Представлен протокол расширения гамма-дельта (γδ) Т-клеточного лекарственного препарата. Лимфоциты выделяют элютрированием и γδ-обогащают золедроновой кислотой и интерлейкином-2. Альфа-бета-Т-клетки истощаются с помощью устройства магнитного разделения клинического класса. Клетки γδ культивируют совместно с искусственными антигенпрезентирующими клетками, полученными из K562, и расширяют.
Методическая статья
Расширение и обогащение гамма-дельта (γδ) Т-клеток из аферезированного продукта человека
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Хотя Т-клетки Vγ9Vδ2 являются незначительным подмножеством Т-лимфоцитов, эта популяция востребована за ее способность распознавать антигены основным комплексом гистосовместимости (MHC) независимым образом и развивать сильную цитолитическую эффекторную функцию, что делает ее идеальным кандидатом для иммунотерапии рака. Из-за низкой частоты гамма-дельта (γδ) Т-клеток в периферической крови мы разработали эффективный протокол для значительного расширения высокочистого лекарственного препарата γδ-клеток для первого в человеке использования аллогенных γδ Т-клеток у пациентов с острым миелоидным лейкозом (ОМЛ). Используя здоровый донорский аферез в качестве аллогенного источника клеток, лимфоциты выделяют с помощью валидированного устройства для метода противоточного центрифугирования разделения клеток по размеру и плотности.
Используется богатая лимфоцитами фракция, и γδ Т-клетки предпочтительно активируются золедроновой кислотой (одобренной FDA) и интерлейкином (IL)-2 в течение 7 дней. После предпочтительного расширения γδ Т-клеток для истощения загрязняющих Т-клеточных рецепторов (TCR)αβ Т-клеток используется магнитное устройство для разделения клеток клинического класса и шарики TCRαβ. Высокообогащенные γδ Т-клетки затем подвергаются второму расширению с использованием искусственных антигенпрезентирующих клеток (aAPC), полученных из клеток K562, генетически модифицированных для экспрессии одноцепочечного переменного фрагмента (scFv) для CD3 и CD28, 41BBL (CD137L) и IL15-RA-вместе с золедроновой кислотой и IL-2. Посев в течение всего дня 7 обогащенных γδ Т-клеток в кокультуре с aAPC облегчает производство высокочистых γδ Т-клеток со средним расширением в 229 000 раз > из здоровой донорской крови.
Введение
Рецидив лейкемии является основной причиной смертности после трансплантации гемопоэтических клеток (HCT) у пациентов с ОМЛ1,2,3. Сообщалось о лучшей выживаемости без лейкемии при повышенном восстановлении γδ Т-клеток крови после HCT без повышенного риска болезни трансплантата против хозяина (GVHD)4. Способность γδ Т-клеток распознавать антигены независимым от MHC способом и развивать сильные цитолитические и Th1-подобные эффекторные функции делает эту незначительную субпопуляцию Т-клеток идеальной для лечения пациентов с ОМЛ, подвергающихся аллогенной трансплантации с риском рецидива5. Учитывая, что Т-клетки Vγ9Vδ2 являются второстепенным подмножеством Т-лимфоцитов в диапазоне от 0,5% до 5% Т-клеток на периферии6, мы решили создать надежную систему для расширения этой редкой популяции клеток крови для достижения потенциально терапевтических доз для клинических испытаний.
Хотя другие успешно расширили γδ Т-клетки, используя золедроновую кислоту и даже aAPC, мы разработали процесс, который потенциально может расширить γδ Т-клетки в 229 749 раз. Расширение двухфазное: сначала лимфоциты получают элютрированием с помощью инструмента разделения. Оборудование обеспечивает замкнутую систему, которая позволяет разделять ячейки на основе их размера, формы и плотности путем противоточного центрифугирования. После обогащения на лимфоциты селективное расширение Т-клеток Vγ9Vδ2 достигается лечением золедроновой кислотой и ИЛ-2 в течение 7 дней. Сразу после этого лечения TCR-αβ Т-клетки истощаются с использованием технологии микрогранул, что позволяет впоследствии расширять γδ Т-клетки с помощью APC, полученных из K562.
Для валидации процесса было использовано только 5 × 106 γδ-Т-клеток, расширенных золедроновой кислотой, для расширения кокультуры фазы-2 с aAPC. На этом втором этапе расширения γδ Т-клетки активируются с использованием текущего Банка рабочих клеток (WCB), совместимого с надлежащей производственной практикой (cGMP), генетически модифицированных APC K562 (K562VL6(scFv-CD3-41BBL;scFv-CD28-IL15-RA)), изготовленных в Моффитте. Обоснование этого двухфазного расширения основано на способности золедроновой кислоты ингибировать фарнезилдифосфатсинтазу (FDPS) в моноцитах, что приводит к накоплению изопентенилпирофосфата, который непосредственно стимулирует клетки Vγ2Vδ2. На второй фазе расширения производные от K562 aAPC (K562VL6(scFv-CD3-41BBL;scFv-CD28-IL15-RA)) обеспечивают надежную стимуляцию всех Т-клеток. Тем не менее, клеточный продукт уже был обогащен для γδ Т-клеток, что привело к надежному расширению γδ Т-клеток.
С использованием специального оборудования и колб процесс представляет собой функционально закрытую систему, что снижает риск загрязнения. Кроме того, 1 л закрытого системного биореактора способствует максимальному росту и расширению клеток в общем объеме 1 л среды с минимальной потребностью в питании. Преимущество метода Моффитта заключается в том, что он обеспечивает быструю, воспроизводимую и высокоосуществимую систему GMP для получения высокочистого продукта γδ-Т-клеток донорского происхождения для аллогенного введения. Этот метод может быть применен к любому клиническому испытанию, которое направлено на использование человеческих γδ Т-клеток, экспрессирующих рецепторы Т-клеток Vγ2Vδ2, в качестве приемной иммунотерапии для опосредования иммунитета против микробов и опухолей у больных раком с частичной и полной ремиссией. Кроме того, он обеспечивает надежную платформу для разработки и производства γδ химерных антиген-рецептор-положительных (CAR+) Т-клеток.
Протокол
ПРИМЕЧАНИЕ: Было получено одобрение IRB и получено информированное согласие от доноров.
1. Выделение лимфоцитов
- Перенесите продукт афереза в чистое помещение.
ПРИМЕЧАНИЕ: Валидация процесса проводилась с использованием обычного донорского афереза от внешнего коммерческого поставщика, соответствующего правилам сбора клеточного сырья. - Соберите образцы для тестирования на стерильность, количество клеток и фенотипирование клеток.
- Элютриат на устройстве центрифугирования противотока с использованием первичной среды сбалансированного раствора соли Хэнкса с 1% сывороточного альбумина человека (HSA) и вторичной среды физиологического раствора (0,9% хлорида натрия для инъекций USP) или фосфатно-буферного физиологического раствора Dulbecco (DPBS). Установите скорость центрифугирования элютриации на уровне 900 × g и соберите фракции на основе расхода и времени.
- Соберите образцы из фракции 2 и выполните следующие испытания: 2 мл для проверки на стерильность; 0,5 мл для количества и жизнеспособности клеток с использованием акридина оранжевого/йодида пропидия (АО/ПИ); 5 × 106 клеток для фенотипирования клеток методом проточной цитометрии.
- Расширить чистую фракцию лимфоцитов (фракция 2) клеток в культуре при 10 × 106 клеток/см2 в 1 л закрытого системного биореактора с 5 мкмоль/л золедроновой кислоты и 300 МЕ/мл IL-2.
- Инкубировать в течение семи дней в инкубаторе при 37 °C с 5% CO2.
2. Истощение альфа-бета(αβ)Т-клеток
- Собирайте клетки из колбы с закрытой системой 1 л. Стерильно приварите 1-литровый трансферный пакет к красной линии биореактора с закрытой системой и используйте соответствующий фармацевтический насос для переноса клеток в трансферную упаковку.
- Берут следующие пробы: 10 мл на отработанную среднюю стерильность; 0,5 мл клеток для подсчета и жизнеспособности клеток с использованием АО/ПИ; 5 × 106 клеток для проточной цитометрии
- Повторное суспендирование клеток при ~5 × 108 клеток/мл в фосфатно-буферном физиологическом растворе (PBS) или (PBS/этилендиаминтетрауксусной кислоте (ЭДТА)) буфере + 0,5% HSA и биотинилированное TCR αβ-специфическое антитело.
- Поместите шейкер в холодильник и высиживайте ячейки при 2-8 °C в течение приблизительно 15 мин с встряхиванием.
- Промывайте ячейки общим количеством 600 мл буфера PBS/EDTA + 0,5% HSA. Центрифуга удаляет несвязанное антитело при 200-500 × г в течение 15 мин при 2-8 °С. Повторное суспендирование ~5 × 108 клеток/мл в буфере PBS/EDTA + 0,5% HSA с антибиотин-специфическими микрошариками (7,5 мл/1 флакон).
- Поместите шейкер в холодильник и высиживайте ячейки при 2-8 °C в течение приблизительно 15 мин с встряхиванием. После инкубации центрифугируют клетки при 200-500 × г в течение 15 мин при 2-8 °C для удаления несвязанных микрошариков. Повторное суспендирование ~6 × 107 клеток/мл в буфере PBS/EDTA + 0,5% HSA и перенос их в сумку для переноски.
- Установите комплект трубок в устройство разделения магнитных клеток клинического класса, следуя инструкциям производителя, поместите упаковки с буфером PBS / EDTA и передаточным пакетом с клеточным продуктом в приборе и увеличьте его по указанию прибора.
- Выберите протокол Depletion 1.2 для истощения меченых αβ Т-клеток.
- Центрифугировать целевую фракцию (обогащенную γδ Т-клетками) и повторно суспендировать клетки в среде, дополненной 10% сывороткой AB человека.
- Возьмите образец объемом 0,5 мл и выполните подсчет и жизнеспособность клеток с окрашиванием AO / PI. Доведите клетки до конечной концентрации приблизительно 1 × 106 клеток/мл. Возьмите образец из 5 × 106 клеток продукта для фенотипирования проточной цитометрии после истощения.
3. Совместная культура с APC
- Облучение 5 × 107 aAPC/колба при 100 Гр на рентгеногенерирующем приборе.
- Используйте aAPC в кокультуре в соотношении 10:1 с γδ Т-клетками. Поместите облученные APC (5 × 107 клеток/колбу) и γδ Т-клетки (5 × 106 клеток/колбу) в колбы с закрытой системой 1 л закрытой системы с 1 л питательной среды, дополненной 10% сывороткой AB человека. Высевают до 10 колб.
- Разверните клетки в культуре в течение 10 дней в инкубаторе при 37 °C и 5% CO2.
- Контролируйте уровень глюкозы и лактата каждые 3-4 дня с помощью полосок, глюкозы и лактатометра.
- Если уровень глюкозы падает до 250 мг/дл, уменьшите объем в колбе до 200 мл с помощью фармацевтического насоса путем стерильной сварки 1-литрового трансферного пакета к красной линии закрытого системного биореактора.
- Смешайте клетки в оставшихся 200 мл и возьмите образец 0,5 мл для подсчета клеток и измерения жизнеспособности путем окрашивания AO-PI. Если количество клеток составляет ≥109, разделите одну колбу на две колбы и заполните каждую колбу до 1 л AIM-V, дополненной 10% сывороткой AB человека. Если количество клеток составляет <109, кормите клетки свежим литром питательной среды, дополненной 10% сывороткой AB человека.
- Повторите шаг 3.6 для всех колб и верните их в инкубатор при 37 °C и 5% CO2. Повторяйте шаги 3,4-3,7 каждые 3-4 дня.
4. Сбор клеток
- По истечении 10 дней в кокультуре собирают все колбы биореактора. Соберите 1 колбу биореактора за раз и объедините все клетки в трансферную упаковку соответствующего размера. Стерильно приварите трансферную упаковку к красной линии биореактора с закрытой системой и используйте фармацевтический насос для переноса клеток в передаточный пакет.
- Удаляют следующие образцы контроля качества: 1% лекарственного препарата (ДП) для стерильности путем посева крови и окрашивания граммами; 0,5 мл для подсчета и жизнеспособности клеток с использованием АО/ПИ; 5-10 × 106 клеток для проточной цитометрии (см. Рисунок 1 для стратегии гастинга); 0,5 мл для эндотоксина; 0,5 мл для окрашивания в грамм; 106 клеток превратились в 10 мл отработанной среды для тестирования на микоплазму.
- Центрифугируют клетки при 200-500 × г в течение 15 мин при комнатной температуре и выбрасывают супернатант.
- Промыть ячейки раствором сбалансированного кристаллоидного раствора + 0,5% HSA при 200-500 × г в течение 15 мин при комнатной температуре. Повторно суспендируют их в целевом объеме 100-300 мл сбалансированного кристаллоидного раствора + 0,5% HSA.
5. Тестирование релиза
- Провести контроль качества γδ Т-клеток DP для следующего: чистоты и идентичности методом проточной цитометрии (Live/Dead, CD45, CD3, TCR αβ, TCR γδ, CD20, CD56, CD16); жизнеспособность при окрашивании АО/ПИ; эндотоксин; Тестирование микоплазмы методом полимеразной цепной реакции (ПЦР); стерильность путем окрашивания по граму и аэробных и анаэробных культур крови; остаточный анализ К562 методом проточной цитометрии (CD3-CD16-CD56-CD71+).
Результаты
Процесс γδ Т-клеток был охарактеризован и оптимизирован для производства лекарственного препарата γδ Т-клеток. Оптимизация процесса включала 1) обогащение лимфоцитов с использованием элютриации, 2) γδ Т-клеточное лекарственное вещество (DS) клеточно-специфическое расширение золедроновой кислотой, 3) γδ T-клеточное разрушение DS TCRαβ, 4) вторичное расширение γδ T-клеточной DS с использованием K562-производных aAPC и 5) конечный сбор DP и рецептура продукта для введения или криоконсервации. После оптимизации процесса были выполнены подтверждающие прогоны в масштабе с использованием материала, полученного от трех здоровых доноров, для подтверждения пригодности обработки клеток. Все данные были проанализированы и обобщены в Таблице 1, Таблице 2 и Таблице 3. Клетки, отделенные от постпротивоточного центрифугирования фракции 2 (F2), дали чистую популяцию лимфоцитов со средним содержанием 99,23% клеток CD45+ (сообщается как частота общего живого затвора) и отличной средней жизнеспособностью 95,80% (таблица 1).
γδ Т-клеточное специфическое расширение с золедроновой кислотой зависело от начального процента естественных клеток-киллеров (NK), присутствующих в фракции лимфоцитов (F2) после элютриации. Обогащение γδ Т-клеток DS с истощением TCRαβ было последовательным (таблица 2). Γδ T-клеточный DP, изготовленный из трех здоровых доноров, имел в среднем 0,11% ± 0,05% CD20 + В-клеток и 0,00% ± 0,00% TCR αβ + Т-клеток, таким образом, удовлетворяя критерию высвобождения ≤1% TCR αβ + Т-клеток. Средний процент NK-клеток в конечном продукте составляет 17,06% ± 26,19% и соответствует критерию высвобождения <35%. Кроме того, средний процент Т-клеток и NK-клеточных линейно-отрицательных клеток в конечном продукте составил 0,48% ± 0,42% (таблица 3). Окрашивание поверхности клеток и проточный цитометрический анализ использовались для характеристики идентичности, чистоты и технологических примесей DS и DP, как показано на рисунке 2A-D.
Вторичное расширение, достигнутое из кокультуры aAPC (K562CL6(CD3-CD137L:CD28-IL-15RA)) WCB и γδ Т-клетки DS в соотношении 10:1, генерировало γδ T-ячейку DP, которая соответствовала всем критериям высвобождения, как показано в таблице 4. Кроме того, клетки окрашивали и оценивали с помощью проточной цитометрии на 0-й день центрифугирования клеток F2, Т-клеток, расширенных 7-золедроновой кислотой, истощения Т-клеток 7-TCR αβ, 17-го дня ДП для следующего кластера биомаркеров дифференцировки (CD)3, TCRαβ, TCR γδ, CD45RA, CD45RO, CC хемокиновый рецептор 7 (CCR7), запрограммированный белок гибели клеток-1 (PD-1), цитотоксический Т-лимфоцит-ассоциированный белок 4 (CTLA4), активирующий лимфоциты ген 3 (LAG3) и Т-клеточный иммуноглобулин и муцин, содержащий домен белка 3 (TIM3). Данные, показанные на рисунке 3 , усреднены из трех независимых прогонов и демонстрируют, что ячейки не достигли истощения. Moffitt CTF также разработал остаточный анализ K562 для определения примесей DP, связанных с APC, полученными из K562 (рисунок 4).
Стратегия проточного цитометрического гатинга, используемая для характеристики процентного соотношения типов клеток, была следующей: 1) обнаружение Т- и NK клеточной линии отрицательной популяции (CD3-CD56-CD16-); 2) затвор на CD71+ (рецептор трансферрина, экспрессируемый в эритроидной линии и ОМЛ, позволяющий обнаруживать остаточные клетки K562). Эта стратегия измерения позволила оценить клетки CD3-CD16-CD56-CD71+, которые являются aAPC (K562CL6(scFv-CD3-CD137;scFv-CD28-IL15-RA)) WCB (называемый «остаточным K562» на рисунке 4).
Обсуждение
Лаборатория клеточной терапии Моффита разработала протокол с двухфазным расширением высокочистых γδ Т-клеток для использования в качестве DP в клинических испытаниях. Этот протокол обеспечивает метод производства в соответствии с руководящими принципами cGMP в закрытой системе, которая дает высокочистую γδ T-ячейку DP, которая успешно активируется и расширяется золедроновой кислотой и WCB aAPCs. Этот протокол был одобрен FDA для производства аллогенной γδ Т-клеточной DP для пациентов с ОМЛ. Используя здоровых доноров, мы успешно расширили небольшую популяцию донорских γδ Т-клеток всего за 7 дней с 2,06 ± 0,45% до 54,45 ± 28,34%. После 7-дневного расширения золедроновой кислотой было замечено, что донор 2 имел увеличение популяции НК.
Золедроновая кислота ингибирует фарнезилдифосфатсинтазу (FDPS) в моноцитах, что, в свою очередь, приводит к накоплению изопентенилпирофосфата (IPP), что коррелирует со значительным увеличением пролиферации Т-клеток и естественных NK-клеток7,8,9. Это увеличение популяции NK препятствует 2-й фазе расширения с aAPCs, поскольку aAPC будут только способствовать дальнейшему расширению NK-клеток. По этой причине критерии доноров были изменены, чтобы исключить доноров с высокой численностью населения Нагорного Карабаха. После истощения αβ Т-клеток γδ Т-клетки были дополнительно обогащены до 76,61 ± 27,51%. Этот уникальный протокол включает в себя второе расширение, использующее APC производства Моффита для нацеливания на рецепторы CD8, CD28 и CD127L в γδ Т-клетках. Эта вторая фаза расширения с aAPC дала DP с ≥65% для CD3 + TCR γδ + Т-клеток, ≤1% TCRαβ T и <35% CD3-CD16 + CD56 + NK-клеток. В связи с использованием APC, полученных из K562, было необходимо продемонстрировать, что эти APC составляют <1% конечного продукта.
Moffit CTF разработал проточный цитометрический анализ, используемый для критериев высвобождения для измерения процента остаточных клеток K562 в конечном DP. Этот проточный цитометрический анализ смягчает все проблемы использования антигенов клеточной поверхности для идентификации клеток K562. Поскольку активированные Т-клетки могут экспрессировать CD71, мы разработали стратегию исключения всех Т-клеток и NK-клеток путем выделения популяций CD3-CD56- и CD16- , а затем изучения клеток CD71+ , которые будут исключительно клетками K562. Этот протокол демонстрирует, что DP γδ Т-клеток дает 0,48 ± 0,42% остаточных клеток K562 и соответствует всем критериям высвобождения жизнеспособности ≥70%, негативности микоплазмы с помощью ПЦР, отсутствия организмов, видимых при окрашивании граммами, ≤2 ЕС / мл эндотоксина и отсутствия стерильности конечного роста (14 дней) культуры крови.
Раскрытие информации
У авторов нет конфликта интересов для раскрытия.
Благодарности
Мы благодарим премию «Клеточная иммунотерапия-исследователь инициировал испытания» от Онкологического центра Моффитта за финансирование этого протокола. Мы также благодарим д-ра Клаудио Анасетти за его неоценимую помощь и руководство в рамках этого проекта. Наконец, мы благодарим д-ра Джастина Буше за его идеи и рецензию на рукопись.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Hanks Balanced Salt Solution | R& D | 285-GMP | |
| Человеческий альбумин 25% | Грифолис | 65483-16-071 | |
| Плазмалит А Фишер | 2B2543Q | ||
| Золедроновая кислота (Зомета) | Hos pira | 4215-04--8 | Одобренный FDA препарат |
| DMSO | WAK-CHEMIE MEDICAL GMBH | WAK-DMSO-10 | |
| CS10 | BIOLIFE SOLUTIONS | 210374 | |
| 3 мл шприц | BD | 309657 | |
| 10 мл шприц | BD | 309604 | |
| 20 мл шприц | BD | 302830 | |
| 50 мл шприц | BD | 309653 | |
| 100 мл шприц | JMS | 992861 | |
| 18г Needle | Fisher | 305198 | |
| Cryovials 1,8 мл | Fisher | 375418 | |
| Пипетка 5 мл | Fisher | 1367811D | |
| 50 мл пипетка | Fisher | 1367610Q | |
| 10 мл пипетка | Fisher | 1367811E | |
| 100 мл пипетка | Fisher | 07-200-620 | |
| 15 мл коническая | Fisher | 05-539-12 | |
| 50 мл коническая | Fisher | 05-539-7 | |
| 250 мл коническая | Fisher | 430776 | |
| 600 мл | TERUMO BCT INC | 1BBT060CB71 | |
| 4" Набор для переноса плазмы | INDEPENDENT MEDICSL ASSOCIATES | 03-220-90 | |
| Набор трубок Elutra | TerumoBCT | 70800 | |
| 100 MCS GREX | WILSON WOLF MFG CORP | 81100-CS | |
| Ashton Sterile Pumpmatic Система | дозирования жидкостиFisher Scientific | 22-246660 | |
| Acacia Pump boot | MPS Medical In | 17789HP3MLL | |
| CliniMACS PBS/EDTA Buffer | Miltenyi Biotec Inc | 130-070-525 | |
| Dornase Alpha | Genentech, Inc | 50242-100-40/186-0055 | Одобренный FDA препарат |
| 1000 мл 0,22 мкм Фильтр | Fisher | 157-0020 | |
| Фильтр для крови 170 мкм | B. Braun | V2500 | |
| Комплект трубок CliniMACs | Miltenyi Biotec Inc | 130-090-719 | |
| CliniMACS TCRα/β Набор | Miltenyi Biotec Inc | 130-021-301 | |
| Набор крови Y-типа | Fenwal | FWL4C2498H | |
| 75 мл Flask | Fisher | 430641U | |
| IL-2 | Prometheus | 65483-116-071 | одобренный FDA препарат |
| AIM-V | Fisher | 0870112BK | |
| Сыворотка AB человека | Gemini Bio-Product | 100H41T | |
| 3 литра Трансферная упаковка | Independent Medical Associates | T3109 | |
| 1000 наконечники для пипеток | Fisher Scientific | 5991040 | |
| CF-250 | KOLBio | CF-250 | |
| Elutra | TERUMOBCT | ||
| CliniMACS | Miltenyi Biotec Inc GatheRex | ||
| Работа с жидкостью, Насос для сбора клеток | WILSON WOLF MFG CORP | ||
| HERAcell Vios CO2 инкубатор | Thermo Scientific |
Ссылки
- Bejanyan, N., et al. Survival of patients with acute myeloid leukemia relapsing after allogeneic hematopoietic cell transplantation: a center for international blood and marrow transplant research study. Biology of Blood and Marrow Transplantation. 21 (3), 454-459 (2015).
- Bejanyan, N., et al. Clinical outcomes of AML patients relapsing after matched-related donor and umbilical cord blood transplantation. Bone Marrow Transplantation. 49 (8), 1029-1035 (2014).
- Schmid, C., et al. Treatment, risk factors, and outcome of adults with relapsed AML after reduced intensity conditioning for allogeneic stem cell transplantation. Blood. 119 (6), 1599-1606 (2012).
- Siegers, G. M., et al. Anti-leukemia activity of in vitro-expanded human gamma delta T cells in a xenogeneic Ph+ leukemia model. PLoS One. 6 (2), 16700(2011).
- Airoldi, I., et al. γδ T-cell reconstitution after HLA-haploidentical hematopoietic transplantation depleted of TCR-αβ+/CD19+ lymphocytes. Blood. 125 (15), 2349-2358 (2015).
- Acuto, O., et al. The human T cell receptor: appearance in ontogeny and biochemical relationship of alpha and beta subunits on IL-2 dependent clones and T cell tumors. Cell. 34 (3), 717-726 (1983).
- Xiao, L., et al. Large-scale expansion of Vγ9Vδ2 T cells with engineered K562 feeder cells in G-Rex vessels and their use as chimeric antigen receptor-modified effector cells. Cytotherapy. 20 (3), 420-435 (2018).
- Peters, C., Kouakanou, L., Oberg, H. H., Wesch, D., Kabelitz, D. In vitro expansion of Vγ9Vδ2 T cells for immunotherapy. Methods in Enzymology. 631, 223-237 (2020).
- Xu, Y., et al. Allogeneic Vγ9Vδ2 T-cell immunotherapy exhibits promising clinical safety and prolongs the survival of patients with late-stage lung or liver cancer. Cellular & Molecular Immunology. 18 (2), 427-439 (2021).
Перепечатки и разрешения
