Этот метод позволяет быстро и просто подготовить раздел смолы размером с цельное семя для наблюдения и анализа клеток, крахмала гранул и белковых тел в различных регионах семян.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Простой сухой метод секций для получения раздела смолы размером с цельное семя и его применения
* These authors contributed equally
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Морфология, размер и количество клеток, крахмала гранул и белковых тел в семени определяют вес и качество семян. Они существенно отличаются между различными регионами семян. Для того, чтобы четко просмотреть морфологии клеток, крахмальных гранул и белковых тел и количественно проанализировать их параметры морфологии, необходим раздел размером с цельное семя. Хотя цельносовый парафиновый раздел может исследовать накопление материалов хранения в семенах, очень трудно количественно проанализировать параметры морфологии клеток и материалов хранения из-за низкого разрешения толстого сечения. Тонкий раздел смолы имеет высокое разрешение, но обычный метод секции смолы не подходит для подготовки цельного семенного размера раздела зрелых семян с большим объемом и высоким содержанием крахмала. В этом исследовании мы представляем простой сухой метод сечения для подготовки раздела смолы размером с семя. Техника может подготовить крест и продольные цельного семени размера разделов развивающихся, зрелых, проросли, и приготовленные семена, встроенные в LR белой смолы, даже для больших семян с высоким содержанием крахмала. Раздел размером с семя может быть окрашен флуоресцентным осветлением 28, йодом и Кумасси блестящим синим R250, чтобы конкретно проявлять морфологию клеток, крахмала гранул и белковых тел четко, соответственно. Полученное изображение также может быть проанализировано количественно, чтобы показать параметры морфологии клеток, крахмала гранул и белковых тел в различных регионах семян.
Введение
Семена растений содержат материалы хранения, такие как крахмал и белок, и обеспечивают энергию и питание для людей. Форма, размер и количество клеточных и складских материалов определяют вес и качество семян. Клетки и материалы хранения в разных регионах семян имеют значительно разные морфологии, особенно для некоторых высокоамилозы зерновых культур с ингибированием фермента ветвления крахмала IIb1,2,3. Поэтому очень важно исследовать морфологии клеток и материалов хранения в разных регионах семян.
Парафин раздел является хорошим методом для подгот....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
1. Подготовка семян, встроенных в смолу (рисунок 1)
- Зафиксите шесть зрелых ядер кукурузы в 10 мл 2,5% фосфатного буфера глутаралдегида (0,1 М, рН7,2) при 4 градусов по Цельсию на 48 ч. Исследователя могут выбрать другие фиксаторные смеси, фиксаторные концентрации, и условия фиксации согласно их целям исследования и типам ткани.
- Выньте ядра и нарежьте их продольно или поперечно до толщины 2-3 мм с помощью резкого двухстороннего лезвия, и зафиксните их в 10 мл 2,5% фосфатно-буферного глутаралдегида (0,1 м, рН 7,2) снова на 48 ч.
- Мыть образцы три раза с 10 мл 0,1 М фосфат буфера (рН 7,2) в течение 30 минут каждый раз.
- Обезвоживаемы....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Простой сухой метод секции для получения раздела размером с цельное семя
Мы устанавливаем простой сухой метод секции для подготовки цельного семенного размера раздела семян, встроенных в LR-белую смолу(рисунок 1). Метод может подготовить поперечные и продольные цельносовые секции размером с семя толщиной 2 мкм(рисунок 2-5, Дополнительный рисунок 1-4). Например, зрелое семя рапса масляного семени .......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Семена являются наиболее важным возобновляемым ресурсом для производства продовольствия, кормов и промышленного сырья и богаты такими материалами хранения, как крахмал и белок. Морфология и количество клеток, содержание и конфигурация материалов для хранения влияют на вес и качествосемян 7,12. Хотя технология стереологии и анализа изображений может измерять размер и количество клеток в области тканей, их не хватает во многих лабораториях. Парафин и смолы разделы .......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторов нечего раскрывать.
Благодарности
Финансирование было предоставлено Национальным фондом естественных наук Китая (32071927), проектом талантов Университета Янчжоу и приоритетной академической программой развития высших учебных заведений Цзянсу.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Уксусная кислота | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | ||
| Компактная стеклянная банка для витражей (5 мест) | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | ||
| Кумасси бриллиантовый синий R-250 | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | ||
| Coverslip | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | ||
| Двустороннее лезвие | Gillette Shanghai Co., Ltd. | 74-S | |
| Абсолютный этанол | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | ||
| Плющильный стол | Leica | HI1220 | |
| Флуоресцентный микроскоп | Olympus | BX60 | |
| Флуоресцентный отбеливатель 28 | Sigma-Aldrich | 910090 | |
| Стеклянные полоски | Leica | 840031 | |
| Глутаральдегид 50% раствор в воде | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | ||
| Глицерин | Сангон Биотек (Шанхай) Ко., Лтд. | ||
| Йод | Сангон Биотех (Шанхай) Ко., Лтд. | ||
| Изопропанол | Сангон Биотек (Шанхай) Ко., Лтд. | ||
| Световой микроскоп | Olympus | BX53 | |
| LR Белая смола | Agar Scientific | AGR1281A | |
| Oven | Shanghai Jing Hong Laboratory Instrument Co.,Ltd. | 9023A | |
| Йодид калия | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | ||
| Слайд | Сангон Биотек (Шанхай) Ко., Лтд. | ||
| Пинцет | Сангон Биотек (Шанхай) Ко., Лтд. | ||
| Двухосновной додекагидрат фосфата натрия | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | ||
| Одноосновной дигидрат фосфата | натрия Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | ||
| Ультрамикротом | Leica | EM UC7 |
Ссылки
- Cai, C., et al. Heterogeneous structure and spatial distribution in endosperm of high-amylose rice starch granules with different morphologies. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 62 (41), 10143-10152 (2014).
- He, W., et al.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
