Выделение и функциональная оценка стволовых клеток рака молочной железы человека из образцов клеток и тканей

Vasudeva Bhat; Cory Lefebvre; David Goodale; Mauricio Rodriguez-Torres; Alison L. Allan

doi:10.3791/61775

Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Выделение и функциональная оценка стволовых клеток рака молочной железы человека из образцов клеток и тканей

4.7K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/61775

⸱

2 октября 2020 г.

Vasudeva Bhat¹^,² , Cory Lefebvre¹^,² , David Goodale¹ , Mauricio Rodriguez-Torres¹^,² , Alison L. Allan¹^,²^,³^,⁴

¹London Regional Cancer Program, ²Department of Anatomy & Cell Biology, Western University, ³Department of Oncology, Western University, ⁴Lawson Health Research Institute

В этой статье

Краткое содержание

Этот экспериментальный протокол описывает выделение BCSC из образцов клеток и тканей рака молочной железы, а также анализы in vitro и in vivo , которые могут быть использованы для оценки фенотипа и функции BCSC.

Аннотация

Стволовые клетки рака молочной железы (BCSC) являются раковыми клетками с унаследованными или приобретенными характеристиками, подобными стволовым клеткам. Несмотря на их низкую частоту, они являются основными факторами, способствующими возникновению рака молочной железы, рецидивам, метастазированию и резистентности к терапии. Крайне важно понять биологию стволовых клеток рака молочной железы, чтобы определить новые терапевтические мишени для лечения рака молочной железы. Стволовые клетки рака молочной железы выделяются и характеризуются на основе экспрессии уникальных маркеров клеточной поверхности, таких как CD44, CD24 и ферментативная активность альдегиддегидрогеназы (ALDH). Эти ALDH^{с высоким содержанием}CD44 ⁺ CD24-клеток составляют популяцию BCSC и могут быть выделены путем флуоресцентно-активированной сортировки клеток (FACS) для последующих функциональных исследований. В зависимости от научного вопроса для оценки функциональных характеристик БЦСК могут использоваться различные методы in vitro и in vivo. Здесь мы предоставляем подробный экспериментальный протокол для выделения БЦСК человека как из гетерогенных популяций клеток рака молочной железы, так и из первичной опухолевой ткани, полученной от пациентов с раком молочной железы. Кроме того, мы выделяем функциональные анализы in vitro и in vivo, включая колониеобразующие анализы, анализы маммосферы, 3D-модели культур и анализы опухолевых ксенотрансплантатов, которые могут быть использованы для оценки функции BCSC.

Введение

Понимание клеточных и молекулярных механизмов стволовых клеток рака молочной железы человека (BCSC) имеет решающее значение для решения проблем, возникающих при лечении рака молочной железы. Появление концепции BCSC восходит к началу^21-го века, когда было обнаружено, что небольшая популяция CD44 ⁺ CD24^{- / низких} клеток рака молочной железы способна генерировать гетерогенные опухоли у мышей ^1,2. Впоследствии было замечено, что клетки рака молочной железы человека с высокой ферментативной активностью альдегиддегидрогеназы (ALDH^high) также проявляли аналогичные стволовы....