Количественная оценка циркулирующей ДНК свиней в крови модели ксенотрансплантации

Yangyang Deng; Ming Zhou; Ying Lu; Jiao Chen; Zuhui Pu; Dongjing Yu; Yifan Dai; Yongqiang Zhan; Lisha Mou

doi:10.3791/61579

Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Количественная оценка циркулирующей ДНК свиней в крови модели ксенотрансплантации

3.4K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/61579

⸱

22 сентября 2020 г.

Yangyang Deng^*¹^,² , Ming Zhou^*¹^,³ , Ying Lu¹ , Jiao Chen¹ , Zuhui Pu⁴ , Dongjing Yu¹^,⁵ , Yifan Dai⁶ , Yongqiang Zhan⁷ , Lisha Mou¹

^* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

В этом протоколе были разработаны свиные специфические грунтовки, построены плазмиды, содержащие свиные фрагменты ДНК, и установлены стандартные кривые для количественной оценки. Используя вид-специфические грунтовки, cpsDNA было количественно qPCR в моделях трансплантации клетки свиньи к мыши и свинья-к-обезьяна модели трансплантации артерии.

Аннотация

Ксенотрансплантация является возможным методом лечения органной недостаточности. Однако, как эффективно контролировать иммунный отказ от ксенотрансплантации является проблемой для врачей и исследователей. В этой рукописи описывается простой и эффективный метод мониторинга иммунного отторжения в моделях трансплантации клеток от свиньи до мыши и моделях трансплантации патчей от свиньи к обезьяне. Циркулирующая ДНК является потенциально неинвазивным биомаркером для повреждения органов. В этом исследовании, циркулирующих свиней конкретных ДНК (cpsDNA) был мониторинг во время ксенотрансплантата отторжения количественных ПЦР в режиме реального времени (qPCR). В этом протоколе были разработаны свиные специфические грунтовки, построены плазмиды, содержащие свиные фрагменты ДНК, и установлены стандартные кривые для количественной оценки. Вид-специфические грунтовки затем были использованы для количественной cpsDNA по qPCR в свинью к мыши модели трансплантации клеток и свиньи до обезьяны артерии патч трансплантации моделей. Значение этого метода предполагает, что он может быть использован в качестве простого, удобного, недорогого и менее инвазивного метода для мониторинга иммунного отторжения ксенотрансплантации.

Введение

Органная недостаточность является одной из основных причин смерти¹. Трансплантация клеток, тканей и органов является эффективным способом лечения органной недостаточности^2. Тем не менее, нехватка донорских органов ограничивает клиническое применение этого^{метода 3,}^4. Исследования показали, что свиньи могут быть использованы в качестве потенциального источника человеческих органов для клинической^{трансплантации 5,}^6. Однако пересадка меж вида органов сталкивается с опасным иммунным отторжением. Поэтому крайне....