Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Кремниевые нанопроводы и оптическая стимуляция для исследований внутриклеточного и межклеточного электрического соединения

4.1K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/61581

⸱

28 января 2021 г.

 ,  ,  , 
1The James Franck Institute, The University of Chicago, 2Department of Chemistry, The University of Chicago, 3The Institute for Biophysical Dynamics, The University of Chicago

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

Этот протокол описывает использование кремниевых нанопроводов для внутриклеточной оптической биомодулации клетки простым и простым в работе методом. Техника очень адаптируется к различным типам клеток и может быть использована для in vitro, а также in vivo приложений.

Аннотация

Миофибробласты могут спонтанно интернализировать кремниевые нанопроводы (SiNWs), что делает их привлекательной мишенью для биоэлектронного применения. Эти клеточные кремниевые гибриды предлагают бесхитные оптические возможности модуляции с минимальным возмущением к нормальному поведению клеток. Оптические возможности получены по фототермальным и фотоэлектрическим свойствам SiNWs. Эти гибриды могут быть собраны с использованием стандартных методов культуры тканей, а затем применяются к различным биологическим сценариям. Мы демонстрируем здесь, как эти гибриды могут быть использованы для изучения электрической связи сердечных клеток и сравнить, как миофибробласты пара друг с другом или кардиомиоцитов. Этот процесс может быть выполнен без специального оборудования за флуоресцентный микроскоп с соединенной лазерной линии. Также показано использование специально построенной matLAB рутины, которая позволяет количественное распространение кальция внутри и между различными клетками в культуре. Миофибробласты, как показано, имеют более медленный электрический ответ, чем у кардиомиоцитов. Кроме того, межклеточное размножение миофиброласта показывает несколько более медленные, хотя и сопоставимые скорости с их внутриклеточными скоростями, что предполагает пассивное распространение через разрывные соединения или нанотрубки. Этот метод очень адаптируется и может быть легко применен к другим клеточным аренам, для in vitro, а также in vivo или ex vivo исследований.

Введение

Все биологические организмы используют электричество в виде ионов для регулирования клеточного поведения. Клеточные мембраны содержат различные типы специфических ионных каналов, позволяющих пассивно и активно транспортировать ионы. Эти ионы регулируют функции возбудимых клеток, таких как нейронная активность и скелетная и сердечная соток. Тем не менее, биоэлектричность также играет важную роль в невозбудимых клетках, регулирующих многие клеточные функции,такие как пролиферацией клеток 1,нейроиммунностью 2,3,4и дифференциацией стволовыхклеток 5.

В последние десятилетия область биоэлектричества привлекла все более высокий уровень интереса, что способствовало развитию многочисленных технологий биоэлектронных интерфейсов. Microelectrode патч пипетки являются золотым стандартом внутриклеточной записи и стимуляции6. В этой методологии, стеклянная пипетка вытащил при определенных условиях, чтобы сформировать острый край с поры размером несколько микрон. Эта пипетка заполнена буфером, а пипетка позволяет напрямую контактировать буфера с внутриклеточным объемом. Это приводит к биоэлектрический интерфейс, который дает чрезвычайно высокий сигнал к шуму отношения, точный контроль над клеточной электрической активности, и чрезвычайно высокое временное разрешение. Хотя эта методология является чрезвычайно мощным инструментом, который недавно был сокращен до нано-пипеткиконфигурации 7, это связано с несколькими важными техническими ограничениями. Эффект разбавленияцитозолом 8,а также механические вибрации, ограничивает его полезность краткосрочными допросами, и требует дорогостоящего специализированного оборудования и высокого уровня технических навыков. Кроме того, его громоздкость ограничивает количество клеток, которые могут быть записаны или стимулированы одновременно, и из-за его инвазивности, он не может быть перенастроен на протяжении всего эксперимента. Для преодоления этих ограничений были разработаны массивы микроэлектродов, но размер электродов ограничивает пространственное разрешение, а также внутриклеточный доступ. Nanoelectrode массивы позволяют внутриклеточной записи и стимуляции, но требуют абразивного электропорации для доступа кцитозолу 9,10. Кроме того, все эти методологии связаны субстратами и, таким образом, ограничиваются культурами клеток в пробирке или внешними поверхностными клетками, не имеют доступа к клеткам, которые находятся внутри трехмерной (3D) ткани.

Optogenetics11 широко используется для решения этих 3D и in vivo ограничений. Однако оптогенетические методы основаны на возмущениях светоактивных плазменных мембранных ионных каналов, которые распространяются на плазменной мембране, ограничивая 3Dпространственное разрешение 12 и внутриклеточные возможности.

Недавно мы показали, что кремниевые нанопроводы (SiNWs) могут быть использованы для выполнения внутриклеточного биоэлектрического допроса с субмикроном пространственного разрешения с различными невозбудимыми клетками, а именно сердечными миофибробластами и олигодендроцитами13. Кроме того, мы использовали эти SiNWs для выполнения экс-vivo клеток конкретных допроса в 3D сердечной ткани, чтобы исследовать, как сердечные клетки электрически пара in vivo14. Основным преимуществом этой методологии является ее простота; он не требует каких-либо генетических изменений или громоздких приборов. Многие клетки спонтанно интернализировать фото-реакции SiNWs без необходимости звуковой или электропорации15. Кроме того, они спонтанно избежит эндосомной инкапсуляции и образуют бесшовную интеграцию с цитозолом и внутриклеточнымиорганеллами 13,15. Эти клеточные-SiNWs композиты, называются клеточно-силиконовыми гибридами, обладают динамичным, мягким и универсальным характером оригинальной клетки, а также оптометическими возможностями SiNWs. После гибридизации гибрид cell-SiNW может быть собран с использованием стандартных методов культуры тканей и использован для различных применений, таких как внутриклеточная биоэлектрическая стимуляция; изучение межклеточной биоэлектрической связи в пробирке; и для in vivo ячейки конкретных допросов. Поскольку эффективная стимуляция требует совместной локализации высокой плотности оптической мощности и SiNWs, можно достичь высокого пространственного разрешения как в 2D, так и в 3D. В этом протоколе мы подробно описываем методологию, а также то, как можно анализировать результаты. Основное внимание уделяется внутриклеточному и межклеточному исследованию in vitro, однако внедрение этой методологии может быть непосредственно использовано для многих других биологических сценариев.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Для обеспечения соблюдения этических стандартов все процедуры для животных, связанные с изоляцией кардиомиоцитов от сердца грызунов, были впервые одобрены Комитетом по институциональному уходу и использованию животных Чикагского университета (IACUC). Кроме того, все эксперименты на животных были проведены в полном соответствии с руководством Чикагского университета IACUC.

1. Подготовка гибридов cell-SiNWs

  1. Изолировать первичные кардиомиоциты (СМ) с помощью коммерческого комплекта в соответствии с руководящими принципами производителя.
  2. Подготовка полного DMEM для первичной изоляции клеток дополняется 10% тепла инактивированной сыворотки крупного рогатого скота плода, 1% пенициллин-стрептомицин, и 1% L-глутамин.
  3. Чтобы изолировать миофибробласт (MFs) от подвески MFs-CMs, предварительно пластины изолированных клеток на ткани культуры блюдо (клетки изолированы от 2 сердца от шага 1,1. на 100 мм блюдо) на 1 ч. По мере того как CMs нужно fibronectin или поверхность обработанной коллагена для того чтобы придерживаться, только MFs прикрепят к поверхности культуры ткани.
  4. Аспирировать обогащенную подвеску клеток CMs. Эти CMs могут быть использованы для гетеро-клеточных экспериментов связи, как описано в разделе 3. Промыть MFs с DMEM для устранения любых оставшихся CMs из MFs блюдо.
  5. Добавьте свежую культурную среду в MFs и позвольте им размножаться до тех пор, пока они не будут 80% стечены (2-4 дня). Изменение среды через день.
  6. Когда клетки будут готовы (80% слияние), подготовить SiNWs для гибридизации шаг ниже (шаг 1.7).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Многие типы SiNWs могут быть использованы для этого. В этом эксперименте, SiNWs, которые были выращены путем химического осаждения пара (CVD) с основной оболочки p-i-n конфигурации соединения были использованы, как описаноранее 16. Во время роста CVD, SiNWs выращиваются на кремниевой пластины субстрата, и в конечном итоге хранятся в качестве кремниевых чипов, покрытых SiNWs.
  7. Вырезать 3 мм х 3 мм чип из пластины с CVD выросли SiNWs с помощью алмазного писца. Используйте острые типсы для обработки пластины и свести к минимуму площадь поверхности, которая коснулась с типсами, так как это может сломать SiNWs.
  8. Стерилизовать чип путем полоскания его с 70% этанола и позволяет этанола высохнуть в течение 30 минут под ультрафиолетовым светом в биобезопасности ламинарного потока капот.
  9. Перенесите чип в стерильную микроцентрифуговую трубку и промойте излишки этанола с помощью полных культурных средств массовой информации.
  10. Добавьте 1 мл культурных средств массовой информации и sonicate чип в sonication ванну в течение 1-10 мин. Средства массовой информации должны стать облачно, как SiNWs выпущены в средствах массовой информации.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Время и мощность Sonication должны быть оптимизированы для различных звуковых или различных клеток, так как более короткие продолжительности и более низкие мощности будут приносить больше SiNWs.
  11. Добавить подвеску SiNWs в 5 мл культурных средств массовой информации и семян его на 100 мм ткани культуры блюдо с MFs. Разрешить SiNWs интернализировать в течение 4 ч и промыть избыток SiNWs от 5x со средствами массовой информации. Разрешить частично интернализированных SiNWs для завершения интернализации, позволяя им сидеть еще 1 ч перед использованием.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Различные типы клеток могут нуждаться в различных концентрациях SiNWs и/или времени интернализации.
  12. Подготовка раствора коллагенового покрытия путем разбавления раствора коллагенового бульона (3 мг/мл) стерильной уксусной кислотой 20 мМ при соотношении 1:50. Добавьте раствор покрытия 0,5 мл в стеклянное дно 35 мм и дайте ему посидеть 1 ч при 37 градусах Цельсия. Снимите раствор и промойте блюдо стерильным PBS.
  13. Урожай клеточно-SiNWs гибридов путем лечения клеток с 3 мл трипсина в течение 2 мин при 37 градусов по Цельсию. Добавьте 10 мл культурных средств массовой информации и энергично промойте гибриды трубами. Центрифуга клетки мягко на 200 х г в течение 5 минут, чтобы избежать повреждения клеток с интернализированными SiNWs. Удалите излишки мультимедиа, приостановите клетки с 1 мл мультимедиа и посеять их на коллаген обработанные стеклянные нижней блюдо.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Гибриды могут быть посеяны в одиночку, для исследования внутриклеточных или межклеточных связи или с CMs для расследования гетеро-клеточных связи в пробирке.
  14. Выполните окончательную проверку интернализации SiNW путем маркировки цитозола клеток (calcein-AM, 4 МКМ) и мембраны (мембранный маркер, 2 МКМ) в течение 30 мин при 37 градусах Цельсия и визуализации клетки с помощью конфокальные микроскопии. Поскольку SiNWs являются высоко отражающими, отраженный свет может быть использован вместо флуоресценции, чтобы визуализировать их.

2. Подготовка клеток к внутриклеточным и межклеточным исследованиям

  1. Подготовка раствора коллагенового покрытия, как в 1.12
  2. Для внутриклеточной электрической стимуляции, гибриды культуры с низкой плотностью посева. Используйте стандартный гемоцитометр для подсчета ячеек из раздела 1.11. и семена 50000 клеток на 35 мм стеклянное дно блюдо в культуре средств массовой информации. Для межклеточных исследований используйте более высокую плотность клеток (500 000 клеток на блюдо). Для межклеточной связи между CMs и MFs, совместно культуры гибридов со свежеисцеленными CMs.
  3. Разрешить клеткам прикрепляться на ночь перед выполнением экспериментов оптической стимуляции. Для межклеточных исследований, позволяют 48 ч при 37 градусов по Цельсию для клеток, чтобы выразить межклеточный разрыв соединений до проведения эксперимента.
  4. Подготовка кальция чувствительный раствор красителя (может храниться в -20 градусов по Цельсию), добавив 50 МКЛ DMSO до 50 мкг Fluo-4 AM. Приготовьте окрашивающий раствор, разбавляя 1 мл красителя в 1 мл DMEM.
  5. Аспирировать культурную среду из клеток и добавить 1 мл окрашивания раствора. Разрешить краситель интернализировать в клетки в течение 20-30 мин при 37 градусов по Цельсию. Аспирировать краситель и промыть дважды стерильным PBS.
  6. Наконец, добавьте 1 мл предварительно разогретого фенол-красного свободного DMEM Media и позвольте внутриклеточному флуо-4 пройти деэстерификацию в течение 30 минут при 37 градусах Цельсия.
  7. Передача клеток в микроскоп для визуализации и стимуляции.

3. Оптическая визуализация и стимуляция

  1. Предварительно разогреть увлажненные микроинцубаторы до 37 градусов по Цельсию и пузырь воздуха-CO2 смеси (95:5).
  2. Используйте микроскоп с коллимированной лазерной линией, соединенной в световой путь для визуализации кальция и оптической стимуляции.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Сканирование конфокального микроскопа является наиболее простым вариантом из-за его возможности стимуляции точки. Тем не менее, эта процедура может быть сделано с помощью любого стандартного флуоресцентного микроскопа путем соединения коллимированного лазерного луча в бесконечность пространства светового пути с помощью пучка сплиттера. Любая цель микроскопа разработана таким образом, что коллимированный лазер, пройаваемый через него, будет направлен на дифракционное ограниченное лазерное пятно на фокусной плоскости. Длина волны лазера должна быть близка к возбуждающей свету, поэтому она будет отражена дихроическим зеркалом и пройдена фильтром возбуждения.
  3. Визуализуйте SiNWs и определите место стимуляции с помощью микроскопии яркого поля, передаваемого света или светоотражающего света. Затем перенастройка пути света в режим флуоресценции, сохраняя при этом точку стимуляции в заранее определенном месте SiNW.
  4. Проверка оптимальной мощности стимуляции и длины импульса для каждого размера SiNW и типа клеток, чтобы свести к минимуму фототермальное повреждение стимулируемых клеток. Для типичного протокола стимуляции выполните 2-10 с базовой записи внутриклеточной активности кальция. Затем нанесите один лазерный импульс мощностью 1-10 мВт и продолжительностью 1-10 мс (соответствующий 30-300 кВт/мм2),чтобы стимулировать SiNW, и записывают полученную волну кальция еще на 2-10 с.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Важно оптимизировать оптическую мощность и длину импульса для каждого размера SiNW и клеток. Это необходимо, чтобы свести к минимуму фототермальное повреждение стимулируемых клеток.
  5. Передача записанных фильмов оптической стимуляции, при необходимости, для дальнейшего анализа.

4. Обработка видео

  1. Визуализуйте изменения флуо-4 флуоресценции с помощьюмакроса 17 dF over F, доступного для ImageJ18,который вычисляет изменение флуоресценции для каждого пикселя и нормализуется средним значением базового уровня покоя. Преобразование вывода (формат плавающей точки) в 8 бит для дальнейшей обработки.
  2. Обработать фильм dF/F с помощьюселективного медианного фильтра, доступного в ImageJ. Определите параметры для удаления пикселей, где их значение более чем на 10 выше медианного значения в радиусе 2 пикселей, и замените это значение пикселя медианой.
  3. Рассчитайте оптический поток в каждом кадре с помощью алгоритма Лукаса-Канада, реализованного в арсенале инструментов Matlab Computer Vision. Выходом этой функции было векторное поле, содержащее x- и y-компоненты оптического потока в каждой точке каждого изображения (код доступен в дополнительном файле 1).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Средний оптический поток внутри клетки, lt;'gt;, соответствует развитию потока кальция внутри клетки. Дифференциал оптического потока, «Lt;»gt; обеспечивает точку времени, в которой была активирована сигнализация кальция, путем определения того, где сигнал был максимизироват. Кроме того, величина йлт; на самом максимуме коррелирует со скоростью, с которой фронт волны кальция прогрессирует через клетку.
  4. Рассчитайте межклеточную скорость передачи кальция в соответствии со следующим уравнением.
    vCa2 "r ij / ( tmax,j tmax,i ),
    где tmax,j и tmax, i - это время активации ячеек j и i, соответственно, и rij - это расстояние между центроидами клеток.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Способность этой методологии обеспечить прямой доступ к внутриклеточному цитозолу зависит от спонтанной интернализации SiNW в клетки. Хотя SiNWs будет проходить спонтанную интернализации вомногих типах клеток 15, некоторые клетки, такие как кардиомиоциты и нейроны, потребуется SiNWs для лечения, чтобы ихинтернализации 19. В этом протоколе мы описываем процесс интернализации р-и-н SiNWs с диаметром 200-300 нм и длиной 1-3 мкм в сердечных MFs. Рисунок 1A ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Мы продемонстрировали здесь простой способ выполнения внутриклеточной электрической стимуляции клеток. В этой демонстрации, мы использовали MFs, которые были prehybridized с SiNWs, а затем совместно с CMs. В целом, большинство размножающихся клеток имеют тенденцию к интернализации SiNWs, что позволяет использовать эту методологию со многими другими типами клеток. Более того, пока мы демонстрировали внутриклеточную стимуляцию клеток, те же принципы можно использовать для выполнения внеклеточной стимуляции клеток. Это може...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.

Благодарности

Эта работа поддерживается Управлением научных исследований ВВС (AFOSR FA9550-18-1-0503).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
35 мм Стеклянное дно посудыCellvisD35-10-0-N
3i Marianas Вращающийся диск Confocal3i
Calcein-AMInvitrogenC1430
CellMask Оранжевый Плазматический Мембранный МорилкаInvitrogenC10045
Коллаген I, крысиный хвостGibcoA1048301
Deluxe Diamond Scribing PenTed Pella54468
DMEM, высокий уровень глюкозы, пируват, без глутаминаGibco10313039
DMSO, безводныйинвитрогенD12345
Falcon Стандартные чашки для культуры тканейFalcon08-772E
Фетальная бычья сыворотка, сертифицированная, термоинактивированная,Gibco10082147
фибронектин Человеческий белок, плазмаGibco33016015
Fisherbrand 112xx Series Усовершенствованный ультразвуковой очистительFisher ScientificFB11201
Fluo-4, AM, клетка пердозированаInvitrogenF14201
FluoroBrite DMEM MediaGibcoA1896701
L-глутамин (200 мМ)Gibco25030081
OKO полная камера контроля окружающей среды (постоянная температура, влажность и CO2)OKO
PBS, pH 7,4Gibco10010023
пенициллин-стрептомицин (10 000 ед/мл)Gibco15140122
Pierce Primary Cardiomyocyte Isolation KitThermo Scientific88281
Trypsin-EDTA (0,25%), феноловый красныйGibco25200056

Ссылки

  1. Blackiston, D. J., McLaughlin, K. A., Levin, M. Bioelectric controls of cell proliferation: ion channels, membrane voltage and the cell cycle. Cell cycle. 8 (21), 3527-3536 (2009).
  2. Dantzer, R. Neuroimmune interactions: from the brain to the immune system and vice versa. Physiological Reviews. 98 (1), 477-504 (2017).
  3. Wohleb, E. S., Franklin, T., Iwata, M., Duman, R. S. Integrating neuroimmune systems in the neurobiology of depression. Nature Reviews Neuroscience. 17 (8), 497(2016).
  4. Veiga-Fernandes, H., Pachnis, V. Neuroimmune regulation during intestinal development and homeostasis. Nature Immunology. 18 (2), 116(2017).
  5. Sundelacruz, S., Levin, M., Kaplan, D. L. Role of membrane potential in the regulation of cell proliferation and differentiation. Stem Cell Reviews and Reports. 5 (3), 231-246 (2009).
  6. Sakmann, B., Neher, E. Patch clamp techniques for studying ionic channels in excitable membranes. Annual Reviews Physiology. 46 (1), 455-472 (1984).
  7. Jayant, K., et al. Targeted intracellular voltage recordings from dendritic spines using quantum-dot-coated nanopipettes. Nature Nanotechnology. 12 (4), 335-342 (2017).
  8. Sakmann, B., Neher, E. Patch clamp techniques for studying ionic channels in excitable membranes. Annual Review of Physiology. 46 (1), 455-472 (1984).
  9. Xie, C., Lin, Z., Hanson, L., Cui, Y., Cui, B. Intracellular recording of action potentials by nanopillar electroporation. Nature Nanotechnology. 7 (3), 185-190 (2012).
  10. Robinson, J. T., et al. Vertical nanowire electrode arrays as a scalable platform for intracellular interfacing to neuronal circuits. Nature Nanotechnology. 7 (3), 180-184 (2012).
  11. Fenno, L., Yizhar, O., Deisseroth, K. The development and application of optogenetics. Annual Review of Neuroscience. 34, 389-412 (2011).
  12. Packer, A. M., Russell, L. E., Dalgleish, H. W., Hausser, M. Simultaneous all-optical manipulation and recording of neural circuit activity with cellular resolution in vivo. Nature Methods. 12 (2), 140-146 (2015).
  13. Rotenberg, M. Y., et al. Silicon Nanowires for Intracellular Optical Interrogation with Sub-Cellular Resolution. Nano Letters. 20 (2), 1226-1232 (2020).
  14. Rotenberg, M. Y., et al. Living myofibroblast-silicon composites for probing electrical coupling in cardiac systems. Proceedings of the National Academy of Sciences U.S.A. 116 (45), 22531-22539 (2019).
  15. Zimmerman, J. F., et al. Cellular uptake and dynamics of unlabeled freestanding silicon nanowires. Science Advances. 2 (12), 1601039(2016).
  16. Jiang, Y., et al. Nongenetic optical neuromodulation with silicon-based materials. Nature protocols. 14 (5), 1339(2019).
  17. Ackman, J. dFoFmovie-CatFullAutoSave.java. , Available from: https://gist.github.com/ackman678/11155761 (2020).
  18. Rueden, C. T., et al. ImageJ2: ImageJ for the next generation of scientific image data. BMC Bioinformatics. 18 (1), 5229(2017).
  19. Lee, J. -H., Zhang, A., You, S. S., Lieber, C. M. Spontaneous internalization of cell penetrating peptide-modified nanowires into primary neurons. Nano Letters. 16 (2), 1509-1513 (2016).
  20. Lozano, O., Torres-Quintanilla, A., García-Rivas, G. Nanomedicine for the cardiac myocyte: where are we. Journal of Controlled Release. 271, 149-165 (2018).
  21. Lozano, O., et al. Nanoencapsulated quercetin improves cardioprotection during hypoxia-reoxygenation injury through preservation of mitochondrial function. Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2019, 7683091(2019).
  22. Gaudesius, G., Miragoli, M., Thomas, S. P., Rohr, S. Coupling of cardiac electrical activity over extended distances by fibroblasts of cardiac origin. Circulation Researach. 93 (5), 421-428 (2003).
  23. Klesen, A., et al. Cardiac fibroblasts : Active players in (atrial) electrophysiology. Herzschrittmacherther Elektrophysiology. 29 (1), 62-69 (2018).
  24. He, K., et al. Long-distance intercellular connectivity between cardiomyocytes and cardiofibroblasts mediated by membrane nanotubes. Cardiovascular Research. 92 (1), 39-47 (2011).
  25. Carvalho-de-Souza, J. L., et al. Photosensitivity of neurons enabled by cell-targeted gold nanoparticles. Neuron. 86 (1), 207-217 (2015).
  26. Wang, S. -H., Lee, C. -W., Chiou, A., Wei, P. -K. Size-dependent endocytosis of gold nanoparticles studied by three-dimensional mapping of plasmonic scattering images. Journal of Nanobiotechnology. 8 (1), 33(2010).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Изоляция миофибробластовкальциевый имиджингконфокальная микроскопиялазерная стимуляцияанализ щелевых контактовсовместное культивирование клетокбиоэлектронные приложения
Кремниевые нанопроводы и оптическая стимуляция для исследований внутриклеточного и межклеточного электрического соединения
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.