Здесь описана модель фототромботического инсульта, где инсульт производится через неповрежденный череп путем индуцирования постоянной микрососудистой окклюзии с использованием лазерного освещения после введения светочувствительного красителя.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Моделирование инсульта у мышей: очаговые поражения коры при фототромбозе
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Инсульт является основной причиной смерти и приобретенной инвалидности взрослых в развитых странах. Несмотря на обширные исследования новых терапевтических стратегий, остаются ограниченные терапевтические возможности для пациентов с инсультом. Поэтому необходимы дополнительные исследования патофизиологических путей, таких как постинсультное воспаление, ангиогенез, нейронная пластичность и регенерация. Учитывая неспособность моделей in vitro воспроизводить сложность мозга, экспериментальные модели инсульта необходимы для анализа и последующей оценки новых лекарственных мишеней для этих механизмов. Кроме того, для преодоления так называемого кризиса репликации срочно необходимы подробные стандартизированные модели для всех процедур. В рамках исследовательского консорциума ImmunoStroke описана стандартизированная фототромботическая модель мыши с использованием внутрибрюшинной инъекции Rose Bengal и освещения неповрежденного черепа лазером 561 нм. Данная модель позволяет выполнять инсульт у мышей с выделением в любую кортикальный область головного мозга без инвазивной операции; таким образом, позволяя изучать инсульт в различных областях мозга. В этом видео демонстрируются хирургические методы индукции инсульта в фототромботической модели наряду с гистологическим анализом.
Введение
Ишемический инсульт остается основной причиной смерти и приобретенной инвалидности взрослых в развитых странах в21-м веке, на которую приходится около 2,7 миллиона смертей в 2017 году во всем мире1. Даже при огромных усилиях научного сообщества доступно мало методов лечения. Кроме того, с такими высокими критериями исключения эти и без того ограниченные варианты недоступны для многих пациентов, что приводит к настоятельной необходимости в новых методах лечения для улучшения функционального восстановления после инсульта.
Учитывая неспособность моделей in vitro воспроизводить сложные взаимодействия ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Эксперименты, о которых сообщается в этом видео, проводились в соответствии с национальными руководящими принципами использования экспериментальных животных, а протоколы были одобрены немецкими правительственными комитетами (Regierung von Oberbayern, Мюнхен, Германия). Мыши, использованные в этом исследовании, были самцами мышей C57Bl/6J, в возрасте 10-12 недель, отправленными Чарльз Ривер Германия. Животные были размещены при контролируемых температурах (22 ° C ± 2 ° C), с периодом цикла 12-ч светло-темного и доступом к гранулированной пище и воде ad libitum.
1. Подготовка материала и инструментов
- Розу Бенгальскую раство....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Модель, описанная здесь, представляет собой модель фототромботического инсульта инъекцией Rose Bengal и неповрежденным освещением черепа в течение 20 минут при постоянной длине волны 561 нм и выходной мощности 25 мВт на волокне. Хотя полная фототромботическая операция длится 30 минут, животное содержится под низким наркозом, а повреждение головного мозга умеренное. Примерно через 10 минут после переноса в свои клетки все животные бодрствовали, свободно перемещаясь в клетке и взаимодействуя с однопометниками.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Представленный протокол описывает экспериментальную модель инсульта фототромбоза путем освещения интактного черепа лазером 561 нм, с предыдущей внутрибрюшинной инъекцией Розы Бенгалии. До недавнего времени использование этой модели было низким, но неуклонно растет.
Смертность при индукции инсульта в данной модели отсутствует. Общая смертность менее 5% возникает во время операции из-за анестезиологических осложнений или жертвоприношения после соответствия критериям исключения. Чтобы гарантирова.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
У авторов нет конкурирующих интересов для раскрытия.
Благодарности
Мы благодарим всех наших партнеров по сотрудничеству Консорциумов иммуноинсульта (FOR 2879, От иммунных клеток до восстановления после инсульта) за предложения и обсуждения. Эта работа финансировалась Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG, Немецкий исследовательский фонд) в рамках Стратегии передового опыта Германии в рамках Мюнхенского кластера системной неврологии (EXC 2145 SyNergy - ID 390857198) и в рамках грантов LI-2534/6-1, LI-2534/7-1 и LL-112/1-1.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 561 нм волновой лазер | Solna | Cobolt HS-03 | |
| Уксусная кислота | Sigma Life Science | 695092 | |
| Система анестезии для изофлурана | Drager | ||
| ApopTag Peroxidase in situ Набор для обнаружения апоптоза | Millipore | S7100 | |
| Bepanthen pomade | Bayer | 1578681 | |
| мышей C57Bl/6J | Коллиметр Charles | River 000664 | |
| Thorlabs | F240APC-A | ||
| Cotons | NOBA Verbondmitel Danz | 974116 | |
| Cresyl violet | Sigma Life Science | C5042-10G | |
| Cryostat | Thermo Scientific CryoStarNX70 | ||
| Этанол 70% | CLN Chemikalien Laborbedorf | 521005 | |
| Этанол 96% | CLN Chemikalien Laborbedorf | 522078 | |
| Этанол 99% | CLN Chemikalien Laborbedorf | ETO-5000-99-1 | |
| Фильтровальная бумага | Macherey-Nagel | 432018 | |
| Мелкие ножницы | FST | 15000-00 | |
| Щипцы | FST | 11616-15 | |
| Нагревательное одеяло | FHC DC Регулятор температуры | 40-90-8D | |
| Изофлуран | Abbot | B506 | |
| Изопентан | Fluka | 59070 | |
| Кетамин | Inresa Arzneimittel GmbH | ||
| Лазер Speckle | Perimed | PeriCam PSI HR | |
| Mayor Ножницы | FST | 1410-15 | |
| Фосфат буферизированный физиологический раствор PH: 7.4 | Apotheke Innestadt Uni München | P32799 | |
| Защитные очки | Лазер 2000 | NIR-ZS2-38 | |
| Розовый бенгальский | Sigma Aldrich | 198250-5G | |
| Roti-Histokit монтажный средний | Roth | 6638.1 | |
| Солевой раствор | Braun | 131321 | |
| Stereomikroskop | Zeiss | Stemi DV4 | |
| Стереотаксическая рамка | Stoelting | 51500U | |
| Superfrost Plus Slides | Thermo Scientific | J1800AMNZ | |
| Xylacine | Albrecht |
Ссылки
- GBD 2016 Causes of Death Collaborators. Global, regional, and national age-sex specific mortality for 264 causes of death, 1980-2016: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2016. Lancet. 390 (10100), 1151-1210 (2017).
- Carmichael, S. T.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
