Использование мутности и тромбоэластографии для дополнительной характеристики сгустка

Summary

Фибрин отвечает за образование тромбов во время гемостаза и тромбоза. Анализы турбитии и тромбоэластогры (TEG) могут быть использованы в качестве синергетический инструмент, который обеспечивает дополнительную оценку сгустка. Эти два метода вместе может дать более глубокое представление о том, как свертывание условия влияют на образование сгустка фибрина.

Abstract

Тромбоз является основной причиной смерти во всем мире. Фибрин (оген) является белок в первую очередь отвечает за образование тромбов или тромбоза. Поэтому для изучения тромбоза полезно характеризование образования фибринового сгустка. Турбичность и тромбоэластография (TEG) широко используются в пробирке анализы для мониторинга образования тромбов. Турбичность динамически измеряет передачу света через структуру сгустка фибрина через спектрометр и часто используется в исследовательских лабораториях. TEG является специализированным вязко-вязкостатический метод, который непосредственно измеряет силу сгустка крови и в первую очередь используется в клинических условиях для оценки гемостаз пациентов. С помощью этих двух инструментов, это исследование описывает метод для характеристики тромба фибрина in vitro с помощью упрощенной модели сгустка фибриногена/тромба. Тенденции данных по обоим методам сравнивались в различных условиях свертывания крови. Человеческие и бычьи сгустки фибрина были сформированы бок о бок в этом исследовании, как бычьего свертывания факторов часто используются в качестве заменителей факторов свертывания человека в клинических и научно-исследовательских условиях. Результаты показывают, что TEG и мутность отслеживать образование тромбов с помощью двух различных методов и при использовании вместе обеспечивают дополнительную силу сгустка и волокна структурной информации через различные условия свертывания.

Introduction

Тромбоз является патологическим образованием тромба в организме, который блокирует кровообращение, что приводит к высокой заболеваемости и смертности во всем мире. Есть от 1 до 2 случаев венозной тромбоэмболии и от 2 до 3 случаев тромбоза индуцированных сосудистых заболеваний на 1000^{человек в год 1,2}. Здесь представлен метод, использующий тромбоэластографию (TEG) и мутность для мониторинга образования тромбов при различных условиях свертывания крови. Фибрин (оген) является основным белком, который отвечает за образование тромбов в организме. На заключительных этапах каскада коагуляции фибринопептиды расщепляются из фибриногена путем тромбина, инициируя полимеризацию нерастворимых мономеров фибрина^помере развития тромба^3,4. Чтобы понять образование тромбов при патологическом тромбозе, необходимо охарактеризовать образование фибрина при различных обстоятельствах свертывания крови. Несколько анализов мониторинга сгустка были использованы для изучения образования сгустка фибрина в пробирке. Протромбиново время (PT/INR) и активированное частичное время тромбопластина (aPTT) являются двумя общими клиническими анализами, которые измеряют целостность конкретного пути свертывания. Тем не менее, они используют время в качестве единственной переменной, которая не дает никаких указаний на физические свойства^{сгустка 5.} Электронная микроскопия позволяет визуализировать микро-структуру полностью сформированного фибринового сгустка, но не дает никакой информации о процессе формирования тромба^6. Среди всех анализов, мутность анализы и TEG предлагают возможность отслеживать характеристики сгустка динамически с течением времени. Эти методы позволяют измерять всеобъемлющие профили свертывания и, следовательно, обеспечивают некоторую выгоду по отношению к другим инструментам характеристики сгустка фибрина.

В частности, анализ мутности (или мутбиметрия сгустка) широко используется для исследований и клинического применения из-за его упрощенного внедрения и широкой доступности спектрометров в исследовательских лабораториях. Этот анализ позволяет динамическое измерение передачи света через формирование сгустка, принимая отдельные повторяющиеся показания на определенной длине волны (чаще всего на длине волны в диапазоне 350 - 700 нм)⁷. Температура в считывной камере также может быть скорректирована. По мере того как гель фибрина формирует, количество света которое перемещает через сеть протеина уменьшен причиняя увеличение в поглощении над временем. Аналогичным образом, абсорбт уменьшается, когда сеть сгустков ухудшается. Анализы турбити могут быть легко мультиплексированы с использованием формата мульти-хорошо пластины, чтобы обеспечить высокую пропускную способность образца скрининга в обоих 96- и 384-хорошо пластин. Несколько характеристик сгустка могут быть получены из кривой отслеживания мутности (поглощение с течением времени измерения), которые включают в себя: максимальная мутность, время до максимальной мутности, время начала сгустка, и скорость образования сгустка (Vmax). Соотношение массы/длины фибринового волокна также может быть получено из необработанных данных о мутности для оценки^{толщины фибринового волокна 8,,9,,10.}

TEG в первую очередь используется в клинических условиях для оценки гемостаза пациентов и лиза тромба. Он также широко используется в хирургических приложениях, чтобы определить, когда антифибринолитические препараты или гемостатические продукты крови^{должны быть введены 11,12}. Образование сгустка происходит внутри чашки TEG со всеми компонентами свертывания добавляются в чашку до начала анализа. Чашка, с развивающимся сгустком, физически вращается против штифта, который вставляется в его центр, а электромеханический датчик коксиона измеряет возрастающую вязко-вязкую прочность сгустка. Этот анализ обычно проводится при физиологической температуре 37 градусов по Цельсию; однако, температура может быть вручную отрегулирована на приборе. Максимальная амплитуда (MA), скорость реакции (R), время кинетики (K), угол (угол) и время максимальной амплитуды (TMA) извлекаются программным обеспечением TEG из динамического отслеживания TEG. Эти значения обычно сравниваются с клиническими нормальными диапазонами для оценки состояния свертывания пациента. Хотя TEG не является точно вискометром, так как он измеряет прочность сгустка в миллиметровых единицах, он обеспечивает важные вязкоэлетические данные сгустка и функционирует как ценный клинический инструмент принятия решений для врачей, чтобы принять решение о введении конкретных продуктов крови и настроить терапевтическую^{дозирование 13}. Когда как TEG и мутность анализы используются вместе, они обеспечивают дополнительную информацию характеристики сгустка, как сила сгустка и кинетики легко извлекаются из TEG и толщины волокна фибрина могут быть доступны для оптических измерений мутности.

Поскольку фибрин является важнейшим компонентом сгустка крови, характеристика сгустка фибрина при различных условиях образования тромбов может дать ценную информацию о том, как определенная переменная способствует процессу образования тромбов и конечным свойствам сгустка. Понимание этого может обеспечить руководство для диагностики тромбоза и развития терапии. Чтобы получить более репрезентативную характеристику сгустка фибрина, плазма может быть заменена для мониторинга образования тромбов, поскольку она напоминает условия свертывания виво более тесно, чем упрощенная система модели фибриногена/тромбина. Однако из-за сложного характера каскада коагуляции образование тромбов с использованием плазмы усугубляет сложность, что затрудняет изоляцию воздействия отдельных факторов. Использование упрощенной модели фибриногена/тромбина предотвращает необходимость инициировать весь каскад свертывания, позволяющий изоляцию заключительного шага формирования фибрина. Путем включая 2 главных компонента образования fibrin (фибриноген и тромбин), эта установка создает высоки контролируемое условие образования сгустка. Важно также отметить, что, хотя упрощенная модель сгустка используется здесь, этот протокол также может быть использован для характеристики более сложных сгустков, включая дополнительные факторы свертывания. В этом исследовании, фибринового сгустка характеристики с использованием мутности и TEG проводятся путем различных концентраций фибриногена и тромбина, ионическая сила, рН, и общая концентрация белка в свертываемости раствора для имитации различных обстоятельств свертывания^{виво 14}. Подробная информация об этих изменениях в протоколе была включена в раздел 5.

Protocol

1. Подготовка фосфатного буферного солевого раствора (PBS)

ПРИМЕЧАНИЕ: PBS был использован на протяжении всего этого исследования, как описанные анализы не требуют добавления кальция. Важно отметить, что при добавлении кальция, часто используется для повторного кальцификации цитированных продуктов крови, PBS следует избегать, как кальций, как известно, осаждаются в фосфатных буферов.

1. Сделать 0,01 М, рН 7,4 PBS буфера путем смешивания 137 мМ хлорида натрия, 1,8 мМ фосфат фосфата фосфата, 10 м натрия фосфат дибазий и 2,7 мМ м хлорида калия в воде DI.
2. Проверить буфер рН с помощью зонда рН и настроить рН с использованием гидроксида натрия или соляной кислоты по мере необходимости.
3. Используйте этот PBS для подготовки фибриногена и свертывания анализов (если иное не указано).
   ПРИМЕЧАНИЕ: Буфер предлагается воссоздать фибриногенный порошок, так как регидратация в воде DI может привести к фибриногену осадков даже при 37 градусов по Цельсию.

2. Приготовление и хранение белков

ПРИМЕЧАНИЕ: На протяжении всего протокола концентрации белковых запасов готовятся в различных концентрациях для мутности и TEG, чтобы обеспечить последовательное соотношение соли, ВОДЫ DI, PBS и других остаточных факторов в окончательных растворах свертывания.

1. Приготовление и хранение фибриногена
   ПРИМЕЧАНИЕ: Загрязнения в коммерчески доступных фибриногена включают значительное количество фактора XIII, остаточное количество других факторов свертывания крови, буфер хранения и соли. В присутствии кальция, фактор XIII, как известно, перекрестной сети сгустка фибрина. Этот эффект способствует ужесточению структуры сгустка и повышенной прочности сгустка, влияющих на характеристику фибрина. Коммерчески доступные наборы активности могут быть использованы для определения уровня активного фактора XIIIa. Чтобы свести к минимуму изменчивость, вызванную фактором XIIIa, эксперименты должны быть разработаны с исключением кальция или дополнительные шаги по удалению фактора XIIIa должны быть включены в этот протокол. Кроме того, следует оценить содержание соли для хранения белка и буферного типа и при необходимости провести диализ для перевода в предпочтительный рабочий буфер анализа.
   1. Взвешивание и алицит лиофилизированный фибриногенный порошок (бык или человек) в 2 мл трубки при 20 мг белка на трубку и хранить aliquots при -20 градусов по Цельсию на срок до 6 месяцев.
   2. Разрешить фибриноген aliquot акклиматизироваться к RT (комнатная температура) в течение 10 минут в день эксперимента. Восстановленный фибриноген, добавив 600 МКЛ PBS к алициту за 20 минут до использования.
   3. Возьмите 10 МКЛ фибриногена и разбавьте его 190 МКЛ PBS в прозрачной 96-ну пластины или кюветт. Определите концентрацию фибриногена, принимая абсорбцию на 280 нм с помощью коммерческого спектрометра и его программного обеспечения.
   4. Рассчитайте концентрацию фибриногена (мг/мл) с помощью закона пива. Подготовка 12 мг/мл (для анализа мутности) и 3,2 мг/мл (для TEG) фибриногенных фондовых растворов путем дальнейшего разбавления PBS (если иное не указано).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Определение концентрации фибриногена (мг/мЛ) по закону пива:
      
      Коэффициент вымирания моляра: ɛ 513 400 л^{мол -1 см -1 при} 280 нм; Патленгт (L); Фактор разбавления (D); Молекулярный вес (МВт) - 340 000 da. ɛ вытекает путем умножения E^0,1% и 1,51 (280 нм) (коэффициент вымирания, данный поставщиком) с МВт.
2. Приготовление и хранение тромбина
   1. Восстановленный лиофилизированный тромбин (бычий или человеческий, 1000 U запасов) в 200 МКЛ деионизированной (DI) воды, чтобы сделать 200 йл из 5000 U/mL тромбина фондового раствора.
   2. Сделайте 5 мкл (20 U/tube) алициты раствора и держите алициты замороженными при 20 градусах Цельсия.
   3. Оттепель тромбин aliquots на RT в течение 15 минут в день эксперимента и сделать тромбин рабочий раствор, разбавляя его до 20 U/mL для анализа мутности и 18 U/mL для TEG с ВОДОЙ DI (если иное не указано).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Меры предосторожности должны быть приняты для поддержания активности ферментов, которые могут быть выполнены путем поддержания ферментов на льду во время оттаивания и использования; однако, никакого снижения активности тромбина не наблюдалось при использовании непосредственно после оттаивания на RT.

3. Мутность

1. Используйте любой коммерчески доступный спектрометр, который имеет диапазон поглощения 350 - 700 нм и соответствующее программное обеспечение для мониторинга мутности сгустка с течением времени (см. Таблицу материалов).
2. Включите спектрометр и откройте соответствующее программное обеспечение анализа.
3. Выберите табличку 1 и откройте вкладку настроек пластины. Нажмите режим ABS и Kinetic, чтобы контролировать динамическое чтение абсорбанса с течением времени.
4. Выберите 550 нм (или любое значение в диапазоне 350 - 700 нм) в вкладке волны и отрегулируйте общее время времени времени времени, чтобы быть 60 мин с интервалом 30 с в вкладке времени. Выберите скважины, представляющие интерес для чтения, подчеркнув скважины. При необходимости отрегулируйте другие настройки.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Выбор длины волны на нижнем конце диапазона (около 350 нм) обеспечивает лучшую чувствительность, но абсорбция может также превышать предел обнаружения спектрометра. Наиболее часто используемая длина волны для измерения мутности составляет 405 нм в литературе; однако в этом протоколе используется 550 нм для обеспечения того, чтобы динамические значения мутности были в пределах предела обнаружения для всех экспериментов. Выбранный интервал чтения должен быть как можно более коротким для достижения наивысшего уровня чувствительности анализа. Это будет зависеть от спектрометра и количества скважин, читаемых во время данного анализа.
5. Возьмите УФ-прозрачную пластину из 96 колодец. Pipette 140 хл PBS в хорошо, который выбран для чтения. Добавить и смешать 10 мкл тромбина (20 U/mL) в колодец.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Не используйте высокие связывающие анализные пластины, чтобы свести к минимуму неспецифическую связывание белка с поверхностью колодец. Это может повлиять на дисперсию белка в растворе и привести к высокой изменчивости анализа.
6. Немедленно инициировать свертываемость путем добавления 50 МКЛ фибриногена (12 мг/мл) в колодец для получения раствора свертывания крови 200 л с конечной концентрацией 3 мг/мл фибриногена и 1 тромбина U/mL. Смешайте содержимое в колодец, трубя вверх и вниз пять раз заботясь, чтобы избежать создания пузырьков в растворе, поскольку они будут влиять на поглощение путем рассеяния света.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Используйте многоканальный пипетку при запуске нескольких образцов сгустка на одной тарелке в то же время. Рекордные разницы во времени между скважинами и период времени до первого чтения инструментом, чтобы компенсировать время свертывания.
7. Поместите 96-хорошо пластины в держатель и нажмите Начало в программное обеспечение, чтобы начать мутность чтения на RT.
   ПРИМЕЧАНИЕ: При проведении анализа при повышенной температуре спектрометр, пластина и реагенты должны поддерживаться при желаемой температуре до начала образования тромба.
8. После завершения, получить данные мутности и получить кривую отслеживания мутности, замышляя изменение поглощения с течением времени в программном обеспечении построения.
9. Получить Turb^Max (максимальная мутность, указывая на толщину волокна фибрина и плотность сети фибрина), принимая максимальное значение поглощения кривой с течением времени.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Соотношение массы/длины волокна Фибрина может быть рассчитано из значений мутности с использованием уравнения, представленного в следующей рукописи^8.
10. Рассчитайте 90% максимальной мутности, умножая Turb^Max на 90%. Получите Turb^Time, вычисляя время от инициации сгустка до 90% максимальной мутности.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Время до 90% максимальной мутности является более надежным метрики, чем время для абсолютной максимальной мутности, как это лучше представляет сгусток времени, устраняя весьма переменной заключительный период образования сгустка. Дополнительные параметры свертывания, такие как время начала образования тромба (время от начала теста до того, когда абсорбация начинает увеличиваться), и скорость образования тромбов (Vmax, самый большой наклон линейной области в кривой отслеживания мутности) также могут быть извлечены из отслеживания мутности.

4. Тромбоэластография (TEG)

1. Включите анализатор тромбоэластографа и подождите, пока температура стабилизируется при температуре 37 градусов по Цельсию.
2. Открытый TEG - программное обеспечение. После вошли в систему, создать имя эксперимента в разделе ID.
3. Проведте электронный тест для всех каналов, следуя подсказкам программного обеспечения на экране. Поместите рычаг обратно в положение нагрузки, как только все проверки будут завершены.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Требуется электронный тест TEG, который должен проводиться каждый раз при использовании инструмента. TEG coagulation контроль анализы (с использованием TEG уровня 1 и уровня 2 контроля) необходимы на регулярной производитель предложил интервалы при использовании для клинических образцов.
4. Нажмите на вкладку TEG, вввените образец информации для каналов, которые будут использоваться. Поместите четкую чашку TEG без покрытия в соответствующий канал. Сдвиньте носитель вверх и нажмите чашку нижней 5 раз, чтобы прикрепить булавку к торсион стержень. Опустите перевозчика и нажмите чашку вниз в базу перевозчика, пока он не "клики".
5. Пипетка 20 МКЛ раствора тромбина (18 U/mL) в чашку TEG. Немедленно инициировать свертывание, добавив 340 л фибриногена (3,2 мг/мл) в чашку TEG для получения раствора свертывания крови 360 л с окончательной концентрацией 3 мг/мл фибриногена и 1 U/mL тромбина в чашке. Смешайте содержимое, трубя вверх и вниз пять раз.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Потенциальные факторы свертывания крови или другие компоненты, представляющие интерес, должны быть добавлены в ходе этого шага, будучи осторожными, чтобы всегда поддерживать окончательный объем 360 МЛ в чашке TEG.
6. Сдвиньте чашку загружен перевозчика вверх, переместить рычаг в положение чтения и нажмите Начало в программном обеспечении, чтобы инициировать чтение TEG.
7. После завершения TEG (примерно через час) извлечения параметров TEG и получения кривой трассировки TEG путем построения амплитуды с течением времени в программном обеспечении для построения.
8. Соберите MA как TEG^Max (максимальная амплитуда свидетельствует о прочности сгустка) и TMA как TEG^Time (время до максимальной амплитуды) от программного обеспечения.
   ПРИМЕЧАНИЕ: MA рассчитывается программным обеспечением как максимальная амплитуда в то время, когда амплитуда имеет менее 5% отклонения в течение 3-минутного периода времени. TMA определяется как время от максимальной скорости генерации тромба (около точки разделения) до MA. Другие параметры также могут быть полезны для оценки при выполнении анализа тромбов. Некоторые примеры этих параметров включают в себя: R-время (время от начала теста до того, когда амплитуда достигает 2 мм), K (время от конца R до когда амплитуда достигает 20 мм), альфа (наклон линии между R и K), и CLT (время свертывания лиза).

5. Фибрин характеристика при различных условиях свертывания

ПРИМЕЧАНИЕ: Выполните эксперименты по характеристике фибрина, модулируя определенную переменную в решениях свертывания крови, таких как: концентрации фибриногена и тромбина, ионическая сила, рН и общие концентрации белка. Экспериментальные препараты с этими примерами переменных описаны в этом разделе; однако, другие факторы свертывания и условия интереса можно заменить также. Тщательно выберите подходящую буферную систему с учетом каждого уникального анализа требований. Для анализа мутности и TEG, включите буфер только контроль, чтобы обеспечить точное вычитание фона при анализе эффекта этих переменных.

1. Изменяемая концентрация фибриногена (1, 2, 3, 4, 5 мг/мл)
   1. Отрегулируйте шаг 2.1.4 для подготовки фибриногенного запаса в различных концентрациях (4, 8, 12, 16, 20 мг/мл для анализа мутности и 1.1, 2.1, 3.2, 4.2, 5.3 мг/мл для TEG).
   2. Отрегулируйте шаг 3.6, чтобы "добавить 50 мкл фибриногена (4, 8, 12, 16, 20 мг/мл) в несколько колодцев 96 скважин" для анализа мутности.
   3. Отрегулируйте шаг 4.5, чтобы "добавить 340 МКЛ фибриноген (1,1, 2,1, 3,2, 4,2, 5,3 мг/мл) в четкие чашки TEG" для TEG.
2. Различаемая концентрация тромбина (0,1, 0,3, 0,6, 0,8, 1, 2,5, 5, 10 U/mL)
   1. Отрегулируйте шаг 2.2.3 для подготовки запасов тромбина в различных концентрациях (2, 6, 12, 16, 20, 50, 100, 200 U/mL для анализа мутности и 1.8, 5.4, 10.8, 14.4, 18, 45, 90, 180 U/mL для TEG).
   2. Отрегулируйте шаг 3.5, чтобы "добавить 10 тромбина (2, 6, 12, 16, 20, 50, 100, 200 U/mL) в несколько скважин 96 скважин" для анализа мутности.
   3. Отрегулируйте шаг 4.5 к «трубе 20 тромбину L (1.8, 5.4, 10.8, 14.4, 18, 45, 90, 180 U/mL) в ясные чашки TEG» для TEG.
3. Различная ионная прочность (0,05, 0,13, 0,14, 0,15, 0,16, 0,17 и 0,3 М)
   1. Растворить хлорид натрия (21, 101, 111, 121, 131, 141 и 271 мМ) вместе с 1,8 мМ фосфатом калия монобазным, 10 м Натрием фосфатным дибазом и 2,7 мМ хлоридом калия в воде ДИ, чтобы сделать 0,01 М.П. решения с различной ионной прочностью.
   2. Отрегулируйте шаг 1.3 для использования PBS сделанных на по-разному ионных прочностях для того чтобы подготовить fibrinogen и свертывая разрешения для обоих анализов мутности и TEG.
4. Переменный рН (5,8, 6,6, 7,3, 7,4, 7,5 и 8,0)
   1. Растворить фосфатный дибаз (0,7, 3,2, 7,7, 8,1, 8,4, 9,5 мМ) и монобазный фосфат калия (8,2, 6,0, 2,0, 1.7, 1.4, 0.5 mM) вместе с 2.7 mM хлоридом калия и хлоридом натрия (153, 147, 138, 137, 136, 134 mM) для того чтобы сделать разрешения 0.01 M PBS с меняя pH и окончательной ионной прочностью на 0.165 M.
   2. Проверить значение буфера рН с помощью зонда рН и при необходимости настроить рН.
   3. Отрегулируйте шаг 1.3 для использования PBS, сделанного при различных рН для подготовки фибриногена и свертывания раствора для анализа мутности и TEG.
5. Изменяемая концентрация альбумин (0, 20, 40, 50, 60, 80, 100 мг/мл)
   1. Растворите 2 г лиофилизированного альбумин в 500 МКЛ PBS в RT в течение 20 минут в день эксперимента.
   2. Определите концентрацию альбуминов с помощью той же процедуры, упомянутой в шаге 2.1.3 и 2.1.4 с коэффициентом вымирания моляла 43800 l mol^{No1 см No1} (при 280 нм) для альбумин.
   3. Подготовка альбумин запасов в различных концентрациях.
   4. Отрегулируйте шаг 3.5 до "Pipette 40 йL PBS в хорошо, который выбран для чтения и добавить 10 йл тромбина (20 U/mL)". Отрегулируйте шаг 3.6 к «Инициировать свертываемость немедленно путем добавлять фибриноген 50 л (12 мг/mL) с альбомином 100 l (0, 40, 80, 100, 120, 160, 200 мг/мл) в несколько скважин до конечной концентрации 3 мг/мл фибриногена, 1 тромбина U/mL и 0, 20, 40, 50, 60, 80, 100 мг/мл альбумин в колодцах."
   5. Отрегулируйте шаг 4.5 до "Немедленно инициировать свертываемость, добавляя смесь из 200 МКЛ альбумин (36, 72, 90, 108, 144, 180 мг/мл) и 140 л 7,7 мг/мл фибриногена в чашки TEG для получения раствора свертывания крови 360 л с окончательной концентрацией 3 мг/мл фибриногена, 1 U/mL тромбина и 0, 20, 40, 50, 60, 80, 100 мг/мл альбумин в чашках TEG."

Results

Эксперименты, показанные на рисунке 1, являются репрезентативными кривыми отслеживания мутности человеческих и бычьих сгустков фибрина на различных уровнях фибриногена. Представитель TEG отслеживания кривых для формирования сгустка фибрина на различных уровнях фибриногена показаны на рисунке 2. Обе кривые трассировки показывают, что после периода задержки после начала образования сгустка, мутность сгустка или амплитуда сгустка увеличивается с течением времени и ...

Discussion

Этот протокол демонстрирует использование двух различных инструментов характеристики сгустка тестирования упрощенной модели сгустка фибриногена/тромбина с использованием коммерчески доступных компонентов. И TEG и мутность анализы легко провести. Они не только обеспечивают конечные точки сгустка обследований, таких как максимальное образование сгустка (Turb^Max и TEG^Max) и время образования сгустка (Turb^Time и TEG^Time), но и оценить динамический процесс формирования сгустка. Это ...

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
96-Well Clear Flat Bottom UV-Transparent	Microplate Corning	3635	Необработанный акриловый сополимер, нестерильный
альбумин из сыворотки крови человека	Millipore	Sigma A1653	≥ 96%, лиофилизированный порошок
Arium Mini Plus Ultrapure Water System	Sartorius	NA	DI источник воды
Бычья сыворотка альбумин	Millipore Sigma	A2153	≥ 96%, лиофилизированный порошок
Одноразовые стаканчики и булавки для TEG 5000 (Прозрачный)	Гемонетика	REF 6211
Фибриноген, Бобычья плазма	Миллипор Sigma	341573	содержит более 95% свертываемого белка
Фибриногена, Истощенный плазмой человека,	Миллипор	341578	Содержит &ge 95% свертываемых белков.
Фосфатный буферный физиологический раствор	Millipore Sigma	P3813	Powder, pH 7,4, для приготовления 1 л растворов
Potassium chloride	Millipore Sigma	60130	≥ Чистота 99,5%
Фосфат калия одноосновной	Millipore Sigma	P9791	≥
pH-метр 98% SevenEasy pH-метр	Mettler Toledo	S20
Хлорид натрия	Millipore Sigma	71378	≥
Двухосновной фосфат натрия	Millipore Sigma	71636	≥ 99,5% чистота
SpectraMax M5 мультидетектирующая микропланшетная система считыватель	молекулярных приборов	M5
TEG 5000 Тромбеластограф Система анализа гемостаза	Гемонетика	07-022
Тромбин, бычьи	миллипоры Сигма	605157
тромбин, плазма человека, высокоактивные	миллипоры Сигма	605195