Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Модель сингенной ортотопической остеосаркомы Sprague Dawley Rat с ампутацией для контроля скорости метастазирования

3.6K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/62139

⸱

3 мая 2021 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Molecular and Comparative Pathobiology, The Johns Hopkins University School of Medicine, 2Sidney Kimmel Comprehensive Cancer Center, Johns Hopkins University, 3Department of Surgery, Johns Hopkins University School of Medicine, 4Department of Coloproctological Surgery, Juntendo University Faculty of Medicine, 5Program for Comparative Medicine, Gene Therapy Program, Perelman School of Medicine, University of Pennsylvania, 6Tuskegee College of Veterinary Medicine, 7Department of Human Pathology, Juntendo University Faculty of Medicine, 8Department of Surgery, Juntendo University Shizuoka Hospital, Juntendo University School of Medicine, 9Department of Urology, The Johns Hopkins School of Medicine, 10Department of Gastroenterology and Minimally Invasive Surgery, Juntendo University Faculty of Medicine

В этой статье

Краткое содержание

Здесь описана сингенная ортотопическая имплантация с последующей процедурой ампутации остеосаркомы со спонтанным легочным метастазированием, которая может быть использована для доклинического исследования биологии метастазирования и разработки новых терапевтических средств.

Аннотация

Самый последний прогресс в лечении остеосаркомы (ОС) произошел в 1980-х годах, когда было показано, что многоагентная химиотерапия улучшает общую выживаемость по сравнению с одной только хирургией. Для решения этой проблемы целью исследования является уточнение менее известной модели ОС у крыс с комплексным гистологическим, визуальным, биологическим, имплантационным и ампутационным хирургическим подходом, который продлевает выживание. Мы использовали иммунокомпетентную, беспородную модель Sprague-Dawley (SD), сингенную модель крысы с имплантированной клеточной линией ОС UMR106 (происходящей от SD-крысы) с ортотопическими имплантатами опухоли большеберцовой кости у 3-недельных самцов и самок крыс для моделирования педиатрической ОС. Мы обнаружили, что у крыс развиваются воспроизводимые первичные и метастатические опухоли легких, и что ампутации конечностей через 3 недели после имплантации значительно снижают частоту легочных метастазов и предотвращают неожиданные смерти. Гистологически первичные и метастатические ОС у крыс были очень похожи на ОС человека. Используя методы иммуногистохимии, исследование показывает, что ОС крыс инфильтрированы макрофагами и Т-клетками. Исследование экспрессии белка клеток ОС показывает, что эти опухоли экспрессируют киназы семейства ErbB. Поскольку эти киназы также высоко экспрессируются в большинстве ОС человека, эта модель крыс может быть использована для тестирования ингибиторов пути ErbB для терапии.

Введение

Остеосаркома (ОС) является наиболее распространенной первичной опухолью кости у детей, подростков и молодых людей. Самый последний прогресс в лечении ОС произошел в 1980-х годах, когда было показано, что многоагентная химиотерапия улучшает общую выживаемость по сравнению с одной только хирургией1. ОС развивается во время быстрого роста костей, обычно происходящего в длинных трубчатых костях, таких как бедренная кость, большеберцовая кость и плечевая кость. Они характеризуются остеолитическим, остеобластным или смешанным внешним видом с заметной периостальной реакцией2. Химиотерапия и хирургическая резекция могут улучшить исход для пациентов с 5-летней выживаемостью для 65% пациентов2,3. К сожалению, пациенты с ОС высокой степени с метастатическим заболеванием имеют 20% выживаемость. ОС вторгается регионально и метастазирует в основном в легкие или другие кости и более распространен у мужчин. Наиболее насущной потребностью для этих молодых пациентов является новая терапия, которая предотвращает и устраняет жизнеспособность отдаленных метастазов.

Рассмотрены доклинические модели ОС4,5,6,7 и разработано несколько доступных иммунокомпетентных моделей с использованием ампутации ортотопической ОС. В 2000 году была разработана важная модель с использованием мышей BALB/c с ортотопической сингенной ОС и ампутацией8. По сравнению с этой моделью мыши, модель крыс основана на генетически перерожденных и в 10 раз более крупных животных, что приводит к некоторым преимуществам. Крысиная модель UMR106 была разработана из 32P индуцированной ОС у крысы Sprague Dawley (SD), которая была выведена в клеточную линию9. В 2001 году ортотопическая имплантация UMR106-01 была впервые описана в имплантированные большеберцовые кости афимических мышей с быстрым, последовательным развитием первичной опухоли и рентгенологическими, гистологическими особенностями, общими с ОС у человека. Легочные метастазы развивались и зависели от ортотопического размещения UMR106 в костном микроокружении10. В 2009 году Yu et al.11 установили воспроизводимую ортотопическую модель ОС бедренной кости крысы с использованием клеток UMR106 у более крупных самцов SD-крыс. Успешные имплантации опухолей и частота метастазирования в легкие у крыс без ампутации были аналогичны данным, представленным здесь. В этом исследовании была выполнена дополнительная ампутация к модели с использованием молодых крыс, которая показала, что сроки первичного удаления опухоли имеют решающее значение для моделирования ОС, особенно связанных с метастатическим прогрессированием. Благодаря этому уточнению ампутация и визуализация in vivo улучшают эту модель для доклинических исследований для оценки новых лекарств для ОС.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все процедуры и эксперименты с участием крыс проводились в соответствии с протоколами, утвержденными Комитетом по уходу и использованию животных Джона Хопкинса.

1. Протокол клеточной культуры SD rat OS UMR-106

  1. Выращивают клетки в DMEM, дополненном 10% (v/v) FBS, пенициллином (10 Ед/мл)-стрептомицином (10 Ед/мл) при 37 °C в увлажненной 5% co2 атмосфере. Проводят эксперименты с использованием клеток с проходами2-8 12.

2. Протокол внутриробной инъекции клеток ОС

ПРИМЕЧАНИЕ: Вовремя спаренные беременные крысы SD рожают в животном учреждении, и в возрасте 3 недель используются пометы (поскольку клеточная линия UMR 106 является сингенной для крыс SD, облучение не требуется).

  1. Индукция
    1. Поместите крысу в индукционную камеру среднего размера и индуцируйте анестезию 2%-3% изофлурана. Следите за глубиной анестезии животного непрерывно путем рефлекторного защемления пальца ноги, частоты дыхания и характера.
    2. Вставьте нос в носовой конус. При необходимости закрепите лентой.
    3. Удалите волосы на правой ноге до вентральной и спинной нижней части живота с помощью машинок для стрижки или используйте средство для депиляции. Поместите крысу в положение лежа на спине.
    4. Очистите хирургическую область асептически, используя 70% этанола и разбавите хлоргексидина ацетат или разбавите бетадин. Начните вокруг области колена и скрабируйте круговыми движениями как проксимально, так и дистально. Повторите этот шаг три раза. Для имплантации опухоли драпировка не используется.
    5. Нанесите глазную смазку на оба глаза крысы, чтобы предотвратить высыхание роговицы, вызванное анестезией. Поместите крысу на грелку с низким нагревом. Убедитесь, что крыса имеет нормальную температуру тела (37 ° C) и нормальную частоту дыхания.
  2. Хирургия
    1. Включите изофлуран при ~1,5%-2% (для обслуживания). Убедитесь, что животное находится в адекватной плоскости анестезии из-за отсутствия рефлекса защемления пальца ноги. Если нет, увеличьте процент изофлурана до 2,5%.
    2. Отметьте стерильную иглу (приблизительно 22 G) на расстоянии 10 мм от наконечника для указания глубины для вставки.
    3. Вставьте иглу на 10 мм вниз в диафиз большеберцовой кости, войдя в согнутое колено в середине большеберцового плато, протягивая иглу через метафиз в диафиз, используя легкое сверлоподобное движение, чтобы сделать отверстие. Извлеките иглу.
    4. Загрузите клеточную суспензию в шприц Гамильтона непосредственно перед инъекцией в большеберцовую кость. Для этого аккуратно перемешайте клетки перед втягиванием в шприц, так как гравитация заставляет клетки оседать в нижней части трубки.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Ячейки можно хранить в трубке объемом от 1,5 до 2 мл (при комнатной температуре) перед втягиванием в шприц Гамильтона (100 мкл) после тщательного перемешивания. Клетки могут храниться при комнатной температуре в течение 2-3 ч во время процедуры имплантации. Всегда проверяйте жизнеспособность клеток в трубке до и после сеанса имплантации. Исключение синего трипана является самым простым методом оценки жизнеспособности клеток.
    5. После того, как кость будет пересечена первой иглой, вставьте вторую (иглу меньшего диаметра, также отмеченную на 10 мм) иглу, прикрепленную к шприцу Гамильтона объемом 100 мкл, загруженному клетками. Убедитесь, что игла вставлена до отметки 10 мм в то же отверстие, простирающееся в диафиз.
    6. Осторожно выгрузите 20 мкл 75 000 суспензии клеток ОС в PBS в диафиз и полость костного мозга.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Игла не должна колебаться в кости и должна чувствовать себя в безопасности. Если игла легко двигается, кора, возможно, была пересечена на диафизе. Повторите введение еще раз, чтобы получить более жесткое размещение перед инъекцией клеток.
    7. Извлеките иглу Гамильтона из кости.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Если образуется небольшая капля крови, примените легкое давление. Если в месте прокола образуется прозрачная капля жидкости, игла, возможно, не была выдвинута достаточно далеко в кости, и суспензия опухолевой клетки могла просочиться обратно через отверстие. Запишите это в примечаниях, но, как правило, имплантация опухоли будет успешной. При наличии опыта процедура имплантации опухоли должна занимать 5 минут на крысу. Со стажем опухолевая имплантация клеток в кость станет проще. Случайное введение клеток в мышцу вокруг кости, может не привести к микроокружению опухоли, необходимому для легочного метастазирования.
  3. Выздоровление
    1. Убедитесь, что крыса нормотермическая. Поместите крысу в клетку с грелкой, помещенной под клетку для восстановления.
    2. После полного бодрствования, подвижности и хорошего дыхания вводите крысам бупренорфин (1,0-1,2 мг/кг SC).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Чтобы получить доступ к Бупренорфину, проконсультируйтесь с учреждением, чтобы увидеть варианты одобрения через ветеринарный персонал для размещения заказа.
    3. Перемещайте крыс обратно в чистые клетки и контролируйте один раз в день, каждую неделю.

3. Измерение и мониторинг

  1. Измеряют размер опухоли через 9-10 дней после имплантации, а затем каждые 2 дня до 3 недель после имплантации для установления скорости роста. Измерьте максимальный диаметр большеберцовой кости с помощью электронного или ручного суппорта. Сохраните данные в электронной таблице с формулой для расчета объема опухоли. Измерьте контралатеральную (не имплантированную большеберцовую кость) в качестве исходного уровня.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Имплантированные диаметры задних конечностей используются в качестве суррогата для размера опухоли. Задние конечности измеряются перпендикулярно длинной оси большеберцовой кости при наибольшем диаметре для двух измерений, вентральных/дорсальных и средних/боковых на конечности. Расчетный объем опухоли рассчитывается по формуле11:Объем опухоли(мм3)= наибольший диаметр (мм) x наименьший диаметр (мм)2/2.
  2. Рассмотрим крыс для ампутации выживания или химиотерапии, когда опухоли приближаются к 15 мм в наибольшем размере или через 3 недели после имплантации опухоли. Контралатеральная конечность составляет около 7-9 мм у большинства крыс в этом возрасте.

4. Доксорубицин внутривенное введение

  1. Обезболивают крыс 2% изофлураном. Подготовьте кожу над яремной веной тремя хирургическими промываниями с использованием бетадина и спирта, как описано13.
  2. При тщательном рассечении визуализируйте правую или левую яремную вену. Вставьте иглу в вышележащую мышцу, а затем направьте к голове крысы в просвет яремной вены, как это визуализируется в яремной вене, передней к грудной мышце.
    1. Когда игла вводится в яремную вену, осторожно втягивайте кровь в шприц, чтобы обеспечить правильное введение. Можно поверить, что игла проходит через вену, но игла находится под веной, а не в просвете. Если яремная вена становится слишком маленькой для инъекций при тупом рассечении, чтобы обнажить яремную вену, используйте другую яремную вену для инъекции.
  3. Вводят доксорубицин (2 мг/кг) медленно в течение 1 мин в объеме 100-150 мкл. Раствор может быть визуализирован внутривенно в яремную вену во время родов.
  4. Вводите аналогичные объемы нормального физиологического раствора контрольным крысам.
  5. Снимите иглу и мягко надавите на вену стерильной марлей.
  6. Закройте разрез кожи с помощью 3-4 намотанных зажимов. Удалите зажимы через 7-10 дней после инъекции.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Крысы обычно не пытаются удалить металлические зажимы, но кусают и снимают швы. Метод яремной инъекции предпочтительнее инъекций в хвостовые вены для доксорубицина, поскольку любой препарат, который просачивается за пределы сосуда, вызывает некроз хвоста, что может потребовать ампутации хвоста.

5. Протокол ампутации задних конечностей

  1. Индукция
    1. Поместите крысу в индукционную камеру среднего размера и индуцируйте анестезию 2%-4% изофлураном. Следите за крысой непрерывно на предмет глубины анестезии.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Индукционная камера подается в канистру с древесным углем, а любые другие газы удаляются с помощью стола с нисходящей тягой, используемого для хирургии.
    2. Вставьте нос в носовой конус. При необходимости закрепите лентой.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Эта процедура выполняется на нисходящей таблице для удаления избыточных летучих газов (т.е. изофлурана).
    3. Удалите волосы на правой ноге до вентральной и спинной нижней части живота с помощью машинок для стрижки или используйте средство для депиляции. Поместите крысу в положение лежа на спине.
    4. Очистите хирургическую область асептически, используя 70% этанола и разбавите хлоргексидина ацетат или разбавите бетадин. Подготовьте кожу к операции от середины икры до области кожи чуть выше тазобедренного сустава правой нижней части живота. Скрабируйте проксимальную часть ноги и дистальную область по окружности. Повторите этот шаг три раза.
    5. Нанесите глазную смазку на оба глаза крысы. Убедитесь, что крыса имеет нормальную температуру тела (37 ° C) и нормальные жизненные показатели. Контролируйте и регулируйте температуру тела с помощью грелки, которая подключена к ректальному датчику температуры.
  2. Хирургия
    1. Включите изофлуран на 1,5%-3% (поддержание). Следите за глубиной анестезии, включая реакцию на защемление пальцев ног, частоту дыхания и характер. Регулируйте норму изофлурана по мере необходимости для поддержания соответствующей плоскости анестезии.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Частота дыхания под наркозом должна составлять от 50 до 100 вдохов в минуту. Глубокие, нечастые вдохи являются признаком того, что крыса слишком глубоко обезболена.
    2. Открытые стерильные наборы инструментов и шторы и надевайте стерильные перчатки. Позаботьтесь о поддержании стерильности на протяжении всей процедуры. Основные необходимые стерильные хирургические инструменты включают держатель лезвия скальпеля, щипцы, гемостаты, держатель иглы, ножницы и раневой зажим.
    3. Протяните ногу крысы через вентиляционное отверстие стерильной хирургической драпировки. Убедитесь, что животное находится в адекватной плоскости анестезии с помощью рефлекса щипца.
    4. Используя лезвие скальпеля или хирургические ножницы, сделайте окружной, кожный разрез непосредственно проксимально к удушью (коленному суставу).
    5. Деглавировать заднюю конечность с помощью марли или тупого рассечения для обнажения бедренной артерии и вены на вентрально-медиальной поверхности задней конечности.
    6. Обжигайте сосуды с помощью 4-0 рассасывающихся швов на уровне средней бедренной кости и трансективно.
    7. Зажмите вену дистально, чтобы уменьшить утечку во время рассечения мышц.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Окружность мускулатуры будет транссектирована дистально до уровня перевязки сосудов бедренной артерии и мышц, поднятых от бедренной кости до уровня тазобедренного сустава.
    8. Используя тупое рассечение, отводят тазобедренный сустав боковым вращением наружу.
    9. Найдите головку бедренной кости и выделите ее из вертлужной впадины. Отрежьте любую оставшуюся ткань, удерживающую ногу прикрепленной к телу.
    10. Дайте брызговик в вертлужную впадину и седалищный нерв примерно 6 мг/кг ропивакаина.
    11. Закройте мускулатуру над вертлужной впадиной с помощью простого прерванного шва (4-0, рассасывающийся шов).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Дополнительные 0,5% бупивакаина или лидокаина (всего 0,15-0,2 мг) могут вводиться в несколько участков вдоль закрытого мышечного слоя (местная инфильтрация/брызговик).
    12. Укладывайте и закрывайте края кожи с помощью раневых зажимов, расставленных каждые 5-10 мм.
  3. Выздоровление
    1. Поместите крысу в чистую клетку-рекуперацию с тепловой поддержкой с помощью грелки, помещенной под клетку.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Для предотвращения гипертермии грелка не должна находиться в непосредственном контакте с животным и не должна превышать 40 °C.
    2. Наблюдайте за животным до тех пор, пока оно полностью не восстановится и не станет нормотермическим (37,5-39 °C).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Животное не следует оставлять без присмотра до полного сознания и кормового лежания и легкого перемещения по клетке.
    3. После полного бодрствования, подвижности и хорошего дыхания вводите крысам бупренорфин (1,0-1,2 мг/кг SC).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Введение бупренорфина анестезированной крысе может ухудшить выздоровление.
    4. Вводят 10 мл теплого лактированного раствора Рингера подкожно между лопатками.
    5. Переместите крыс обратно в чистую клетку и воссоединитесь с сородичами.
    6. Контролируйте всех животных два раза в день в течение следующего месяца на наличие признаков боли и дистресса, включая пилоэрекцию, сгорбленную осанку или неаппетитность или признаки инфекции места разреза, включая эритему, гнойные выделения или дегисценцию раны.
      ПРИМЕЧАНИЕ: На сегодняшний день мы не наблюдали клинических признаков (таких как инфекции) после послеоперационного выздоровления ни у одного из животных. Только у одной крысы была дегисценция швами, после чего раневые клипсы использовались для закрытия ран без дальнейших проблем.
    7. Вводят бупренорфин или мелоксикам животным, имеющим клинические признаки боли в опубликованных дозах, в консультации с ветеринаром лабораторных животных.
    8. Вводите антибиотики (т.е. цефалоспорин) животным, имеющим клинические признаки боли в опубликованных дозах, в консультации с ветеринаром лабораторных животных.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Любые животные, проявляющие затяжные признаки боли или дистресса, которые не улучшаются с анальгетиками, или животные, проявляющие признаки инфекции, которые не реагируют на антибиотики, должны быть гуманно усыплены.

6. Визуализация с помощью рентгеновского снимка

  1. После имплантации опухоли визуализируйте большеберцовую кость и легкие неинвазивно, чтобы обнаружить рост опухоли с помощью рентгеновского снимка с помощью машины, предназначенной для грызунов.
  2. Обезболивайте крыс, как это делалось ранее.
  3. Делайте снимки с 3-кратным увеличением в течение 6 с при 25 кВ.
  4. Обработайте пленку с помощью рентгеновского процессора. Рентгенограммы также могут быть отсканированы в цифровом виде.

7. Процедура некропсии

  1. Усыплите крыс с помощью CO2. Подтвердите смерть через отсутствие сердцебиения и немедленно возьмите 3 мл крови из сердца для образцов сыворотки или плазмы.
  2. Откройте грудную клетку и брюшную полость для осмотра.
  3. Изолируют трахею и каннулируют с помощью катетера (18 г). Чтобы закрепить катетер в трахее, завяжите шелковый шов вокруг обеих трахеи катетером.
  4. Подключите инфузионный катетер к шприцу объемом 3 или 5 мл. Вводят формалин или физиологический раствор, чтобы мягко надуть доли легких для улучшения гистологических образцов. При инфузии легкие будут надуваться и обеспечивать лучшую визуализацию легочных метастазов.
  5. Осмотрите, рассекните и взвесьте все выбранные органы грудной и брюшной полости (например, печень, почки).
  6. Зафиксируйте органы в формалине для гистопатологии или заморозьте на сухом льду, 2-метилбутане или жидком азоте.
  7. Для оценки экспрессии белка с помощью вестерн-блоттинга вводят лизаты замороженных тканей. Антитела, которые реагируют с тканями крыс, подробно описаны13.

8. Иммуногистохимия

  1. Обработайте первичную ткань ОС, встройте в парафин, и разделите ее для иммуногистохимического окрашивания.
  2. Извлечение антигена после депарафинизации с использованием цитратного буфера (рН 6,0). Инкубировать в 0,3%Н2О2в метаноле в течение 30 мин для гашения эндогенной пероксидазы.
  3. Блокируйте парафиновые срезы толщиной 5 мкм, используя обычную сыворотку.
  4. Инкубировать с первичными антителами против CD68 и CD3 (см. таблицу) в течение ночи при 4 °C.
  5. Промыть срезы в PBS и инкубировать их в полимере HRP с помощью комплекта обнаружения.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Иммуноокрашивание было разработано с диаминобензидином в качестве хромогена.

9. Вестерн-блоттинг

  1. Лизируйте клетки UMR-106 в 200-300 мкл лизисного буфера14 для выполнения стандартного гелевого электрофореза и западного блоттинга.
  2. Используйте от 4% до 12% гелей Бис-Трис.
  3. Инкубировать в анти-ErbB2, анти-ErbB4, анти-EGFR, анти-ERK, β-актине или антимышечном первичном антителе β2-AR (см. таблицу) и вторичном антителе, связанном с пероксидазой хрена.
  4. Добавить хемилюминесцентный субстрат. Подвергайте мембраны воздействию рентгеновской пленки.
    ПРИМЕЧАНИЕ: β-актиновые уровни используются в качестве регуляторов нагрузки.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Иммунокомпетентные SD беспородные крысы используются для этих исследований ОС, которые предлагают животную модель с интактной иммунной системой. Мы использовали клеточную линию UMR106 от ATCC, разработанную из клеток, которые были первоначально выделены из ОС крысы SD. Мы имплантировали клетки крысАм SD, тем самым обеспечивая сингенную модель для OS. Клетки UMR106 имплантируются в большеберцовую кость 3-недельных самцов и самок SD-крыс, имитируя педиатрическую модель ОС. Более того, ортотопическая имплантация клеток UMR1...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

У крыс с имплантатами ОС большеберцовой кости развиваются измеримые опухоли к 3 неделям после имплантации. Если конечности с опухолями ампутируют через 3 недели после имплантации, частота метастазирования в легкие значительно снижается. ОС являются как остеолитическими, так и остеобластными. У крыс без ампутации развиваются метастазы в легкие, множественные и переменного размера, наблюдаемые рентгенографией или при некропсии через 7 недель после имплантации. EGFR, ErbB2 и ErbB4 экспрессируются в крысиной ОС UMR106, анало...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Никакого раскрытия для декларирования.

Благодарности

Финансирование NIH через Национальный институт рака, грант # CA228582. Шун Исияма в настоящее время получает грант от Toray Medical Co., Ltd.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
AKTCell Signaling TECHNOLOGY4685S
рассасывающийся шовный материалEthiconJ214H
β-актинSANTA CRUZ BIOTECHNOLOGYsc-47778
β Антитело 2-АРSANTA CRUZ BIOTECHNOLOGYsc-569заменено на β 2-AR (E-3): sc-271322
Bis– Трис гелиThermo FisherNP0321PK2
Бупренорфин SR LabZooPharmIZ-70000-201908
CD3 антителоDako#A0452
CD68 антителоeBioscience#14-0688-82
Хемилюминесцентный субстратцитиваRPN2232
пленка CL-XposureThermo Fisher34089
Комплексная анестезиологическая системаEVETEQUIP922120
диаминобензидинVECTOR LABORATORIESSK-4100
ДоксорубицинActavisNDC 45963-733-60
АНТИТЕЛО EGFRSANTA CRUZ BIOTECHNOLOGYsc-03заменено на EGFR (A-10): sc-373746
антитело ERBB2SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGYsc-284заменено на Neu (3B5): sc-33684
антитело к ERBB4SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGYsc-283заменено на ErbB4 (C-7): sc-8050
антитело ERKSANTA CRUZ BIOTECHNOLOGYsc-514302
смазка для глазPHARMADERMNDC 0462-0211-38
Шприц Hamilton (100 &; L)HamiltonModel 1710 SN SYR
хрен-пероксидаза, связанное с пероксидазой хрена, вторичное антителоцитиваNA934
НАБОР ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ ПОЛИМЕРОВ HRPВЕКТОР LABORATORIESMP-7401
ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ ПОЛИМЕРОВ HRPВЕКТОР LABORATORIESMP-7402
изофлуранBUTLER SCHEINNDC 11695-6776-2
изофлуран испарительEVETEQUIP911103
UMR-106 ячейкаATCCCRL-1661
рентгеновскийфакситронультрафокусный
рентгеновский процессорHope X-Ray Peoducts IncРентгеновский процессор MicroMaxПроцессоры Hope больше не доступны в США
клипсыдля ран BECTON DICKINSON427631
НАБОР

Ссылки

  1. Link, M. P., et al. The effect of adjuvant chemotherapy on relapse-free survival in patients with osteosarcoma of the extremity. New England Journal of Medicine. 314 (25), 1600-1606 (1986).
  2. Bielack, S. S., et al. Prognostic factors in high-grade osteosarcoma of the extremities or trunk: an analysis of 1,702 patients treated on neoadjuvant cooperative osteosarcoma study group protocols. Journal of Clinical Oncology. 20 (3), 776-790 (2002).
  3. Botter, S. M., Neri, D., Fuchs, B. Recent advances in osteosarcoma. Current Opinion in Pharmacology. 16, 15-23 (2014).
  4. Ek, E. T. H., Dass, C. R., Choong, P. F. M. Commonly used mouse models of osteosarcoma. Critical Reviews in Oncology Hematology. 60 (1), 1-8 (2006).
  5. Guijarro, M. V., Ghivizzani, S. C., Gibbs, C. P. Animal models in osteosarcoma. Frontiers Oncology. 4, 189(2014).
  6. Janeway, K. A., Walkley, C. R. Modeling human osteosarcoma in the mouse: From bedside to bench. Bone. 47 (5), 859-865 (2010).
  7. Mohseny, A. B., Hogendoorn, P. C., Cleton-Jansen, A. M. Osteosarcoma models: from cell lines to zebrafish. Sarcoma. 2012, 417271(2012).
  8. Khanna, C., et al. An orthotopic model of murine osteosarcoma with clonally related variants differing in pulmonary metastatic potential. Clinical & Experimental Metastasis. 18 (3), 261-271 (2000).
  9. Martin, T. J., et al. Parathyroid hormone-responsive adenylate cyclase in induced transplantable osteogenic rat sarcoma. Nature. 260 (5550), 436-438 (1976).
  10. Fisher, J. L., Mackie, P. S., Howard, M. L., Zhou, H., Choong, P. F. The expression of the urokinase plasminogen activator system in metastatic murine osteosarcoma: an in vivo mouse model. Clinical Cancer Research. 7 (6), 1654-1660 (2001).
  11. Yu, Z., et al. Establishment of reproducible osteosarcoma rat model using orthotopic implantation technique. Oncology Reports. 21 (5), 1175-1180 (2009).
  12. Zhang, P., et al. Homologous mesenchymal stem cells promote the emergence and growth of pulmonary metastases of the rat osteosarcoma cell line UMR-106. Oncology Letters. 8 (1), 127-132 (2014).
  13. Gabrielson, K., et al. Heat shock protein 90 and ErbB2 in the cardiac response to doxorubicin injury. Cancer Research. 67 (4), 1436-1441 (2007).
  14. Sysa-Shah, P., et al. Bidirectional cross-regulation between ErbB2 and β-adrenergic signalling pathways. Cardiovascular Research. 109 (3), 358-373 (2016).
  15. Wachtman, L. M., Browning, M. D., Bedja, D., Pin, S., Gabrielson, K. L. Validation of the use of long-term indwelling jugular catheters in a rat model of cardiotoxicity. Journal of American Association Laboratory Animal Science. 45, 55-64 (2006).
  16. Abdou, A. G., et al. The Prognostic role of Ezrin and HER2/neu expression in osteosarcoma. Applied Immunohistochemistry & Molecular Morphology. 24 (5), 355-363 (2016).
  17. Hughes, D. P., Thomas, D. G., Giordano, T. J., McDonagh, K. T., Baker, L. H. Essential erbB family phosphorylation in osteosarcoma as a target for CI-1033 inhibition. Pediatric Blood & Cancer. 46 (5), 614-623 (2006).
  18. Wen, Y. H., et al. Epidermal growth factor receptor in osteosarcoma: expression and mutational analysis. Human Pathology. 38 (8), 1184-1191 (2007).
  19. Khanna, C., et al. Toward a drug development path that targets metastatic progression in osteosarcoma. Clinical Cancer Research. 20 (16), 4200-4209 (2014).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Модель остеосаркомы у крысортотопическая имплантация опухолиампутация конечностиметастазирование в легкиекрысы линии Sprague Dawleyинъекция в яремную венурентгенографияиммуногистохимияэкспрессия протеинкиназыинфильтрация опухолевыми клетками
Модель сингенной ортотопической остеосаркомы Sprague Dawley Rat с ампутацией для контроля скорости метастазирования
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.