Кислород-индуцированной ретинопатии (OIR) может быть использован для моделирования ишемических заболеваний сетчатки, таких как ретинопатия недоношенных и пролиферативной диабетической ретинопатии и служить в качестве модели для доказательства концепции исследований в оценке антиангиогенных препаратов для неоваскулярных заболеваний. OIR вызывает надежную и воспроизводимую неоваскуляризацию сетчатки, которую можно количественно оценить.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Кислород-индуцированной ретинопатии Модель ишемической болезни сетчатки у грызунов
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Одной из часто используемых моделей ишемической ретинопатии является модель ретинопатии, вызванной кислородом (OIR). Здесь мы описываем подробные протоколы индукции модели OIR и ее считывания как у мышей, так и у крыс. Неоваскуляризация сетчатки индуцируется в OIR путем подвергая щенков грызунов либо гипероксия (мышей) или чередующихся уровней гипероксии и гипоксии (крысы). Основными считываниями этих моделей являются размеры неоваскулярных (NV) и аваскулярных (AVA) областей сетчатки. Эта доклиническая модель in vivo может быть использована для оценки эффективности потенциальных антиангиогенных препаратов или для решения роли конкретных генов в ангиогенезе сетчатки с помощью генетически манипулируемых животных. Модель имеет некоторые деформации и поставщика конкретных изменений в индукции OIR, которые должны быть приняты во внимание при разработке экспериментов.
Введение
Надежные и воспроизводимые экспериментальные модели необходимы для изучения патологии ангиогенных заболеваний глаз и разработки новых терапевтических средств для этих разрушительных заболеваний. Патологический ангиогенез является отличительной чертой для мокрой возрастной макулярной дегенерации (AMD) и для многих ишемических заболеваний сетчатки, среди них ретинопатия недоношенности (ROP), пролиферативная диабетическая ретинопатия (PDR) и окклюзия сетчатки вен (RVO)1,2,3,4. Сетчатки человека и грызунов следуют аналогичной модели развития, та....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Описанный здесь протокол был одобрен Национальным комитетом по этике животных Финляндии (протокол ESAVI/9520/2020 и ESAVI/6421/04.10.07/2017).
1. Экспериментальные животные и мышь OIR модель индукции
ПРИМЕЧАНИЕ: Используйте спариваемых во времени животных, например, обычно используемых C57BL/6J мышей, чтобы получить щенков, родившихся в тот же день. Используйте приемные плотины, например, 129 штаммов (129S1/SvImJ или 129S3/SvIM) кормящих плотин, чтобы ухаживать за щенками во время и после индукции гипероксии. Кроме того, убедитесь, что Существуют дополнительные плотины лактации доступны в случае ухода плотины должн....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Основным результатом модели является сосудистый фенотип: размер АВА и количество НВ. В модели мыши OIR, вазо-облитерация происходит в центральной сетчатке(рисунок 2A), в то время как в модели крысы она развивается на периферии, т.е. похож на человека ROP22 (Рисунок 3A). Это потому, что поверхностное сосудистое сплетение уже развилось, когда мыши подвергаются воздействию гипероксии, в то время как в модели крыс сетчатка является сосудистой.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Тяжесть фенотипа заболевания зависит как от штамма, так и даже от поставщика как в моделях мыши, так и от крыс OIR23. Это говорит о том, что в развитии патологии существует широкая генотипическая изменчивость. В целом у пигментированных грызунов развивается более тяжелый фенотип, чем у альбиносов. Например, сосуды сетчатки альбиноса BALB/c быстро переаскуляризируются после гипероксии и не развиваются NV вообще24. Аналогичным образом, у крыс, пигментированные коричневые крыс.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы Мария Вяхютупа, PhD, Ниина Яскеляйнен, Марк Серрада-Хименес, PhD, и Рубина Тапа являются сотрудниками Experimentica Ltd.
Автор Giedrius Kalesnykas, Доктор философии, является сотрудником (президент и главный исполнительный директор) и акционер Experimentica Ltd., которая предлагает контракт научно-исследовательских услуг, использующих доклинарные модели OIR, используемые в этой статье.
Теро Ярвинен, доктор медицинских наук, доктор философии, и Ханнеле Ууситало-Ярвинен, доктор медицинских наук, не имеют ничего общего с информацией.
Благодарности
Мы благодарим Марианну Карлсберг, Анн Мари Хаапаниеми, Пёйви Партанен и Анну Канккунен за отличную техническую поддержку. Эта работа финансировалась Академией Финляндии, Фондом Пяйвикки и Сакари Солбергом, Фондом Тампере Туберкулеза, Финским медицинским фондом, Районным исследовательским фондом больницы Пирканмаа и Фондом исследований больницы Университета Тампере.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 33 калибр, малый концентратор RN Needle | Hamilton Company | 7803-05, 10 мм, 25°, PS4 | для интравитреальных инъекций |
| Adobe Photoshop | Adobe Inc. | Для анализа изображений | |
| Воздушный насос air100 | Eheim GmbH & Co. KG. | 143207 | Для ингаляционной анестезии |
| Анестезиологический аппарат 410 AP | Univentor Ltd. | 2360309 | Для ингаляционной анестезии |
| AnalaR NORMAPUR Soda Lime | VWR International Ltd | 22666.362 | Для контроля CO2 во время индукции модели |
| Attane Vet 1000 мг/г | VET MEDIC ANIMAL HEALTH OY | vnr 17 05 79 | Для ингаляционной анестезии |
| Щетка | Для приготовления плоских креплений | ||
| Углекислый газ | Для жертвоприношения | ||
| Система Celeris D430 ERG | Diagnosys LLC | 121 | Для in vivo ERG |
| Чашки для клеточных культур | Greiner Bio-One International GmbH | 664 160 | Для приготовления плоских креплений |
| Cepetor Vet 1 мг/мл VET | MEDIC ANIMAL HEALTH OY | vnr 08 78 96 | Для обезболивания |
| Чехлы | Thermo Fisher Scientific | 15165452 | Для изготовления плоских креплений |
| O2 Controlled InVivo Cabinet, Aninal Filtrarion System and Dehumidifier | Coy Laboratory Products | Закрытая система для индукции модели заболевания, опционально для полузакрытой системы | |
| E702 O2 датчик | BioSphenix, Ltd. | E207, 1801901 | Для измерения уровня кислорода |
| Envisu R2200 Spectral Domain Optical Coherence Tomograph (SD-OCT) | Bioptigen, Inc. | BPN000668 | Для in vivo imaging |
| Eye spears | Beaver-Visitec International, Inc. | 0008685 | Для интравитреального инъекционного введения и визуализации in vivo |
| Flexilux 600LL Источник холодного света | Mikron | 11140 | Для интравитреального инъекционного введения или забора тканей |
| Флуоресцеиновая натриевая соль | Merck KGaA | F6377-100G | Для визуализации in vivo |
| Газоотводная установка (+Двойной 3-ходовой клапан, маски для лица мышей и крыс, фильтр UNOsorb) | UNO Roestvaststaal BV | GEX 17015249 | Для ингаляционной анестезии |
| Стеклянный шприц, модель 65 RN | Hamilton Company | 7633-01 | Для интравитреального введения |
| HRA2 Ангиограф сетчатки глаза (FA) | Heidelberg Engineering GmbH | Spec-KT-05488 | Для in vivo визуализации |
| Isolectin GS-IB4, Alexa Fluor 488 Conjugate | Thermo Fisher Scientific | I21411 | Для мечения сосудистой сети сетчатки на плоские крепления |
| Ketaminol Vet 50 мг/мл | Intervet International B.V. | vnr 51 14 85 | Для анестезии |
| Медицинский кислород газообразный | Для индукции модели болезни | ||
| Мыши C57BL/6JRj | Janvier Labs | Также возможны другие | |
| штаммы Микроскопические стекла | Thermo Fisher Scientific | J1800AMNZ | Для приготовления плоских креплений |
| Minims Povidone Iodine 5% (единица) | Bausch & Lomb U.K Limited | vnr 24 11 304 | Для интравитреального введения |
| Газообразный | Для индукции модели болезни (крыса) | ||
| Oftan Chlora 10 мг/г | Santen Pharmaceutical Co., Ltd. | vnr 55 01 11 | Для интравитреального введения |
| Офтан Метаокседрин 100 мг/мл | Santen Pharmaceutical Co., Ltd. | vnr 55 03 43 | Для in vivo ERG |
| Oftan Obucain 4 мг/мл | Santen Pharmaceutical Co., Ltd. | vnr 55 03 50 | Для интравитреального введения |
| Офтан Тропикамид 5 мг/мл | Santen Pharmaceutical Co., Ltd. | vnr 04 12 36 | Для in vivo imaging |
| ProOx Model 110 O2 controller and animal chamber | BioSphenix, Ltd. | 803 | Для индукции модели болезни, полузакрытая система, опционально для закрытой системы |
| контроллер ProOx Model P360 O2 и камера для животных | BioSphenix, Ltd. | 538 | Для индукции модели заболевания, полузакрытая система, опционально для закрытой системы |
| Rats CD(SD) | Charles River Laboratories | Также возможны другие штаммы | |
| Revertor 5 мг/мл | VET MEDIC ANIMAL HEALTH OY | vnr 13 04 97 | Для реверсивной анестезии |
| Силикагель | Для контроля влажности во время индукции модели | ||
| Systane Ultra 10ml | Alcon | Tamro 2050250 | Для увлажнения глаз |
| Systane Ultra unit 0,7мл | Alcon | Tamro 2064871 | Для увлажнения глаз |
| Трансферная пипетка | Thermo Fisher Scientific | 1343-9108 | Для подготовки плоских креплений |
| VENTI-Line VL 180 PRIME Сушильный шкаф | VWR | VL180S 170301 | Для сушки силикагеля |
| VisiScope SZT350 Стереомикроскоп | VWR | 481067 | Для интравитреального введения или забора тканей |
Ссылки
- Chase, J. The evolution of retinal vascularization in mammals. A comparison of vascular and avascular retinae. Ophthalmology. 89 (12), 1518-1525 (1982).
- Sun, Y., Smith, L. E. H. Retinal vasculature in development and diseases. Annual Review of....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
Теги
