Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Выделение внутрилегочной артерии и гладкомышечных клеток для исследования сосудистых реакций

4.7K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/63686

⸱

8 июня 2022 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Physiology, Faculty of Medical Science and Center of Excellence for Innovation in Chemistry, Naresuan University, 2Department of Pharmaceutical Chemistry and Pharmacognosy, Faculty of Pharmaceutical Sciences, Naresuan University, 3Cosmetics and Natural Products Research Center, Faculty of Pharmaceutical Sciences, Naresuan University, 4Snyder Institute for Chronic Diseases, Airways Inflammation Research Group, Department of Physiology and Pharmacology, University of Calgary

В этой статье

Краткое содержание

Сосудистые реакции артериального легочного кровообращения могут быть изучены с использованием внутрилегочной артерии (IPA) и гладкомышечных клеток сосудов (VSMC). В настоящем исследовании подробно описывается изоляция IPA и протоколы, используемые для исследования вазорелаксации в ответ на физиологические стимулы.

Аннотация

Внутрилегочная артерия (IPA) и сосудистые гладкомышечные клетки (VSMC), выделенные из легких крыс, могут быть использованы для изучения основных механизмов сужения сосудов и вазорелаксации. После выделения IPA и VSMC характеристики сосудистых реакций при физиологических и патологических состояниях могут быть оценены при отсутствии внешних факторов, таких как нервные сигналы, гормоны, цитокины и т.д. Таким образом, IPA и VSMC служат отличными моделями для изучения сосудистой физиологии / патофизиологии, наряду с различными экспериментальными исследованиями, такими как модуляция фармакологическими агентами, электрофизиологический анализ, визуализация кальция и т. Д. Здесь мы использовали технику выделения IPA для исследования сосудистых реакций в органной ванне. Сегменты IPA были установлены на камере ванны органа через внутрипросветные провода и стимулировались различными фармакологическими средствами. Изменения сосудистого тонуса IPA (т.е. вазоконстрикция и вазорелаксация) регистрировались с помощью изометрического преобразователя силы и программного обеспечения для анализа физиологических данных. Мы внедрили несколько экспериментальных протоколов, которые могут быть адаптированы для исследования механизмов вазорелаксации/вазоконстрикции для изучения фармакологической активности фитохимических или синтетических препаратов. Протоколы также могут быть использованы для оценки роли лекарств в модуляции различных заболеваний, включая легочную артериальную гипертензию. Модель IPA позволяет исследовать кривую концентрация-реакция, которая имеет решающее значение при оценке фармакодинамических параметров лекарственных средств.

Введение

Легочная сосудистая система представляет собой сосудистую систему низкого давления, в которой основной функцией является доставка дезоксигенированной крови в газообменную область легких. Легочные артерии в легких расположены в ветвях параллельно бронхиальному дереву, в конечном итоге образуя обширную сеть капилляров, которая непрерывна над несколькими альвеолами и, наконец, собирается вместе в венулы и вены. Сосудистый тонус легочной артерии контролируется несколькими факторами, включая взаимодействие между эндотелием и гладкомышечными клетками сосудов (VSMC)1.

В этом исследовании мы фокусируемся на эндотелий-зависимой и -независимой вазорелаксации внутрилегочной артерии (IPA). Что касается эндотелий-зависимой вазорелаксации, различные механизмы, происходящие на поверхности эндотелиальных клеток, могут увеличивать внутриклеточную концентрацию Ca2+ (например, ацетилхолин [ACh] связывается с мускариновым рецептором [M3]), что приводит к образованию оксида азота (NO), простациклина (PGl2) и гиперполяризующего фактора, полученного из эндотелия (EDHF) (рисунок 1 ). NO является основным эндотелиевым расслабляющим фактором, синтезируемым из L-аргинина эндотелиальной синтазой оксида азота (eNOS)2, который затем диссоциирует из эндотелиальных клеток в VSMC (рисунок 1) и стимулирует растворимый фермент гуанилилциклазы (sGC); этот фермент превращает гуанозинтрифосфат (GTP) в циклический гуанозинмонофосфат (cGMP), который активирует протеинкиназу G (PKG) и снижает цитозольный уровень Ca2+, вызывая тем самым вазорелаксацию (рисунок 1). PGl2 синтезируется эндотелиальными клетками через циклооксигеназный (ЦОГ) путь 3,4. Он связывается с простациклиновым рецептором (IP) на VSMC и стимулирует фермент аденилилциклазу (AC), который затем превращает аденозинтрифосфат (АТФ) в циклический аденозинмонофосфат (цАМФ) (Рисунок 1)3,4. цАМФ активирует протеинкиназу А (ПКА), снижая цитозольный уровень Ca2+ и вызывая вазорелаксацию5 (рисунок 1). Путь EDHF также участвует в эндотелий-зависимой вазорелаксации через различные эндотелиальные медиаторы и электрические события. Активация пути EDHF приводит к гиперполяризации VSMC, тем самым закрывая управляемые напряжением каналы Ca2+ (ЛОСК), снижая внутриклеточные уровни Ca2+ и индуцируя вазорелаксацию6. Эндотелий-независимое вазорелаксирование происходит непосредственно на VSMC с помощью нескольких механизмов, таких как снижение внутриклеточного уровня Ca2+, ингибирование миозин-тижной киназы (MLCK), активация миозин-фосфатазы легкой цепи (MLCP) и снижение чувствительности Ca2+ к сократительному механизму VSMC. В этом исследовании мы фокусируемся на вазорелаксации, вызванной открытием различных каналов K+, блокадой ЛОСЦ и ингибированием высвобождения Ca2+ из саркоплазматического ретикулума7, что приводит к снижению внутриклеточных уровней Ca2+, тем самым уменьшая фосфорилирование легкой цепи миозина VSMC и связывание миозина или образование поперечных мостов, соответственно, в конечном итоге приводит к вазорелаксации.

Методика оценки измерений вазоконстрикции и вазорелаксации в изолированных IPA хорошо зарекомендовала себя для грызунов, но данные варьировались в зависимости от экспериментальных протоколов. В настоящем исследовании описан метод, используемый для оценки сосудистой реактивности препаратов IPA для крыс in vitro, которые были сделаны в отсутствие внешних факторов, модулирующих сосудистый ответ in vivo, таких как нервные сигналы, гормоны, цитокины, артериальное давление и т. Д.

Мы использовали несколько экспериментальных протоколов, используя растительный экстракт в качестве примера для изучения сосудистой реактивности IPA. Различные блокаторы (рисунок 1) использовали для идентификации механизмов эндотелий-зависимого и -независимого вазорелаксирования, индуцированного растительным экстрактом. Тем не менее, те же протоколы могут быть адаптированы для оценки сосудистых реакций МПА на любые препараты, экстракты или фитохимические вещества, используемые для лечения различных легочных патологий.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Эксперименты, проведенные в этом исследовании, были одобрены Комитетом по этике Комитета по уходу и использованию животных Университета Наресуан (NUACUC), номер протокола NU-AE620921, для ухода и использования животных в научных целях.

1. Состав физиологических растворов

  1. Формулируют раствор Кребса путем растворения химических веществ в дистиллированной воде для достижения конечных концентраций следующим образом: 122 мМ NaCl, 10 мМ HEPES, 5 мМ KCl, 0,5 мМ KH2PO4, 0,5 мМ NaHPO4, 1 мМ MgCl2, 1,8 мМ CaCl2 и 11 мМ глюкозы8. Отрегулируйте рН раствора до 7,3 с 1 М NaOH и разогрейте до 37 °C перед использованием.
  2. Приготовьте холодный раствор Кребса аналогично тому, как указано в шаге 1.1. для использования в качестве изоляционной среды IPA, как описано в шаге 2.

2. Изоляция внутрилегочной артерии (ИПА)

  1. Обезболить 8-недельного самца крыс Wistar внутрибрюшинной инъекцией тиопентала натрия (100 мг/кг)9. Проверьте крыс на их реакцию на болезненные раздражители в глубоком сне, используя щипцы, прижатые к их ногам, а затем убедитесь, что у крыс нет реакции отката ноги, прежде чем усыплять их на шаге 2.2.
  2. Разрезайте ножницами среднюю грудную клетку крысы и сердечную оконечность (размер 14 см). Затем расположите корень легкого ножницами (размер 14 см). Соберите все легкое, разрезав ножницами и погрузив его в холодный раствор Кребса10,11.
  3. Нарежьте ножницами одну долю легкого (размер 11 см) и положите на чашку Петри (размер 9 см) медиальной стороной/корнем легкого лицом вверх (рисунок 2A, B). Наблюдайте и идентифицируйте выравнивание вены, бронхов и артерий сверху вниз (рисунок 2B).
  4. Разрезать бронх продольно ножницами (размер 11 см). Затем используйте щипцы (размер 11 см), чтобы захватить кончик бронха. Аккуратно рассекните и удалите бронхи и вены из легкого. Обратите внимание, что IPA всегда анатомически выровнен под бронхом.
  5. После этого можно визуализировать основной МПА (рисунок 2С). Используйте щипцы (размер 11 см), чтобы схватить кончик МФА и аккуратно рассекнуть его из легочной ткани ножницами (размер 11 см).
  6. Держите изолированный IPA в холодном растворе Кребса до тех пор, пока не будет установлен органная ванна (рН 7,3 и температура 4 °C)1.

3. Выделение гладкомышечных клеток сосудов (VSMC)

  1. Изолируйте IPA, как описано ранее в шаге 2. Разрезать ножницами основную ветвь МПА продольно (размер 11 см) и разрезать небольшими полосками (2 мм) (рисунок 3А).
  2. Погрузить полоски IPA в диссоциационную среду (DM)10,12, содержащую 110 мМ NaCl, 5 мМ KCl, 0,5 мМ KH2PO4, 0,5 мМ2PO4, 10 мМ NaHCO3, 10 мМ HEPES, 0,03 мМ фенола красного, 10 мМ таурина, 0,5 мМ ЭДТА, 2 мМ MgCl2, 11 мМ глюкозы и 0,16 мМ CaCl2, и отрегулируйте pH до 7,0 с 1 М NaOH. Инкубируют полоски в течение 1 ч при 4 °C в СД, содержащие 1 мг/мл папаина, 0,04% бычьего сывороточного альбумина (BSA) и 0,4 мМ 1,4-дитиотрейтола (DTT), и далее инкубируют при 37 °C в течение 15 мин. Добавляют 1 мг/мл коллагеназы типа 1А в СД и далее инкубируют при 37 °C в течение 5 мин.
    ПРИМЕЧАНИЕ: DM - это раствор, используемый для сохранения жизнеспособности клеток. Папаин и коллагеназа типа 1А являются ферментами, которые расщепляют белки внеклеточного матрикса для выделения отдельных клеток. BSA представляет собой сывороточный альбуминовый белок, используемый для стабилизации ферментов во время хранения и ферментативных реакций. DTT является восстановителем, используемым для стабилизации и стимулирования активности ферментов во время процесса выделения клеток. Таурин - это аминосерная кислота, используемая для стабилизации клеточной мембраны и целостности клеток.
  3. Переведите ткани в свежий DM и рассейте путем мягкой тритурации с использованием стеклянной пипетки Пастера (рисунок 3B). Продолжайте тритурацию до тех пор, пока изолированные VSMC не станут видимыми в растворе для купания под микроскопом (рисунок 3C).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Свежеизолированные VSMC могут быть использованы для изучения сосудистой физиологии / патофизиологии, наряду с различными экспериментальными исследованиями, такими как модуляция фармакологическими агентами, электрофизиологический анализ, визуализация кальция и т. Д. Однако настоящее исследование фокусируется только на вазорелаксации изолированного IPA с использованием техники органной ванны.

4. Техника органной ванны

  1. Изолируйте IPA, как описано ранее в шаге 2. Вырежьте основную ветвь МПА на кольца длиной ~2 мм (рисунок 2D)13.
  2. Прикрепите кольца IPA в камеры органной ванны (рисунок 4), нанизав их на две проволоки из нержавеющей стали диаметром 40 мкм (рисунок 2E)11,13,14.
  3. Прикрепите провода из нержавеющей стали, установленные с кольцами IPA, к изометрическим силовым преобразователям, подключенным к устройству сбора данных и компьютерной системе, установленной с помощью подходящего физиологического программного обеспечения для записи и анализа данных, затем осторожно поднимите напряжение кольца IPA до 1 g11.
  4. Дайте сегментам сосуда уравновеситься в течение примерно 45 мин при напряжении покоя 1 г. В течение периода уравновешивания следите за тем, чтобы раствор Кребса регулярно менялся каждые 15 минут. После этого периода равновесия проверьте жизнеспособность сосудов, измерив их вазоконстрикцию до высококлеточного раствора K+ (80 мМ), содержащего 47,4 мМ NaCl, 80 мМ KCl, 10 мМ HEPES, 0,5 мМ KH2PO4, 0,5 мМ NaHPO4, 1,8 мМ CaCl2, 1 мМ MgCl2 и 11 мМ глюкозы10,11.
  5. Оценить наличие или отсутствие эндотелия путем вычисления реакции релаксации на ацетилхолин (1 х 10−5 М) в кольцах, предварительно сжатых фенилэфрином (ПЭ, 1 х 10−5 М) (обратите внимание, что сосудистые сокращения остаются стабильными в течение 1 ч после добавления ПЭ). Рассматривайте кольца как неповрежденные эндотелии, если они количественно оценивают более 70% релаксации (рисунок 5A). Если они имеют менее 10% расслабления, рассматривайте кольца как эндотелийно-оголенные13 (рисунок 5B). Механически удалите эндотелий, аккуратно втирая внутрь сосуда небольшой проволокой, чтобы вызвать денудацию.
  6. Снова уравновешивают артериальные кольца за 30 мин до начала тестовых экспериментов.

5. Реакция вазорелаксанта на растительный экстракт

  1. Исследуйте релаксирующий эффект растительного экстракта путем предварительного согласования колец IPA с ПЭ (1 х 10−5 М).
  2. Затем осторожно добавляют растительный экстракт (1-1000 мкг/мл) кумулятивно к эндотелий-интактным кольцам и эндотелий-оголенным кольцам, чтобы вызвать вазорелаксацию (рисунок 6A, B) и получить концентрационно-зависимую кривую ответа (рисунок 6C).
  3. Убедитесь, что эффект диметилсульфоксида (ДМСО), используемого в качестве растворителя, также оценивается аналогичным образом, чтобы служить отрицательным контролем (рисунок 6C).

6. Механизм вазорелаксации, вызванной растительным экстрактом, через эндотелий

  1. Оценить вазорелаксантный механизм действия растительного экстракта через эндотелиальную синтазу оксида азота (eNOS), циклооксигеназу (COX)13 и пути гиперполяризующего фактора, полученного из эндотелия (EDHF), путем инкубации эндотелий-интактных IPA-колец в течение 30 мин со следующими ингибиторами (рисунок 7A): 1 x 10−4 M NG-нитро-L-аргининовый метиловый эфир (L-NAME, ингибитор eNOS)9, 1 x 10−5 M индометацин (ингибитор ЦОГ)9, или комбинацию 1 х 10−7 М апамина (небольшой блокатор калиевых каналов, активированный кальцием) и 1 х 10−7 М харибдотоксина (блокатор калиевых каналов с промежуточной и повышенной проводимостью, активированный кальцием), до индуцирования сокращений МФА с 1 х 10−5 М ПЭ.
  2. Затем, после того, как сокращения стабилизируют ПЭ, добавляют кумулятивные концентрации (0,1-1000 мкг/мл) растительного экстракта.
  3. Представить эффекты растительного экстракта в виде процентного расслабления колец МФА в присутствии ингибиторов по сравнению с реакцией колец МФА без ингибиторов (рисунок 7B-D) и построить кривую концентрация-реакция.

7. Механизм вазорелаксации, вызванной растительным экстрактом, через каналы K+ гладкой мускулатуры сосудов

  1. Предварительно инкубированные эндотелий-оголенные IPA кольца в течение 30 мин с 1 х 10−3 М 4-аминопиридином (4-АП), блокатором калиевого канала с напряжением (КВ) (Рисунок 8А), 1 х 10−5 М глибенкламида, блокатором АТФ-чувствительного калиевого канала (КАТФ), или 1 х 10−7 М ибериотоксина, блокатора большой проводимости Ca2+-активированных K+ каналов (KCa), до индуцирования сокращений МПА с 1 х 10−5 М ПЭ.
  2. Затем добавьте кумулятивные концентрации растительного экстракта.
  3. Представить эффекты растительного экстракта в виде процентного расслабления колец МФА с ингибитором по сравнению с кольцами МФА без ингибитора (рисунок 8B-D) и построить кривую концентрация-реакция.

8. Механизм вазорелаксации, индуцированной растительным экстрактом, путем ингибирования притока внеклеточного кальция (Ca2+) в VSMC

  1. Предварительно инкубированные кольца IPA с эндотелием в течение 30 мин в ca2+-свободном растворе Кребса, содержащем 1 мМ этиленгликоля-биса (2-аминоэтилетра)-N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты (EGTA) (Рисунок 9A).
  2. Затем замените раствор для купания раствором Ca2+ free-80 mM K+ в течение 10 мин для деполяризации VSMC, которые затем открывают ЛОСК (рисунок 9А).
  3. Кумулятивно добавляютCaCl2 (0,01-10 мМ), чтобы индуцировать вазоконстрикцию МПА и строят кривую концентрация-реакция (рисунок 9А).
  4. Повторите этот протокол в тех же кольцах IPA, но предварительно инкубируйте их растительным экстрактом или 1 мкМ никардипина (блокатор каналов L-типа Ca2+ ) в Ca2+ , содержащем 80 мМ K+ раствор в течение 10 мин с последующим кумулятивным добавлением CaCl28.
  5. Наконец, сравните сократительную реакцию с максимальным сокращением, ранее вызванным контрольными вызовами CaCl2 (рисунок 9B).

9. Механизм вазорелаксации, вызванной растительным экстрактом, путем ингибирования внутриклеточного высвобождения кальция (Ca2+) из саркоплазматического ретикулума (SR)

  1. Подвергайте эндотелиевые кольца IPA воздействию 80 мМ раствора K+ в течение приблизительно 5 мин, деполяризуя VSMC, открывая ЛОСЦ и в конечном итоге генерируя нагрузку Ca2+ в SR (рисунок 10A).
  2. Замените раствор для купания на 10 мин раствором Кребса без Ca2+, содержащим 1 мМ EGTA (рисунок 10A).
  3. Затем бросьте вызов кольцам IPA с 1 x 10−5 M PE, которые активируют путь фосфолипазы C/IP3 , в конечном итоге высвобождая Ca2+ из SR и вызывая переходное сокращение IPA (рисунок 10A).
  4. Повторите тот же протокол, чтобы установить аналогичные переходные схватки с ПЭ.
  5. Снова испытайте кольца IPA раствором K+ 80 мМ в течение примерно 5 минут, затем замените раствор для купания раствором Кребса без Ca2+, содержащим 1 мМ EGTA с растительным экстрактом или без него в течение 10 минут.
  6. Опять же, бросьте вызов кольцам IPA с 1 x 10−5 M PE.
  7. Сравните сокращения IPA, индуцированные ПЭ, между состоянием с растительным экстрактом и без него (рисунок 10B).

10. Статистический анализ

  1. Выразите результаты как среднее ± SEM. Сравните эти значения с помощью t-теста студента или проанализируйте с помощью дисперсионного анализа (ANOVA), за которым следует пост-специальный тест Туки-Крамера с использованием подходящего статистического программного обеспечения. Считать различия при p < 0,05 статистически значимыми. Здесь было n = 6 крыс/экспериментальный протокол.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Запись вазоконстрикции и вазорелаксации может быть оценена с помощью соответствующего программного обеспечения, установленного на компьютере. Например, рисунок 5А показывает, что, когда кровеносные сосуды стимулируются ПЭ, вызывающим сокращение, это можно наблюдать по повышенному напряжению первоначального отслеживания. Трассировка стабилизируется через 20-30 мин, что считается 100% сокращением. После этого ACh стимулирует кровеносные сосуды, вызывая расслабление, которое можно было наблюдать от снижения напряжения исходного отслеживания. Таким образом, пониженное напряжение рассчитывается как процент по сравнению со 100% сокращением.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Протокол в настоящем исследовании разработан для определения оптимальных экспериментальных условий измерения физиологических явлений, наблюдаемых в сосудистых реакциях изолированных препаратов МПА. Пилотные эксперименты были проведены для описания потенциальных результатов, которые помогают понять сосудистые эффекты и механистическую основу вазорелаксантного действия растительного экстракта, следующим образом.

Вазорелаксантное действие растительного экстракта
Как показано <...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

В этой рукописи мы описываем технику выделения крыс iPA и VSMC. Несколько экспериментальных протоколов были использованы для исследования сосудистого ответа IPA in vitro, который может быть использован для характеристики фармакологического эффекта и механистической основы вазорелаксации IPA, вызванной растительным экстрактом.

Что касается эндотелий-зависимого сосудорасширяющего действия растительного экстракта, были использованы различные блокаторы, такие как L-NAME (eNOS), индометаци...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Авторы хотели бы поблагодарить Национальный исследовательский совет Таиланда, Центр передового опыта по инновациям в химии (PERCH-CIC) и Международную исследовательскую сеть (IRN61W0005) за предоставление финансовой поддержки, а также Факультет физиологии факультета медицинских наук Университета Наресуан за поддержку исследовательского центра.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
1,4-дитиотреитол (DTT)Sigma-AldrichD0632
CAS NO 348-12-3
4-аминопиридин (4-AP)Aldrich ChemicalA78403
CAS NO 504-24-5
АцетилхолинSigma-AldrichA6625
CAS NO 60-31-1
ApaminSigma-AldrichA9459
CAS NO 24345-16-2
Бычий сывороточный альбумин (БСА)Sigma-AldrichA2153
CAS NO 9048-46-8
Хорид кальцияAjax FinechemAJA960
CAS NO 1707055184
ХарибдотоксинSigma-AldrichC7802
CAS NO 95751-30-7
Коллагеназа типа 1ASigma-AldrichC9891
CAS NO 9001-12-1		Из Clostridium histolyticum
D(+)- Моногидрат глюкозыMillipore CorporationK50876942 924
CAS NO 14431-43-7
Диметилсульфоксид (ДМСО)Sigma-AldrichD4540
CAS NO 67-68-5
Этиленгликоль-бис (2-аминоэтиловый эфир)-N,N,N',N'-тетрауксусная кислота (EGTA)Sigma-AldrichE3889
CAS NO 67-42-5
Этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА)Sigma-AldrichE9884
CAS NO 60-00-4
Щипцы 11 см.Нержавеющий думоксель-щипцы
14 см.Нержавеющий Dumoxel-Glibenclamide
Sigma-AldrichG6039
CAS NO. 16673-34-0
GraphPad Prism programSoftware version 5.0 (San Diego, CA, США)
HEPESSigma-AldrichH3375
CAS NO 7365-45-9
IberiotoxinSigma-AldrichI5904
CAS NO 1002546960		рекомбинантный из Mesobuthus tamulus
IndomethacinSigma-AldrichI7378
CAS NO. 53-86-1
Labchart ProgramSoftware version 7.0 (A.D. Instrument, Castle Hill, Australia).
Хлорид магнияAjax Finechem296
CAS NO 1506254995
Самцы крысWistar Nomura Siam International Co. Ltd., Бангкок, Таиланд
NG-нитро-L-аргинин метиловый эфир (L-NAME)Sigma-AldrichN5751
CAS NO 51298-62-5
NicardipineSigma-AldrichN7510
CAS NO 54527-84-3
Органная ванна 15 мл.--Специальныйзаказ исследователей
PapainSigma-AldrichP4762
CAS NO. 9001-73-4		FromPapaya Latex
Phenal redSigma-AldrichP5530
CAS NO 34487-61-1
ФенилэфринSigma-AldrichP6126
CAS NO. 61-76-7
Хлорид калияKemausKA383
CAS NO. 7447-40-7
Дигидрогенфосфат калияAldrich ChemicalEC231-913-4
CAS NO 7778-77-0
S+A2:E36odium хлоридKemausKA465
CAS NO 7647-14-5
Ножницы 11 см.Ножницы из нержавеющей стали
14 см.Откол Нержавеющий
бикарбонат натрияAjax Finechem475
CAS NO 912466
Дигидрогенфосфатнатрия Aldrich Chemical33,198-8
CAS NO 7558-80-7
Гидроксид натрияAjax Finechem482
CAS NO 1506196602
Тиопентал натрияAnesthalJPN3010002
CAS NO 1C 314/47
Taurine Sigma-AldrichT0625
CAS NO. 107-35-7
Waterbath WBU 45Memmert2766
CAS NO. -

Ссылки

  1. Lyle, M. A., Davis, J. P., Brozovich, F. V. Regulation of pulmonary vascular smooth muscle contractility in pulmonary arterial hypertension: Implications for therapy. Frontiers in Physiology. 8, 614(2017).
  2. Cyr, A. R., Huckaby, L. V., Shiva, S. S., Zuckerbraun, B. S. Nitric oxide and endothelial dysfunction. Critical Care Clinics. 36 (2), 307-321 (2020).
  3. Ruan, K. -H. Advance in understanding the biosynthesis of prostacyclin and thromboxane A2 in the endoplasmic reticulum membrane via the cyclo-oxygenase pathway. Mini Reviews in Medicinal Chemistry. 4 (6), 639-647 (2004).
  4. Del Pozo, R., Hernandez Gonzalez, I., Escribano-Subias, P. The prostacyclin pathway in pulmonary arterial hypertension: A clinical review. Expert Review of Respiratory Medicine. 11 (6), 491-503 (2017).
  5. Morgado, M., Cairrão, E., Santos-Silva, A. J., Verde, I. Cyclic nucleotide-dependent relaxation pathways in vascular smooth muscle. Cellular and Molecular Life Sciences. 69 (2), 247-266 (2012).
  6. Schmidt, K., de Wit, C. Endothelium-derived hyperpolarizing factor and myoendothelial coupling: The in vivo perspective. Frontiers in Physiology. 11, (2020).
  7. Fan, G., Cui, Y., Gollasch, M., Kassmann, M. Elementary calcium signaling in arterial smooth muscle. Channels. 13 (1), 505-519 (2019).
  8. Wisutthathum, S., et al. Extract of Aquilaria crassna leaves and mangiferin are vasodilators while showing no cytotoxicity. Journal of Traditional and Complementary Medicine. 9 (4), 237-242 (2019).
  9. Kamkaew, N., Paracha, T. U., Ingkaninan, K., Waranuch, N., Chootip, K. Vasodilatory effects and mechanisms of action of Bacopa monnieri active compounds on rat mesenteric arteries. Molecules. 24 (12), 2243(2019).
  10. Chootip, K., Kennedy, C., Gurney, A. Characterization of P2 receptors mediating contraction of the rat isolated pulmonary vasculature. British Journal of Pharmacology. 131, 167(2000).
  11. Paracha, T. U., et al. Elucidation of vasodilation response and structure activity relationships of N2, N4-disubstituted quinazoline 2, 4-diamines in a rat pulmonary artery model. Molecules. 24 (2), 281(2019).
  12. Chootip, K., Gurney, A. M., Kennedy, C. Multiple P2Y receptors couple to calcium-dependent, chloride channels in smooth muscle cells of the rat pulmonary artery. Respiratory Research. 6 (1), 1-10 (2005).
  13. Wisutthathum, S., et al. Eulophia macrobulbon extract relaxes rat isolated pulmonary artery and protects against monocrotaline-induced pulmonary arterial hypertension. Phytomedicine. 50, 157-165 (2018).
  14. Kruangtip, O., et al. Curcumin analogues inhibit phosphodiesterase-5 and dilate rat pulmonary arteries. Journal of Pharmacy and Pharmacology. 67 (1), 87-95 (2015).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Гладкие мышцы сосудовметод органного банямеханизмы вазоконстрикциимеханизмы вазорелаксациилегочная гипертензиякривая зависимости «концентрация — ответ»денудация эндотелияизмеритель изометрической силы
Выделение внутрилегочной артерии и гладкомышечных клеток для исследования сосудистых реакций
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.