Методическая статья

Применение ультразвуковой и сдвиговой эластографии в крысиной модели НАЖБ НАЖБ/НАСГ

DOI:

10.3791/62403

⸱

20 апреля 2021 г.

 ,  ,  ,  ,  , 
1Comparative Medicine, Pfizer Inc., 2Digital Medicine & Translational Imaging, Pfizer Inc., 3Internal Medicine Research Unit, Pfizer Inc., 4Drug Safety Research & Development, Pfizer Inc.

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Этот протокол описывает использование расширенной ультразвуковой техники для неинвазивного наблюдения и количественной оценки изменений ткани печени в моделях грызунов с неалкогольной жировой болезнью печени.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Неалкогольный стеатогепатит (НАСГ) является состоянием в спектре неалкогольной жировой болезни печени (НАЖБП), которая характеризуется накоплением жира в печени (стеатоз) и воспалением, приводящим к фиброзу. Доклинические модели, близко переименовывающие НАСГ/НАЖБП человека, имеют важное значение для разработки лекарств. В то время как биопсия печени в настоящее время является золотым стандартом для измерения прогрессирования и диагностики НАЖБП / НАСГ в клинике, в доклиническом пространстве для гистологического анализа для оценки стадии заболевания необходим либо сбор целых образцов печени в нескольких временных точках во время исследования, либо биопсия печени.

Проведение биопсии печени в середине исследования является инвазивной и трудоемкой процедурой, а сбор образцов печени для оценки уровня заболевания увеличивает количество исследовательских животных, необходимых для исследования. Таким образом, существует потребность в надежном, переводимом, неинвазивном биомаркере визуализации для обнаружения НАСГ/НАЖБД в этих доклинических моделях. Неинвазивные ультразвуковые изображения B-режима и эластография сдвиговых волн (SWE) могут использоваться для измерения стеатоза, а также фиброза печени. Чтобы оценить полезность SWE в доклинических моделях НАСГ для грызунов, животных поместили на диету с про-НАСГ и подвергли неинвазивной ультразвуковой визуализации B-мод и эластографии сдвиговых волн для измерения гепаторенального (ЧСС) индекса и эластичности печени, измеряя прогрессирование как накопления жира в печени, так и жесткости тканей, соответственно, в нескольких временных точках в течение данного исследования НАЖБП / НАСГ.

Индекс ЧС и показатели эластичности сравнивали с гистологическими маркерами стеатоза и фиброза. Результаты показали сильную корреляцию между индексом HR и процентом окрашивания Oil Red O (ORO), а также между эластичностью и окрашиванием печени Picro-Sirius Red (PSR). Сильная корреляция между классическими методами ex vivo и результатами визуализации in vivo свидетельствует о том, что эластография сдвиговых волн / ультразвуковая визуализация могут быть использованы для оценки фенотипа и прогрессирования заболевания в доклинической модели НАЖБП/НАСГ.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Неалкогольная жировая болезнь печени (НАЖБП) является метаболическим состоянием, характеризующимся чрезмерным накоплением жира в печени, и быстро становится ведущим заболеванием печени во всем мире с недавно зарегистрированной глобальной распространенностью 25%1. Неалкогольный стеатогепатит (НАСГ) является более прогрессирующей стадией спектра НАЖБП, характеризующейся избытком жира печени с прогрессирующим повреждением клеток, воспалением и фиброзом. Эти недуги часто молчат, не обнаруживаются с помощью анализов крови или обычных осмотров, пока не произошло значительное повреждение печени пациента. В настоящее время золотым стандартом для диагностики НАСГ у пациентов является гистологическое исследование образцов биопсии печени, полученных пациентом. Аналогичным образом, доклинические исследователи, которые работают над пониманием патогенеза НАСГ / НАЖБП, а также индустрии разработки лекарств, полагаются на биопсию клина in vivo образцов печени или терминальную эвтаназию спутниковых когорт для гистологии для измерения стеатоза, воспаления и фиброза.

Например, клиновидная биопсия печени была стандартным методом оценки стеатогепатита и фиброза при использовании модели GUBRA NASH2. Метод клиновидной биопсии печени является инвазивным и трудоемким у мелких животных3. Использование клиновидной биопсии печени в середине исследования представляет собой дополнительную экспериментальную переменную в модели заболевания, которая часто увеличивает количество необходимых животных. Учитывая эти факторы, неинвазивные методы визуализации, которые могут быть использованы для надежной оценки стеатоза и фиброза в животных моделях НАСГ / НАЖБВ в ранние моменты времени, оказываются ценными. Эластография сдвиговых волн (SWE) - это ультразвуковой метод, используемый для измерения эластичности мягких тканей. Метод измеряет распространение волн сдвига, создаваемых сверхзвуковыми ультразвуковыми импульсами, направленными на тканевую мишень, а затем вычисляет значение, называемое модулем E4. Скорость волны сдвига пропорциональна степени жесткости тканей.

На рисунках 1 и 2 показана настройка области визуализации и прибор SWE. Прибор SWE представляет собой один колесный блок с двумя экранами и панелью управления, показанный на рисунке 2A. Верхний монитор(рисунок 2B)действует как монитор компьютера и отображает изображения и каталоги пациентов. Панель управления(рисунок 2C)представляет собой массив кнопок и циферблатов, которые управляют общими аспектами захвата изображения: замораживание экрана, сохранение изображений, переход из одного режима в другой. Нижний экран(рисунок 2D)представляет собой сенсорный экран с дополнительными элементами управления для изменения настроек и действует как клавиатура для ввода данных по мере необходимости. Прибор оснащен стилусом для использования на сенсорном экране при желании. Ультразвуковые зонды крепятся к нижней передней панели прибора. Для визуализации B-режима и SWE у грызунов использовался суперлинейный преобразователь от 6 до 20 МГц. Эта способность неинвазивно измерять жесткость тканей делает SWE ценным инструментом для идентификации и постановки фиброза печени5 у пациентов с НАСГ, уменьшая потребность в более инвазивных методах. SWE, фактически, использовался для измерения фиброза печени у пациентов и является одобренным FDA методом оценки фиброза в клинике6. Использование SWE для мониторинга прогрессирования НАСГ на животных моделях заболевания обеспечит трансляционный инструмент для разработки методов лечения и одновременно улучшит благополучие животных за счет сокращения числа животных и совершенствования процедур in vivo для минимизации боли и дистресса.

SWE-визуализация у пациентов с человеческим контролем использует низкочастотный ультразвуковой преобразователь4,который не идеален для мелких животных. Примечательно, что высокочастотные методы SWE были использованы для оценки эффективности ингибирования ацетил-КоА-карбоксилазы на патогенез НАСГ в модели7крыс, и полезность этого метода была описана в тетрахлорметановых крысах, моделях фиброза печени с успешными результатами по сравнению с традиционными методами гистологической оценки METAVIR8. Однако в существующей литературе отсутствует подробная информация о технике и методологии применения визуализации SWE в доклинических моделях НАСГ. Как описано выше, стеатоз печени является одной из ключевых особенностей состояния НАЖБВ/НАСГ и является важным этапом, на котором может быть рассмотрено вмешательство. Таким образом, оценка накопления жира в печени с использованием метода визуализации так же важна, как и оценка фиброза печени в доклинических моделях НАСГ/НАЖБП.

Ультразвуковой метод, известный как индекс ЧС, соотношение яркости тканей печени по сравнению с почечной корой, был использован в качестве суррогатного маркера стеатоза в клинике9,10. Этот подход, однако, не был широко использован в доклинических животных моделях НАЖБЛ/НАСГ. В этой статье описывается метод измерения эластичности, а также индекса ЧСС в качестве суррогатного маркера фиброза и стеатоза печеночной области, соответственно, в модели крыс с дефицитом холина и высоким содержанием жиров (CDAHFD) НАЖБП/НАСГ. Эта модель вызывает быстрый стеатоз, воспаление печени и фиброз, который можно измерить в течение 6 недель у мышей11. Было показано, что добавление холестерина (1%) к этой диете способствует фиброгенезу у крыс12,что делает эту модель подходящим кандидатом для валидационных исследований, включающих визуализацию сдвиговых волн. В целом, эта технология визуализации также может быть применена к широкому спектру моделей / диет НАСГ, где стеатоз и / или фиброз являются конечной точкой интереса.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все процедуры, связанные с животными, были рассмотрены и одобрены Институциональным комитетом pfizer по уходу за животными и их использованию (IACUC) и проведены в международном аккредитованном учреждении AAALAC (Оценка и аккредитация по уходу за лабораторными животными).

1. Индукция заболевания

  1. Используйте самцов крыс Глиц-Хан (150-175 г; ~ 6-7 недель; всего 40 крыс), которые свободны от известных адвентивных патогенов крыс. Размещайте крыс парами в индивидуально вентилируемой камере с бумажным подстилкой (см. Таблицу материалов)и поддерживайте их при температуре 22 ± 1 °C, относительной влажности 40-70% при цикле 12:12 ч светло-темного.
  2. Поместите крыс весом 150-175 г (~ 6-7 недель) на холин-дефицитную диету с высоким содержанием жиров с 1% холестерина (n = 20) или стандартный лабораторный грызун-чау (n = 20) в зависимости от дизайна исследования.
    ПРИМЕЧАНИЕ: В этом исследовании в общей сложности 40 крыс были включены с 20 животными в группе. В конце6-й недели половина когорты из каждой группы была некропсиирована для гистологического анализа образцов печени в середине исследования. Таким образом, размер выборки составил 10 животных на группу за9-ю и 12-ю недельные временные точки.

2. Настройка приборов

  1. Настройте область визуализации следующим образом: включите нагретую поверхность, чтобы держать животное в тепле во время визуализации (c на рисунке 1),и защищенный конус анестезии носа для доставки ингаляционной анестезии для поддержания плоскости анестезии на протяжении всей процедуры (b на рисунке 1).
  2. Используйте держатель ультразвукового зонда, чтобы облегчить перемещение ультразвукового зонда в нужное место и предотвратить покои зонда на животное.
    1. Используйте подогретый ультразвуковой гель на коже, где получено ультразвуковое изображение.
    2. Поддерживайте следующие настройки на протяжении всей процедуры, которые можно настроить на сенсорном экране: Акустическая мощность 0,0 дБ; Тканевый тюнер 1540 м/с; Динамический диапазон 60 дБ; Диапазон упругости (для режима SWE) < 30 кПа.
  3. Прикрепите ультразвуковой зонд к рельсовой системе в специализированном держателе (a на рисунке 1).
  4. Включите прибор и позвольте ему загрузиться. После того, как монитор включен, обратите внимание на изображение режима B с подключенными сведениями о преобразователе.

3. Предметная подготовка

  1. Убедитесь, что животные голодают по крайней мере за 4 часа до процедуры визуализации, чтобы содержимое кишечника не мешало получению изображения.
    1. После по крайней мере 4 ч голодания поместите крысу в индукционную камеру изофлуранового анестетика до тех пор, пока не будет достигнут подходящий уровень анестезии, подтвержденный отсутствием реакции на защемление носком. Подвергайте животных воздействию 3-5% изофлурана в течение 3-5 мин, чтобы вызвать анестезию.
    2. Для поддержания анестезии держите животных под 2-3% изофлурана во время получения изображения. Применяют офтальмологическую мазь для защиты глаз от пересыхания во время анестезии.
  2. Как только анестезия будет достигнута, извлеките животное из индукционной камеры и поместите его на теплое одеяло с горячей водой. Поместите анестезирующий конус носа над мордой и побрейте животное на правой стороне, от грудной клетки до таза. Используйте химический крем для депиляции, чтобы удалить все оставшиеся волосы в этой области.
  3. После удаления волос поместите животное в левую боковую клетку с верхними лапами, заклеенными над головой на теплой платформе визуализации(рисунок 3A).
  4. Нажмите клавишу «Пациент» на панели управления прибором и определите субъекта в соответствии с дизайном исследования.
    1. Откройте функцию клавиатуры на инструменте, коснувшись значка на сенсорном экране. Введите нужные имена.
    2. Нажмите Выход, чтобы выйти из экрана имени пациента. Обратите внимание, что B-режим снова открывается на мониторе.

4. Получение изображения для измерения гепато-почечного (ЧГ) индекса

  1. Нанесите небольшое количество подогретого ультразвукового геля на депилированную область кожи на животном.
  2. Переместите ультразвуковой зонд, чтобы он коснулся покрытой гелем области субъекта(рисунок 3B). Как только на мониторе появится живое изображение внутренних органов субъекта в B-режиме, переместите ультразвуковой зонд в область немного выше бедра, прямо параллельно поясничным позвонкам (сагиттальная плоскость).
  3. Используя дисплей B-режима на мониторе, найдите правую почку, определив разделение большой почечной артерии и коры и продолговатого мозга(рисунок 4A). Кроме того, наблюдают за частью печени в единой плоскости изображения.
    1. Убедитесь, что артефактов изображения практически нет, таких как тени и пузырьки воздуха.
  4. Измерьте коэффициент B Mode для получения индекса HR.
    1. Убедитесь, что кора почек и паренхима печени находятся в одной плоскости фокуса. При необходимости отрегулируйте фокусировку и усиление управления для получения четкого изображения.
      1. Отрегулируйте фокус, повернув ручку фокусировки на панели управления. Отрегулируйте коэффициент усиления, нажав кнопку Auto TGC один раз.
    2. Нажмите клавишу Freeze на панели управления. Убедитесь, что животное находится между вдохами при замерзании экрана, чтобы избежать размытых изображений.
    3. Как только экран зависнет, нажмите «Инструменты измерения» на сенсорном экране. Выберите B-mode Ratio, встроенный инструмент, который измеряет относительную яркость ткани из выбранной области, которая представляет интерес. Создайте круг 2 мм, чтобы выбрать интересуящий регион (ROI). Отрегулируйте размер круга, переместив палец вдоль внешнего края трекбола на панели управления.
    4. Поместите 2 мм круг на изображение печени ROI, которое должно быть расположено справа от почки. Выявляют ткань печени на основании ее однородной эхогенности и гладкого контура.
    5. Как только круг будет на месте, нажмите кнопку Выбрать на панели управления и наблюдайте за новым появившимся кругом.
    6. Отрегулируйте размер нового круга до 2 мм, и поместите его на изображение коры почек. Обязательно держите глубину кругов на печени и коре почек одинаковой. Оказавшись на месте, нажмите кнопку Выбрать на панели управления. Обратите внимание, что встроенный системный инструмент отображает индекс HR в виде коэффициента B-режима.
    7. Нажмите «Сохранить изображение», чтобы сохранить изображение, и просмотрите сохраненные изображения, которые отображаются в виде миниатюр в правой части монитора.
    8. Нажмите кнопку Freeze на панели управления, чтобы разморозить изображение и вернуться к изображению в режиме B.
  5. Повторите измерение соотношения B Mode 3 раза на разных глубинах и плоскостях ткани. Рассчитайте среднее значение этих трех соотношений B-мод для каждого животного и точки времени.

5. Получение изображений для эластографии сдвиговых волн

  1. Переместите зонд поперечно в правую подреберную область, чтобы найти печень с помощью режима B. Найдите область печени, которая в основном паренхима и свободна от крупных кровеносных сосудов, таких как воротная вена и печеночная артерия. Как только чистая область печени была найдена, сгенерируйте карту эластичности сдвига ткани, нажав кнопку SWE на панели управления.
  2. Отрегулируйте размер и положение коробки SWE под капсулой печени в области, свободной от теней. Определите капсулу как яркую эхогенную линию вблизи верхней части печени.
  3. Обратите внимание, что поле SWE переходит на цветовую карту в течение 5-10 с. Как только коробка будет заполнена и стабильна, нажмите кнопку Freeze на панели управления, когда животное находится между вдохами.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Минимальное количество покрытия коробки должно составлять 60-80%, чтобы точно оценить эластичность печени.
  4. На сенсорном экране нажмите QBox, встроенный системный инструмент, который вычисляет эластичность из ROI на карте упругости волн сдвига. Обратите внимание на круг и поле данных, которые появляются на мониторе. Отрегулируйте положение QBox, коснувшись значка положения на сенсорном экране в нужной настройке.
  5. Отрегулируйте размер круга до 3 мм, переместив палец вдоль внешнего края трекбола на панели управления. Используя трекбол, расположите круг в области, свободной от тени с равномерной окраской(рисунок 5A,B). Позаботьтесь о том, чтобы избежать известных областей жесткости, таких как кровеносные сосуды или капсула печени, а также кровотечения из этих структур.
  6. Когда будет найдена адекватная область, нажмите «Сохранить изображение» на панели управления, чтобы сохранить изображение. Повторите эту процедуру 3 раза в разных областях печени. Перемещайте зонд вверх и вниз или вбок на брюшной полости, чтобы собрать изображения, нанесенные на карту SWE, из разных областей печени.
  7. После того, как все изображения будут собраны, нажмите «Завершить экзамен» на панели управления и запишите экран информации о пациенте, который появляется на мониторе.
  8. Снимите ленту с лап животного, вытрите лишний гель и удалите животное со стадии визуализации. Позвольте ему восстановиться после анестезии в теплой, сухой клетке самостоятельно, пока он полностью не восстановится. Следите за каждым животным, чтобы обеспечить полное восстановление после анестезии, о чем свидетельствует его способность поддерживать стернальную лежачие состояния.
  9. Повторите шаги в разделах 4-5 для каждого животного в когорте, которое будет изображено.

6. Поиск и анализ данных изображений

  1. Когда изображения для всех животных будут собраны, выключите анестезию.
  2. Чтобы извлечь данные изображения с устройства, нажмите кнопку «Обзор» на панели управления и просмотрите все сканирования, выполненные на этом приборе, которые отображаются на мониторе. Найдите нужные сканы с помощью окна поиска в верхнем углу экрана.
  3. Выберите все сканы, необходимые для анализа данных, установив флажок рядом с именем пациента с помощью трекбола и кнопки Выбрать. После того, как все необходимые сканы будут выделены, выберите Экспорт JPEG на сенсорном экране. Экспорт данных на сетевой диск или портативный USB-накопитель. Найдите порты USB на задней панели прибора.
  4. После экспорта файлов откройте отдельные jpg-файлы каждого сканирования на компьютере рабочей станции. Наблюдайте за всеми данными в правой части изображения: B Mode Ratio - соберите число B Ratio; Q Box-соберите значение средней эластичности (кПа).
  5. Введите все данные в электронную таблицу или другое программное обеспечение для управления базами данных и выполните необходимый статистический анализ.

7. Гистологический анализ образцов печени

  1. В конце6-й недели выполняют некропсию половине когорты из каждой группы для промежуточного исследования гистологического анализа образцов печени. Аналогичным образом, усыпляют остальную когорту животных и собирают образцы печени для гистологического анализа на12-й неделе.
  2. Для окрашивания ORO зафиксируйте участки печени в 10% нейтрально-буферном формалине и криоконсервируйте их сахарозой, используя охлажденный 30% раствор сахарозы на ночь как минимум. Крио-встраивание секций в оптимальный температурный компаунд резки и крио-секционирование их на заряженные слайды для подготовки к окрашиванию ORO.
  3. Поместите криосеки в 100% пропиленгликоль на 2 мин с последующей ночной инкубацией в 0,5% растворе ORO. После удаления из раствора ORO дифференцируют срезы в 85% пропиленгликоле в течение 1 мин, промывают в деионизированной воде и противопоставляют гематоксилин-лилли модификации Майера в течение 1 мин.
    1. Поместите крышки на горки с помощью водной монтажной среды и высушите их при комнатной температуре.
  4. Для PSR депарафинизируйте закрепленные формалином, встроенные в парафин слайды печени, поместите их на ночь в жидкость Bouin, а затем окрасьте их с помощью автоматического окрашивателя слайдов в соответствии с протоколом производителя с некоторыми оптимизированными шагами (1% фосфомолибдовой кислоты в течение 5 мин; 0,1% Sirius Red в насыщенной пикриновой кислоте в течение 90 мин; 2 x 30 с промывки в 0,5% уксусной кислоты). Автоматически обезвоживайте слайды, а затем монтируем их с помощью постоянного монтажного носителя.
  5. Захват изображений слайдов, окрашенных ORO- и PSR, с помощью цифрового микроскопионного сканера с 20-кратным увеличением, сохраните их в формате .svs и сохраните в базе данных изображений менеджера слайдов.
  6. Анализируйте изображения с помощью пользовательских алгоритмов, созданных в программном обеспечении для цифровой патологии. Единообразно применять цифровые программные приложения для патологии с пороговыми параметрами для идентификации и количественной оценки области сечений печени, а также областей, окрашенных ORO- и PSR. Экспортируйте измерения в электронную таблицу для вычисления процентной области.

8. Статистический анализ

  1. Выполните статистический анализ данных визуализации с помощью двустороннего ANOVA, используя тест множественных сравнений Сидака для оценки разницы между группами в разные моменты времени. Предположим значительные различия между группами для значений вероятности p ≤ 0,001. Кроме того, выполните корреляцию считываний изображений с гистологическими анализами.
  2. Используйте непараметрическую статистику для анализа результатов гистологического анализа этого исследования. Заявите значения группы как медиану ± полумесяцвартильном диапазоне (sIQR). Предположим значительные различия между группами для значений вероятности p ≤ 0,001. Используйте тест Манна-Уитни для сравнения количества гистохимического окрашивания PSR и ORO между различными группами.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Одной из отличительных черт животных, которых кормят CDAHFD, является стеатоз. Накопление жира в печени изменяет эхогенные свойства ткани, которые можно количественно оценить, измерив яркость печени и нормализовав ее до яркости коры почек по изображению В-мода, сделанному в той же плоскости. Количественное значение выражается в виде индекса ЧС, который является косвенной мерой стеатоза. На рисунке 4Арепрезентативное изображение печени от контрольного животного показывает примерно равную или ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ультразвуковая визуализация, включая SWE, может быть бесценным инструментом для продольной оценки стеатоза печени и жесткости в доклинических моделях НАЖБВ/НАСГ. В этой статье описываются подробные методологии получения высококачественного B-режима, а также SWE-изображений печени для измерения индекса HR и эластичности с использованием CDAHFD диетической модели НАСГ. Далее результаты показывают отличную корреляцию индекса ЧСС и эластичности с золотым стандартом оценки – гистологической оценки ткани печени. Хотя сама проц...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все авторы являются сотрудниками компании Pfizer, Inc.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы хотели бы поблагодарить команду Pfizer Comparative Medicine Operations Team за их тяжелую работу по управляющей и обеспечивающей здоровье исследуемых животных, а также за помощь с некоторыми методами. Кроме того, спасибо Даниэль Кроуэлл, Гэри Сейтису и Дженнифер Эшли Олсон за их помощь в обработке тканей для гистологического анализа. Кроме того, авторы хотели бы поблагодарить Джулиту Рамирес за рецензирование и предоставление ценных отзывов во время подготовки этой рукописи.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
AixplorerСверхзвуковой инструментэластографии сдвиговой волны
Aixplorer SuperLinear SLH20-6 преобразовательсверхзвуковой преобразователь дляэластографии сдвиговой волны
Alpha-dri подстилкакрыс клетки
Aperio AT2 сканерLeica BiosystemsDigital Pathology Brightfield Scanner
Compac 6 Система анестезииVetEquipАнестезиологический испаритель и система доставки. Тем не менее, можно использовать любую систему доставки анестезии.
Управление базой данных имиджеровLeica BiosystemsDigital Pathology
Гематоксилин МайераDako/AgilentH& E Окрашивание/Гистология
Церковь Наири Масло для удаления волос Dwight
Red O solutionPoly ScientificLipid Staining/Histology
Picrosirius Red Stain (PSR)Rowley BiochemicalF-357-2Collagen Stain/Histology
Puralube Opthalmic Othalmic мазьDechra Veterinary ProductLubrication для предотвращения сухости глаз во время анестезии
Tissue-Tek Prisma PlusSakura Finetek СШААвтоматизированный краситель предметных стекол
VISIOPHARM программное обеспечениеVisiopharmЦифровое программное обеспечение
исследований патологии ДиетыA06071309iДиета
Purina5053Контроль животных
Станция визуализации VevoFujifilm VisualSonicsСтанция визуализации Vevo используется для удержания ультразвукового датчика во время визуализации.
Крысы Вистар Ханв лабораториях Чарльза Ривера
для для для индуцирования НАСГ

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Younossi, Z. M., et al. Global epidemiology of nonalcoholic fatty liver disease-Meta-analytic assessment of prevalence, incidence, and outcomes. Hepatology. 64 (1), 73-84 (2016).
  2. Boland, M. L., et al. Towards a standard diet-induced and biopsy-confirmed mouse model of non-alcoholic steatohepatitis: Impact of dietary fat source. World Journal of Gastroenterology. 25 (33), 4904-4920 (2019).
  3. Oldham, S., Rivera, C., Boland, M. L., Trevaskis, J. L. Incorporation of a survivable liver biopsy procedure in mice to assess non-alcoholic steatohepatitis (NASH) resolution. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (146), e59130(2019).
  4. Bercoff, J., Tanter, M., Fink, M. Supersonic shear imaging: a new technique for soft tissue elasticity mapping. IEEE Transactions on Ultrasonics, Ferroelectrics, and Frequency Control. 51 (4), 396-409 (2004).
  5. Bavu, E., et al. Noninvasive in vivo liver fibrosis evaluation using supersonic shear imaging: a clinical study on 113 hepatitis C virus patients. Ultrasound in Medicine & Biology. 37 (9), 1361-1373 (2011).
  6. Ferraioli, G., et al. Accuracy of real-time shear wave elastography for assessing liver fibrosis in chronic hepatitis C: a pilot study. Hepatology. 56 (6), 2125-2133 (2012).
  7. Ross, T. T., et al. Acetyl-CoA carboxylase inhibition improves multiple dimensions of NASH pathogenesis in model systems. Cellular and Molecular Gastroenterology and Hepatology. 10 (4), 829-851 (2020).
  8. Gu, L. H., Gu, G. X., Wan, P., Li, F. H., Xia, Q. The utility of two-dimensional shear wave elastography and texture analysis for monitoring liver fibrosis in rat model. Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International. 20 (1), 46-52 (2020).
  9. Marshall, R. H., Eissa, M., Bluth, E. I., Gulotta, P. M., Davis, N. K. Hepatorenal index as an accurate, simple, and effective tool in screening for steatosis. American Journal of Roentgenology. 199 (5), 997-1002 (2012).
  10. Webb, M., et al. Diagnostic value of a computerized hepatorenal index for sonographic quantification of liver steatosis. American Journal of Roentgenology. 192 (4), 909-914 (2009).
  11. Tous, M., Ferre, N., Camps, J., Riu, F., Joven, J. Feeding apolipoprotein E-knockout mice with cholesterol and fat enriched diets may be a model of non-alcoholic steatohepatitis. Molecular and Cellular Biochemistry. 268 (1-2), 53-58 (2005).
  12. Kirsch, R., et al. Rodent nutritional model of non-alcoholic steatohepatitis: species, strain and sex difference studies. Journal of Gastroenterology and Hepatology. 18 (11), 1272-1282 (2003).
  13. Journal of Ultrasound in Medicine. 2018 Scientific Program. Journal of Ultrasound in Medicine. 37 (1), 1(2018).
  14. Engelmann, G., Quader, J., Teufel, U., Schenk, J. P. Limitations and opportunities of non-invasive liver stiffness measurement in children. World Journal of Hepatology. 9 (8), 409-417 (2017).
  15. Piscaglia, F., Salvatore, V., Mulazzani, L., Cantisani, V., Schiavone, C. Ultrasound shear wave elastography for liver disease. a critical appraisal of the many actors on the stage. Ultraschall in der Medizin. 37 (1), 1-5 (2016).
  16. Singh, S., Loomba, R. Role of two-dimensional shear wave elastography in the assessment of chronic liver diseases. Hepatology. 67 (1), 13-15 (2018).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

BOil Red O

Похожие статьи