Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Полуцелевая сверхвысокоэффективная хроматография в сочетании с масс-спектрометрическим анализом фенольных метаболитов в плазме пожилых людей

3.7K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/63164

⸱

22 апреля 2022 г.

 ,  ,  ,  , 
1Department of Chemical Biological Sciences, Universidad Autónoma de Ciudad Juárez

В этой статье

Краткое содержание

Целью данного протокола является обнаружение фенольных метаболитов в плазме с помощью полуцелевого метода хроматографии-масс-спектрометрии.

Аннотация

Группе из 23 пожилых людей давали функциональное питание (напиток и кекс), специально разработанное для профилактики саркопении (возрастной потери мышечной массы). Образцы плазмы брали в начале вмешательства и через 30 дней употребления функциональных приемов пищи. Для выявления фенольных соединений и их метаболитов была проведена полуцелевая ультравысокоэффективная хроматография в сочетании с анализом тандемной массы (UPLC-MS/MS). Белки плазмы осаждали этанолом, а образцы концентрировали и повторно суспендировали в подвижной фазе (1:1 ацетонитрил: вода) перед инъекцией в инструмент UPLC-MS/MS. Разделение проводили с помощью реверсивной фазовой колонны C18 , и соединения идентифицировали с использованием их экспериментальной массы, изотопного распределения и структуры фрагментов. Интересующие соединения сравнивались с соединениями банков данных и внутренней полуцелевой библиотеки. Предварительные результаты показали, что основными метаболитами, выявленными после вмешательства, были фенилуксусная кислота, глицитин, 3-гидроксифенилвалеровая кислота и гомизин М2.

Введение

Саркопения является прогрессирующим скелетным расстройством, связанным с ускоренной потерей мышц у пожилого населения. Такое состояние увеличивает риск падений и приводит к ограниченной деятельности повседневной жизни. Саркопения присутствует примерно у 5-10% лиц старше 65 лет и около 50% лиц в возрасте 80 лет и старше1. Для лечения саркопении не было одобрено никаких специфических препаратов, поэтому важна профилактика с физической активностью и сбалансированной диетой1,2. Питательные вмешательства со специально разработанными продуктами, обогащенными молочным белком и незаменимыми аминокислотами, показали положительные результаты в предотвращении саркопении2. В других исследованиях авторы включили в рацион витамины и антиоксиданты, такие как витамин Е и изофлавоны, увеличивая преимущества для увеличения мышечной массы на талии и бедрах3.

Brosimum alicastrum Sw. (Ramón) — дерево, произрастающее в мексиканских тропических регионах; он потребляется культурами майя из-за его высокой питательной ценности4. Это хороший источник белка, клетчатки, минералов и фенольных антиоксидантов, таких как хлорогеновая кислота5. Поскольку его можно измельчать в порошок и использовать в хлебобулочных изделиях или потреблять в напитках, недавние исследования оценили включение семенной муки Рамона (RSF) в различные продукты для улучшения их питательной ценности. Был разработан напиток со вкусом капучино, дополненный RSF, который был с высоким содержанием пищевых волокон и содержал более 6 г белка на порцию и был высоко принят потребителями; таким образом, он рассматривался в качестве потенциальной альтернативы для удовлетворения особых диетических требований6. В последующем исследовании RSF также использовался для приготовления кекса и нового напитка, богатого белком, пищевыми волокнами, микроэлементами и фенольными антиоксидантами. Кекс и напиток использовались в диетическом вмешательстве для пожилых людей, которые потребляли оба продукта два раза в день в течение 30 дней. После этого периода улучшился питательный и саркопенический статус участников, а общее фенольное содержание в плазме увеличилось7. Однако определение общих фенольных соединений в плазме проводили спектрофотометрическим методом, поэтому идентификация фактических фенольных соединений, которые были поглощены, была невозможна; более того, этот метод не является полностью специфичным для фенольных соединений, поэтому может произойти некоторое завышение8.

Идентификация и количественная оценка фенольных соединений, которые всасываются после потребления продуктов, богатых этими антиоксидантами, является сложной задачей, но необходима для демонстрации биологической активности этих фитохимических веществ. Биодоступность большинства фенольных соединений низкая; менее 5% из них можно обнаружить без структурной трансформации в плазме. Фенольные соединения подвергаются нескольким биотрансформациям, таким как метилирование, сульфирование или глюкуронизация, которые осуществляются энтероцитами и гепатоцитами9. Фенольные соединения также биотрансформируются микробиотой в бактериальные катаболиты, которые могут оказывать свое благотворное влияние на организм после всасывания в плазму10. Например, фенилуксусная кислота является продуктом бактериальной трансформации флавоноидов и олигомерных проантоцианидинов, которые могут ингибировать до 40% адгезии бактерий (Escherichia coli) в мочевыводящих путях после потребления клюквы11.

Структурное разнообразие встречающихся в природе фенольных соединений, в сочетании с разнообразием их метаболитов и их низкой биодоступностью, делает их идентификацию в плазме еще более сложной. Метаболомное профилирование с использованием платформ спектроскопического анализа, таких как ядерный магнитный резонанс (ЯМР) и тандемная масс-спектроскопия (MS / MS), вероятно, является лучшим подходом для достижения этой цели; к сожалению, оборудование не является легкодоступным, а разработка протоколов анализа по-прежнему ограничена12. В нескольких исследованиях сообщалось о РС / МС в сочетании с системой разделения (такой как жидкостная хроматография) в качестве стратегии снижения сложности масс-спектров в метаболомических исследованиях. Недавнее внедрение методов разделения сверхвысокопроизводительной жидкостной хроматографии (UPLC) сократило время анализа и повысило разрешение и чувствительность по сравнению с обычными высокопроизводительными жидкостными протоколами, поэтому системы UPLC-MS/MS быстро получили широкое признание сообщества аналитической метаболомики13. Таким образом, некоторые исследования исследовали фенольные метаболиты и обнаружили глюкуронизированные производные из кофейной кислоты, кверцетина и феруловой кислоты, а также сульфированные производные из сиринговой и ванильной кислоты в плазме лиц после приема клюквы14. Предыдущие протоколы предназначались для поиска фенольных соединений и фенольных метаболитов в биожидкостях, таких как плазма. Эти протоколы были основаны на идентификации и количественной оценке с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), соединенной с УФ-ви-детектором15. Тем не менее, такие протоколы требуют использования аутентичных стандартов для оценки абсолютной идентификации и точной количественной оценки. Широкий круг исследований выявил наиболее распространенные метаболиты в биожидкостях (сульфированные, глюкуронизированные и метилированные формы) UPLC-MS и UPLC-MS/MS; однако большая часть бактериальных метаболитов не была зарегистрирована из-за отсутствия баз данных, содержащих их полную информацию16. Идентификация метаболитов осложняется стоимостью и коммерческой доступностью стандартов метаболитов. Поэтому наилучшей стратегией может быть нецелевой или полуцелевой анализ метаболитов РС/МС, который опирается на использование информации о молекулярных признаках (m/z, моноизотопная точная масса, изотопное распределение и паттерн фрагментации) для определения химической идентичности и сравнивает ее со свободно доступными онлайн-базами данных, содержащими полифенольные метаболиты, идентифицированные в биожидкостях после потребления полиполифенол-рихттов12 . Наиболее важными базами данных, используемыми в исследованиях UPLC-MS / MS для идентификации фенольных соединений и их метаболитов, являются база данных метаболомов человека (HMDB), библиотека LipidBlast, библиотека METLIN и другие дополнительные базы данных, такие как PubChem, ChemSpider и Phenol Explorer17.

В настоящем исследовании был разработан полуцелевой метод UPLC-MS/MS для анализа образцов плазмы группы пожилых людей, участвующих в исследовании потребления кекса и напитков, содержащих RSF7. Данные из различных бесплатных онлайн-баз данных метаболитов плазмы были собраны и интегрированы в специализированную базу данных. Эта база данных может быть автоматически доступна программному обеспечению оборудования для идентификации полифенольных метаболитов в пяти образцах плазмы до и после 30-дневного вмешательства в питание. Это делается для выявления основных фенольных соединений, или их метаболитов, которые всасываются из специально разработанных функциональных продуктов, предназначенных для профилактики саркопении.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Образцы плазмы, используемые в этом протоколе, были собраны в предыдущем исследовании в соответствии со всеми этическими принципами и одобрены Комитетом по институциональной этике и биоэтике (CIEB-2018-1-37) из Автономного университета Сьюдад-Хуареса. Полный протокол экстракции и идентификации фенольных соединений и метаболитов в плазме методом UPLC-MS/MS представлен на фиг.1.

figure-protocol-1
Рисунок 1: Схематическое изображение экстракции и идентификации фенольных соединений и метаболитов в плазме полуцелевым методом UPLC-MS/MS. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

1. Пробоподготовка

  1. Храните образцы плазмы при температуре -80 °C до анализа.
  2. Разморозка образцов плазмы при комнатной температуре в течение 15 мин.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Образцы могут быть помещены на водяную баню при температуре 37 °C для ускорения процесса (5 мин).
  3. Поместите 200 мкл образца плазмы в микропробирку объемом 2 мл и смешайте с 1000 мкл чистого этанола. Вихрь образца плазмы в течение 30 с.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Всегда используйте перчатки при работе с образцами плазмы.
  4. Центрифугирование образца при 6,580 х г в течение 5 мин. После центрифугирования соберите супернатант с помощью микропипетки или пипетки Пастера и поместите его в новую микропробирку. Храните супернатант при температуре 4 °C.
  5. Смешайте гранулы с предыдущей стадии с 1000 мкл 100% этанола, вихрь в течение 30 с, а затем центрифугу при 6 580 х г в течение 5 мин.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Гранулы плотно упакованы и должны быть хорошо повторно использованы для обеспечения контакта между образцом и чистым этанолом. Рекомендуется использовать микропипетку для промывки гранул этанолом.
  6. После центрифугирования соберите супернатант и смешайте с супернатантом, ранее полученным на этапе 1.4. в микротрубке 2 мл.
  7. Удалите этанол из образца, используя чистый азот (99,997%) при 135 фунтах на квадратный дюйм. Держите иглу на расстоянии 1 см от верхней части микропробирки, чтобы предотвратить потерю образца и промывку, пока образец не высохнет. Для испарения этанола не требуется тепло.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Поток азота должен быть низким, чтобы предотвратить потерю пробы. После того, как этанол высушен, держите поток азота не менее 5 минут, чтобы обеспечить сухость образца. На этом этапе протокол может быть приостановлен; образцы должны храниться при температуре -20 °C. Не храните образцы более 12 ч.
  8. Повторно суспендируют сухие образцы в 100 мкл смеси ацетонитрила: воды в пропорции 50:50 (v:v).
  9. Отфильтруйте образец через мембрану нейлонового шприца 0,45 мкм непосредственно в микровставку флакона ВЭЖХ.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Образцы во флаконе могут храниться при температуре -20 °C перед анализом. Хранить образцы не более 8 ч. Рекомендуется вводить образцы в систему UPLC сразу после фильтрации.

2. Анализ UPLC-MS/MS

  1. Впрыскивайте 3 мкл образца в UPLC, оснащенный реверсивной колонной C18 (50 мм x 2,1 мм; 1,8 мкм). Установите температуру автопробоотборника на уровне 20 °C, а столбчатого термостата на 25 °C. Вводите каждый образец в трех экземплярах.
  2. Используйте 0,1% (v:v) муравьиной кислоты в воде в качестве растворителя А и 100% ацетонитрила в качестве растворителя В. Установите скорость потока на уровне 0,4 мл/мин и градиентную программу следующим образом: 0-1 мин 10% В, 1-4 мин 30% В, 4-6 мин 38% В, 6-8 мин 60% В, 8-8,5 мин 60% В, 8,5-9 мин 10% В (таблица 1).
  3. Установите масс-спектрометр на отрицательный режим ионизации. Используйте азот в качестве сушильного газа при 340 °C и расходе 13 л/мин. Установите давление небулайзера на уровне 60 фунтов на квадратный дюйм. Установите капиллярное напряжение на уровне 4000 В, напряжение фрагментора на 175 В и напряжение скиммера на 65 В. Используйте энергию столкновения при 20 В (таблица 2).
  4. Сканируйте массы в диапазоне от 100 до 1100 масс к заряду (м/з) и, для MS/MS, массы сканирования в диапазоне 50-1000 м/з (таблица 2). Установите сбор данных в автоматический режим MS/MS. Используйте следующую ссылочную массу: 119.036 и 966.0007.
Время (мин)Растворитель А (0,1 % муравьиной кислоты в воде ВЭЖХ)Растворитель B (100% ацетонитрил)
0 до 19010
1 до 47030
4 до 66238
6 до 84060
от 8 до 8,54060
8.5 до 99010

Таблица 1: Градиент подвижной фазы, используемый для разделения фенольных соединений по UPLC.

Режим ионизацииОтрицательная
Сушильный газАзот при 340 °C, расход 13 л/мин
Давление небулайзера60 фунтов/кв. дюйм
Капиллярное напряжение175 В
Ms сканирующие массы100-1100 м/з
Ms/MS сканирующие массы50-1000 м/з

Таблица 2: Параметры ионизации для анализа MS/MS.

3. Построение базы данных

  1. Поиск фенольных соединений, фенольных метаболитов или других соединений, представляющих интерес в научной литературе.
  2. Откройте программное обеспечение для управления базами данных, входящее в систему UPLC. Выберите | файлов Новая | составной библиотеки персональных баз данных (PCDL) Создайте новый PCDL. Выберите тип PCDL: LC/MS Metabolomics. Задайте имя для PCDL. Затем выберите Создать.
  3. На панели инструментов выберите PCDL , а затем параметр Разрешить редактирование . Затем нажмите кнопку Найти соединения .
    ПРИМЕЧАНИЕ: Поскольку это новый PCDL, результаты таблицы будут пустыми. Это изменится, как только новые соединения будут добавлены в PCDL.
    1. Добавляйте соединения в специализированную библиотеку соединений персональной базы данных, копируя их из общей библиотеки прибора. Откройте существующую базу данных инструмента, включенную в программное обеспечение для управления базами данных. Нажмите кнопку Найти составы. В параметре Одиночный поиск введите составные критерии поиска, чтобы найти интересующее соединение.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Соединения можно найти по названию, молекулярной формуле, точной массе и времени удержания.
    2. В таблице составных результатов выберите процентное соединение. Чтобы выбрать несколько соединений, щелкните первое соединение, удерживая нажатой клавишу CTRL , а затем щелкните каждое интересующее соединение. Затем щелкните правой кнопкой мыши на всех выделенных соединениях и выберите Добавить в PCDL.
    3. В новом окне найдите и выберите специализированный файл персональной базы данных. Пометьте поля Включить спектры для соединений, если они присутствуют , и Включить информацию о подвижности ионов для соединений, если они присутствуют. Нажмите кнопку Добавить . В новом диалоговом окне выберите Да , чтобы проверить добавленные новые соединения. Выберите Нет , чтобы продолжить поиск интересующих соединений.
  4. Если интересующие соединения отсутствуют в общей библиотеке прибора, добавьте новые соединения вручную.
    1. Откройте специализированную персональную базу данных. После открытия выполните шаг 3.3. Выберите параметр «Редактировать соединения ». Нажмите кнопку Добавить новый .
    2. В верхней части окна заполните информацию о новом соединении. Введите формулу, имя, имя IUPAC, номер CAS, идентификатор Chemspider и другие идентификаторы.
    3. Используйте информацию, доступную в бесплатных онлайн-библиотеках (Chemspider, PubChem и Phenol Explorer), чтобы заполнить информацию для нового интересующего соединения. По завершении нажмите кнопку Сохранить как новую , чтобы сохранить новую составную информацию в специализированной персональной базе данных.
      ПРИМЕЧАНИЕ: При добавлении информации из свободных библиотек обязательно включайте информацию о соединении без присутствия ионов хлорида или йодида. Это может изменить точную массу и молекулярную формулу интересующего соединения.
  5. Повторите процесс со всеми интересующими соединениями, чтобы заполнить специализированную персональную базу данных.

4. Анализ данных

  1. Используйте качественное управляющее программное обеспечение прибора для идентификации фенольных соединений и фенольных метаболитов, присутствующих в образцах.
  2. Откройте пример файла. На панели «Хроматограмма» выберите «Определить хроматограммы» и извлеките общую ионную хроматограмму (TIC), извлеченную ионно-хроматограмму MS (EIC) и EIC MS/MS. Выберите параметр интегрировать хроматограмму.
  3. На панели « Найти соединения » выберите « Найти по формулам-параметрам». В новом окне выберите Источник формул , а затем параметр База данных/библиотека . Найдите ранее созданную базу персональных данных и нажмите кнопку Открыть.
  4. Выберите параметр «Сопоставление формул» и установите допуск на массовое совпадение 5 частей на миллион (ppm).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Различный допуск на совпадение масс может быть установлен на уровне 10 ppm; эта разница зависит от используемого масс-спектрометра.
  5. Выберите параметр «Отрицательные ионы » и выберите только диалоговое окно -H . В параметре Результаты отметьте диалоговые окна Извлечение EIC, Извлечение очищенного спектра, Извлечение необработанного спектра и Включение структуры .
  6. Выберите параметр Фильтры результатов . Отметьте Предупредите, если счет есть , и установите счет матча на уровне 80,00%. Отметка Не совпадает, если счет есть , и установите счет на уровне 75,00%.
    ПРИМЕЧАНИЕ: При необходимости результаты совпадений и не совпадений могут быть изменены на более низкие значения. Это снизит точность идентификации.
  7. Нажмите на кнопку Найти соединения по формуле , чтобы определить соединения, представляющие интерес в образце.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Пошаговый процесс идентификации фенольных метаболитов с помощью полуцелевого анализа UPLC-MS/MS в отрицательном режиме образцов плазмы показан на рисунке 2. Во-первых, общая ионная хроматограмма (ТИЦ) из экстракта фенолов плазмы (полученная после осаждения белка из общего образца плазмы) была получена с помощью качественного программного обеспечения прибора. Затем использовали извлеченную ионную хроматограмму, а точную массу и структуру фрагментации (ms/MS анализ) каждо...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Идентификация и количественная оценка биологически активных фитохимических веществ, которые поглощаются после употребления пищи или пищевой добавки, имеют решающее значение для демонстрации и понимания пользы для здоровья этих соединений и продуктов, содержащих их. В настоящей работе был разработан метод UPLC-MS/MS, направленный только на идентификацию основных фенольных соединений и их метаболитов, увеличившихся в концентрации в плазме после 30-дневного питательного вмешательства двумя пищевыми продуктами, специально ра...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Все авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Благодарности

Авторы благодарны за финансовую поддержку со стороны CONACYT, Мексика (CB-2016-01-286449) и UACJ-PIVA (проекты 313-17-16 и 335-18-13). OAMB хотел бы поблагодарить CONACYT за его стипендию Ph.D. Мы с благодарностью благодарим техническую поддержку от офиса Multimedia Production от UACJ.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
АцетонитрилTediaAl1129-001LC Масс-спектрометрия
АвтосамплерAgilent TechnologiesG4226A1290 Infinity series
C18 обратная фазовая колонкаAgilent Technologies959757-902Zorbax Eclipse plus C18 2,1x50 мм, 1,8 μ m; Центрифуга высокого разрешения HD
Eppendorf5452000018Mini Spin; Ротор F-45-12-11
Колонный отсек с термостатомAgilent TechnologiesG1316Cсерии 1290 Infinity
(UV-Vis)Agilent TechnologiesG4212BСерия Infinity 1260
Источник ионизации электроспреяAgilent TechnologiesG3251BДвойной распылитель источник ESI
Муравьиная кислотаJ.T. Baker0128-02Реагент Baker, ACS
Mass Hunter Сбор данныхAgilent TechnologiesG3338AA
Mass Hunter Персональный компаунд Datbase и менеджер библиотекиAgilent TechnologiesG3338AA
Mass Hunter Качественный анализAgilent TechnologiesG3338AA
Микроцентрифужная пробиркаТорговаямарка BR780546Микроцентрифужная пробирка, 2 мл с крышкой
Pure этанолSigma-AldrichE7023-1L200 proof, для молекулярной биологии
Q-TOF LC/MSAgilent TechnologiesG6530B6530 Точный массовый
четвертичный насосAgilent TechnologiesG4204A1290 серии Infinity
Шприцевой фильтрThermo Scientific44514-NN17 мм, 0,45 μ m, нейлоновая мембрана
ТермостатAgilent TechnologiesG1330B1290 Бесконечная серия
ФлаконAgilent Technologies8010-0199Янтарь, PFTE красный силикон 2 мл с завинчивающейся крышкой и синими колпачками
Вкладыш для флаконовAgilent Technologies5183-2089Вкладыш для флаконов 200 μ L для стандартного отверстия 2 мл, конический
WaterTediaWL2212-001LC Масс-спектрометрия
Детектор диодной матрицы

Ссылки

  1. Morley, J. E., Anker, S. D., von Haehling, S. Prevalence, incidence, and clinical impact of sarcopenia: facts, numbers, and epidemiology-update 2014. Journal of Cachexia, Sarcopenia and Muscle. 5 (4), 253-259 (2014).
  2. Cruz-Jentoft, A. J., Sayer, A. A. Sarcopenia. The Lancet. 393 (10191), 2636-2646 (2019).
  3. Beaudart, C., et al. Nutrition and physical activity in the prevention and treatment of sarcopenia: systematic review. Osteoporosis International. 28 (6), 1817-1833 (2017).
  4. Ozer, H. K. Phenolic compositions and antioxidant activities of Maya nut (Brosimum alicastrum): Comparison with commercial nuts. International Journal of Food Properties. 20 (11), 2772-2781 (2017).
  5. Subiria-Cueto, R., et al. Brosimum alicastrum Sw. (Ramón): An alternative to improve the nutritional properties and functional potential of the wheat flour tortilla. Foods. 8 (12), 1-18 (2019).
  6. Martínez-Ruiz, N., Torres, L. E. J., del Hierro-Ochoa, J. C., Larqué-Saavedra, A. Bebida adicionada con Brosimum alicastrum sw.: Una alternativa para requerimientos dietarios especiales. Revista Salud Pública y Nutrición. 18 (3), 1-10 (2019).
  7. Rodríguez-Tadeo, A., et al. Functionality of bread and beverage added with brosimum alicastrum sw. Seed flour on the nutritional and health status of the elderly. Foods. 10 (8), 1-21 (2021).
  8. Muñoz-Bernal, ÓA., et al. Nuevo acercamiento a la interacción del reactivo de Folin-Ciocalteu con azúcares durante la cuantificación de polifenoles totales. TIP Revista Especializada en Ciencias Químico-Biológicas. 20 (2), 28-33 (2017).
  9. Luca, S. V., et al. Bioactivity of dietary polyphenols: The role of metabolites. Critical Reviews in Food Science and Nutrition. 60 (4), 626-659 (2020).
  10. Kawabata, K., Yoshioka, Y., Terao, J. Role of intestinal microbiota in the bioavailability and physiological functions of dietary polyphenols. Molecules. 24 (2), (2019).
  11. de Llano, D. G., Moreno-Arribas, M. V., Bartolomé, B. Cranberry polyphenols and prevention against urinary tract Infections: Relevant considerations. Molecules. 25 (15), (2020).
  12. Alsaleh, M., et al. Mass spectrometry: A guide for the clinician. Journal of Clinical and Experimental Hepatology. 9 (5), 597-606 (2019).
  13. Wang, X., Sun, H., Zhang, A., Wang, P., Han, Y. Ultra-performance liquid chromatography coupled to mass spectrometry as a sensitive and powerful technology for metabolomic studies. Journal of Separation Science. 34 (24), 3451-3459 (2011).
  14. Feliciano, R. P., Mills, C. E., Istas, G., Heiss, C., Rodriguez-Mateos, A. Absorption, metabolism and excretion of cranberry (poly)phenols in humans: A dose response study and assessment of inter-individual variability. Nutrients. 9 (3), (2017).
  15. Mateos, R., Goya, L., Bravo, L. Uptake and metabolism of hydroxycinnamic acids (chlorogenic, caffeic, and ferulic acids) by HepG2 cells as a model of the human liver. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 54 (23), 8724-8732 (2006).
  16. Rodriguez Lanzi,, Perdicaro, C., Antoniolli, D. J., Piccoli, A., Vazquez Prieto, M. A., Fontana, A. Phenolic metabolites in plasma and tissues of rats fed with a grape pomace extract as assessed by liquid chromatography-tandem mass spectrometry. Archives of Biochemistry and Biophysics. , 28-33 (2018).
  17. Hou, Y., He, D., Ye, L., Wang, G., Zheng, Q., Hao, H. An improved detection and identification strategy for untargeted metabolomics based on UPLC-MS. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 191, 113531(2020).
  18. Nagy, K., et al. First identification of dimethoxycinnamic acids in human plasma after coffee intake by liquid chromatography-mass spectrometry. Journal of Chromatography A. 1218 (3), 491-497 (2011).
  19. Marmet, C., Actis-Goretta, L., Renouf, M., Giuffrida, F. Quantification of phenolic acids and their methylates, glucuronides, sulfates and lactones metabolites in human plasma by LC-MS/MS after oral ingestion of soluble coffee. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 88, 617-625 (2014).
  20. McCord, J., Strynar, M. Identifying per-and polyfluorinated chemical species with a combined targeted and non-targeted-screening high-resolution mass spectrometry workflow. Journal of Visualized Experiments. 2019 (146), 1-15 (2019).
  21. Muñoz-Bernal, ÓA., et al. Phytochemical characterization and antiplatelet activity of Mexican red wines and their by-products. South African Journal of Enology and Viticulture. 42 (1), 77-90 (2021).
  22. Muñoz-Bernal, ÓA. Enriquecimiento de un vino tinto con un extracto de compuestos fenólicos provenientes de orujo de uva: bioaccesibilidad, análisis sensorial y respuesta biológica. Universidad Autónoma de Ciudad Juárez. , (2021).
  23. Low, D. Y., et al. Data sharing in PredRet for accurate prediction of retention time: Application to plant food bioactive compounds. Food Chemistry. , 357(2021).
  24. Sánchez-Patán, F., et al. Gut microbial catabolism of grape seed flavan-3-ols by human faecal microbiota. Targeted analysis of precursor compounds, intermediate metabolites and end-products. Food Chemistry. 131 (1), 337-347 (2012).
  25. Zhang, X., Sandhu, A., Edirisinghe, I., Burton-Freeman, B. M. Plasma and urinary (poly)phenolic profiles after 4-week red raspberry (Rubus idaeus L.) intake with or without fructo-oligosaccharide supplementation. Molecules. 25 (20), (2020).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

C18
Полуцелевая сверхвысокоэффективная хроматография в сочетании с масс-спектрометрическим анализом фенольных метаболитов в плазме пожилых людей
Свяжитесь с нами
Рекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

Авторские права © 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.