki; Wieland  B. Huttner

doi:10.3791/61171

Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

В Vivo Ориентация нейронных клеток-предшественников в Ferret Neocortex от In Utero Electroporation

5.9K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/61171

⸱

6 мая 2020 г.

Nereo Kalebic¹^,² , Barbara Langen¹^,³ , Jussi Helppi¹ , Hiroshi Kawasaki⁴ , Wieland B. Huttner¹

¹Max Planck Institute of Molecular Cell Biology and Genetics, ²Human Technopole, ³Landesdirektion Sachsen, ⁴Department of Medical Neuroscience, Graduate School of Medical Sciences, Kanazawa University

В этой статье

Краткое содержание

Здесь представлен протокол для выполнения генетических манипуляций в эмбриональном мозге хорька с использованием в утробе матери электропорации. Этот метод позволяет таргетирование нейронных клеток прародителя в неокортексе in vivo.

Аннотация

Манипуляция экспрессией генов in vivo во время эмбрионального развития является методом выбора при анализе роли отдельных генов при развитии млекопитающих. В утробе матери электропорация является ключевым методом для манипулирования экспрессией генов в эмбриональном мозге млекопитающих in vivo. Здесь представлен протокол в утробе матери электропорации эмбрионального неокортекса хорьков, маленького хищника. Хорек все чаще используется в качестве модели для развития неокортекса, потому что его неокортекс демонстрирует ряд анатомических, гистологических, клеточных и молекулярных особенностей, которые также присутствуют у человека и нечеловеческих приматов, но отсутствуют в моделях грызунов, таких как мышь или крыса. В утробе матери электропорация проводилась в эмбриональный день (Е) 33, стадии миднейрогенеза у хорька. В утробе электропорации цели нервных клеток-предшественников накладки бокового желудочка мозга. Во время нейрогенеза, эти клетки-предшественники дают начало всем другим типам нервных клеток. Эта работа показывает репрезентативные результаты и анализы на E37, послеродовой день (P) 1, и P16, соответствующие 4, 9 и 24 дней после в утробе матери электропорации, соответственно. На более ранних стадиях потомство целевых клеток состоит в основном из различных подтипов нейронных прародителя, в то время как на более поздних стадиях большинство помеченных клеток являются постмитотические нейроны. Таким образом, в утробе матери электропорация позволяет изучать влияние генетических манипуляций на клеточные и молекулярные особенности различных типов нервных клеток. Благодаря своему влиянию на различные популяции клеток, в утробе матери электропорации также могут быть использованы для манипуляции гистологических и анатомических особенностей неокортекса хорька. Важно отметить, что все эти эффекты являются острыми и выполняются с spatiotemporal специфики определяется пользователем.

Введение

Неокортекс является внешним листом головного мозга млекопитающих и местом высших^{когнитивных функций 1,}^,^2,^,^3,^,^4,^,^5. Для достижения острой генетической манипуляции в млекопитающих neocortex in vivo во время эмбрионального развития, были изучены два различных метода: вирусная^{инфекция 6} и в утробе матери электропорации⁷. Оба метода позволяют эффективной ориентации неокортикальные клетки, но страдают от некоторых ограничений. Основным преимуществом в электропорации....