В этой рукописи описывается хирургическая техника и экспериментальный подход к развитию тяжелой перегрузки давления правого желудочка для моделирования их адаптивных и дезадаптивных фенотипов.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Большая животная модель легочной гипертензии и правожелудочковой недостаточности: перевязка левой легочной артерии и прогрессирующая перевязка главной легочной артерии у овец
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Декомпенсированная правожелудочковая недостаточность (ЛРВ) при легочной гипертензии (ЛГ) приводит к летальному исходу, с ограниченными вариантами медицинского лечения. Разработка и тестирование новых терапевтических средств для лГ требует клинически значимой модели больших животных повышенного легочного сосудистого сопротивления и ЛРВ. В этой рукописи обсуждается последняя разработка ранее опубликованной модели PH-RVF овец, которая использует перевязку левой легочной артерии (PA) и окклюзию основного PA. Эта модель PH-RVF является универсальной платформой для контроля не только тяжести заболевания, но и фенотипического ответа RV.
Взрослые овцы (60-80 кг) прошли лигирование левого ПА (LPA), установку основной манжеты ПА и установку монитора давления RV. Манжета PA и монитор давления RV были подключены к подкожным портам. Испытуемые подвергались прогрессирующей полосе ПА два раза в неделю в течение 9 недель с последовательными измерениями давления RV, давления манжеты ПА и смешанного венозного газа крови (SvO2). В начале и конечной точке этой модели функцию желудочков и размеры оценивали с помощью эхокардиографии. В репрезентативной группе из 12 животных среднее и систолическое давление RV увеличились с 28 ± 5 и 57 ± 7 мм рт.ст. на 1-й неделе соответственно до 44 ± 7 и 93 ± 18 мм рт.ст. (среднее ± стандартное отклонение) к 9-й неделе. Эхокардиография продемонстрировала характерные результаты PH-RVF, в частности расширение RV, увеличение толщины стенки и смещение перегородки. Продольная тенденция давления Манжеты SvO2 и PA показывает, что скорость полос ПА может быть титрована для выявления различных фенотипов RV. Более быстрая стратегия полос ПА привела к резкому снижению SvO2 < 65%, что указывает на декомпенсацию RV, тогда как более медленная, более динамичная стратегия привела к поддержанию физиологического SvO2 на уровне 70%-80%. У одного животного, которое испытало ускоренную стратегию, развилось несколько литров плеврального выпота и асцита к 9 неделе. Эта хроническая модель PH-RVF предоставляет ценный инструмент для изучения молекулярных механизмов, разработки диагностических биомаркеров и обеспечения терапевтических инноваций для управления адаптацией RV и дезадаптацией от PH.
Введение
Декомпенсированная правожелудочковая (РВ) недостаточность является преобладающей причиной заболеваемости и смертности у пациентов с легочной гипертензией (ЛГ). Недостаточность RV ответственна за более чем 50% госпитализаций у пациентов с ЛГ и является распространенной причиной смерти в этой популяции пациентов1,2. Хотя современные медицинские методы лечения ЛГ могут обеспечить временные меры, они не обращают вспять прогрессирование заболевания. Таким образом, единственным долгосрочным лечением является трансплантация легких. Для изучения и тестирования новых медицинских методов лечения и вмешательств для PH и ЛРВ необходима клинически значимая модель на животных, чтобы повторить сложную патофизиологию заболевания. В частности, существует большая клиническая потребность в разработке RV-таргетных терапевтических средств для пациентов с ЛГ для улучшения функции RV. На сегодняшний день большинство опубликованных исследований дисфункции PH и RV на животных опирались на мелких млекопитающих, таких как мыши и крысы3. С другой стороны, было только несколько крупных животных моделей для изучения болезни и патофизиологии RV от аномальной перегрузки4,5,6,7. Кроме того, ни одна из ранее опубликованных моделей крупных животных не включает описания экспериментальных процедур контролируемого титрования тяжести заболевания, что дифференцированно приводит к компенсированным и декомпенсированным фенотипам недостаточности RV. Животная модель PH, которая может быть титрована для индуцирования острой и хронической недостаточности RV с различной степенью компенсации, необходима для изучения механизмов заболевания и разработки, тестирования и перевода новых диагностических и терапевтических средств для PH и RVF в клиническую практику. Такая модель у крупного животного особенно ценна для разработки механических устройств поддержки кровообращения8.
Здесь представлена хроническая модель PH-RVF крупного животного с использованием перевязки левой легочной артерии (ПА) и прогрессирующей основной полосы ПА у взрослых овец9,10. Перевязка левого ПА (LPA) увеличивает легочное сосудистое сопротивление и уменьшает емкость ПА11,12. Прогрессивный подход к полосам ПА позволяет точно титровать тяжесть заболевания и адаптацию RV. Эта платформа также может быть легко использована для продольного исследования прогрессирования заболевания в направлении декомпенсации RV. Процедуры и процессы, необходимые для выполнения этой модели, представлены в качестве ресурса для исследователей, заинтересованных в большой платформе для животных для разработки новых методов лечения PH и ЛРВ.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Институциональный комитет по уходу за животными и их использованию в Медицинском центре Университета Вандербильта одобрил протокол. Описанные процедуры были проведены в соответствии с Руководством Национального исследовательского совета США по уходу и использованию лабораторных животных, 8-е издание. Обзор и временная шкала экспериментальной процедуры приведены на рисунке 1. Дополнительная таблица 1 описывает пол, вес, породу, источник овец и другую соответствующую информацию, которая может быть полезна для целей воспроизводимости.
1. За день до операции, подготовка животного
- Воздержитесь от пищи в течение 24-40 ч до хирургической процедуры, чтобы декомпрессировать рубец животного.
- Нанесите фентаниловый пластырь размером 50 мкг/ч на стриженную область на спинной кость овцы за 12 ч до процедуры. Очистите область хлоргексидином, чтобы удалить остатки ланолинового масла перед нанесением пластыря. Накройте и защитите пластырь эластичной трубчатой повязкой.
2. День операции, предоперационные этапы в подготовительном кабинете
- Вводят тилетамин/золазепам внутримышечно (2,2-5 мг/кг) и доставляют 1%-3% изофлурана, смешанного с 80%-100% кислорода через маску для лица, чтобы вызвать анестезию.
- Расположите овцу лежа на подготовительном столе и закрепите ее ноги.
- Интубировать эндотрахеальной трубкой 10 мм и запустить механическую вентиляцию в режиме регулировки объема (приливный объем, TV = 10 мл/кг, частота дыхания, RR = 15 вдохов в минуту).
- Сбрите хирургическое поле от шеи овцы до ее верхней части живота, как описано ниже.
- Побрейте переднюю шею овцы, чтобы обнажить кожу, покрывающую яремные вены, для центральной венозной катетеризации (см. шаг 3.7).
- Обрежьте переднебоковую грудную клетку двусторонне при подготовке к торакотомии (см. шаг 4.1).
- Побрейте левую сторону туловища от груди к спине (т.е. так дорсально, как позволит стол с испытуемым в лежачем положении), и от груди до задней боковой каудально, в рамках подготовки к имплантации подкожных отверстий (см. шаги 4.12-4.15).
- Вставьте ангиокатетер 20 Г в ушную артерию для мониторинга артериального давления и забора газов в кровь.
- Поместите силиконовую трубку с внутренним диаметром 3/8"-1/2" для декомпрессии рубца. Орогастральный зонд будет оставаться в рубце на протяжении всей процедуры.
- Транспортируйте животное из предоперационной подготовительной комнаты в хирургический кабинет.
3. День операции, предоперационные шаги в операционной
- Повторно подключите овец к аппарату ИВЛ в хирургическом кабинете и продолжайте вентиляцию в той же обстановке на этапе 2.3 (изофлуран 1%-3%, ТВ = 10 мл/кг, РР = 15 вдохов в минуту)
- Подключите датчики пульсоксиметрии (SpO2), артериального давления, температуры, концевого капнографа и электрокардиограммы (ЭКГ) к монитору анестезии.
- Подключите датчики жизненно важных показателей к животному.
- Поместите пульсоксиметр на язык животного.
- Поместите температурный зонд в прямую кишку.
- Подключите 3-выводные электрокардиограммные зонды: поместите красный свинец на левую заднюю ногу, белый свинец на правую переднюю ногу и черный свинец на левую переднюю ногу.
- Соедините мужской конец запорного крана с ангиокатетером ушной артерии и соедините противоположный женский конец luer с датчиком давления для мониторинга артериальной линии с использованием трубки давления соответствующего размера.
- Выровняйте датчик по уровню операционного стола.
- Откройте трехсторонний запорный кран на преобразователе.
- Прокрутите главную ручку монитора жизненных сил, чтобы выделить канал артериального кровяного давления, а затем нажмите ручку, чтобы выбрать канал.
- Выберите ZERO IBP , чтобы обнулить преобразователь.
- Подключите мужское соединение luer линии монитора капнографии к женскому соединению luer на трубке вентилятора для мониторинга конечного приливного CO2.
- Настройте внутривенные насосы для непрерывного введения жидкости и инотропной или вазопрессорной поддержки.
- Перфорировать перегородку на солевом мешочке с помощью набора для внутривенного введения. Убедитесь, что трубка iv зажата перед перфорацией мешка, чтобы предотвратить просыпание.
- Выровняйте и установите трубку iv administration в роликовый насос IV и проверьте, соответствует ли направление, указанное на насосе, направлению введения жидкости.
ПРИМЕЧАНИЕ: Убедитесь, что набор администрирования IV совместим с насосом IV. - Включите насос и укажите PRIME , чтобы удалить весь воздух в линии.
- Позиционируйте овец для оперативной процедуры.
- Из положения лежа на спине поверните овцу в частичное правое боковое пролежневое положение.
- Закрепите правую переднюю ногу вниз и закрепите левую переднюю ногу, втягивая ее в цефаладу и латераль с помощью веревки или атравматических ремней.
- Выполнение трансторакальной эхокардиографии для базовой оценки анатомии и функции желудочков. УЗИ также полезно для определения оптимального межреберного пространства, облегчающего хирургический доступ как к главной легочной артерии, так и к левой легочной артерии.
- Очистите операционное поле от грязи и других загрязнений с помощью мыла или щетки для скраба. Подготовьте шею и грудную клетку раствором хлоргексидина или бетадина и задрапируйте хирургическое поле стерильным способом.
- Используя ультразвуковое наведение или анатомические ориентиры, получите доступ к левой или правой внутренней яремной вене с помощью иглы искателя или ангиокарта. Используя технику Зельдингера, вставьте 7-французский трехпросветный центральный венозный катетер во внутреннюю яремную вену для внутривенного доступа и центрального мониторинга венозного давления.
- Используйте проксимальный порт для контроля давления и дистальный порт для введения жидкости и лекарств.
- Вводят 20 мг/кг цефазолина и 5 мг/кг энрофлоксацина внутривенно. Повторяют дозирование цефазолина каждые 2-4 ч во время процедуры.
- Введите болюс 500 мл нормального физиологического раствора, чтобы увеличить преднагрузку перед операцией. Начинают поддерживающую внутривенную подачу жидкости со скоростью 15 мл/кг/ч.
4. Оперативное производство
- Выполняют мышечно-щадящую мини-торакотомию (длина < 8 см) в левом четвертом межреберном пространстве для получения воздействия средостения. Выбирайте мини-торакотомию для ускорения послеоперационного восстановления.
- После деления кожи расщепляют подлежащую мышцу (большую грудную клетку) продольно вдоль ее волокон, которые проходят слегка косо к межреберному пространству. Поместите самоподдерживающийся ретрактор, чтобы распределить мышечный слой и обнажить грудную стенку.
- Разделите зазубренную переднюю и нижележащую межреберную мышцу в выбранном межреберном пространстве, позаботившись о том, чтобы сразу же остаться цефаладой к ребру.
- Войдите в плевральное пространство, а затем продолжайте полностью освобождать межреберные мышцы сзади к позвоночнику и передней части грудины, чтобы предотвратить непреднамеренный перелом ребра или вывих грудины. Избегайте травмирования молочных сосудов медиально.
- Поместите самоудерживающиеся ретракторы, чтобы открыть реберное пространство и вышележащую мягкую ткань. Используйте небольшой или средний втягивающий механизм Finochietto для разделения ребер и втягивающий механизм Tuffier (лезвие втягивающего устройства 5 см), чтобы сидеть перпендикулярно Finochietto в межреберном пространстве, которое втягивает мягкие ткани в межреберном пространстве для улучшения воздействия.
- Разрезайте перикард перед диафрагмальным нервом, не повреждая его, и создайте перикардиальный колодец с 2-0 шелковыми швами, чтобы обнажить основной ПА и RV. Определите придаток левого предсердия в пределах экспозиции как ориентир для уровня бифуркации ПА.
- Оцените воздействие и убедитесь, что было введено соответствующее межреберное пространство. В идеале проксимальный ПА и придаток левого предсердия легко видны непосредственно под разрезом, что говорит о том, что оптимальное межреберное пространство было выбрано для обеспечения воздействия как основного ПА, так и LPA.
- Если воздействие считается недостаточным для безопасного достижения как основного ПА, так и LPA, не стесняйтесь открывать дополнительное межреберное пространство для выполнения всех необходимых этапов операции; однако в этом не будет необходимости при соответствующем выборе разреза.
- Рассекните вокруг основного ПА и изолируйте его пуповинной лентой. Обеспечьте адекватную заднюю диссекцию для возможного размещения окклюдера и зонда потока ПА как можно более дистально на главном ПА.
- Поместите стерильный датчик потока в чашу с водой или физиологическим раствором на стерильном поле, чтобы откалибровать программное обеспечение для сбора данных. Передайте электрическую вилку на другом конце нестерильному назначенному лицу для подключения зонда к измерителю.
- Обратитесь к дополнительным документам для получения подробной информации о подключении и калибровке расходомера и измерителя ПА.
- Нанесите обильное количество стерильного ультразвукового геля в канавку зонда потока ПА.
- Поместите силиконовый вкладыш в канавку проточного зонда PA и нанесите на вкладыш дополнительный слой ультразвукового геля.
- Поместите датчик потока ПА на ПА и получите показания потока ПА на расходомере и интерфейсе сбора данных.
- Размещение зонда потока ПА может вызвать частичную окклюзию ПА, что может снизить преднагрузку левого желудочка и среднее артериальное давление. Обратите пристальное внимание на гемодинамику при приобретении потока ПА.
- Проверьте на экране расходомера, чтобы убедиться, что уровень сигнала потока PA составляет 5 бар. Если счетчик отображает менее 5 бар, обеспечьте достаточный контакт между датчиком потока и основным ПА. При необходимости нанесите дополнительный ультразвуковой гель.
- Поместите стерильный датчик потока в чашу с водой или физиологическим раствором на стерильном поле, чтобы откалибровать программное обеспечение для сбора данных. Передайте электрическую вилку на другом конце нестерильному назначенному лицу для подключения зонда к измерителю.
- Полное внутриперикардиальное рассечение ЛПА и опоясывают его пуповинной лентой.
- Используйте небольшую губчатую палочку или тонкий податливый втягиватель для хвостового втягивания придатка левого предсердия.
ПРИМЕЧАНИЕ: Воздействию LPA способствует каудальная втягивание придатка левого предсердия, цефаладная втягивание основного ПА и латеральное втягивание перикарда непосредственно перед тем местом, где LPA выходит из перикарда.
- Используйте небольшую губчатую палочку или тонкий податливый втягиватель для хвостового втягивания придатка левого предсердия.
- Поместите сверхпрочный силиконовый сосудистый окклюдер вокруг основного ПА (рисунок 2A, B, круг). Размер окклюдера может быть отрегулирован в зависимости от диаметра PA; убедитесь, что посадка плотно прилегает. Используйте шелковый шов 0 на игле Кита, чтобы закрепить концы сосудистого окклюдера вместе с U-образным швом. После закрепления вокруг основного ПА сдвиньте окклюдер дистально вдоль основного ПА.
- Опоясывайте проксимальную магистраль ПА дренажем Пенроуза 1/2 дюйма, чтобы облегчить рассечение и зарезервировать пространство для размещения проточного зонда при последующей повторной операции. Обрежьте дренаж Пенроуза, чтобы он свободно облегался вокруг ПА и закрепил Пенроуз к себе с помощью шова Пролена 4-0 (Рисунок 2В).
- Установите напорную линию RV для контроля давления RV (рисунок 2B, белая стрелка).
- Выберите место для напорной линии RV в стене отвода RV без тракта. Поместите 5-0 мононитью, нерассасывающуюся полипропиленовую пучковую шов с залогами, окружающими выбранное место, и установите сосудистую петлю. Сделайте залог из стерильной хирургической перчатки.
- Подготовьте напорную линию RV: отрежьте мужской конец стерильной 36-дюймовой напорной трубки под углом 30°, чтобы облегчить введение через миокард. Используйте шелковую стяжку 2-0, чтобы отметить линию давления на оптимальной глубине для размещения в пределах RV.
- Используя скальпель из 11 лезвий, сделайте небольшую кардиотомию в свободной стенке RVOT в пределах ранее размещенного шва кошелька. Контролируйте кровотечение с помощью ручного давления или путем затягивания ловушки на шове кошелька.
ПРИМЕЧАНИЕ: Получите базовую биопсию стенки без RV на этом этапе путем забора ткани RV в шве кошелька. Этот участок биопсии может затем служить точкой входа для линии давления RV. - Вставьте и закрепите вырезанный конец напорной трубки в тракте оттока RV (RVOT). Привяжите цепочку кошелька, а затем закрепите нить кошелька к напорной трубке, чтобы закрепить напорную линию.
- Расширьте трубку RVOT, подключив дополнительную напорную трубку к напорной линии RVOT.
- Передайте дополнительную напорную трубку нестерильному назначенному лицу для подключения трубки к преобразователю давления и контроля за измерением исходного давления RV. Настройте датчик давления следующим образом.
- Подключите мужской конец luer набора для введения IV к женскому концу luer преобразователя.
- Соедините женский конец люера нажимной трубки с мужским концом люера преобразователя.
- Спайк при внутривенном введении в гепаринизированный солевой мешок (2 МЕ/мл).
- Поместите солевой мешок в напорный мешок и откачайте напорный мешок до 250-300 мм рт.ст., как указано на манометре.
- Полностью загрунтуйте линию, отпустив клапан на преобразователь, обеспечив надлежащую обезвоживание.
- Следуйте дополнительным методам калибровки преобразователей.
- После тщательного рассечения вокруг LPA обведите его пуповинной лентой. Разложите LPA, завязав пуповинную ленту. Обратите внимание на гемодинамический ответ животного на лигирование, если это имеет отношение к исследованию. Увеличьте минутную вентиляцию, чтобы компенсировать повышенную вентиляцию мертвого пространства, созданную при лигировании LPA. Эти корректировки вентилятора смягчают респираторный ацидоз.
- Медленно впрыскивайте до 3 мл физиологического раствора в основной окклюдер PA, чтобы обеспечить отсутствие утечки при мониторинге давления RV из линии давления RVOT. Как только реакция RV подтвердится, отмените закапываемый физиологический раствор.
- Выведите нажимную линию RVOT и трубку окклюдера PA из грудной клетки на одно межреберное пространство ниже разреза торакотомии.
- Сформируйте два подкожных кармана вдоль фасциального слоя на левой спине овцы как можно дальше к позвоночнику, насколько это возможно в пределах стерильного поля. Они служат площадками для внутренних портов (рисунок 2C).
- Используя съемник грудной трубки, туннелируйте линию давления RVOT и трубку окклюдера от разреза грудной клетки к левым местам дорсума.
- Закрепите трубку окклюдера и напорную магистраль RV к барбусным соединениям порта. Закрепите окклюдер и напорную трубку вокруг разъемов порта дополнительными стяжками. Используйте прилагаемый штепсельный разъем для защиты соединения (рисунок 1С). Поместите порты в предварительно сформированные подкожные карманы.
- Прикрепите порты в трех местах вокруг его края к подстилающей фасции с помощью полипропиленовых швов 3-0 для предотвращения миграции порта. Повторное оплодотворение подкожной клетчатки, дермы и кожи слоями с помощью полиглактина 910 швами. Повторное подтверждение показаний давления через чрескожный доступ к портам. Промывайте порт RVOT 5 мл (1000 МЕ/мл, 5000 единиц) гепарина натрия.
- Поместите 16-французскую грудную трубку в левую плевральную полость через отдельный разрез, закрепите ее на коже, а затем подключите к закрытому дренажному блоку грудной трубки под давлением -20 см · H2O. Поместите развязанный U-образный стежок вокруг трубки, чтобы облегчить закрытие после удаления грудной трубки.
- Вводят блок межреберного нерва (0,5-1 мг/кг бупивакаина) для послеоперационной анальгезии.
- Закройте торакотомию восьмеркой, No2 полиглактина 910 швами. Закройте мышечный слой грудной клетки бегущим полиглактином No0 910. Закройте подкожную клетчатку слоями швов полиглактина No2-0 и скрепите кожу.
- Перепозиционировать животное в дорсальную рекомбинацию, удалить орогастральный зонд, а затем прекратить прием изофлурана.
- Продолжайте искусственную вентиляцию легких и поддерживающую терапию до тех пор, пока рН артериальной крови не > 7,35 и pCO2 < 55 мм рт.ст.
- Экстубируйте, как только животное дышит спонтанно, поднимает голову и жует эндотрахеальную трубку. Удалите грудную трубку до полного восстановления анестетика. Завяжите U-образный стежок, чтобы закрыть разрез грудной трубки.
- Переведите животное в клетку, контролируя его восстановление после анестезии. Обеспечьте доступность дополнительного кислорода (3-5 л/мин лицевой маской) в любое время, пока овцы остаются неподвижными. Контролируйте жизненно важные показатели каждый час в течение первых 4 ч, каждые 8 ч в течение следующих 24 ч и один раз в день после этого.
5. Послеоперационное восстановление
- Ежедневно контролируйте места торакотомии и имплантации портов на наличие признаков инфекции. Вводят антибиотик длительного действия (цефтиофур, 5 мг/кг внутримышечно) в течение 24 ч после процедуры и каждые 3-4 дня после этого в течение 1 недели.
- Продолжайте фентаниловый пластырь после операции в общей сложности 72 ч. После этого обеспечивают дополнительную анальгезию (например, мелоксикам, 1 мг/кг один раз в день внутримышечно), если животное продолжает проявлять признаки боли (т.е. скрежетание зубами, повышенная частота сердечных сокращений).
- Удалите наружные швы и скобы кожи через 10-14 дней после операции или по рекомендации ветеринарного персонала.
- Обеспечьте защиту портовой площадки от трения или соскабливания животными участков порта от окружающих конструкций с помощью трубчатой повязки (рисунок 2D).
6. Хроническая полосатость ПА (9 - 10 недель)
- Переведите овец в небольшой вольер. Срежьте лишнюю шерсть вокруг имплантированных портов.
- Очистите бритые участки 70% изопропиловым спиртом. Наносите местный лидокаиновый спрей для местного анестетика.
- Подготовьте два датчика давления для контроля давления RV и манжеты окклюдера (рисунок 3A).
- Для обоих преобразователей: Подключите женский конец люера напорной трубки (36 дюймов или дольше) к мужскому концу датчика. Соедините мужской конец трубки под давлением с одним из женских соединений luer на трехстороннем запорном кране. Наконец, подключите иглу 22 G Huber к мужскому концу этого трехстороннего запорного крана.
- Для датчика давления RV: повесьте гепаринизированный солевой мешок (2 МЕ/мл), проколите мешок с помощью набора для введения IV и подключите мужское соединение luer набора iv к женскому соединению luer датчика давления RV. Затем создайте давление в солевом пакете (например, в нажимном мешке).
- Для датчика окклюдера: полностью загрунтуйте преобразователь и напорную трубку. Наденьте мужской колпачок luer на женский конец датчика давления, чтобы предотвратить утечку жидкости манжеты обратно в преобразователь.
- Подключите оба преобразователя к оборудованию для сбора данных с помощью соответствующего кабеля или адаптера.
- Откалибруйте преобразователи, как указано в дополнительном файле 1.
- Нажмите « Пуск» в правом верхнем углу окна программного обеспечения, чтобы начать запись программного обеспечения для сбора данных для захвата сигналов давления манжеты RV и PA при частоте 400 Гц.
- Попросите помощника обеспечить мягкое сдерживание животного до доступа в порт. Вставьте иглу Huber из датчика давления RV в порт RV. Прикрепите шприц объемом 10 мл к трехстороннему запорному крану и попытайтесь втянуть кровь обратно в шприц из порта RV (рисунок 3B).
- Если трудно оттянуть шприц, сначала введите 5-10 мл физиологического раствора в порт RV, чтобы выбить источник окклюзии.
- Если засорение сохраняется, закапывают 2 мг активатора плазминогена ткани (tPA) в порт в качестве фибринолитического агента и оставляют его на ночь. Проверьте на следующий день, чтобы аспирировать tPA.
- Как только напорная линия RV установлена, подключите иглу Huber к датчику манжеты PA.
- Зафиксируйте начальные значения давлений манжеты RV и PA (рисунок 3C). Обратите внимание на любые радикальные изменения по сравнению с предыдущими показаниями.
- Если давление манжеты PA и / или RV значительно снизилось по сравнению с предыдущими показаниями, это может быть признаком того, что манжета PA протекает.
- Наблюдайте еще один очевидный признак утечки манжеты ПА, изучая форму сигнала манжеты ПА. Если среднее давление манжеты ПА падает с заметной скоростью, то существует высокая вероятность того, что манжета протекает.
ПРИМЕЧАНИЕ: Повторно проверьте, что все соединения luer на датчике давления, трубке и запорном кране затянуты. Содержимое жидкости под высоким давлением из манжеты ПА может течь обратно и вытекать из рыхлых соединений luer.- Если манжета ПА протекает, определите степень утечки. Если скорость утечки медленная, то более частая стратегия полосирования может преодолеть утечку, чтобы сделать модель заболевания все еще эффективной.
- Медленно вводите 3% гипертонического физиологического раствора в порт окклюдера, обращая внимание на давление RV и манжеты.
- Скорректируйте количество инъекций в зависимости от желаемой тяжести заболевания PH и фенотипа RV. Еженедельное повышение давления манжеты на 100-150 мм рт.ст. является разумной целью для развития адаптивного компенсирующего фенотипа RV.
- Более быстрое увеличение давления манжеты (>250 мм рт.ст. в неделю), вероятно, приведет к декомпенсации фенотипа RV.
- Как только манжета PA будет надута до нужного количества, снимите иглу Huber из порта манжеты.
- Получите образец крови из порта RV.
- Аспирировать 10 мл крови из порта RV стерильным способом и отложить в сторону.
- Поместите новый шприц вместо аспирационного шприца и аспирируйте столько крови, сколько необходимо, не превышая недельный предел забора крови в 7,5% от общего объема крови.
- Снова подключите оригинальный шприц с аспирированной кровью и верните его через порт RV.
- Потяните за рычаг клапана датчика давления, чтобы смыть гепаринизированный физиологический раствор из солевого мешка в порт RV. Продолжайте промывку до тех пор, пока вся линия не станет прозрачной и бесцветной.
- Промывайте порт RV 10 мл физиологического раствора. Затем дополнительно промыть порт 5 мл 1000 Ед/мл гепарина натрия.
- Повторяйте шаги 6.1-6.12 каждые 1-4 дня в течение 9-10 недель.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Репрезентативная группа из 12 овец используется для демонстрации эффективности этой модели для развития различных степеней PH-RVF. Среди этих овец среднее давление манжеты ПА увеличилось с 32 ± 20 мм рт.ст. на 1-й неделе до 1002 ± 429 мм рт.ст. на 9-й неделе. Это привело к увеличению среднего и систолического давления RV с 28 ± 5 и 57 ± 7 мм рт.ст. на 1-й неделе, соответственно, до 44 ± 7 и 93 ± 18 мм рт.ст. к 9-й неделе. Кроме того, профиль давления манжеты ПА накладывали на смешанное венозное насыщение кислородом (
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Представленная модель PH-RVF может надежно индуцировать различные уровни тяжести заболевания в соответствии с целями исследования. Два разных подхода используются в комбинации, чтобы вызвать эту модель заболевания. Во-первых, лигирование LPA служит для повышения легочного сосудистого сопротивления и снижения емкости ПА11,12, тем самым устанавливая начальную точку хронической модели при уже повышенном состоянии постнагрузки RV. Затем имплантация манжеты ПА и ее пр...
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
У авторов нет конфликта интересов для раскрытия.
Благодарности
Эта работа финансировалась Национальными институтами здравоохранения R01HL140231. Мы благодарим Отдел по уходу за животными за их животноводство и ветеринарную помощь. Мы благодарим лабораторию SR Light и ее сотрудников, Джейми Эдкока, Сьюзан Фульц, Коди ВанРуйена и Хосе Диаса, за их самоотверженную техническую поддержку в операциях на крупных животных.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 0,9% хлорид натрия для ирригационной бутылки от Baxter Healthcare, 1000 мл | Medline | BHL2F7124 | Хирургический одноразовый |
| 0,25% Бупивакаин | Hospira Inc | 0409-1160-18 | Лекарство, интраоперационное |
| 0,9% Нормальный физиологический раствор, 1000 мл | Baxter Healthcare Corp | 0338-0049-04 | Лекарство, интраоперационное |
| 0,9% Обычный физиологический раствор, 500 мл | Baxter Healthcare Corp., | 0338-0049-03 | Лекарство для хронических PH |
| 16 мм Сверхмощный окклюдер с приводной трубкой | Access Technologies | OC-16HD | Хирургический одноразовый |
| аппликатор для подготовки кожи | 3 мл Medline | MDF260400 | Хирургические одноразовые |
| прокладки с 70% изопропиловым спиртом | Medline | MDS090670 | Одноразовые, Хроническая |
| PH Клейкая лента | Patterson Veterinary | 07-835-7776 | Одноразовые, хронические |
| PH Щипцы Адсона | V. Mueller | NL1400 | Хирургический инструмент |
| Allis Тканевые щипцы | V. Mueller | CH1560 | Хирургический инструмент |
| Аортальный зажим, прямой (щипцы Бейнбриджа) | V. Mueller | SU6001 | Хирургический инструмент |
| Backhaus щипцы для полотенец | V. Mueller | SU2900 | Сумки для хирургических инструментов |
| , инфузия: нестерильный инфузионный мешок Novaplus, 500 мл | Medline | TCV4005H | одноразовый, хронический PH |
| Ягодный стернальный иглодержатель | V. Mueller | CH2540 | Хирургический инструмент |
| Лезвия, электрод: Электродное лезвие, 6,5", с валом 0,24 см | Medline | VALE15516 | Хирургические |
| одноразовые лезвия: стерильное хирургическое лезвие из нержавеющей стали, размер #10 | Medline | Хирургические | одноразовые |
| : стерильное хирургическое лезвие из нержавеющей стали, размер #11 | Medline | Хирургические | одноразовые |
| : стерильное хирургическое лезвие из нержавеющей стали, размер #15 | Medline | B-D371215 | Хирургический одноразовый |
| BNC Male на BNC Male Кабель | Digi-Key | 415-0198-036 | Оборудование |
| Castroviejo иглодержатель | V. Mueller | CH8589 | Хирургический инструмент |
| Цефазолин | Apotex Corp | 60505-6142-0 | Лекарство, интраоперационный |
| цефтиофур кристаллическая свободная кислота | Zoetis Inc | 54771-5223-1 | Лекарство, Послеоперационный |
| дренаж грудной клетки, с сухой аспирацией, Adult-Pediatric | Medline | DEKA6000LFH | Хирургический одноразовый |
| проходчик плевральной дренажной трубки | V. Mueller | CH04189 | хирургический инструмент |
| Проточные зонды COnfidence для исследований (серия PAU) | Трансзвуковое | 24PAU | , периваскулярный датчик потока |
| Cooley тангенциальный окклюзионный зажим | V. Mueller | CH6572 | |
| сбора данных | хирургических | НБСП; PowerLab 16/30 | Оборудование |
| Зажим для аорты DeBakey | V. Mueller | CH7247 | Хирургический инструмент |
| DeBakey многоцелевой зажим | V. Mueller | CH7276 | Хирургический инструмент |
| Щипцы для тканей Debakey, 12' « | V. Mueller | CH5906 | Хирургический инструмент |
| Щипцы для сосудистой ткани Debakey 7 3/4' « | V. Mueller | CH5902 | Хирургический инструмент |
| Щипцы для сосудистой ткани Debakey, 9' « | V. Mueller | CH5904 | Хирургический |
| инструмент Электрохирургический генератор | Covidien | Force | FX-C Equipment |
| Эндотрахеальная трубка, 10 мм | Patterson Veterinary | 07-882-9008 | Хирургический одноразовый |
| энрофлоксацин | Norbrook Laboratories Limited | 55529-152-05 | Лекарство, интраоперационный |
| фентаниловый трансдермальный пластырь | Apotex Corp | 60505-7007-2 | Лекарство, предоперационные |
| щипцы для ткани Ферриса Смита | В. Мюллер | SU2510 | Хирургический инструмент |
| Разбрасыватели ребер Finochietto, большой | V. Mueller | CH1220-1 | Хирургический инструмент |
| Разбрасыватели ребер Finochietto, средний | V. Mueller | CH1215-1 | Хирургический инструмент |
| Гибкий ленточный ретрактор, 1" x 13" | V. Mueller | SU3340 | Хирургический инструмент |
| Гибкий ленточный ретрактор, 2" x 13" | V. Mueller | SU3346 | Хирургический инструмент |
| Губчатые щипцы Foerster, изогнутые | V. Mueller | GL660 | Хирургический инструмент |
| Марлевые губки: стерильные марлевые губки, совместимые с рентгеновскими лучами, 16 слоев, 4 x 4 дюйма | Medline | PRM21430LFH | Хирургические одноразовые |
| щипцы Джеральда-Дебейки | В. Мюллер | CH04242 | Хирургический инструмент |
| Глассман Аллис | В. Мюллер | SU6152 | Хирургический |
| инструмент Хальстед Москитные щипцы | В. Мюллер | SU2702 | Хирургический инструмент |
| Зажим Харкена | В. Мюллер | CH6462 | Хирургический инструмент |
| Теплотерапия Насос | Gaymar/Stryker | ТП-400 | Оборудование |
| Heparin | Fresenius Kabi, | 63323-540-31 | Лекарство, |
| первичные наборы для первичного внутривенного лечения хронической PH Hospira, 80" | Patterson Veterinary | 07-835-0123 | Хирургический одноразовый |
| гипертонический раствор 3% | Baxter Healthcare Corp., | 0338-0054-03 | Лекарство, |
| игла для подкожных инъекций при хронической РН со скосом и обычной стенкой, 20 г x 1 дюйм | Одноразовый кабель для интерфейса Medline | B-D305175Z | хронической РН |
| , преобразователь Edwards LifeScience для ADInstruments Мостовой усилитель | Fogg System | 0395-2434 | Оборудование |
| внутривенного инфузионного насоса | Heska | Vet/IV 2.2 Инфузионный насос | |
| Изофлуран | Паттерсон Ветеринарный | 14043-704-06 | Лекарство, предоперационный |
| торакальный зажим Кантровица, 9-1/2" | V. Mueller | CH1722 | Хирургический инструмент |
| Kelly гемостаты | V. Mueller | 88-0314 | Хирургический инструмент |
| Lidocaine HCl, 2,46% | PRN Pharmacal, | 49427-434-04 | лечения хронического PH |
| Ligaclip Multiple-Clip от Ethicon | Medline | ETHMCS20 | Хирургическая одноразовая |
| петля, сосуд, мини, красный, 2/уп, стерильный | Medline | DYNJVL12 | Хирургические одноразовые |
| щипцы для полотенец Lorna без перфорации | V. Mueller | SU2937 | Хирургический инструмент |
| Mayo препарирующие ножницы, изогнутые | V. Mueller | SU1826 | Хирургический инструмент |
| Mayo ножницы для препарирования, прямые | V. Mueller | SU1821 | Хирургический инструмент |
| Medipore Dress-it предварительно вырезанные чехлы для перевязочных материалов от 3M | Medline | & НБСП; MMM2955Z | Хирургический одноразовый |
| мелоксикам | Patterson Veterinary | 14043-909-10 | Лекарство, послеоперационный |
| микстер торакальных щипцов, 9" | V. Mueller | CH1730-003 | Хирургический инструмент |
| Комары гемостатики | V. Mueller | 88-0301 | Хирургический инструмент |
| многоканальные исследовательские консоли | Transonic | T402/T403 | Оборудование, периваскулярный расходомер |
| многопросветный центральный венозный катетеризация Medline | ARW45703XP1AH | Хирургический одноразовый | |
| многопараметрический монитор жизненных показателей | Smiths Medical | Иглы для оборудования SurgiVet Advisor 3 | |
| : игла для подкожных инъекций со скосом, стерильная, 18 г x 1,5 дюйма | Medline | B-D305185Z | Хирургический одноразовый |
| No 3 Рукоятка ножа | V. Mueller | SU1403-001 | Хирургический инструмент |
| No 7 Рукоятка ножа | V. Mueller | SU1407 | Хирургический инструмент |
| невентилируемый мужской колпачок | Luer Cap Qosina | 13614 | Одноразовый, хронический PH |
| Восьмеричный мостик Усилитель | ADInstruments | FE228 | Оборудование |
| Офтальмологическая мазь | Akorn Animal Health | 59399-162-35 | Лекарство, предоперационная |
| трубка Penrose, 6 мм x 46 см, 11 мм плоская | Medline | SWD514604H | Хирургическая одноразовая |
| перма-рука Черный плетеный шелк: 2-0 SH игла Taperpoint, контрольный выпуск, 30 " | Medline | ETHD8552 | Хирургический одноразовый |
| перма-кистовой шовный материал, черный плетеный, размер 0, 6 x 30" | Медлайн | ETHA306H | Хирургический одноразовый |
| шовный материал для рук, черный плетеный, размер 4-0, 12 x 30" | Medline | ETHA303H | Хирургический одноразовый |
| фенилэфрин | West-Ward | 0641-6142-25 | Лекарство, интраоперационные |
| полигезивные беспроводные электроды для пациента обратного хода, взрослые | Medline | SWDE7509 | Хирургическая одноразовая |
| игла Port-A-Cath Huber, прямая, 22 г x 1-1/2 " | Medline | AAKM21200724 | одноразовая, хронический |
| шовный материал PH PROLENE Monofilament, синий, размер 4-0, 36", двойная рука, игла RB-1 | Medline | ETHD7143 | Хирургический одноразовый |
| полипропиленовый монофиламентный шовный материал, синий, двусторонний, игла RB-1, размер 5-0, 24 " | Medline | ETH8555H | Хирургические |
| одноразовые иглы для регионарного блока, 22-го калибра | Medline | B-D408348Z | Хирургические одноразовые |
| щипцы для миндалин | V. Mueller | M01700 | Хирургический инструмент |
| Экстрактор для скоб | кожи Medline | CND3031 | Одноразовый, Хронический PH |
| Степлер для кожи 35 ширина, со счетчиком | Medline | STAPLER35W | Хирургический одноразовый |
| сфигмоманометр | Patterson Veterinary | 07-815-0464 | Оборудование |
| Губка для губки | V. Mueller | GE-75 | Хирургический инструмент |
| Губка, колено: рентгеновская обнаруживаемая стерильная губка на коленях, 18" x 18", 5 / упаковка | Medline | MDS241518HH | Хирургическая одноразовая |
| губка, арахис: рентгенологически обнаруживаемая стерильная арахисовая губка, маленькая, 3/8" | Medline | MDS72038 | Хирургическое одноразовое |
| стерильное одноразовое полотенце Deluxe OR, синий, 17 дюймов x 27 дюймов, 2 / упаковка | Medline | MDT2168202 | Хирургический одноразовый |
| стерильный шприц Luer-Lock, 3 мл | Medline | SYR103010Z | одноразовый, хронический PH |
| стерильный шприц Luer-Lock, 5 мл | Medline | SYR105010Z | одноразовый, хронический |
| PH стерильный чехол для хирургического оборудования | Medline | DYNJE5930 | Хирургический одноразовый |
| запорный кран: 3-позиционный запорный кран с ручкой в выключенном положении, вращающийся адаптер с наружной резьбой, 45 фунтов на квадратный дюйм | Medline | DYNJSC301 | Хирургический одноразовый |
| запорный кран: 3-позиционный запорный кран с ручкой в выключенном положении, вращающийся адаптер Мужской воротник, 45 PSI | Medline | DYNJSC301 | одноразовый, подкожный порт для хронической PH |
| с 5-французским разъемом и Blue Boot | Access Technologies | CP2AC-5NC | Хирургические одноразовые |
| супер разрезанные ножницы для пресечения Мюллера | V. Mueller | CH2032-S | Surgical Инструмент |
| Супер рез препарирующие ножницы Нельсона-Метценбаума | V. Mueller | CH2025-S | Хирургический инструмент |
| Шприцы: Стерильный шприц Luer-Lock, 10 мл | Medline | SYR110010Z | Хирургический одноразовый |
| торакальный катетер, прямой, 28 Fr x 20" | Medline | SWD570549H | Хирургический одноразовый |
| трехчетвертный хирургический простыня | Medline | DYNJP2414H | Хирургический одноразовый |
| тилетамин + золазепам | Zoetis Inc | 54771-9050-1 | Лекарство, предоперационный |
| набор жгутов TourniKwik с четырьмя 7,5-дюймовыми трубками бронзового цвета и 1 петлей, 12 французских | медлиний | CVR79013 | Хирургический одноразовый |
| зажим для датчика | Edwards LifeScience | TCLIP05 | Оборудование |
| Триггерный анероидный манометр (Sphygmomanometer) | Patterson Veterinary | 07-815-0464 | Оборудование |
| TruWave Одноразовые наборы датчиков давления от Edwards Lifesciences | Medline | VSYPX260 | Хирургический одноразовый и хронический |
| модуль периваскулярного потока PH TS420 | Transonic | TS420 | оборудование, трубка для периваскулярного расходомера |
| , аспирация: стерильная универсальная всасывающая трубка с прямыми ребристыми соединителями, 1/4" x 12'Medline | OR612 | Хирургическая одноразовая | |
| трубка: Трубка контроля давления с фиксированной наружной вилкой Люэра и внутренним фитингом, низкое давление, 72 дюйма L | Medline | DYNJPMTBG72MF | хирургическая одноразовая |
| трубка: Трубка контроля давления с фиксированной наружной вилкой Люэра и внутренним фитингом, низкое давление, 72 дюйма L Medline | DYNJPMTBG72MF | одноразовый, хронический PH | |
| Трубчатый эластичный фиксатор повязки | Medline | DERGL711 | Одноразовый, хронический ретрактор ребер PH |
| Tuffier | V. Mueller | CD1101 | Хирургический инструмент |
| Tygon E-3603 Гибкие трубки | Fisher Scientific | 14-171-227 | Хирургический |
| одноразовый ретрактор U.S.A | V. Mueller | SU3660 | Хирургический инструмент |
| Пуповинная лента, хлопок, 3 нити, 1/8 x 36 дюймов | Medline | ETHU12TH | Хирургический одноразовый |
| кнопочный переключатель Valleylab Pencil | Medline | VALE2516H | Хирургические одноразовые |
| щипцы для глубоких сосудов Вандербильта | V. Mueller | CH1687 | Хирургический инструмент |
| Ветеринарный наркозный аппарат | Midmark | Matrx VMC | Оборудование |
| для ветеринарной анестезии Аппарат искусственной вентиляции легких | Hallowell EMC | Модель 2000 | Оборудование |
| Vicryl: Неокрашенный Vicryl 0 CT-1 36" Шовный материал | Medline | ETHVCP946H | Хирургический одноразовый |
| Викрил: Неокрашенный Викрил 2 TP-1 Конус 54" Шовный материал | Medline | ETHVCP880T | Хирургический одноразовый |
| Викрил: Неокрашенный Викрил 2-0 CT-1 18" Шовный материал | Medline | ETHVCP739D | Хирургический одноразовый |
| иглодержатель Vital crile-wood, 10-3/8" | V. Mueller | CH2427 | Хирургический инструмент |
| Vital майо-хегарский иглодержатель, 7-1/4" | V. Mueller | CH2417 | Хирургический инструмент |
| Vital metzenbaum препарирующие ножницы, 14' « | V. Mueller | CH2009 | Хирургический инструмент |
| Vital metzenbaum препарирующие ножницы, 9" | V. Mueller | CH2006 | Хирургический инструмент |
| Vital Ryder иглодержатель, 9" | V. Mueller | CH2510 | Хирургический инструмент |
| Yankauer, наконечник луковицы: стерильный жесткий Yankauer с наконечником лампы, без вентиляционных отверстий | Medline | DYND50130 | Хирургические одноразовые |
Ссылки
- Campo, A., et al. Outcomes of hospitalization for right heart failure in pulmonary arterial hypertension. European Respiratory Journal. 38 (2), 359-367 (2011).
- Tonelli, A. R., et al. Causes and circumstances of death in pulmonary arterial hypertension. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 188 (3), 365-369 (2013).
- Urashima, T., et al. Molecular and physiological characterization of RV remodeling in a murine model of pulmonary stenosis. American Journal of Physiology- Heart and Circulatory Physiology. 295 (3), (2008).
- Sato, H., et al. Large animal model of chronic pulmonary hypertension. ASAIO Journal. 54 (4), 396-400 (2008).
- Pohlmann, J. R., et al. A low mortality model of chronic pulmonary hypertension in sheep. Journal of Surgical Research. 175 (1), 44-48 (2012).
- Noly, P. -E., Guihaire, J., Coblence, M., Dorfmuller, P., Fadel, E., Mercier, O. Chronic thromboembolic pulmonary hypertension and assessment of right ventricular function in the piglet. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (105), e53133(2015).
- Pereda, D., et al. Swine model of chronic postcapillary pulmonary hypertension with right ventricular remodeling: Long-term characterization by cardiac catheterization, magnetic resonance, and pathology. Journal of Cardiovascular Translational Research. 7 (5), 494-506 (2014).
- Silva, K. A. S., Emter, C. A. Large animal models of heart failure: A translational bridge to clinical success. JACC: Basic to Translational Science. 5 (8), 840-856 (2020).
- Ukita, R., et al. Left pulmonary artery ligation and chronic pulmonary artery banding model for inducing right ventricular - pulmonary hypertension in sheep. ASAIO Journal (American Society for Artificial Internal Organs: 1992. 67 (1), 44-48 (2020).
- Ukita, R., et al. Progression toward decompensated right ventricular failure in the ovine pulmonary hypertension model. ASAIO Journal (American Society for Artificial Internal Organs: 1992. , (2021).
- Mercier, O., et al. Piglet model of chronic pulmonary hypertension. Pulmonary Circulation. 3 (4), 908-915 (2013).
- Guihaire, J., et al. Right ventricular plasticity in a porcine model of chronic pressure overload. Journal of Heart and Lung Transplantation. 33 (2), 194-202 (2014).
- Tang, K. J., Robbins, I. M., Light, R. W. Incidence of pleural effusions in idiopathic and familial pulmonary arterial hypertension patients. Chest. 136 (3), 688-693 (2009).
- Luo, Y. F., et al. Frequency of pleural effusions in patients with pulmonary arterial hypertension associated with connective tissue diseases. Chest. 140 (1), 42-47 (2011).
- Brixey, A. G., Light, R. W. Pleural effusions occurring with right heart failure. Current Opinion in Pulmonary Medicine. 17 (4), 226-231 (2011).
- Holt, T. N. Bovine High-mountain Disease. Merck and the Merck Veterinary Manual. , Available from: https://www.merckvetmanual.com/circulatory-system/bovine-high-mountain-disease/bovine-high-mountain-disease (2019).
- Van De Veerdonk, M. C., et al. Progressive right ventricular dysfunction in patients with pulmonary arterial hypertension responding to therapy. Journal of the American College of Cardiology. 58 (24), 2511-2519 (2011).
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
