Методическая статья

Флуоресцентно-активированная клеточная сортировка-радиолигандная обработанная ткань (FACS-RTT) для определения клеточного происхождения радиоактивного сигнала

2K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/62883

⸱

10 сентября 2021 г.

 ,  ,  ,  , 
1Division of Adult Psychiatry, Department of Psychiatry, University Hospitals of Geneva, 2Department of Psychiatry, University of Geneva, 3Division of Nuclear medicine and Molecular Imaging, University Hospitals of Geneva, 4Division of Radiation Oncology, Department of Oncology, University Hospitals of Geneva, 5Department of Brain Sciences, Faculty of Medicine, Imperial College London

В этой статье

Краткое содержание

Флуоресцентно-активированная клеточная сортировка-радиолигандная обработанная ткань (FACS-RTT) является мощным инструментом для изучения роли транслокаторного белка 18 кДа или экспрессии серотонина 5HT2A-рецептора при болезни Альцгеймера в клеточном масштабе. Этот протокол описывает применение EX-vivo FACS-RTT в модели крыс TgF344-AD.

Аннотация

Глиальные клетки, вероятно, имеют значительное значение в патофизиологии нейродегенеративных расстройств, таких как болезнь Альцгеймера (БА). Их изменения, возможно, связаны с провоспалительным состоянием. Штамм крыс TgF344-AD был разработан для экспрессии человеческих генов APP и ЧЕЛОВЕЧЕСКОГО PS1ΔE9 , кодирующих амилоидные белки Aβ-40 и Aβ-42 и демонстрирующих амилоидную патологию и когнитивный дефицит со старением. Модель крыс TgF344-AD используется в этом исследовании для оценки клеточного происхождения связывания 18 кДа транслокаторного белка (TSPO, маркер активации глиальных клеток) и уровней рецептора серотонина 5HT2A (5HT2AR), которые, возможно, нарушаются при AD. Метод, представленный здесь, представляет собой флуоресцентно-активированную сортировку клеток в радиолигандную обработанную ткань (FACS-RTT), количественный метод, специфичный для типа клеток, дополняющий методы ауторадиографии in vivo PET или SPECT или ex vivo / in vitro . Он количественно определяет тот же радиоактивный индикатор, который использовался ранее для визуализации, используя счетчик γ после сортировки клеток цитометрии. Это позволяет определить клеточное происхождение меченого радиоактивным путем белка с высокой клеточной специфичностью и чувствительностью. Например, исследования с FACS-RTT показали, что (i) увеличение связывания TSPO было связано с микроглией в крысиной модели нейровоспаления, индуцированного липополисахаридом (LPS), (ii) увеличение связывания TSPO через 12 и 18 месяцев было связано сначала с астроцитами, а затем с микроглией у крыс TgF344-AD по сравнению с крысами дикого типа (WT) и (iii) стриатальной плотностью 5HT2A. R снижается в астроцитах через 18 месяцев в той же модели AD крыс. Интересно, что эта техника может быть распространена практически на все радиоиндикаторы.

Введение

Нейродегенеративные заболевания, такие как болезнь Альцгеймера (БА), характеризуются потерей нейронов, связанной с усилением симптомов. БА, наиболее распространенная причина деменции, на которую приходится 60-70% случаев, затрагивает около 50 миллионов человек во всем мире1. На нейропатологическом уровне двумя основными характеристиками БА являются накопление внеклеточных амилоидно-β (Aβ) бляшек и внутриклеточных тау-нейрофибриллярных клубков. Изменения глиальных клеток также были связаны с AD2 и возможным нарушением работы нескольких нейротрансмиттерных систем 3,4.

Крысиная линия TgF344-AD была модифицирована для моделирования AD путем экспрессии трансгенов APP и PS1ΔE9 человека, что приводит к растворимой и нерастворимой экспрессии Aβ-40 и Aβ-42 и образованию амилоидных бляшек5. В нем также представлено накопление гиперфосфорилированных форм тау-белка, приводящего к тауопатии. В возрасте 9-24 месяцев у крыс прогрессивно развиваются патологические признаки БА и когнитивные нарушения 5,6,7,8,9.

Позитронно-эмиссионная томография (ПЭТ), однофотонная эмиссионная компьютерная томография (ОФЭКТ) и ауторадиография являются методами, основанными на излучении и количественной оценке γ лучей. Радиоиндикаторы количественно определяются либо in vivo (ПЭТ и ОФЭКТ), либо ex vivo/in vitro (ауторадиография). Эти чувствительные методы способствовали пониманию механизмов нескольких заболеваний головного мозга, таких как БА. Действительно, с точки зрения нейровоспаления, существует множество исследований, оценивающих 18 кДа транслокаторного белка (TSPO), маркер нейровоспаления in vivo, с радиомаркированными индикаторами, такими как [11C]-(R)-PK11195 или [11C]PBR28 (для обзора см.10). Кроме того, изменения нейротрансмиттерных систем были изучены с использованием радиоиндикаторов 11,12,13.

Однако эти методы не определяют клеточное происхождение радиоактивного сигнала. Это может затруднить интерпретацию биологических основ изменения в связывании радиолиганда в ПЭТ/ОФЭКТ. Например, в случае исследований нейровоспаления TSPO, понимание того, связано ли увеличение или уменьшение TSPO с астроцитарными или микроглиальными изменениями, имеет первостепенное значение. Для обхода этих проблем был разработан метод флуоресцентно-активированной сортировки клеток в ткань, обработанную радиоактивными лигандами (FACS-RTT), позволяющий оценить связывание радиолигандов в каждом типе клеток отдельно и количественно оценить плотность целевого белка на клетку. Следовательно, этот инновационный метод дополняет и высоко совместим с визуализацией ПЭТ и ОФЭКТ.

Здесь эта методика применялась по двум осям: изучение нейровоспаления с использованием TSPO-специфических радиолигандов и оценка серотонинергической системы. На первой оси цель состояла в том, чтобы понять клеточное происхождение сигнала TSPO в ответ на острую воспалительную реакцию. Поэтому FACS-RTT использовали на тканях мозга крыс после индукции нейровоспаления с помощью инъекции липополисахарида (ЛПС) и после исследования визуализации in vivo [125I]CLINDE SPECT. Кроме того, та же визуализация и протокол FACS-RTT были применены к 12- и 24-месячным крысам TgF344-AD и соответствующим крысам дикого типа (WT). Вторая ось была направлена на определение происхождения изменений серотонинергической системы в этой модели крыс с помощью оценки плотности ex vivo 5-HT2AR по типу клеток.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все экспериментальные процедуры проводились по согласованию с Комитетом по этике экспериментов на людях и животных кантона Женева, Кантональной комиссией по этике исследований (CCER) и Общим руководством по охране здоровья кантона Женева (Швейцария), соответственно. Данные сообщаются в соответствии с руководящими принципами исследований на животных: отчетность по экспериментам In vivo (ARRIVE).

1. Подготовка и калибровка камеры ОФЭКТ

  1. Включите камеру, загрузите операционное программное обеспечение (см. Таблицу материалов). Нажмите на кнопку Home XYZ Stage , чтобы выполнить самонаведение.
  2. Настройте эксперимент, состоящий из одного 10-минутного сканирования. Установите для пошагового режима значение Fine , а для режима получения — Listmode (для записи всего спектра излучения).
  3. Установите кровать и убедитесь, что система согревания, датчик дыхания и анестезия являются функциональными и безопасными (рисунок 1A-D). Затем поместите фантом (т.е. 2 мл известной концентрации 125I в микрофьюжную трубку объемом 2 мл), где будет расположена голова животного (по центру на площади, рисунок 1Е).
  4. Установите область сканирования, переместив курсоры для трех измерений с помощью трех изображений в нижней части экрана. Убедитесь, что объем сканирования фантома и животного одинаков.
  5. Запустите фантомное сканирование для последующей калибровки с параметрами, установленными на шагах 1.2-1.4.

2. Настройка рабочего пространства для создания изображений ОФЭКТ

  1. Очистите рабочее пространство дезинфицирующим вируцидом и разместите мягкую бумагу на всех поверхностях.
  2. Убедитесь, что в их соответствующих резервуарах достаточно изофлунана и кислорода.
  3. Подготовьте катетер весом 24 г, отрезав плавники катетера бабочки, чтобы иметь более четкое представление о вене крысиного хвоста.
  4. Обложите катетер, полностью заполнив его раствором гепарина (25000 Ед/мл) после удаления иглы. Затем поместите иглу обратно в нее, чтобы избежать образования сгустка крови после введения катетера.

3. [125I]Синтез радиоиндикатора CLINDE

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ: Радиоактивность может иметь достаточную ионизирующую энергию, чтобы воздействовать на атомы живых клеток и повреждать их генетический материал (ДНК).

  1. Обеспечить работу в соответствующей среде, разрешенной для экспериментов, связанных с радиоактивностью.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Носите соответствующие средства индивидуальной защиты (СИЗ) для обработки радиоактивности, включая дозиметры для пальцев и тела. Старайтесь находиться на безопасном расстоянии от любого источника радиоактивности.
  2. Инкубировать 100 мкг предшественника трибутилина в 100 мкл уксусной кислоты с йодидом натрия (Na125I) (см. Таблицу материалов) и 5 мкл 37% перуксусной кислоты при 70 °C в течение 20 мин в термоциклере, расположенном в бардачке.
  3. Разбавляют реакцию, используя 50% ацетонитрила (ACN) в воде до достижения объема 500 мкл. Вводят 500 мкл разбавленной реакции на колонну обратной фазы (см. Таблицу материалов).
  4. Выделяют [125I]CLINDE с линейным градиентом ВЭЖХ, работающим от 5%-95% ACN в 7 мМ H3PO4 в течение 10 мин. Разбавляют изолят вН2Одо достижения конечного объема 10 мл, а затем вводят разбавленную реакцию в колонку концентрации (см. Таблицу материалов).
  5. Элюируют [125I]CLINDE из колонны 300 мкл абсолютного этанола, а затем испаряют этанол, инкубируя его в вакуумной центрифуге при RT в течение 40 мин.
  6. Разбавляют остаток, содержащий [125I]КЛИНД, в 300 мкл стерильного физиологического раствора для создания запасного раствора.
  7. После измерения его радиоактивности разводят исходный раствор в стерильном физиологическом растворе для получения раствора 0,037 МБк в 500 мкл.
  8. Очистите индикатор с помощью ВЭЖХ (высокоэффективная жидкостная хроматография). Определите время элюирования, используя стандартную калибровку при 450 нм, и изолируйте один радиоактивный пик. Выполните стандартную калибровочную кривую, используя семь стандартных концентраций холодного (нерадиоактивного) КЛИНДА (0,1 мкг, 0,5 мкг, 0,75 мкг, 1 мкг, 1,5 мкг, 2 мкг и 5 мкг в 400 мкл раствора 50% ACN). Установить радиохимическую чистоту путем измерения одного пика в радио TLC (тонкослойная хроматография). Убедитесь, что чистота радиохимического вещества выше 60%.
  9. Проверить удельную активность радиолиганда, измеряющего ультрафиолетовое поглощение при 450 нм, и калибровочные кривые, установленные с холодными эталонными соединениями. Убедитесь, что удельная активность превышает 1000 ГБк/мкмоль.

4. [125I]R91150 синтез радиоиндикатора

ПРИМЕЧАНИЕ: Убедитесь, что соблюдаются те же правила безопасности, которые упомянуты в разделе синтеза CLINDE.

  1. Смешать 300 мкг предшественника R91150 в растворе 3 мкл абсолютного этанола, 3 мкл ледниковой уксусной кислоты, 15 мкл безносителя Na125I (см. Таблицу материалов) (10 мКи) в 0,05 М NaOH и 3 мкл 30%H2O2. Инкубировать в течение 30 мин в бардачке.
  2. Ввести всю реакцию в столбец обратной фазы (см. Таблицу материалов).
  3. Изолировать [125I]R91150 изократическим прогоном ВЭЖХ (ACN/вода 50/50, 10 мМ буфер уксусной кислоты) со скоростью потока 3 мл/мин.
  4. Разбавить [125I]R91150 вH2Oдля конечного объема 10 мл.
  5. Вводят 10 мл разбавленной реакции в колонку концентрации (см. Таблицу материалов).
  6. Elute [125I]R91150 из колонки с 300 мкл абсолютного этанола.
  7. Испаряют этанол, инкубируя его в вакуумной центрифуге на РТ в течение 40 мин.
  8. Разбавляют остаток, содержащий [125I]R91150 в 300 мкл физиологического раствора.
  9. Очистите индикатор с помощью ВЭЖХ. Определите время элюирования с помощью стандартной калибровки при 450 нм и изолируйте один радиоактивный пик. Установите радиохимическую чистоту, измерив один пик в радио TLC. Убедитесь, что чистота радиохимического вещества выше 98%.

5. Подготовка животных

  1. Взвешивают и обезболивают крысу TgF344-AD (самца или самку, от 2 до 24 месяцев) в индукционной камере с 3% изофлураном. После глубокого обезболивания уменьшите расход изофлурана до 2% (0,4 л/мин, 100% O2) в камере.
  2. Поместите животное на предварительно подогретую кровать, оснащенную анестезирующим носовым конусом. Поддерживают изофлуран на уровне 2% (0,4 л/мин, 100%O2).
  3. Наносить гелевую смазку для глаз в глаза животного и подтверждать глубину анестезии с помощью респираторного мониторинга; при необходимости отрегулируйте анестезию.
  4. Выполните установку катетера 24 G в хвостовую вену.

6. Приобретение ОФЭКТ

  1. Перенесите животное на камеру, оснащенную нагревательной подушкой с регулируемой температурой, установленной на 38°C (рисунок 1E).
  2. Закрепите голову животного на перекладине и закрепите опоры головы.
  3. Настройте эксперимент на 60-минутное сканирование, составляющее 60 кадров по 1 мин. Повторно используйте все остальные параметры, настроенные на шаге 1. Нажмите кнопку Обновить изображение , чтобы обновить положение животного.
  4. Установите область сканирования, переместив курсоры с помощью трех изображений в нижней части экрана для трех измерений.
  5. Введите 500 мкл радиоактивного радиоиндикатора ([125I]CLINDE или [125I]R91150), а затем промыть трубку 300 мкл стерильного 0,9% NaCl. Одновременно нажмите «Начать сбор», чтобы начать сканирование.
  6. Во время сканирования убедитесь, что животное находится под постоянным наркозом с контролем скорости дыхания. При необходимости отрегулируйте расход изофлурана.
  7. Как только сканирование закончится, быстро усыпите обезболенное животное путем обезглавливания.

7. Реконструкция сканирования

  1. Откройте программное обеспечение для восстановления сканирования (см. раздел Таблица материалов), а затем откройте набор данных, выполнив поиск файла [имя_файла].parameters, созданного в папке сканирования.
  2. Выберите интересующий вас изотоп. Обратите внимание, что параметр Listmode позволяет выбрать несколько изотопов на этом шаге.
  3. Выберите следующие параметры: размер вокселя 0,4 мм, 4 подмножества (POS-EM), 6 итераций (эквивалент 24ME-EM), отсутствие постфильтра и соответствующий изотоп коррекции распада. Выберите выходной формат для NIfTI, а затем выберите Начать реконструкцию ОФЭКТ .

8. Извлечение мозга крысы

  1. В том же анестезирующем мероприятии, что и процедура сканирования и после обеспечения состояния глубокой анестезии животного путем контроля его частоты дыхания, приступают к обезглавливанию гильотиной и быстро переносят голову на рассеченную скамью.
  2. Ножницами аккуратно срежьте кожу на макушке головы сзади спереди до середины глаз.
  3. Отрежьте лишние мышцы вокруг основания черепа и шейных позвонков.
  4. Далее аккуратно поместите одно лезвие ножниц в отверстие в задней части черепа, отверстие magnum, и удалите заднюю часть черепа хирургическими плоскогубцами.
  5. Затем хирургическими плоскогубцами аккуратно удаляют верхнюю часть черепа. Череп старых самцов крыс можно быть толстым, удалять как мелкие кусочки, чтобы избежать повреждения головного мозга.
  6. Аккуратно срежьте мозговые оболочки ножницами. Мозговые оболочки могут повредить мозг во время процесса экстракции; удалите его в качестве меры предосторожности.
  7. Удалив верхнюю часть черепа, поверните голову животного вокруг, и небольшим плоским шпателем осторожно вытащите мозг, перерезав зрительный и тройничный нервы.
  8. Осторожно перенесите мозг на плоскую, чистую стеклянную поверхность для рассечения на льду.
  9. Используйте плоский металлический шпатель и лезвие бритвы для рассечения областей, представляющих интерес для мозга. Поместите ткани в центрифужную трубку объемом 2 мл и взвесьте полученную ткань. Используйте секцию мозга непосредственно для выделения клеток или быстро заморозьте ее в жидком азоте для последующего использования.

9. Изоляция клеток

  1. Убедитесь, что вы работаете в чистой и стерильной среде. Рекомендуется работать в кабинете биобезопасности класса II (BSC). Убедитесь, что перчатки и каждое оборудование, введенное в BSC, стерильны.
  2. Чтобы подготовить ячейки к сортировке клеток, следуйте протоколу Jaclyn M. Schwarz14.
    ПРИМЕЧАНИЕ: В этом эксперименте для подготовки клеток использовался коммерчески доступный набор нейронной диссоциации (см. Таблицу материалов).
    1. Поместите образцы в центрифужную трубку объемом 2 мл с 1 мл HBSS (без Ca- и Mg), а затем центрифугу (300 х г, 2 мин, комнатная температура = RT) и удалите супернатант, не нарушая гранулу.
    2. Добавляют 1900 мкл ферментной смеси-1 и инкубируют ее в течение 15 мин при 37 °C, перемешивая пробирки путем инверсии каждые 5 мин.
    3. Добавьте 30 мкл смеси ферментов-2, осторожно перемешайте пипеткой 1 (см. Таблицу материалов) вперед и назад 30 раз. Затем инкубируют в течение 15 мин при 37 °C, перемешивая пробирки путем инверсии каждые 5 мин.
    4. Осторожно смешайте взад и вперед с пипеткой 2, а затем пипеткой 3 перед инкубацией в течение 10 мин при 37 °C для диссоциации тканей.
    5. Отфильтруйте клетки с помощью клеточного ситечка 80 мкм, добавьте 10 мл HBSS (без Ca- и Mg). Центрифугу (300 х г, 10 мин, RT) и удалить супернатант, не нарушая гранулу.
    6. Для истощения миелина повторно суспендируют гранулу с 400 мкл буфера удаления миелина (см. Таблицу материалов), а затем добавляют 100 мкл шариков для удаления миелина (см. Таблицу материалов) перед инкубацией в течение 15 мин при 4 °C.
    7. Добавьте 5 мл буфера для удаления миелина, центрифугу (300 х г, 10 мин, RT) и удалите супернатант, не нарушая гранулу.
    8. Добавьте 500 мкл буфера для удаления миелина и поместите трубку в столб магнитного поля. Промойте колонку 1 мл буфера для удаления миелина четыре раза.
    9. Центрифуга (300 х г, 2 мин, RT) и удалить супернатант, не нарушая гранулу. Вихрь ненадолго (2 с) для диссоциации клеток и добавления 5 мкл Fc блока CD32. Снова вихрь и инкубировать в течение 5 мин при 4 °C.
    10. Добавьте 100 мкл смеси первичных антител, представляющих интерес; инкубировать в течение 20 мин при 4 °C.
    11. Центрифугу (350 х г, 5 мин, 4 °C) и удаляют супернатант, не нарушая гранулу. Промокните трубки вверх ногами на мягкой бумаге.
    12. После короткого вихря (2 с) добавляют 100 мкл смеси вторичных антител и инкубируют в течение 15 мин при 4 °C.
    13. Добавьте 2 мл буфера для удаления миелина, центрифугу (350 х г, 5 мин, 4 °C) и удалите супернатант, не нарушая гранулу. Промокните трубки вверх ногами на мягкой бумаге. Повторно суспендируйте клетки в 250 мкл стерильного PBS и приступайте непосредственно к сортировке клеток.

10. Сортировка ячеек

  1. Подготовьте микрофьюжную трубку с 500 мкл стерильной PBS для сбора отсортированных клеток.
  2. Добавьте 10 мкл Hoechst на 1000 мкл клеточного раствора, чтобы окрасить ядра живых клеток и отличить их от мертвых клеток.
  3. Как можно скорее перенесите ячейки в сортировочную машину при 4 °C.
  4. Сначала отсортируйте ячейки по прямому и боковому рассеянию, а затем отсортируйте положительные клетки Hoechst. Затем отсортируйте клетки на основе интересующих антител. Соберите положительно окрашенные клетки по отдельности. Обязательно отличайте положительные клетки от автофлуоресцентных.
  5. Подсчитайте количество отсортированных ячеек для каждого интересующего пула.

11. Гамма-счет

  1. Откалибруйте систему подсчета γ с 10 мкл того же фантомного раствора, который использовался для калибровки ОФЭКТ, но разбавьте его в 1 мл воды.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Фантомный раствор разбавляется из-за повышенной точности системы подсчета γ.
  2. Поместите трубку из отсортированных ячеек в систему подсчета γ и приступайте к подсчету γ в соответствии с протоколом производителя.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Крысы WT испытали in vivo SPECT сканирование с помощью радиоиндикатора [125I]CLINDE после односторонней инъекции LPS (рисунок 2). Это сканирование (с использованием суммированных данных из изображений 45-60 мин после инъекции радиоиндикатора) показало более высокое связывание [125I]CLINDE в месте инъекции LPS (рисунок 2A), чем в контралатеральной области мозга (рисунок 2B). Образцы ex vivo , к...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Насколько нам известно, этот метод был первым, который описал подход, который позволяет лучше понять изменения связывания in vivo радиоиндикатора на клеточном уровне. Протокол описывает многомасштабный метод количественной оценки связывания радиоиндикатора на клеточном уровне с использованием [125I]CLINDE (TSPO) или [125I]R91150 (5HT2AR) в качестве примеров.

Этот метод является надежным и достаточно чувствительным, чтобы точно обнаружить клеточное прои...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Благодарности

Эта работа была поддержана Швейцарским национальным научным фондом (грант No 320030-184713). Авторы ББТ и КС поддерживаются Фондом Velux (проект No 1123). Автор ST получил поддержку от Швейцарского национального научного фонда (Early Post-Doc Mobility Scholarship, no. P2GEP3_191446), Фонд профессора доктора Макса Клоэтты (стипендия Clinical Medicine Plus) и Фонд Жана и Мадлен Вашу.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Уксусная кислотаSigma-Aldrich
АцетонитрилSigma-Aldrich
BioVet BioVetПрограммное обеспечение для проверки жизненно важных функций
Bondclone C18 реверсивная фазовая колонкаPhenomenex, Шлирен, Швейцария
Университетская клиникаДе-СюрVirucide
Fc Block / anti-CD32BD BiosciencesBDB550270Реакционная способность для крыс
FITC-конъюгированный антикрысиный CD90Biolegend202504Реакционная способность для крыс
ГепаринB. BraunB01AB01
ВЭЖХKnauer
Insyte-W 24 GA 0,75 IN 0,7 x 19 ммBD Biosciences321312катетер 24 G
IsofluraneBaxterZDG9623
LacryviscAlcon2160699
LS КолонныMiltenyi Biotec130-042-401
MACS MultiStandMiltenyi Biotec130-042-303
Микропористая мягкая лента3MF51DA01
MILabs-Uspect IIMILabsПрограммное обеспечение для камеры SPECT
MoFlo AstriosBeckman CoulterСортировщик клеток
Шарики для удаления миелина IIMiltenyi Biotec130-096-733Содержит гранулы и буфер для удаления миелина.
NaCl 0,9% Стерильный растворB. Braun395202
Набор для нейронной диссоциации (P)Miltenyi Biotec130-092-628Содержит ферментные смеси, пипетки 1, 2 и 3.
Нейлоновая сетка ЛистAmazonCMN-0074-10YDширина 40 дюймов, размер ячейки 80 микрон
Надуксусная кислотаSigma-Aldrich
QuadroMACS SeparatorMiltenyi Biotec130-090-976
R91150 pré курсорCERMN
Sep-Pak C18 КолоннаВодаКонцентрационная колонка
Йодид натрия Na125PerkinElmer
Предшественник трибутилинаCERMN
U-SPECT Rec2.38cMILabsVersion Rec2.38cПрограммное обеспечение для реконструкции изображений ОФЭКТ
USPECT IIMILabsSpect Camera
Wizard 3"PerkinElmerГамма-счетчик
Женева

Ссылки

  1. Nichols, E., et al. regional, and national burden of Alzheimer's disease and other dementias, 1990-2016: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2016. The Lancet Neurology. 18 (1), 88-106 (2019).
  2. Kinney, J. W., et al. Inflammation as a central mechanism in Alzheimer's disease. Alzheimer's & Dementia. 4, New York, N. Y. 575-590 (2018).
  3. D'Amelio, M., Puglisi-Allegra, S., Mercuri, N. The role of dopaminergic midbrain in Alzheimer's disease: Translating basic science into clinical practice. Pharmacological Research. 130, 414-419 (2018).
  4. D'Amelio, M., Serra, L., Bozzali, M. Ventral tegmental area in prodromal Alzheimer's disease: Bridging the gap between mice and humans. Journal of Alzheimer's Disease: JAD. 63 (1), 181-183 (2018).
  5. Cohen, R. M., et al. A transgenic Alzheimer rat with plaques, tau pathology, behavioral impairment, oligomeric aβ, and frank neuronal loss. The Journal of Neuroscience: The Official Journal of the Society for Neuroscience. 33 (15), 6245-6256 (2013).
  6. Morrone, C. D., et al. Regional differences in Alzheimer's disease pathology confound behavioural rescue after amyloid-β attenuation. Brain: A Journal of Neurology. 143 (1), 359-373 (2020).
  7. Berkowitz, L. E., Harvey, R. E., Drake, E., Thompson, S. M., Clark, B. J. Progressive impairment of directional and spatially precise trajectories by TgF344-Alzheimer's disease rats in the Morris Water Task. Scientific Reports. 8 (1), 16153(2018).
  8. Koulousakis, P., vanden Hove, D., Visser-Vandewalle, V., Sesia, T. Cognitive improvements after intermittent deep brain stimulation of the nucleus basalis of meynert in a transgenic rat model for Alzheimer's disease: A preliminary approach. Journal of Alzheimer's Disease: JAD. 73 (2), 461-466 (2020).
  9. Tournier, B. B., et al. Spatial reference learning deficits in absence of dysfunctional working memory in the TgF344-AD rat model of Alzheimer's disease. Genes, Brain, and Behavior. , 12712(2020).
  10. Tournier, B. B., Tsartsalis, S., Ceyzériat, K., Garibotto, V., Millet, P. In vivo TSPO signal and neuroinflammation in Alzheimer's disease. Cells. 9 (9), (2020).
  11. Backes, H. [11C]raclopride and extrastriatal binding to D2/3 receptors. NeuroImage. 207, 116346(2020).
  12. Millet, P., et al. Quantification of dopamine D(2/3) receptors in rat brain using factor analysis corrected [18F]Fallypride images. NeuroImage. 62 (3), 1455-1468 (2012).
  13. Tsartsalis, S., et al. A modified simplified reference tissue model for the quantification of dopamine D2/3 receptors with [18F]Fallypride images. Molecular Imaging. 13 (8), (2014).
  14. Schwarz, J. M. Using fluorescence-activated cell sorting to examine cell-type-specific gene expression in rat brain tissue. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (99), e52537(2015).
  15. Tournier, B. B., et al. Fluorescence-activated cell sorting to reveal the cell origin of radioligand binding. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 40 (6), 1242-1255 (2020).
  16. Tournier, B. B., et al. Astrocytic TSPO upregulation appears before microglial TSPO in Alzheimer's disease. Journal of Alzheimer's Disease: JAD. 77 (3), 1043-1056 (2020).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

TSPOTgF344 AD5HT2A

Похожие статьи