Заражение Caenorhabditis elegans микроспоридийным паразитом Nematocida parisii позволяет червям производить потомство, которое обладает высокой устойчивостью к одному и тому же патогену. Это пример унаследованного иммунитета, плохо изученного эпигенетического явления. Настоящий протокол описывает изучение унаследованного иммунитета в генетически податливой модели червя.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Изучение наследственного иммунитета в модели caenorhabditis elegans инфекции microsporidia
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Наследственный иммунитет описывает, как некоторые животные могут передать «память» о предыдущей инфекции своему потомству. Это может повысить устойчивость патогенов в их потомстве и способствовать выживанию. В то время как наследственный иммунитет был зарегистрирован у многих беспозвоночных, механизмы, лежащие в основе этого эпигенетического явления, в значительной степени неизвестны. Заражение Caenorhabditis elegans естественным микроспоридиевым патогеном Nematocida parisii приводит к тому, что черви производят потомство, которое устойчиво устойчиво к микроспоридиям. Настоящий протокол описывает изучение межпоколенческого иммунитета в простой и генетически поддающейся лечению модели инфекции N. parisii -C. elegans . В настоящей статье описаны методы заражения C. elegans и получения иммуно-праймированного потомства. Также приведены методы анализа устойчивости к микроспоридиозной инфекции путем окрашивания на микроспоридию и визуализации инфекции с помощью микроскопии. В частности, унаследованный иммунитет предотвращает инвазию клеток-хозяев микроспоридиями, а флуоресцентная гибридизация in situ (FISH) может быть использована для количественной оценки событий инвазии. Относительное количество спор микроспоридии, продуцируемых в иммунно-праймированном потомстве, может быть количественно определено путем окрашивания спор хитин-связывающим красителем. На сегодняшний день эти методы пролили свет на кинетику и патогенную специфичность унаследованного иммунитета, а также на молекулярные механизмы, лежащие в его основе. Эти методы, наряду с обширными инструментами, доступными для исследований C. elegans , позволят сделать важные открытия в области унаследованного иммунитета.
Введение
Наследственный иммунитет является эпигенетическим явлением, при котором родительское воздействие патогенов может обеспечить производство устойчивого к инфекции потомства. Этот тип иммунной памяти был показан у многих беспозвоночных, у которых отсутствует адаптивная иммунная система и которые могут защитить от вирусных, бактериальных и грибковых заболеваний1. В то время как унаследованный иммунитет имеет важные последствия для понимания как здоровья, так и эволюции, молекулярные механизмы, лежащие в основе этой защиты, в значительной степени неизвестны. Отчасти это связано с тем, что многие животные, у которых был описан унаследованный иммунитет....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
В настоящем исследовании используется штамм C. elegans Bristol N2 дикого типа, выращенный при 21 °C.
1. Подготовка СМИ
- Подготовка носителей M9 в соответствии с предыдущим отчетом21,22.
- Подготовьте питательную среду нематоды (NGM), как указано в предыдущем отчете 21,22. Налейте 12 мл NGM на пластину размером 6 см или 30 мл на пластину размером 10 см.
- Приготовьте штамм Escherichia coli OP50-1 согласно предыдущему отчету23.
- Подгот....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
В настоящем исследовании родительские популяции C. elegans (P0) были инфицированы на стадии L1 низкой дозой спор N. parisii . Эти инфекционные состояния обычно используются для получения большого количества микроспоридиа-резистентного потомства F1 путем отбеливания родителей. Инфицированные родительские популяции и неинфицированные контрольные группы были зафиксированы на уровне 72 hpi и окрашены DY96 для визуализации эмбрионов червей и спор микроспоридии (рисунок 1A). Инфи.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Настоящий протокол описывает изучение микроспоридии и наследственного иммунитета в простой и генетически поддающейся лечению модели инфекции N. parisii -C. elegans .
Подготовка спор представляет собой интенсивный протокол, который обычно дает достаточно спор в течение 6 месяцев экспериментов, в зависимости от продуктивности24. Важно отметить, что инфекционность должна быть определена для каждой новой споровой «партии», прежде чем использовать ее для эк.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторам нечего раскрывать.
Благодарности
Мы благодарны Винни Чжао и Инь Чэнь Вану за полезные комментарии к рукописи. Эта работа была поддержана Советом по естественным наукам и инженерным исследованиям Канады (грант No 522691522691).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Бусины из диоксида циркония 2,0 мм | Biospec Products Inc. | 11079124ZX | |
| 10 мл шприц | Fisher Scientific | 1482613 | |
| 5 μ m фильтр | Millipore Sigma | SLSV025LS | |
| Axio Imager 2 | Zeiss-Флуоресцентный микроскоп для визуализации червей, окрашенных DY96- и FISH, на предметных стеклах микроскопа | ||
| Axio Zoom V.16 Fluorescence Stereo Zoom Microscope | Zeiss-For | live imaging of flуоресцентных трансгенных животных для визуализации IPR | |
| Baked EdgeGARD Horizontal Flow Clean Bench | Baker | - | |
| Разрушитель шариков, Genie SI-D238 Analog Disruptor Genie Cell Disruptor, 120 В | Global Industrial | T9FB893150 | |
| Cell-VU слайд, Одноразовые цитометры для подсчета сперматозоидов Millennium Sciences | Fisher Scientific | DRM600 | |
| Direct Yellow 96 | Sigma-Aldrich | S472409-1G | |
| EverBrite Монтажная среда с DAPI | Biotium | 23001 | |
| Монтажная среда EverBrite без DAPI | Biotium | 23002 | |
| Fiji/ImageJ программное обеспечение | ImageJ | https://imagej.net/software/fiji/downloads | |
| Механический ротор | Thermo Sceintific | 415110 / 1834090806873 | Используется для вращения трубок обесцвеченных эмбрионов для ночного вылупления |
| зонда MicroB FISH Biosearch | Technologies Inc. | - | Синтезирован с помощью модификации Quasar 570 (Cy3) 5' и очищенной от ВЭЖХ, CTCTCGGCACTCCTTCCTG |
| N2 | Wild-type, Bristol strain | Default штамм | Caenorhabditis Genetics Center (CGC) |
| Додецилсульфат натрия (SDS) | Sigma-Aldrich | L3771-100G | |
| Раствор гидроксида натрия (5 N) | Fisher Chemical | FLSS256500 | |
| Раствор гипохлорита натрия (6% ) | Fisher Chemical | SS290-1 | |
| Stemi 508 Стереомикроскоп | Zeiss-Для | ежедневного содержания червей и подсчета червей L1 для пробирных установок | |
| Tween-20 | Sigma-Aldrich | P1379-100ML | |
| Vectashield + A16 | Biolynx | VECTH1500 |
Ссылки
- Tetreau, G., Dhinaut, J., Gourbal, B., Moret, Y. Trans-generational immune priming in invertebrates: current knowledge and future prospects. Frontiers in Immunology. 10, 1938(2019).
- Au, V., et al.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
