Этот протокол описывает процедуру удаления вентральной доли печени у взрослых рыбок данио, чтобы обеспечить возможность изучения регенерации печени.
Методическая статья
Этот протокол описывает процедуру удаления вентральной доли печени у взрослых рыбок данио, чтобы обеспечить возможность изучения регенерации печени.
Печеночная недостаточность является одной из ведущих причин смерти во всем мире, а смертность от хронических заболеваний печени резко возрастает в Соединенных Штатах. Здоровая печень способна регенерировать от токсического повреждения, но при запущенном заболевании печени естественная способность печени к регенерации нарушается. Рыбки данио стали мощной экспериментальной системой для изучения регенерации. Они являются идеальной моделью для изучения регенерации печени после частичной гепатэктомии, процедуры, имеющей прямое клиническое значение, при которой часть печени удаляется хирургическим путем, оставляя остальную часть нетронутой. Не существует стандартного протокола для частичной гепатэктомии; Предыдущие исследования с использованием этой модели использовали несколько разные протоколы и сообщали о несопоставимых результатах. Здесь описан эффективный, воспроизводимый протокол для выполнения частичной гепатэктомии у взрослых рыбок данио. Мы используем эту технику, чтобы продемонстрировать, что рыбки данио способны к эпиморфной регенерации резекционированной доли. Этот протокол может быть использован для дальнейшего опроса механизмов, необходимых для регенерации печени у рыбок данио.
Среди твердых органов у человека печень является единственным органом, способным к регенерации1. Это имеет решающее значение, так как печень является важным органом, ответственным за ключевые метаболические функции, хранение энергии, детоксикацию крови, секрецию белков плазмы и выработку желчи2. Гепатоциты, потерянные из-за токсического или воспалительного повреждения, заменяются в основном путем деления оставшихся гепатоцитов1. Одной из классических экспериментальных моделей для изучения регенерации печени является частичная гепатэктомия, при которой удаляются отдельные доли печени, оставляя оста....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Рыбок данио выращивали и разводили в соответствии со стандартными процедурами. Эксперименты были одобрены Комитетом по уходу за животными и их использованию Бригама и женской больницы (2016N000405). Взрослых рыбок данио голодали за 24 часа до начала протокола. Системная вода относится к воде в аквариумах для рыбок данио в водном объекте.
1. Подготовка и обезболивание
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Чтобы изучить регенеративный потенциал печени взрослой рыбки данио, мы провели частичную гепатэктомию (PHX) у взрослых рыбок данио. В основном отбирались крупные взрослые особи (30-40 мм в длину), начиная от 1,5-2,5 лет. В ходе отдельных экспериментов животные были отобраны из одного аквариума и соответствовали возрасту и размеру. В качестве соответствующего контроля мы использовали фиктивные операции, в которых животное было обезболено и получило большой разрез в стенке вентрального тела, но было восстановлено без удале.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Анатомические различия между моделями регенеративной печени рыбок данио и млекопитающих представляют собой уникальные проблемы для резекции печени. Печень у рыбок данио находится в непосредственной близости от сердца и кишечника; непреднамеренное повреждение любого органа приводит к увеличению смертности. Печень рыбок данио не инкапсулирована, что затрудняет ее отделение от кишечника. Печень получает богатую питательными веществами кровь из кишечника через портальные вены. У млекопитающих вены, выходящие из кишечника, сх.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.
I.M.O. поддерживается NIAAA (F32AA027135). W.G. поддерживается R01DK090311, R01DK105198, R24OD017870 и Программой Клаудии Адамс Барр по передовому опыту в исследованиях рака. W.G. является ученым Pew в области биомедицинских наук.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 16% параформальдегидный водный раствор, EM Grade | Electron Microscopy Sciences | 15700 | |
| 50 мл Falcon Centrifuge Tubes, полипропилен, стерильный | Corning | 352098 | |
| AS 82/220.R2 PLUS Analytical Balance | Bay State Scale & Системс, ИНК. | WL-104-1051 | |
| Dumont #55 Щипцы | Fine Science Инструменты | 11295-51 | |
| EMS Kuehne Coverglass/Образец щипцов | Электронная микроскопия Науки | 72997-07 | |
| Эпифлуоресцентный микроскоп | Zeiss | Discovery.V8 | |
| Mastertop Целлюлозный скраб | Губка Amazon | B07CBSM53Z | |
| PBS10X Liquid Conc 4 л | EMD Millipore | 6505-4L | |
| Супертонкие микроножницы, 3 1/4" прямые | биомедицинские исследовательские инструменты | 11-1020 | |
| Трикаин метансульфонат | Syndel | TRIC-M-GR-0010 | |
| Tween 20, Fisher BioReagents | Fischer Scientific | BP337-500 |
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE
Запросить разрешение