Животные модели тяжелого острого панкреатита позволяют изучать патофизиологические изменения на начальной стадии, облегчая наблюдение за эволюцией воспалительных явлений. Здесь мы приводим протокол индукции тяжелого острого билиарного панкреатита ретроградной инфузией таурохолата натрия в проток поджелудочной железы анестезированных мышей C57BL/6.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Вызванный таурохолатом натрия тяжелый острый панкреатит у мышей C57BL/6
* These authors contributed equally
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Индукция билиарного острого панкреатита путем инфузии таурохолата натрия широко используется научным сообществом благодаря представлению клинического состояния человека и воспроизведению воспалительных событий, соответствующих наступлению клинического билиарного панкреатита. Тяжесть повреждения поджелудочной железы может быть оценена путем измерения концентрации, скорости и объема введенной желчной кислоты. Это исследование предоставляет обновленный контрольный список материалов и методов, используемых в воспроизведении протокола, и показывает основные результаты этой модели острого панкреатита (АП). Большинство предыдущих публикаций ограничились воспроизведением этой модели на крысах. Мы применили этот метод на мышах, что дает дополнительные преимущества (т.е. наличие арсенала реагентов и антител для этих животных наряду с возможностью работы с генетически модифицированными штаммами мышей), которые могут иметь отношение к исследованию. Для индукции острого панкреатита у мышей мы представляем систематический протокол с определенной дозой 2,5% таурохолата натрия со скоростью инфузии 10 мкл / мин в течение 3 мин у мышей C57BL / 6, которая достигает максимального уровня тяжести в течение 12 ч после индукции и выделяет результаты с результатами, которые подтверждают метод. При практике и технике общее расчетное время, от индукции анестезии до завершения инфузии, составляет 25 минут на животное.
Введение
У человека наличие желчных камней является наиболее частой причиной панкреатита из-за непроходимости терминального участка холедохала, прерывая течение выделений поджелудочной железы и вызывая интенсивный воспалительный процесс в поджелудочной железе, с повышением концентрации пищеварительных ферментов в сыворотке крови и медиаторов воспаления1,2.
Для объяснения развития острого панкреатита (АП) были предложены две различные теории. Теория «общего канала» предполагает, что камни, присутствующие в желчном пузыре, препятствуют дистальной системе общих желчных протоков, позволяя секрец....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Этот протокол был одобрен Комитетом по этике использования животных Медицинской школы USP, Num. Проект: 1343/2019-CEUA: FMUSP. Для этого протокола использовали мышей C57BL/6 в возрасте 6 недель с массой тела 20 ± 2 г (n = 9/группа).
1. Лапаротомия
- Обезболивать животных ксилазином (10 мг/кг) и раствором кетамина (80 мг/кг) подкожно (0,1 мл/10 г массы тела) с помощью шприца 1 мл и иглы 13х0,45мм 26г 1/2. Проверьте достаточную глубину анестезии, зажав палец ноги. Контролируйте температуру тела с помощью подогреваемых прокладок. Убедитесь, что все хирургические материалы стерильны.
- Очистите область живота 5% раствором повидо....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Тяжесть панкреатита была оценена между 0-3 по шкале Шмидта21, где ноль соответствует отсутствию, 1 соответствует мягкому присутствию (<25%), 2 соответствует умеренному присутствию (от 25 до 50%) и 3 соответствует интенсивному присутствию (> 50%) (таблица 1). Выполненные измерения включали активность амилазы плазмы, отек поджелудочной железы, ацинарную клетку, травму / некроз, воспаление поджелудочной железы (путем гистологического анализа окр.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Способ индуцирования острого панкреатита ретроградной инфузией таурохолата натрия уже показан у крыс22,23,24. Три подобные работы, опубликованные в 2008, 2010 и 2015 годах, послужили справочным материалом для протокола3,14,15. В этой работе мы перечислим все критические шаги для воспроизведения этого метода на мышах C57BL/6 и некоторые .......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторам нечего раскрывать.
Благодарности
Авторы благодарят программу последипломного образования в медицинской клинике Университета Сан-Паулу; Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) и Медицинская школа Университета Сан-Паулу (FMUSP).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Игла 0,4 мм | INTRAG MEDICAL TECH | 30G | |
| 0,54 мм полиэтиленовая трубка | Tygon | 730010-Пенополистирольный | |
| блок | - | - | - |
| малярная лента для крепления мыши | Missner | 1236-Инфузионный | |
| насос запланирован на 10&м; Л/мин. | Аппаратусо-перистальтический насос Havard серии | MA1 55-7766 | Модель 66 Малые перистальтические |
| ножницы и щипцы | |||
| Антисептик провидин йод | Pfizer | 12086OR | антисептика |
| 70% этанол | SIGMA | 459836 | Смесь 700 мл 100% этанола с 300 мл dH2O |
| Лезвие бритвы | Lord | bdk9a1ghk6 | Для трихотомии |
| таурохолат натрия | Sigma-Aldrich | 86339- 1G | НОМЕР КАС- 345909-26-4 |
| Зажим для микрососудов | Medicon Surgical | 56.87.35 | Аппроксиматор, отверстие 4,0 мм, давление закрытия 30 - 40 г |
| 6-0 пролена | Bioline | 5162 | Шовная линия |
| Ketamin NP (cloridrato de dextrocetamina) 50мг/мл | Cristá lia | ||
| Xilazine 2% | Syntec | ||
| Стерильный физиологический раствор (0,9% (масс./об.) физиологического раствора) | Farmace | 105851 | |
| Methyl Blue | Sigma-Aldrich Chemicals | M5528 | |
| MILLIPLEX КАРТА Мышиная панель магнитных гранул цитокинов/хемокинов - иммунологический мультиплексный анализ | MERCK | MCYTOMAG-70K | Одновременный анализ нескольких цитокинов и хемокинов с помощью мультиплексных анализов на основе бусин с использованием технологии Luminex в образцах сыворотки мыши, плазмы и клеточных культур. |
| Amylase Assay | Labtest | 11 | |
| Desmarres ретрактор 13-мм<бр/> шириной | ROBOZ | RS-6672 |
Ссылки
- Li, X., et al. Significantly different clinical features between hypertriglyceridemia and biliary acute pancreatitis: A retrospective study of 730 patients from a tertiary center. BMC Gastroenterology. 18 (1), 1-8 (2018).
- Rechreche, H., Abbes, A., Iovanna, J. L.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
