Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

От клеток к бесклеточному синтезу белка в течение 24 часов с помощью бесклеточного процесса автоиндукции

4.9K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/62866

⸱

22 июля 2021 г.

 ,  ,  , 
1Department of Chemistry and Biochemistry, California Polytechnic State University San Luis Obispo, 2Center for Application in Biotechnology, California Polytechnic State University San Luis Obispo

В этой статье

Уведомление об исправлении

Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice

Краткое содержание

В этой работе описывается получение клеточного экстракта из кишечной палочки (E. coli) с последующими реакциями бесклеточного синтеза белка (CFPS) менее чем за 24 часа. Объяснение протокола бесклеточной аутоиндукции (CFAI) детализирует улучшения, сделанные для уменьшения надзора исследователей и увеличения количества получаемого клеточного экстракта.

Аннотация

Бесклеточный синтез белка (CFPS) вырос как биотехнологическая платформа, которая захватывает механизмы транскрипции и трансляции in vitro. Многочисленные разработки сделали платформу CFPS более доступной для новых пользователей и расширили спектр приложений. Для систем CFPS на основе лизата клеточные экстракты могут быть получены из различных организмов, используя уникальную биохимию этого хозяина для увеличения синтеза белка. За последние 20 лет Escherichia coli (E. coli) стала одним из наиболее широко используемых организмов для поддержки CFPS из-за его доступности и универсальности. Несмотря на многочисленные ключевые достижения, рабочий процесс подготовки экстракта клеток E. coli остается ключевым узким местом для новых пользователей, чтобы внедрить CFPS для своих применений. Процесс подготовки выписки занимает много времени и требует технических знаний для достижения воспроизводимых результатов. Чтобы преодолеть эти барьеры, мы ранее сообщали о разработке 24-часового рабочего процесса автоиндукции без клеток (CFAI), который снижает пользовательский вклад и требуемые технические знания. Рабочий процесс CFAI сводит к минимуму трудозатраты и технические навыки, необходимые для создания клеточных экстрактов, а также увеличивает общее количество полученных клеточных экстрактов. Здесь мы пошагово описываем этот рабочий процесс для улучшения доступа и поддержки широкого внедрения CFPS на основе E. coli .

Введение

Использование бесклеточного синтеза белка (CFPS) для применения в биотехнологии значительно выросло за последние несколько летна 1,2,3. Это развитие можно отчасти объяснить активизацией усилий по пониманию процессов, происходящих в ХФПС, и роли каждого компонента 4,5. Кроме того, снижение затрат, связанных с оптимизированными установками и альтернативными источниками энергии, облегчило внедрение бесклеточной технологии для новых пользователей 6,7,8,9. Чтобы реализовать необходимые факторы транскрипции и трансляции для синтеза белка, клеточный экстракт часто используется для управления бесклеточными реакциями10. Недавно опубликованные руководства пользователя предоставили простые протоколы для создания функционального извлечения, что облегчает его реализацию для новых и опытных пользователей, как 1,11,12,13,14. Клеточный экстракт обычно получают путем лизиса клеточной культуры, которая может быть выращена с использованием различных организмов в зависимости от желаемого конкретного использования 1,15,16.

Кишечная палочка (E. coli) быстро стала одним из наиболее часто используемых организмов-хозяев для производства функциональных экстрактов17. Штамм BL21 Star (DE3) является предпочтительным, поскольку он удаляет протеазы из внешней мембраны (протеаза OmpT) и цитоплазму (протеаза Lon), обеспечивая оптимальную среду для экспрессии рекомбинантного белка. Кроме того, DE3 содержит λDE3, который несет ген T7 РНК-полимеразы (T7 RNAP) под контролем промотора lacUV5; звездный компонент содержит мутировавший ген RNaseE, который предотвращает расщепление мРНК 4,14,18,19. Под действием промотора lacUV5 индукция изопропил-тиогалактопиранозида (IPTG) позволяет экспрессировать T7 RNAP20,21. Эти штаммы используются для выращивания и сбора клеток, которые дают сырье для приготовления экстракта. Лизис клеток может быть выполнен с использованием различных методов, включая биение шариков, френч-пресс, гомогенизацию, обработку ультразвуком и кавитацию азота 1,11,12,22.

Процесс культивирования и сбора бактерий согласован на большинстве платформ при использовании кишечной палочки, но требует нескольких дней и интенсивного надзора исследователей 1,11,13. Этот процесс обычно начинается с ночной посевной культуры в бульоне LB, которая после ночного роста затем инокулируется в более крупную культуру 2xYTPG (дрожжи, триптон, фосфатный буфер, глюкоза) на следующий день. Рост этой более крупной культуры контролируется до тех пор, пока она не достигнет ранней и средней фазы log, при оптической плотности (OD) 2,514,20. Постоянное измерение требуется, поскольку компоненты транскрипции и перевода ранее были продемонстрированы как очень активные в начале-середине фазылогарифма 23,24. Хотя этот процесс может создать воспроизводимый экстракт, наша лаборатория недавно разработала новый метод с использованием бесклеточной автоиндукционной среды (CFAI), который уменьшает надзор исследователей, увеличивает общий выход экстракта для данного литра клеточной культуры и улучшает доступ к препарату экстракта на основе кишечной палочки как для опытных, так и для новых пользователей (рисунок 1). ). Здесь мы предоставляем пошаговое руководство по реализации рабочего процесса CFAI, чтобы перейти от полосатой пластины клеток к завершенной реакции CFPS в течение 24 часов.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

1. Рост СМИ

  1. Приготовьте 960 мл среды CFAI, как описано в таблице 1 , и отрегулируйте рН до 7,2 с помощью KOH.
  2. Передавайте питательные среды в 2,5-литровую перемешанную колбу и автоклав в течение 30 мин при 121 °C.
  3. Приготовьте раствор сахара объемом 40 мл, как описано в таблице 1. Фильтруйте-стерилизуйте раствор в отдельную автоклавную стеклянную емкость.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Раствор сахара можно хранить в инкубаторе при температуре 30 °C до дальнейшего использования.
  4. Дайте среде полностью остыть до температуры ниже 40 °C после автоклавирования.
  5. Перед посевом среды CFAI добавьте раствор сахара непосредственно в среду CFAI.
  6. Чтобы привить среду, проведите пальцем по петле колоний от ранее полосатой пластины E. coli BL21 Star (DE3) и вставьте непосредственно в носитель. Закрутите петлю в носитель, но избегайте касания боковых сторон контейнера. Убедитесь, что пластина полосы свежая, с жизнеспособными клетками.
  7. Поместите колбу с инокулированной средой в инкубатор при температуре 30 °C, встряхивая при 200 оборотах в минуту. Позвольте культуре расти в одночасье. Если клетки привить вечером, культура достигнет приблизительной оптической плотности, измеренной при 600 нм (OD600), из 10 на следующее утро. Время прививки и сбора урожая могут быть скорректированы по мере необходимости.

2. Сбор клеток

  1. Заранее подготовьте буфер S30 и держите его холодным. Подготовьте буфер S30 в соответствии с таблицей 2 к конечному рН 8,2.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Буфер S30 может быть подготовлен за несколько дней до сбора клеток. Если это сделано, готовят без дитиотрейтола и хранят при температуре 4 °C. Добавьте дитиотрейтол непосредственно перед использованием.
  2. С этого момента держите все растворы и материалы на льду. Переложите 1 л среды в бутылку центрифуги объемом 1 л и центрифугу при 5000 х г при температуре 4-10 °C в течение 10 мин. Декантировать и утилизировать надводный. Используя стерильный шпатель, переложите гранулу в предварительно охлажденную и предварительно взвешенную коническую трубку объемом 50 мл.
  3. Промывайте один раз 30-40 мл холодного буфера S30 путем повторного использования гранулы путем вихря в 30 с всплесками с периодами покоя на льду.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Из-за большего объема гранул разделение ячейки гранулы на две конические трубки по 50 мл может быть полезно для этапа промывки. Хранение ячеек в меньших аликвотах также обеспечивает гибкость для последующей обработки.
  4. Центрифугирование ячейки при 5000 х г при 4-10 °C в течение 10 мин.
  5. Утилизируйте супернатант и вытрите излишки с внутренних стенок конической трубки объемом 50 мл с помощью чистой ткани, избегая прикосновения к самой грануле. Взвесьте и заморозьте гранулы во вспышке в жидком азоте. Хранить при температуре -80 °C до дальнейшего использования.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Гранулы могут не требовать мгновенного замораживания, если пользователь планирует продолжить протокол подготовки экстракта.

3. Подготовка экстракта

  1. Соединить замороженную гранулу с 1 мл буфера S30 на каждый 1 г ячейки гранулы и дать оттаять на льду примерно 30-60 мин. Повторное суспендирование размороженной гранулы путем вихря всплесками по 30 с периодами покоя на льду. Вихрь до тех пор, пока не останется видимых скоплений клеток.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Меньшие сгустки могут быть повторно суспендированы путем смешивания с помощью пипетки.
  2. Перенос аликвот 1,4 мл клеточной ресуспензии в микрофьюжные трубки объемом 1,5 мл для лизиса клеток. Обрабатывайте ультразвуком каждую трубку с частотой 20 кГц и амплитудой 50% в течение трех очередей по 45 с 59 с покоя за цикл в окружении ледяной ванны. Инвертируйте трубку между циклами и немедленно добавляйте 4,5 мкл 1 М дитиотрейтола после последнего цикла обработки ультразвуком.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Из-за тепла, выделяемого ультразвуком, чрезвычайно важно убедиться, что все аликвоты хранятся на льду, когда они не обрабатываются ультразвуком. Ледяная ванна должна постоянно пополняться или быть достаточно большой, чтобы оставаться прохладной на протяжении всего процесса обработки ультразвуком.
  3. Центрифуга каждой трубки при 18 000 х г и 4 °C в течение 10 мин. Извлеките супернатант и аликвоту в микрофрагменты объемом 1,5 мл в аликвотах по 600 мкл. Вспышка замораживает аликвоты и хранит при -80 °C до дальнейшего использования. Следует соблюдать осторожность, чтобы пипетка была только супернатантом.

4. Бесклеточный синтез белка

  1. Разморозьте одну аликвоту экстракта с предыдущей стадии, чтобы выполнить 15 мкл бесклеточных реакций синтеза белка в 1,5 мл микрофьюжных пробирок в квадрузикате.
  2. Готовят каждую реакцию, комбинируя 240 нг ДНК (конечная концентрация 16 мкг/мл), 2,20 мкл раствора А, 2,10 мкл раствора В, 5,0 мкл экстракта и различный объем молекулярной воды для заполнения реакции до 15 мкл. Эта реакция может быть масштабирована до более высоких объемов. Соотношения см. в таблице 3 .
    1. Готовят раствор А и В согласно таблице 4. Каждый раствор может быть приготовлен партиями от 100 мкл до 1 мл, аликвотирован и сохранен при -80 °C до дальнейшего использования.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Количество ДНК может варьироваться в зависимости от интересующего белка. В этом случае используемая плазмида, pJL1-sfGFP, была оптимизирована для работы при 16 мкг/мл или 597 мкМ.
  3. Дайте реакциям продолжаться не менее 4 ч при 37 °C.

5. Количественная оценка репортерного белка, супер папка зеленого флуоресцентного белка (sfGFP)

  1. Используя половину площади 96-луночной черной полистирольной пластины, соедините 2 мкл каждого бесклеточного продукта реакции синтеза белка с 48 мкл буфера 0,05 M HEPES при рН 7,2. Рекомендуется три-четыре реплики каждой реакционной трубки.
  2. Количественно оценить интенсивность флуоресценции sfGFP с длиной волны возбуждения 485 нм и длиной волны излучения 528 нм.
  3. Для преобразования относительных единиц флуоресценции в объемный выход (мкг/мл) sfGFP установите стандартную кривую с использованием очищенного pJL1-sfGFP.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

При приготовлении среды CFAI глюкозу обменивали на увеличение лактозы и глицерина в качестве основного энергетического субстрата в среде. Кроме того, была увеличена буферная способность сред CFAI. Эти конкретные компоненты приведены в таблице 1.

Затем клетки выращивали как до OD600 10 , так и до стандартного 2,5 в средах CFAI, чтобы показать согласованность с качеством экстракта, несмотря на различные количества экстракта. Среду 2,5 OD600 CFAI выращивали ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Надзор исследователей традиционно необходим для двух ключевых действий во время роста клеток: индукции T7 RNAP и сбора клеток при определенном OD600. CFAI устраняет оба этих требования, чтобы сократить время исследователя и техническую подготовку, необходимую для приготовления высококачественных клеточных экстрактов. Аутоиндукция T7 RNAP достигается путем замены глюкозы лактозой в качестве первичного сахара в среде, устраняя предыдущую необходимость активно контролировать рост, а затем индуцировать IPTG в точн...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых конфликтов интересов.

Благодарности

Авторы хотели бы поблагодарить доктора Дженнифер ВандерКелен и Андреа Лаубшер за техническую поддержку. Авторы также хотели бы поблагодарить Николь Грегорио, Макса Левина, Алиссу Маллин, Бюнгчеола Со, Августа Бруквелла, Элизабет (Лиззи) Воеводу, Логана Беррингтона и Джиллиан Касман за полезные обсуждения. Авторы также признают финансовую поддержку со стороны Фонда Билла и Линды Фрост, Центра приложений в биотехнологии Chevron Biotechnology Applied Research Endowment Grant, Cal Poly Research, Scholarly и Национального научного фонда (NSF-1708919).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Пробирки для микрофуге объемом 1,5 млPhenixMPC-425Q
1л ЦентрифугаBeckman CoulterA99028
Центрифуга Avanti J-E BeckmanCoulter369001
CoASigma-AldrichC3144-25MG
Cytation 5 Cell Imaging Multi-Mode ReaderBiotekBTCYT5F
D-глюкозаFisherD16-3
D-лактозаAlfa AesarJ66376
DTTThermoFisher15508013
фолиевая кислотаSigma-AldrichF7878-100MG
ГлицеринFisherBP229-1
глицинSigma-AldrichG7126-100G
HEPESThermoFisher11344041
IPTGSigma-AldrichI6758-1G
JLA-8.1000 РоторBeckman Coulter366754
K(Glu)Sigma-AldrichG1501-500G
K(OAc)Sigma-AldrichP1190-1KG
KOHSigma-AldrichP5958-500G
L-аланинSigma-AldrichA7627-100G
L-аргининSigma-AldrichA8094-25G
L-аспарагинSigma-AldrichA0884-25G
L-аспарагиновая кислотаSigma-AldrichA7219-100G
L-цистеинSigma-AldrichC7352-25G
L-глутаминовая кислотаSigma-AldrichG1501-500G
L-глютаминSigma-AldrichG3126-250G
L-гистадинSigma-AldrichH8000-25G
L-изолейцинSigma-AldrichI2752-25G
L-лейцинSigma-AldrichL8000-25G
L-лизинSigma-AldrichL5501-25G
L-метионинSigma-AldrichM9625-25G
L-фенилаланинСигма-ОлдричP2126-100G
L-пролинСигма-ОлдричP0380-100G
L-серинСигма-ОлдричS4500-100G
L-треонинСигма-ОлдричT8625-25G
L-триптофанСигма-ОлдричT0254-25G
L-тирозинСигма-ОлдричT3754-100G
Бульон LuriaThermoFisher12795027
L-валинSigma-AldrichV0500-25G
Mg(Glu)2Sigma-Aldrich49605-250G
Mg(OAc)2Sigma-AldrichM5661-250G
Microfuge 20Beckman CoulterB30134
Молекулярная водаSigma-Aldrich7732-18-5
NaClАльфа АэсарA12313
НАДСигма-ОлдричN8535-15VL
Нью-Брансуик Иннова 42/42R ИнкубаторEppendorfM1335-0000
NH4(Glu)Sigma-Aldrich09689-250G
NTPsThermoFisherR0481
Щавелевая кислотаСигма-ОлдричP0963-100G
PEPSigma-Aldrich860077-250MG
фосфат калия, Органическиевещества A0382124
Моноосновные акро фосфата калия, ОрганическиеA0379904
Набор для подготовки плазмиды PureLink HiPure ThermoFisherK210007
путресцинаSigma-AldrichD13208-25G
СпермидинSigma-AldrichS0266-5G
Tris(OAc)Sigma-AldrichT6066-500G
тРНКSigma-Aldrich10109541001
триптонFisher биореагенты73049-73-7
Tunair 2,5 л Колба с перегородкойSigma-AldrichZ710822
ультразвуковой процессорQSonicaQ125-230V/50HZ
Биореагенты Фишераэкстрактом дрожжей1/2/8013
Диосновной акрос с

Ссылки

  1. Gregorio, N. E., Levine, M. Z., Oza, J. P. A user's guide to cell-free protein synthesis. Methods and Protocols. 2 (1), 1-34 (2019).
  2. Silverman, A. D., Karim, A. S., Jewett, M. C. Cell-free gene expression: an expanded repertoire of applications. Nature Reviews Genetics. 21 (3), (2020).
  3. Swartz, J. R. Expanding biological applications using cell-free metabolic engineering: An overview. Metabolic Engineering. 50, 156-172 (2018).
  4. Jared, B., Dopp, L., Tamiev, D. D., Reuel, N. F. Cell-free supplement mixtures: Elucidating the history and biochemical utility of additives used to support in vitro protein synthesis in E. coli extract. Biotechnology Advances. 37 (1), 246-258 (2019).
  5. Jewett, M. C., Swartz, J. R. Mimicking the Escherichia coli cytoplasmic environment activates long-lived and efficient cell-free protein synthesis. Biotechnology and Bioengineering. 86 (1), 19-26 (2004).
  6. Calhoun, K. A., Swartz, J. R. Energizing cell-free protein synthesis with glucose metabolism. Biotechnology and Bioengineering. 90 (5), 606-613 (2005).
  7. Levine, M. Z., Gregorio, N. E., Jewett, M. C., Watts, K. R., Oza, J. P. Escherichia coli-based cell-free protein synthesis: Protocols for a robust, flexible, and accessible platform technology. Journal of Visualized Experiments. (144), e58882(2019).
  8. Sun, Z. Z., et al. Protocols for Implementing an Escherichia coli Based TX-TL Cell-Free Expression. System for Synthetic Biology. , 1-14 (2013).
  9. Pardee, K., et al. Portable, on-demand biomolecular manufacturing. Cell. 167, 248-254 (2016).
  10. Moore, S. J., Macdonald, J. T., Freemont, P. S. Cell-free synthetic biology for in vitro prototype engineering. Biochemical Society Transactions. 45 (3), 785-791 (2017).
  11. Cole, S. D., Miklos, A. E., Chiao, A. C., Sun, Z. Z., Lux, M. W. Methodologies for preparation of prokaryotic extracts for cell-free expression systems. Synthetic and Systems Biotechnology. 5 (4), 252-267 (2020).
  12. Didovyk, A., Tonooka, T., Tsimring, L., Hasty, J. Rapid and scalable preparation of bacterial lysates for cell-free gene expression. ACS Synthetic Biology. 6 (12), 2198-2208 (2017).
  13. Dopp, J. L., Reuel, N. F. Process optimization for scalable E. coli extract preparation for cell-free protein synthesis. Biochemical Engineering Journal. 138, 21-28 (2018).
  14. Kwon, Y. C., Jewett, M. C. High-throughput preparation methods of crude extract for robust cell-free protein synthesis. Scientific Reports. 5, 8663(2015).
  15. Endo, Y., Sawasaki, T. Cell-free expression systems for eukaryotic protein production. Current Opinion in Biotechnology. 17 (4), 373-380 (2006).
  16. Zemella, A., Thoring, L., Hoffmeister, C., Kubick, S. Cell-free protein synthesis: Pros and cons of prokaryotic and eukaryotic systems. ChemBioChem. 16 (17), 2420-2431 (2015).
  17. Laohakunakorn, N., Grasemann, L., Lavickova, B., Michielin, G. Bottom-up construction of complex biomolecular systems with cell-free synthetic biology. Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 8, (2020).
  18. Ahn, J. H., et al. Cell-free synthesis of recombinant proteins from PCR-amplified genes at a comparable productivity to that of plasmid-based reactions. Biochemical and Biophysical Research Communications. 338 (3), 1346-1352 (2005).
  19. Kim, T. W., et al. Simple procedures for the construction of a robust and cost-effective cell-free protein synthesis system. Journal of Biotechnology. 126 (4), 554-561 (2006).
  20. Hunt, J. P., et al. Streamlining the preparation of "endotoxin-free" ClearColi cell extract with autoinduction media for cell-free protein synthesis of the therapeutic protein crisantaspase. Synthetic and Systems Biotechnology. 4 (4), 220-224 (2019).
  21. Studier, F. W. Protein production by auto-induction in high-density shaking cultures. Protein Expression and Purification. 41, 207-234 (2005).
  22. Shrestha, P., Holland, T. M., Bundy, B. C. Streamlined extract preparation for Escherichia coli-based cell-free protein synthesis by sonication or bead vortex mixing. BioTechniques. 53 (3), 163-174 (2012).
  23. Bosdriesz, E., Molenaar, D., Teusink, B., Bruggeman, F. J. How fast-growing bacteria robustly tune their ribosome concentration to approximate growth-rate maximization. FEBS Journal. 282 (10), 2029-2044 (2015).
  24. Zawada, J., Swartz, J. Maintaining rapid growth in moderate-density Escherichia coli fermentations. Biotechnology and Bioengineering. 89 (4), 407-415 (2005).
  25. Kim, J., Copeland, C. E., Padumane, S. R., Kwon, Y. C. A crude extract preparation and optimization from a genomically engineered Escherichia coli for the cell-free protein synthesis system: Practical laboratory guideline. Methods and Protocols. 2 (3), 1-15 (2019).
  26. Failmezger, J., Rauter, M., Nitschel, R., Kraml, M., Siemann-Herzberg, M. Cell-free protein synthesis from non-growing, stressed Escherichia coli. Scientific Reports. 7 (1), 1-10 (2017).
  27. Levine, M. Z., et al. Activation of energy metabolism through growth media reformulation enables a 24-h workflow for cell-free expression. ACS Synthetic Biology. 9 (10), 2765-2774 (2020).
  28. Martin, R. W., et al. Cell-free protein synthesis from genomically recoded bacteria enables multisite incorporation of noncanonical amino acids. Nature Communications. , 1-9 (2018).
  29. Soye, B. J. D., et al. Resource A highly productive, One-pot cell-free protein synthesis platform based on genomically recoded Escherichia coli resource. Cell Chemical Biology. 26 (12), 1743-1754 (2019).
  30. Ezure, T., Suzuki, T., Ando, E. A cell-free protein synthesis system from insect cells. Methods in Molecular Biology. , 285-296 (2014).
  31. Heide, C., et al. development and optimization of a functional mammalian cell-free protein synthesis platform. Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 8, 1-10 (2021).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Исправление


Formal Correction: Erratum: From Cells to Cell-Free Protein Synthesis within 24 Hours using Cell-Free Autoinduction Workflow
Posted by JoVE Editors on 5/23/2022. Citeable Link.

An erratum was issued for: From Cells to Cell-Free Protein Synthesis within 24 Hours using Cell-Free Autoinduction Workflow. The Authors section was updated.

The Authors section was updated from:

Philip E.J. Smith1,2, Taylor Slouka1,2, Javin P. Oza1,2
1Department of Chemistry and Biochemistry, California Polytechnic State University
2Center for Application in Biotechnology, California Polytechnic State University

to:

Philip E.J. Smith1,2, Taylor Slouka1,2, Mona Dabbas 1,2, Javin P. Oza1,2
1Department of Chemistry and Biochemistry, California Polytechnic State University
2Center for Application in Biotechnology, California Polytechnic State University

Теги

E coliS30
От клеток к бесклеточному синтезу белка в течение 24 часов с помощью бесклеточного процесса автоиндукции
Свяжитесь с нами
Рекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

Авторские права © 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.