Эндотелий представляет собой динамическую интегрированную структуру, которая играет важную роль во многих физиологических функциях, таких как ангиогенез, гемостаз, воспаление и гомеостаз. Эндотелий также играет важную роль в патофизиологии, такой как атеросклероз, гипертония и диабет. Эндотелиальные клетки образуют внутреннюю оболочку кровеносных и лимфатических сосудов и проявляют гетерогенность в структуре и функциях. Различные группы оценивали функциональность эндотелиальных клеток, полученных из периферической крови человека, уделяя особое внимание эндотелиальным клеткам-предшественникам, полученным из гемопоэтических стволовых клеток или зрелых эндотелиальных клеток крови (или эндотелиальных колониеобразующих клеток). Эти клетки обеспечивают аутологичный ресурс для терапии и моделирования заболеваний. Ксеногенные клетки могут обеспечить альтернативный источник терапевтических средств из-за их доступности и однородности, достигаемой с помощью генетически сходных животных, выращенных в аналогичных условиях. Таким образом, был представлен надежный протокол выделения и расширения эндотелиальных клеток с высоким пролиферативным ростом крови из периферической крови свиней. Эти клетки могут быть использованы для многочисленных применений, таких как сердечно-сосудистая тканевая инженерия, клеточная терапия, моделирование заболеваний, скрининг лекарств, изучение биологии эндотелиальных клеток и совместные культуры in vitro для исследования воспалительных и коагуляционных реакций при ксенотрансплантации.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Характеристика эндотелиальных клеток разрастания крови (BOEC) из периферической крови свиней
В этой статье
Аннотация
Введение
Эндотелий представляет собой очень сложную, динамичную структуру и жизненно важный компонент сосудистой стенки. Он выстилает внутреннюю поверхность кровеносных сосудов, обеспечивая физический интерфейс между циркулирующей кровью и окружающими тканями. Известно, что эта гетерогенная структура выполняет различные функции, такие как ангиогенез, воспаление, вазорегуляция и гемостаз 1,2,3,4. Эндотелиальные клетки пупочной вены человека являются широко изученным типом клеток для оценки функциональности эндотелиальных клеток. Тем не менее, вариабел....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Все исследования на животных были одобрены соответствующими институциональными комитетами по уходу за животными и их использованию (IACUC) в Медицинском колледже Висконсина и клинике Майо.
ПРИМЕЧАНИЕ: В этом исследовании использовались домашние свиньи помеси йоркшир/ландрас/дюрок (Sus domesticus), самцы и самки, 40-80 кг, в возрасте 3-6 месяцев.
1. Забор периферической крови свиней
- Подготовьте материалы.
- Раствор гепарина развести до 100 ЕД/мл в стерильном физиологическом растворе.
- Добавьте по 3-4 мл раствора гепарина в каждую из двух конических пробирок по 50 ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Морфология культивируемых клеток наблюдалась с самого начала культивирования до наблюдения колоний BOEC (рис. 1). Меньшая популяция адгезивных клеток начала прикрепляться к чашкам для культивирования и расти, в то время как неадгезивные клетки удалялись с изменением питательной среды (рис. 1B). Колонии впервые появились на 6-й день как совокупность эндотелиальных клеток, размножающихся радиально наружу от центральной точки (рис. 1D).......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
BOEC являются мощным инструментом, который может быть использован в различных научных и терапевтических подходах 7,8,16. BOEC были использованы для анализа экспрессии гена EC для выяснения ключевых факторов, ответственных за развитие сосудистых заболеваний и рака 5,19,20,21. BOEC также использовались в.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторам раскрывать нечего.
Благодарности
Авторы хотели бы выразить признательность за финансирование со стороны NIH/NHLBI R00 HL129068.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Игла 19 г | Covidien | 1188818112 | |
| 50 мл конические пробирки | Corning | 352098 | |
| 6-луночная пластина | BD Falcon | 353046 | |
| шприцы 60 мл | Covidien | 8881560125 | |
| раствор хлорида аммония (0,8%) | Stemcell Technologies | 07850 | |
| Антибиотик/антимикотический раствор (100x) | Gibco | 15240-062 | |
| Центрифуга | Thermo Scientific | 75-253-839 | |
| Питательная среда EGM-2 | Lonza Walkersville | CC-3162 | |
| Удлинительная пробирка | Hanna Pharmaceutical Supply Co. | 03382C6227 | |
| Фетальная бычья сыворотка (FBS) | Atlas Biologicals | F-0500-A | |
| 1077 | Цитива | 17144003 | Раствор градиента плотности |
| Гепарин натрия для инъекций (1,000 единиц/мл) | Pfizer | 00069-0058-01 | |
| Фибронектин плазмы человека | Gibco | 33016-015 | |
| Ice | N/A | N/A | |
| Фосфатно-солевой буфер (PBS) | Gibco | 10010-023 | |
| Набор пипеток | Eppendorf | 2231300004 | |
| стерильной водой | Gibco | 15230-162 | |
| Тонкая пипетка | Celltreat Scientific | 229280 |
Ссылки
- Aird, W. C. Phenotypic heterogeneity of the endothelium: II. Representative vascular beds. Circulation Research. 100 (2), 174-190 (2007).
- Aird, W. C. Phenotypic heterogeneity of the endothelium: I. Structure, function, and mechanisms....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
