Мы разработали модель хориоамнионит для имитации воздействия плода на воспаление матери (ФЕМИ) без осложнений живых организмов для изучения влияния ФЕМИ на развитие желудочно-кишечного тракта потомства. Это позволяет изучать механистические причины развития кишечной травмы после хориоамнионит.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Мурин модель плода воздействия материнского воспаления для изучения последствий острого хориоамнионит на развитие кишечника новорожденных
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Хориоамнионит является распространенным осадком преждевременных родов и связан со многими из заболеваний недоношенных, в том числе некротизирующий энтероколит (NEC). Однако механистическая связь между этими двумя условиями еще предстоит выяснить. Мы приняли мурин модель хориоамнионит с участием липополисахарид (LPS)-индуцированного плода воздействия материнского воспаления (FEMI). Эта модель FEMI вызывает стерильный материнский, плацентарный и плода воспалительный каскад, который также присутствует во многих случаях клинического хориоамнионит. Хотя существуют модели, которые используют живые бактерии и более точно имитируют патофизиологию восходящей инфекции, приводящей к хориоамниониту, эти методы могут вызвать косвенное воздействие на развитие незрелого желудочно-кишечного тракта и связанного с ним развивающегося микробиома. Используя этот протокол, мы продемонстрировали, что ИНДУЦ, вызванный LPS FEMI, приводит к дозозависимым увеличению потери беременности и преждевременных родов, а также нарушению нормального развития кишечника у потомства. Кроме того, мы показали, что FEMI значительно увеличивает кишечные травмы и цитокины сыворотки у потомства, одновременно уменьшая кубок и клетки Панета, которые обеспечивают первую линию врожденного иммунитета против воспаления кишечника. Хотя аналогичная модель LPS-индуцированной FEMI была использована для моделирования связи между хориоамнионитом и последующими аномалиями центральной нервной системы, насколько нам известно, этот протокол является первой попыткой прояснить механистическую связь между хориоамнионитом и более поздними возмущениями в развитии кишечника в качестве потенциальной связи между хориоамнионитом и NEC.
Введение
Хорионные мембраны играют неотъемлемую роль в беременности млекопитающих. Они включают в себя хорион и амнион, которые служат нескольким функциям. Они окружают и защищают плод, облегчают сигнализацию паракрина между материнским и фетальнымотсеками 1и создают локальные петли обратной связи в хорионных мембранах, которые могут быть вовлечены в инициирование партуриции1. Текущее понимание мембран указывает на то, что амнион обеспечивает структурную барьерную функцию, а хорион обеспечивает иммунологический буфер в первую очередь для защиты развивающегося плода от материнской иммуннойсистемы 2. Воспале....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Все процедуры для животных были одобрены Комитетом по институциональному уходу и использованию животных Университета Айовы (Протокол #8041401). Все животные были размещены в Ассоциации по оценке и аккредитации лабораторного ухода за животными (AALAC), утвержденной виварием в Университете Айовы. Все мыши были дикого типа штамма C57Bl/6J.
1. Создание FEMI у беременных мышей
- Подготовка LPS
- Используйте LPS, полученные из Escherichia coli O55:B5 (концентрация запасов 2 мг/мл).
- Разбавить концентрацию запасов LPS 1:100 стерильным солевым раствором для рабочей концентрации 20 мкг/мл.
- Мате....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Воздействие FEMI на эмбриональный день 15 приводит к дозозависимых потери беременности и доза зависит от скорости преждевременных родов (Рисунок 1)42. Для экспериментов, мы решили использовать дозу LPS 100 мкг/кг, чтобы свести к минимуму потерю беременности и недоношенность (50% потери между недоношенностью и внутриутробной гибели плода), подвергая плод значительное воспалительное оскорбление.
Используя этот подход, мы затем рассмотрели вли.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Хориоамнионит влияет на 2'u20124% срока и 25'u201230% преждевременныхродов 8,9. Тем не менее, влияние хориоамнионит может продлить давнорождения,как было показано, оказывают значительное влияние на плоди новорожденных 10,11,12,13,14,15,16<.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторов нечего раскрывать.
Благодарности
Эта работа была частично поддержана Национальными институтами здравоохранения (DK097335 и T32AI007260) и Семейным отделением педиатрии Университета Айовы.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 10% нейтральный буферизованный формалин | Sigma | HT501128 | |
| краситель Alcian blue Новинка | поставки | 1003A | |
| C57Bl6/J мыши | Jackson Laboratories | 664 | |
| Этанол | Decon labs | 2701 | |
| HCl | Sigma | H1758 | |
| Окрашивание гематоксилином | Leica 381562 | ||
| LPS | Sigma | L2880 | |
| NaHCO3 | Sigma | S6014 | |
| Nikon Eclipse Ni-U микроскоп | Nikon | 2CE-MQVJ-1 | |
| Периодическая кислота | ACROS | H5106 | CAS# 10450-59-9 |
| РНКалейтерный | Thermofisher | Am7021 | |
| Реактив Шиффа | Sigma | S5133 | |
| Secor Imager 2400 | Meso Scale Discovery (MSD) | ||
| V-plex Assay | Meso Scale Discovery (MSD) | ||
| Xylene | Sigma | 534056 |
Ссылки
- Myatt, L., Sun, K. Role of fetal membranes in signaling of fetal maturation and parturition. International Journal of Developmental Biology. 54 (2-3), 545-553 (2010).
- Verbruggen, S. W., Oyen, M. L., Phillips, A. T., Nowlan, N. C.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
Больше статей
Фетальное воздействие материнского воспалениямодель хориоамнионитапротокол инъекции ЛПСоценка повреждения кишечникаколичественное определение бокаловидных клетоканализ клеток Панетаизмерение уровня цитокинов в сыворотке кровиисследование некротизирующего энтероколитапотеря плода у мышеймодель преждевременных родов
