Методическая статья

Доксициклиновый композитный каркас с коллагеном и хитозаном для ускоренного заживления диабетических ран

4.3K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/62184

⸱

21 августа 2021 г.

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Pharmaceutics, JSS College of Pharmacy, JSS Academy of Higher Education & Research, 2Department of Pharmaceutical Sciences, School of Pharmacy, North Dakota state university, 3Department of Pharmacology, JSS College of Pharmacy, JSS Academy of Higher Education & Research

В этой статье

Краткое содержание

Подготовленный каркас DOX-CL удовлетворил предпосылки идеальной DW-повязки по механической прочности, пористости, водопоглощению, скорости деградации, замедленному высвобождению, антибактериальной, биосовместимости и противовоспалительным свойствам, которые считаются необходимыми для восстановления поврежденных тканей у ДВ.

Аннотация

Одним из основных осложнений сахарного диабета являются диабетические раны (DW). Длительная фаза воспаления при диабете препятствует дальнейшим стадиям травмы, что приводит к задержке заживления ран. Мы выбрали доксициклин (DOX) в качестве потенциального препарата выбора из-за его антибактериальных свойств наряду с его противовоспалительными свойствами. Текущее исследование направлено на формулирование doX-нагруженных коллаген-хитозаном несшитых (NCL) и сшитых (CL) каркасов и оценку их заживляющей способности в диабетических состояниях. Результат характеристик каркасов показывает, что каркас DOX-CL обладает идеальной пористостью, низкой скоростью набухания и деградации и устойчивым высвобождением DOX по сравнению с каркасом DOX-NCL. Исследования in vitro показывают, что каркас DOX-CL был биосовместимым и усиливал рост клеток по сравнению с клетками, обработанными КАРКАСОМ CL, и контрольными группами. Антибактериальные исследования показали, что каркас DOX-CL был более эффективным, чем каркас CL против наиболее распространенных бактерий, обнаруженных в DW. Используя стрептозотоцин и модель DW с высоким содержанием жиров, наблюдалась значительно (p≤0,05) более высокая скорость сокращения раны в группе, обработанной каркасом DOX-CL, по сравнению с группами, обработанными каркасами CL, и контрольными группами. Использование каркаса DOX-CL может оказаться перспективным подходом для местного лечения ДМ.

Введение

Сахарный диабет (СД) - это состояние, при котором неспособность организма доставлять инсулин или реагировать на его результаты при аномальном переваривании простых сахаров приводит к всплеску уровня глюкозы в крови 1. Наиболее последовательным и сокрушимающим запутыванием СД является диабетическая рана (DW). Примерно 25% пациентов с СД имеют возможность создать DW в течение своей жизни 1. Затрудненное заживление DW относится к триопатии СД: иммунопатии, васкулопатии и нейропатии. Всякий раз, когда DW не лечат, это может привести к развитию гангрены, что приводит к удалению соответствующего органа 2.

Множество методов лечения, таких как инструктаж пациентов (ежедневно осматривать рану, очищать рану, избегать действий, которые создают давление на рану, периодический мониторинг глюкозы в крови и т. Д.), Контроль уровня глюкозы в крови, санация ран, разгрузка давления, медицинская процедура, гипербарическая кислородная терапия и передовые методы лечения находятся в практике 3,4. Большинство из этих препаратов не учитывают все предпосылки, жизненно важные для ухода dw в свете многофакторных патофизиологических условий и непредвиденных расходов, связанных с этими лекарствами 5. Несмотря на то, что патогенез DW является многофакторным, стойкое воспаление с ненадлежащим управлением тканями считается фактической причиной задержки заживления в DW 5,6.

Увеличение уровня воспалительных и провоспалительных медиаторов в DW приводит к уменьшению факторов роста, ответственных за задержку заживления ран 2,6. Неправильное образование внеклеточного матрикса (ECM) в ДВ относится к повышенным уровням матричных металлопротеиназ (MMP), ответственным за быструю деградацию сформированных ECM. В MMP MMP-9 сообщается как основной посредник, ответственный за длительное воспаление и быструю деградацию ECM 7. Утверждается, что местное лечение противовоспалительным препаратом, снижающим повышенный уровень ММП-9, восстанавливает кожный гомеостаз, каркасное расположение и побуждает к лучшему заживлению ДМО 8,9.

Доксициклин (DOX), ингибитор MMP-9, был выбран для подавления повышенных уровней MMP-9, основного медиатора воспаления, ответственного за стойкое воспаление в DWs 10,11,12. Кроме того, DOX обладают антиоксидантными (продуцируют свободные гидрокси и феноксирадики, способные связываться с активными формами кислорода) 13 и антиапоптотическими (ингибируют экспрессию каспазы и стабилизацию митохондрий) 14 активностями, которые необходимы для лечения DW. Было выбрано расположение фреймворков, содержащих DOX, коллаген (COL) и хитозан (CS). Выбор COL зависит от того, каким образом он помогает в обеспечении необходимых рамок, отвечающих за механическую прочность и регенерацию тканей 15. С другой стороны, CS структурно гомологичны гликозаминогликану, связанным с несколькими фазами заживления ран. Также сообщается, что КС обладает значительным антибактериальным свойством 15. Следовательно, каркас COL / CS DOX разработан для подавления длительного воспаления с последующей поддержкой формирования матрицы для успешного заживления ран в условиях СД.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все выполненные процедуры для животных были одобрены институциональным этическим комитетом по защите животных Фармацевтического колледжа JSS, Ути, Индия.

1. Подготовка пористых лесов, загруженных DOX методом сублимационной сушки

  1. Добавьте 1,2 г COL к 100 мл воды (например, Millipore) и держите в стороне для набухания.
  2. Перемешайте набухшие дисперсии COL со скоростью 2000 об/мин в течение ночи, чтобы обеспечить полное растворение COL.
  3. Готовят раствор КС, растворяя примерно 0,8 г КС в 100 мл 1% уксусной кислоты.
  4. Перемешайте раствор CS в течение ночи со скоростью 2000 об/мин для обеспечения равномерного диспергирования.
  5. Смешайте DOX (1% мас./об.), а затем раствор CS, с раствором COL, и перемешайте в течение 30 мин.
  6. Фильтруйте полученную физическую смесь с помощью муслиновой ткани для удаления твердых частиц.
  7. Глубоко замораживают полученный фильтрат при -85 °C ± 4 °C в течение примерно 24 ч.
  8. Лиофилизируйте смесь глубокой заморозки при -85 °C ± 4 °C в течение 72 ч.
  9. Хранят полученные строительные леса в адсорбаторе для дальнейшего анализа 16,17.

2. Сшивание строительных лесов

  1. Растворить MES (0,488 г) в 50 мл воды.
  2. Замочите 50 мг нагруженного DOX каркаса в 20 мл буфера MES в течение 30 мин.
  3. Смешайте 19,5 мл буфера MES с 0,1264 г EDC и 0,014 г NHS в отдельном заквасе.
  4. Погрузите каркас в буферную смесь на 4 ч для достижения сшивки 16.
  5. Храните загруженные DOX сшитые (CL) и несшитые каркасы (NCL) для дальнейшей оценки.

3. Характеристика строительных лесов

  1. Морфологическое исследование с использованием сканирующей электронной микроскопии (СЭМ)
    1. Охарактеризовать каркасы для морфологического анализа с помощью SEM (1 см × 1 см × 0,5 см).
    2. Окрасить поперечное сечение и внешнюю поверхность каркаса тонким слоем золота (~150 Å).
    3. Захват фотографического изображения при напряжении возбуждения 5 кВ и 10 кВ.
    4. Поместите образцы в алюминиевые заглушки и заключите их в золото при длине около 9 В.
    5. Измерьте каркас с помощью SEM с увеличенным разрешением при 10 кВ.
  2. Определение пористости
    1. Измеряют пористость каркасов с помощью метода вытеснения жидкости (этанола) 18.
    2. Рассчитайте пористость каркасов, используя приведенные ниже формулы.
      figure-protocol-1
      Ww = Мокрый вес строительных лесов
      Wd = Сухой вес каркаса
      Wv = Объем каркаса
  3. Определение водопоглощающей способности
    1. Измерьте сухой вес строительных лесов.
    2. Инкубировать взвешенный каркас при 37 °C в течение 24 ч в фосфатном буферном солевом растворе (PBS) pH 7,4.
    3. Удалите излишки PBS над каркасом с помощью фильтровальной бумаги.
    4. Измерьте водопоглощающую способность, используя приведенную ниже формулу 17.
      figure-protocol-2
      WS = Процент водопоглощения
      W1= Мокрый вес строительных лесов
      W0= Сухой вес каркаса
  4. Деградация строительных лесов
    1. Инкубируют каркас (1 см х 1 см) при 37 °C в течение 7 дней в PBS рН 7,4, содержащей лизоцимы.
    2. Вымойте каркас, чтобы удалить все прилипшие ионы на поверхности.
    3. Сублимационная сушка вымытых лесов 17.
    4. Рассчитайте скорость деградации с помощью формул.
      figure-protocol-3
      Ww = Начальный вес каркаса
      Wd = Вес строительных лесов после сублимационной сушки
  5. Исследования высвобождения in vitro
    1. Определите поведение высвобождения DOX из каркаса с помощью метода диализного мешка.
    2. Рассейте каркас в нескольких миллилитрах моделируемой раневой жидкости (рН 7,4) и перенесите его в диализный мешок.
    3. Плотно закройте концы мембранного мешка и погрузите в 500 мл смоделированного раствора раневой жидкости.
    4. Размешайте раствор раневой жидкости, содержащий диализный мешок, со скоростью 200-250 об/мин.
    5. Соберите раствор супернатанта и замените его равным количеством свежего буферного раствора через определенные промежутки времени.
    6. Определите процент высвобождения DOX из каркасов в растворе супернатанта с помощью УФ-видимого спектрометра при 240 нм.

4. Антибактериальные исследования in vitro

  1. Определить минимальную ингибируемую концентрацию (МИК) каркасов CL и DOX-CL в отношении S. aureus, S. epidermis, E. coli, P. aeruginosa с помощью метода микро-разведения отвара.
  2. Готовят бактериальные культуры с помощью бульона Мюллера-Хинтона в соотношении 1:1000 для получения 0,5 мутности Макфарланда.
  3. Добавляют D-глюкозу (800 мг/дл) в бактериальные культуры для гипергликации 19,20.
  4. Измечить и солюбилизировать CL и DOX-CL в ДМСО (отрицательный контроль).
  5. Последовательно разбавляют гипергликированную бактериальную суспензию (100 мкл) и испытуемые образцы (100 мкл раствора каркасов) в 96-й пластине скважины.
  6. Инкубировать пластину при 37 °C в течение 20-24 ч.
  7. Запись поглощения на длине волны 600 нм 21.

5. Исследования биосовместимости in vitro

  1. Оценить биосовместимость подготовленных каркасов с помощью анализа MTT [(3-(4, 5 диметилтиазол-2 ил)-2, 5-дифенилтетразолия бромида)].
  2. Стерилизуйте каркасы стандартного размера и поместите их в 24 плиты скважины.
  3. Добавляют клетки 3T3-L1 в пластину 24 лунки и инкубировали в течение 72 ч.

6. Исследования in vivo на животных

  1. Индукция ДМ и иссечение раны
    1. Кормят животное с высокожировой диетой в течение двух недель и вводят однократную дозу стрептозотоцина (СТЗ) (50 мг/кг массы тела) в цитратном буферном растворе внутрибрюшинно крысам-альбиносам Wistar (180-200 г) для индукции диабета 2 типа.
    2. Выберите животных с постоянным содержанием глюкозы в крови 250 мг/дл для исследования.
    3. Рандомизировать отобранных животных для индукции иссеченных ран.
    4. Обезболивают крыс с диабетом с помощью диэтилового эфира (5 мл добавляли в ранее насыщенную анестезируемую камеру) и подтверждали с помощью метода защемления носком и цвета слизистой оболочки.
    5. Сбрить дорсальную область (дорсальная грудная, поясничная область) с помощью асептического триммера и лопастей (А40).
    6. Стерилизуйте выбритый участок спиртовой тампон.
    7. Иссекайте кожу (2 х 2см2 и глубиной 1 мм) асептическим хирургическим лезвием А40 на бритой области для создания открытой раны.
    8. Разделите животных на три группы (Группа 1 - Контроль заболевания , Группа 2 - Каркас CL (Плацебо), Группа 3 - Каркас DOX CL), каждая группа состоит из 6 крыс.
    9. Прикрепите каркасы CL и DOX CL хирургическим скотчем и накройте контрольную группу стерильной марлей в течение 21 дня.
    10. Проследите область раны на стерильном листе OHP и измерьте процентное уменьшение раны с помощью сетчатого метода в дни 0, 7, 14 и 21 для всех групп.
    11. Рассчитайте процент уменьшения раны, используя следующие формулы.
      figure-protocol-4

7. Гистопатологические исследования

  1. Изолируют заживчивую рану на 7, 14 и 21 день, хранят в растворе формалина (10%).
  2. Срез тканей с помощью микротома получают толщину 6 мкм.
  3. Установите секции на стеклянную горку и пятно с помощью гематоксилина и эозина 17.
  4. Захват изображений под 40-кратным увеличением с помощью цифрового микроскопа.

8. Оценка гидроксипролина

  1. Изолируйте заживливую рану на 0, 7, 14 и 21 день для оценки.
  2. Оцените содержание гидроксипролина с помощью процедуры, описанной Reddy G et al., 1996 22.

9. Ифа-тест

  1. Оцените уровни MMP-9 с помощью комплекта Elisa в соответствии с инструкциями производителя.
  2. Изолируйте образцы тканей из зажившей раны на 21-й день и измерзайте с помощью гомогенизатора ткани.
  3. Центрифугируют полученный гомогенат и собирают супернатант.
  4. Разбавить супернатант в 100 раз с помощью пробирного буфера.
  5. Сканируйте пластину с помощью устройства считывания нескольких пластин.

10. Статистический анализ

  1. Представить полученные результаты как среднее ± УР.
  2. Выполните статистический анализ с помощью призмы Графовой панели v5.01.
  3. Достигайте статистической значимости с помощью одностороннего анализа дисперсии (ANOVA) и пост-специального теста Даннета.
  4. Рассмотрим значения с p≤0,05 как значимые.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Характеристика скафолдов NCL и CL, загруженных DOX
При визуальном осмотре было обнаружено, что каркасы NCL и CL кремового цвета. Кроме того, оба каркаса кажутся похожими на губку, жесткими и неэластичными при физическом осмотре. SEM-изображения каркасов NCL и CL показаны на рисунке 1. Из рисунка было ясно, что после сшивания наблюдалось уменьшение размера пор путем образования межмолекулярных связей. Кроме того, было обнаружено, что пористость каркасов NCL и CL составила ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Основной целью этого исследования было определение влияния нагруженного DOX каркаса COL-CS на заживление DW у крыс. CL и NCL были подготовлены и оценены с точки зрения морфологии, индекса набухания, кинетики высвобождения in vitro и биосовместимости.

Характеристика скафолдов NCL и CL, загруженных DOX
Подготовленные каркасы оказались пористыми с взаимосвязанными порами. Эти взаимосвязанные поры обеспечивают пористую, губчатую природу, которая помогает в правильной диффузии к...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.

Благодарности

Авторы благодарят доктора Ашиша Д. Вадхвани. (Доцент и заведующий кафедрой фармацевтической биотехнологии, Фармацевтический колледж JSS, Ути, Индия) за помощь в исследованиях жизнеспособности клеток in vitro.

Авторы хотели бы поблагодарить Департамент науки и технологий - Фонд совершенствования научно-технической инфраструктуры в университетах и высших учебных заведениях (DST-FIST), Нью-Дели, за поддержку нашего отдела.

Авторы также хотели бы поблагодарить г-на Санджу. С. и г-н Шрирам. Нарукулла М. Фарм студентам за поддержку в видеосъеме.

Это исследование было поддержано JSS Academy of Higher Education & Research (JSSAHER).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
1-этил-(3-3-диметиламинопропил) карбодиимида гидрохлорид (EDC)Merck Millipore, Мумбаи, ИндияE7750
2-(N-морфолино) этановая сульфоновая кислота (MES)Merck Millipore, Мумбаи, Индия137074
3-(4, 5 диметилтиазол-2 ил) -2, 5-дифенилтетразолия бромид (МТТ)Thermo Fisher, Мумбаи, ИндияM6494
Морозильная камераLabline Instruments, Кочи, Индия
Диализный мешокMerck Millipore, Мумбаи, ИндияD6191-Avg. плоская ширина 25 мм (1,0 дюйма), MWCO 12,000 Da
DoxycyclineSigma Chemicals Co. Ltd, Мумбаи, ИндияD9891
Elisa kitR& D SystemsRMP900
Escherichia coli (E. coli)Национальная коллекция промышленных микроорганизмов, Пуна, ИндияNCIM 2567
ЭтанолMerck Millipore, Мумбаи, Индия100983
Lyophilizer-SZ042Sub-Zero лабораторные инструменты, Ченнаи, Индия
Механическая мешалка-RQ-122/DRemi laboratory instruments, Мумбаи, Индия
Среднемолекулярные ChitosanSisco Research Laboratories Pvt. Ltd., Мумбаи, Индия18824
Microtome-RM2135Leica, Великобритания
Клетки эмбриональных фибробластов мыши (3T3-L1)Национальный центр клеточных наук, Пуна, Индия
Считыватель нескольких планшетов -Inifinte M200 ProTecan Instruments, Швейцария
N-гидроксисукцинимид (NHS)Sigma chemicals Co. Ltd, Мумбаи, Индия130672
Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa)Национальнаяколлекция промышленных микроорганизмов, Пуна, ИндияNCIM 2036
Сканирующая электронная микроскопия (SEM)-S-4800Хитачи, Индия
Гранулы гидроксида натрия (NaOH)Qualigen fine chemicals, Мумбаи, ИндияQ27815
Staphylococcus aureus (S. aureus)Национальная коллекция промышленных микроорганизмов, Пуна, ИндияNCIM 5022
Staphylococcus epidermis (S. epidermis)Национальная коллекция промышленных микроорганизмов, Пуна, ИндияNCIM 5270
Стрептозотоцин (STZ)Sisco Research Laboratories Pvt. Ltd., Мумбаи, Индия14653
Тип-1 крыса КоллагенSigma Chemicals Co. Ltd, Мумбаи, ИндияC7661
Ультрафиолет– спектроскопия видимого диапазона-1700Shimadzu
Вертикул морозильной камеры M6494

Ссылки

  1. International Diabetes Federation. IDF Diabetes Atlas, 9th edn. , Brussels, Belgium. Available from: https://www.diabetesatlas.org (2019).
  2. Falanga, V. Wound healing and its impairment in the diabetic foot. The Lancet. 366 (9498), 1736-1743 (2005).
  3. Frykberg, R. G., Banks, J. Challenges in the treatment of chronic wounds. Advances in Wound Care. 4 (9), 560-582 (2015).
  4. Alexiadou, K., Doupis, J. Management of diabetic foot ulcers. Diabetes Therapy. 3 (1), 1-15 (2012).
  5. Karri, V. V. S. R., et al. Current and emerging therapies in the management of diabetic foot ulcers. Current Medical Research and Opinion. 32 (3), 519-542 (2016).
  6. Sanapalli, B. K., et al. Human beta defensins may be a multifactorial modulator in the management of diabetic wound. Wound Repair and Regeneration. 28 (3), 416-421 (2020).
  7. Caley, M. P., Martins, V. L., O'Toole, E. A. Metalloproteinases and wound healing. Advances in Wound Care. 4 (4), 225-234 (2015).
  8. Reiss, M. J., et al. Matrix metalloproteinase-9 delays wound healing in a murine wound model. Surgery. 147 (2), 295-302 (2010).
  9. Gill, S. E., Parks, W. C. Metalloproteinases and their inhibitors: regulators of wound healing. The International Journal of Biochemistry & Cell Biology. 40 (6-7), 1334-1347 (2008).
  10. Stechmiller, J., Cowan, L., Schultz, G. The role of doxycycline as a matrix metalloproteinase inhibitor for the treatment of chronic wounds. Biological Research for Nursing. 11 (4), 336-344 (2010).
  11. Griffin, M. O., Fricovsky, E., Ceballos, G., Villarreal, F. Tetracyclines: a pleitropic family of compounds with promising therapeutic properties. Review of the literature. American Journal of Physiology-Cell Physiology. 299 (3), 539-548 (2010).
  12. Burns, F., Stack, M., Gray, R., Paterson, C. Inhibition of purified collagenase from alkali-burned rabbit corneas. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 30 (7), 1569-1575 (1989).
  13. Kraus, R. L., et al. Antioxidant properties of minocycline: neuroprotection in an oxidative stress assay and direct radical-scavenging activity. Journal of Neurochemistry. 94 (3), 819-827 (2005).
  14. Yrjänheikki, J., Keinänen, R., Pellikka, M., Hökfelt, T., Koistinaho, J. Tetracyclines inhibit microglial activation and are neuroprotective in global brain ischemia. Proceedings of the National Academy of Sciences. 95 (26), 15769-15774 (1998).
  15. Moura, L. I., Dias, A. M., Carvalho, E., de Sousa, H. C. Recent advances on the development of wound dressings for diabetic foot ulcer treatment-a review. Acta Biomaterialia. 9 (7), 7093-7114 (2013).
  16. Natarajan, J., et al. Nanostructured Lipid Carriers of Pioglitazone Loaded Collagen/Chitosan Composite Scaffold for Diabetic Wound Healing. Advances in Wound Care. 8 (10), 499-513 (2019).
  17. Karri, V. V. S. R., et al. Curcumin loaded chitosan nanoparticles impregnated into collagen-alginate scaffolds for diabetic wound healing. International Journal Of Biological Macromolecules. 93, Part B 1519-1529 (2016).
  18. Hsieh, W. -C., Chang, C. -P., Lin, S. -M. Morphology and characterization of 3D micro-porous structured chitosan scaffolds for tissue engineering. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 57 (2), 250-255 (2007).
  19. Xie, Y., Chen, J., Xiao, A., Liu, L. Antibacterial activity of polyphenols: structure-activity relationship and influence of hyperglycemic condition. Molecules. 22 (1913), 1-11 (2017).
  20. Geerlings, S. E., Brouwer, E. C., Gaastra, W., Verhoef, J., Hoepelman, A. I. Effect of glucose and pH on uropathogenic and non-uropathogenic Escherichia coli: studies with urine from diabetic and non-diabetic individuals. Journal of Medical Microbiology. 48 (6), 535-539 (1999).
  21. Eloff, J. N. A sensitive and quick microplate method to determine the minimal inhibitory concentration of plant extracts for bacteria. Planta Medica. 64 (8), 711-713 (1998).
  22. Reddy, G. K., Enwemeka, C. S. A simplified method for the analysis of hydroxyproline in biological tissues. Clinical Biochemistry. 29 (3), 225-229 (1996).
  23. Charulatha, V., Rajaram, A. Influence of different crosslinking treatments on the physical properties of collagen membranes. Biomaterials. 24 (5), 759-767 (2003).
  24. Rehakova, M., Bakoš, D., Vizarova, K., Soldán, M., Jurícková, M. Properties of collagen and hyaluronic acid composite materials and their modification by chemical crosslinking. Journal of Biomedical Materials Research: An Official Journal of The Society for Biomaterials and The Japanese Society for Biomaterials. 30 (3), 369-372 (1996).
  25. Chang, M. -Y., et al. Doxycycline enhances survival and self-renewal of human pluripotent stem cells. Stem Cell Reports. 3 (2), 353-364 (2014).
  26. Dovi, J. V., He, L. K., DiPietro, L. A. Accelerated wound closure in neutrophil-depleted mice. Journal of Leukocyte Biology. 73 (4), 448-455 (2003).
  27. Lindeman, J. H., Abdul-Hussien, H., van Bockel, J. H., Wolterbeek, R., Kleemann, R. Clinical Perspective. Circulation. 119 (16), 2209-2216 (2009).
  28. Zhang, C., Gong, W., Liu, H., Guo, Z., Ge, S. Inhibition of matrix metalloproteinase-9 with low-dose doxycycline reduces acute lung injury induced by cardiopulmonary bypass. International Journal Of Clinical And Experimental Medicine. 7 (12), 4975-4982 (2014).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи